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1、(10)申请公布号 CN 102030834 A(43)申请公布日 2011.04.27CN102030834A*CN102030834A*(21)申请号 200910196296.8(22)申请日 2009.09.24C08B 37/00(2006.01)A61K 31/715(2006.01)A61P 3/10(2006.01)C12S 3/02(2006.01)(71)申请人上海新康制药厂地址 201418 上海市奉贤区奉炮公路438弄58号申请人上海师范大学(72)发明人张华 王元凤 茅仁刚 魏新林袁萍(74)专利代理机构上海天翔知识产权代理有限公司 31224代理人吕伴(54) 发明。
2、名称从茶花中提取制备茶花多糖的方法及所得茶花多糖的用途(57) 摘要本发明涉及从茶花中提取、制备茶花多糖的方法及所得制备物的用途，其方法是首选水或加酶的水进行提取，提取液醇沉后分离，分离的沉淀物干燥得到茶花粗多糖，茶花粗多糖经过树脂或化学方法脱色脱蛋白后，经过凝胶纯化或超滤膜纯化得到茶花多糖。同时本发明通过动物实验证明，茶花多糖具有防治疗糖尿病的功效。(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 3 页CN 102030837 A 1/1页21.以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法以及按照该方法获得的茶花多糖，其特征在于，具体包括如下。
3、步骤：a、将干茶花经粉碎后，加入水或酶溶液520倍质量比提取30分钟后，过滤或离心分离得固体沉淀和提取液；b、浓缩提取液至密度大于1.2Kg/L后，加入2倍以上体积低级醇静置沉淀12小时以上，上清液回收低级纯重复利用，沉淀物干燥后得茶花粗多糖。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水中加入酶制剂，其中酶与水的质量比为0.11.2100。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述酶包括果胶酶、纤维素酶中的一种或两种酶制剂混合物。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取在常温至100下进行。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取为任何以水为媒介的提取工艺。6.如权利要求1。
4、所述的方法，其特征在于，所述提取为浸提、沸水提取、超声提取或微波提取的一种或几种的合用。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取为一次或一次以上的提取。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低级醇是乙醇。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓缩为55100下减压浓缩。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干燥为55100下减压真空干燥、低温冷冻干燥或喷雾干燥。11.一种由权利要求1提取制备的茶花粗多糖的纯化方法，其特征在于，具体包括如下方法：a、使用大孔吸附树脂或离子交换树脂对茶花粗多糖进行脱色及除去部分蛋白质，或者使用化学脱蛋白及脱色处理；或者使用滤膜将分子量小。
5、于1万的茶花粗多糖、单糖、无机盐及其他杂质去除得到茶多糖；b、步骤a所得到的茶多糖，使用不同分子量的滤膜获得多糖分子量分布不同的茶多糖；c、使用凝胶纯化步骤a所得到的茶多糖，纯化后分离获得不同分子量分布范围的茶花多糖及不同电荷、离子强度的茶花多糖。12.权利要求11制备的茶花多糖具有防治糖尿病的功效。权 利 要 求 书CN 102030834 ACN 102030837 A 1/3页3从茶花中提取制备茶花多糖的方法及所得茶花多糖的用途技术领域0001 本发明属于食品、保健食品或药品制备技术领域，特别涉及从茶花中提取制备茶花多糖的方法，并涉及该茶花多糖的医药用途。背景技术0002 茶花是茶树的生。
6、殖器官之一。茶树于每年5月开始花芽分化，910月开花，花期多100110天。我国南部茶区茶树花期较长，可延续至翌年23月，个别地区甚至全年可见茶花开放。全国茶区每年可产茶花300多万吨，资源相当丰富。0003 研究表明，茶花中含有丰富的多糖、蛋白质、氨基酸、维生素等多种有益成分和活性物质，对人体具有降糖、降脂、解毒、抗癌、滋补、养颜等功效。实践验证，茶花的抗氧化功能可与国际公认的抗氧化植物迷迭香媲美。0004 然而目前人们对茶的利用研究，主要涉及的是茶叶在食品、医学和人体保健等方面的作用，而对茶树花的开发利用研究尚未全面展开，大量的茶花只能自行脱落回归自然与泥土相拌。直到2002年，我国著名的。
7、茶学专家徐纪英才提出开发利用茶树花资源，充分利用现有茶花资源，进行深度加工，开发出对人类有益的产品。如果充分利用茶花资源，提取其有效成分，不仅具有较大的社会效益，而且能极大地提高经济效益。发明内容0005 本发明所要解决的技术问题之一在于提供一种以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法以及用该方法获得茶花多糖。0006 本发明所要解决的技术问题之二在于提供一种茶花粗多糖的纯化方法。0007 本发明所要解决的技术问题之三在于提供茶花多糖的用途。0008 作为本发明第一方面的以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法，具体包括如下步骤：0009 a、将干茶花经粉碎后，加入水提取30分钟后，过滤或离心分离得固。
8、体沉淀和提取液；0010 b、浓缩提取液至密度大于1.1Kg/L后，加入2倍以上体积低级醇静置沉淀12小时以上，上清液回收低级纯重复利用，沉淀物干燥后得茶花粗多糖。0011 在上述以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法中，所述水中可以加入酶制剂，其中酶与水的质量比为0.11.2100。所述酶包括果胶酶、纤维素酶等任何破坏茶花纤维结构，有利于多糖提取高效、提高得率的单一酶制剂或其两种以上的酶制剂混合物。0012 在上述以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法中，所述提取可以在常温至100下进行。0013 在上述以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法中，所述提取包括但不限于：浸提、沸水提取、超声提取、微波。
9、提取或以及任何以水为媒介的提取工艺。0014 在上述以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法中，所述低级醇优选为乙醇。说 明 书CN 102030834 ACN 102030837 A 2/3页40015 在上述以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法中，所述浓缩为55100下减压浓缩，优选75。0016 在上述以茶花为原料提取制备茶花粗多糖的方法中，所述干燥包括55100下减压真空干燥、低温冷冻干燥或喷雾干燥。0017 作为本发明第二方面的茶花粗多糖的纯化方法，具体包括如下方法：0018 a、使用大孔吸附树脂或离子交换树脂对茶花粗多糖进行脱色及除去部分蛋白质；或者使用化学脱蛋白及脱色处理；或者使用滤。
10、膜将分子量小于1万的茶花粗多糖、单糖、无机盐及其他杂质去除得到茶多糖；0019 b、步骤a所得到的茶多糖，使用不同分子量的滤膜获得多糖分子量分布不同的茶多糖；0020 c、使用凝胶纯化步骤a所得到的茶多糖，纯化后分离获得不同分子量0021 分布范围的茶花多糖及不同电荷、离子强度的茶花多糖。0022 作为本发明的第三方面是茶花多糖的用途，其所述的茶花多糖可以用来制备预防和治疗糖尿病。0023 本发明的茶花多糖经四氧嘧啶SD大鼠造模，灌胃30天后，与模型组大鼠相比，血糖浓度具有显著性降低。动物实验结果证明，所获茶花多糖即有防治糖尿病的功效。0024 本发明的提取制备工艺简单、无污染。适合规模化生产。
11、。具体实施方式0025 实施例10026 干燥茶花10Kg投料，粉碎过16目筛，加入80L体积水，搅拌，常温提取30分钟，4500转/分钟离心，使固液分离，收集提取液。固体沉淀茶花再加入60L水，搅拌常温提取30分钟，4500转/分钟离心，使固液分离，提取液与第一次提取液合并，固体沉淀茶花弃去。0027 合并后的提取液在75摄氏度下减压浓缩至密度大于1.2Kg/L，冷却后加入4倍体积乙醇沉淀12小时。上清液乙醇回收，沉淀物在75摄氏度下减压真空干燥。得茶花粗多糖1.68Kg。0028 实施例20029 干燥茶花10Kg投料，粉碎过16目筛，加入80L体积水，搅拌，微波600w提取10分钟，板框。
12、过滤，收集提取液。固体茶花再加入60L水，微波600w提取10分钟，板框过滤，使固液分离，提取液与第一次提取液合并，固体沉淀茶花弃去。0030 合并后提取液在75摄氏度下减压浓缩至密度大于1.1Kg/L，冷却后加入4倍体积乙醇沉淀12小时。上清乙醇回收，冷冻真空干燥。得茶花粗多糖211g。0031 实施例30032 实施例1中所得茶花粗多糖，用水溶解后，每小时3倍柱体积流速上离子交换树脂RJA(购自上海摩速科学器材有限公司)柱，上样后洗脱得茶多糖，得率82，脱色效果良好。0033 实施例40034 实施例3中所得茶花多糖经过DEAE Sepharose Fast Flow凝胶纯化，分离后得到两。
13、个单一峰，前者为中性糖峰，后者为酸性糖峰。经HPGPC分析，分子量1.8060万，后者为说 明 书CN 102030834 ACN 102030837 A 3/3页5酸性糖峰，经HPGPC分析，Mw1.8687万。0035 实施例50036 取健康大鼠80只，适应性饲养3d后，随机留取10只作为正常对照组。其余70只大鼠禁食不禁水12h，按180mg/(Kgbw)的剂量一次性腹腔注射2四氧嘧啶溶液。72h后禁食5h尾静脉取血测定空腹血糖，以血糖值11.125mmol/L，并出现多饮、多食、多尿者确定为糖尿病模型。选择符合标准的模型动物50只，按空腹血糖和体重水平，随机分为茶花多糖(为实施例3所。
14、获得茶多糖)高剂量组800mg/(kgbw)、中剂量组400mg/(kgbw)、低剂量组200mg/(kgbw)、二甲双胍组50mg/(kgbw)和模型对照组，每组10只。各剂量组和二甲双胍组分别给相应药品灌胃，正常组和模型对照组灌服生理盐水。各组均以1ml/100g的容积灌胃。将每日药量1次灌胃，连续15d。试验结果显示，药物干预前，注射四氧嘧啶造模各组与正常对照组相比均有高基线的空腹血糖水平(P0.01)，且组间无显著性差异(P0.05)。实验期间糖尿病模型组显示持续的高血糖。茶花多糖各剂量组给药后血糖缓慢下降，实验结束时与糖尿病模型组比较有显著性差异，尤以中高剂量组降血糖作用明显(P0.05)。二甲双胍组与糖尿病模型组相比则有极显著性差异(P0.01)，结果见表1。0037 表1茶花多糖对糖尿病大鼠第1天及第15天体重和血糖的影响(Xs)0038 0039 与正常组比较，*P0.01；与模型对照组比较，P0.05，P0.01。说 明 书CN 102030834 A。