三环衍生物或其药学上可接受的盐、其制备以及包含它们的药物组合物.pdf

本发明涉及三环衍生物或其药学上可接受的盐，它们的制备及含有它们的药物组合物。更具体而言，本发明涉及三环衍生物，如秋水仙碱衍生物，其药学上可接受的盐，它们的制备及含有它们的药物组合物。本发明的三环衍生物对癌细胞系显示出非常强的细胞毒性，但经动物毒性试验证实，其比秋水仙碱或紫杉醇的毒性低得多。本发明的三环衍生物也减少肿瘤的体积和重量，而且对HUVEC细胞具有强的血管生成抑制活性。因此，本发明的三环衍生物可有效地用作抗癌剂、抗增殖剂及血管生成抑制剂。

权利要求书
1.  三环衍生物，或其药学上可接受的盐，所述三环衍生物由如下<式1>所示，
<式1>

(其中，
(1)R1为-T1-B1；
其中T1为-X1-、-X1-C(X2)-、-N(R5)-、-N(R5)C(X2)-、-N(R5)S(O)n1-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自为O或S，R5各自为H或C1～C5烷基，n1是1-2的整数；和B1选自下列(a)～(j)，

        -Z1-R7          (c)                            -Z1-T2-B2            (h)

其中，R6和R8各自为H、卤素、羟基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低级烷基；R7和R9各自独立地为卤素、羟基、巯基、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9为相同或者不同；

是含有1～2个杂原子的C5～C6元饱和或不饱和杂环，其中，杂原子选自O、S和N，优选为

更优选为，在2位和6位或2位和5位被取代的C1(吡啶基)、在2位和5位或2位和4位被取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)；
Z1为C1～C10直链或支链烷基，优选为C2～C5直链或支链烷基或环烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自独立地为H或甲基，其中当Z2为甲基时Z3是H，当Z3为甲基时Z2是H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自独立地为O或S；B2选自所述(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2为0～3的整数；n3为0～5的整数，n4为1～5的整数，n5和n6各自独立地为1～6的整数；
(2)R2和R3各自独立地为H、-PO3H2、膦酸酯基团、硫酸酯基团、C3～C7环烷基、C2～C7链烯基、C2～C7炔基、C1～C7烷酰基、C1～C7直链或支链烷基或糖，其中糖为单糖，例如葡糖醛酸基、葡糖基或半乳糖基；
(3)R4为OCH3、SCH3或NR10R11，其中R10和R11每个各自独立地为H或C1-5烷基；
(4)X为O或S。)

2.  根据权利要求1所述的三环衍生物或其药学上可接受的盐，其中所述<式1>的化合物具有如下特征：
(1)R1为-T1-B1；
其中T1为-N(R5)C(X2)-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自为O，R5各自为H或C1～C5烷基；和B1选自下列(a)～(j)，

     -Z1-R7              (c)                        -Z1-T2-B2               (h)

其中，R6和R8各自为H、卤素、羟基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低级烷基；R7和R9各自独立为卤素、羟基、巯基(硫醇)、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9为相同或不同；

为含有1～2个杂原子的C5～C6元饱和或不饱和杂环，其中杂原子选自O、S和N，优选地为

更优选地，为2位和6位或2位和5位取代的C1(吡啶基)、2位和5位或者2位和4位取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)，取代基的键接可以在对称或不对称位置；Z1为C1～C10直链或支链烷基，优选C2～C5直链或支链烷基或环烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自独立为H或甲基，其中当Z2为甲基时Z3为H，当Z3为甲基时Z2为H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自为O或S；B2选自所述(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2为0～3的整数，n3为0～5的整数，n4为1～3的整数，n5和n6各自独立为1～3的整数；
(2)R2和R3各自独立为C3～C7环烷基或C1～C7烷基；
(3)R4为SCH3或OCH3；
(4)X为O或S。

3.  根据权利要求1所述的三环衍生物或其药学上可接受的盐，其中所述三环衍生物包括：
(1)6-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-烟酰胺；
(2)5-硝基氧甲基-呋喃-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧-10-甲硫基-9氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
(3)N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(4)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(5)6-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
(6)5-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
(7)N-[(7S)-3-环戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(8)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(9)2-氟-N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(10)2-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(11)N-[(7S)-3-环戊基氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(12)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(13)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(14)3-氟-N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(15)N-[(7S)-3-环戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
(16)4-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(17)2-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(18)3-羟基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(19)3，5-二-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(20)2-羟基-4-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(21)4-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
(22)3-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
(23)2-(3-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；
(24)3-(2-硝基氧-乙基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(25)3-硝基氧苯甲酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
(26)4-硝基氧丁酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
(27)3-硝基氧甲基-苯甲酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
(28)4-硝基氧丁酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
(29)3-硝基氧甲基-苯甲酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
(30)4-硝基氧丁酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
(31)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
(32)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
(33)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄基酯；
(34)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄基酯；
(35)2-亚硝基硫-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(36)3-亚硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(37)3-氟-5-亚硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(38)3-亚硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(39)3-氟-5-亚硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(40)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(41)3-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(42)3-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
(43)2-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；或
(44)2-(2-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺。

4.  如<方案1>所示的用于制备三环衍生物的方法，其包括下列步骤：
(1)进行式(III)的化合物与式(IV)的化合物或式(VI)的化合物的反应，生成式(V)的化合物或式(VII)的化合物，或将所生成的式(VII)的化合物与卤素化合物反应，生成式(V)的化合物(步骤1)；和
(2)将已制备的式(V)或式(VII)的化合物进行硝化或亚硝化，以生成式(IIa)的化合物(步骤2)，
<方案1>

(其中，D是并且R2、R3、R4和X与<式1>中的定义相同；
R5是H或低分子量烷基；X1是O或S；Hal1和Hal2是卤素；通式(IV)和(IX)的Hal1和Hal2各自为相同或不同的卤素，例如F、Cl、Br或I；Y分别表示通式(a′)、(b′)、(c′)、(d′)和(e′)，

其中，R6、R8、R9、Z1、Z2、Z3、n2、n3、n4、n5和n6与在<式1>中的定义相同。)

5.  抗癌剂或抗增殖剂，其含有权利要求1-3中的任何一项所述的三环衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分。

6.  血管生成抑制剂，其含有权利要求1-3中的任何一项所述的三环衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分。

说明书三环衍生物或其药学上可接受的盐、其制备以及包含它们的药物组合物
技术领域
本发明涉及如下面<式1>所示的三环衍生物，或其药学上可接受的盐，它们的制备以及包含它们的药物组合物。
<式1>

(其中，R1、R2、R3、R4和X如说明书中所定义。)
背景技术
秋水仙碱，一种假生物碱(pseudo-alkaloid)化合物，具有抗炎作用，这使之成为类风湿性关节炎的治疗剂[Internal Medicine，86，No.2，342-345，2000]。秋水仙碱和硫代秋水仙碱(thiocolchicine)衍生物具有松弛肌肉和抗炎的功能(USP 5 973204，EP 0870761 A1)。硫代秋水仙苷(Thiocolchicoside)已经被用于治疗骨骼肌挛缩和炎症。而且，在动物试验中，秋水仙碱抑制移植器官中的单核细胞和T细胞浸润，而且同时抑制TNF-α、IL-1和IL-6、炎症细胞因子的产生，这表明了其对免疫应答的抑制作用[J.Am.Soc.Nephrol.，4(6)，1294-1299，1993；TransplantationProceedings，32，2091-2092，2002]。因此，对于免疫应答抑制剂的开发，秋水仙碱是极具吸引力的候选化合物(WO 02/100824)。
通过与微管蛋白相互作用，秋水仙碱抑制微管装配，这导致了对细胞分裂的抑制[The Alkaloids，1991，41，125-176；USP 4 533 675]。这样的秋水仙碱已被用于治疗痛风以及与痛风有关的其它炎症性疾病。然而，秋水仙碱的应用限于急性炎症，原因在于治疗指数(therapeutic index)上的限制和对胃肠道的毒性[Pharmacotherapy，11，3，196-211，1991]。
迄今为止，将秋水仙碱衍生物开发作为抗癌药剂的所有努力都还未获得成功[USP 3 222 253；USP 00/6080739；WO 97/01570]，而且只有脱羰秋水仙碱(demecolcine)被用于治疗白血病。然而，对胃肠道的毒性以及在治疗指数上的限制依旧是脱羰秋水仙碱面临的难题。
通过开发秋水仙碱衍生物，本发明人完成了本发明，所述衍生物具有极佳的抗癌、抗增殖和血管生成抑制活性，由于毒性降低，这些衍生物具有稳定的治疗指数。
发明概述
本发明的一个目的是提供三环衍生物或其药学上可接受的盐，它们具有极佳的抗癌、抗增殖和血管生成抑制活性，并由于降低的毒性而具有稳定的治疗指数。
提供所述三环衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法也是本发明的目的。
本发明进一步的目的是提供含有所述三环衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分的药物组合物。
附图说明
图1中的图表显示了，在给予本发明的三环衍生物之后，移植有人肺癌细胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠体内的肿瘤体积变化(实施例8)；
图2中的图表显示了，在给予本发明的三环衍生物之后，移植有人肺癌细胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠的体重变化(实施例8)；
图3中的图表显示了，在以不同浓度(1、3、10mg/kg)给予本发明的三环衍生物之后，移植有人肺癌细胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠体内的肿瘤体积变化(实施例12)；
图4中的图表显示了，在以不同浓度(1、3、10mg/kg)给予本发明的三环衍生物之后，移植有人肺癌细胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠的体重变化(实施例12)；
图5为一组照片，显示了在移植有人肺癌细胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠体内生长的肿瘤的体积，这些肿瘤是在给予本发明的三环衍生物之后的第十四天被分离；
图6是一组照片，显示了本发明的三环衍生物抑制HUVEC细胞中血管生成的活性。
优选实施方案详述
本发明涉及由下面<式1>所示的三环衍生物，或其药学上可接受的盐。
<式1>

(其中，
(1)R1是-T1-B1；
其中T1为-X1-、-X1-C(X2)-、-N(R5)-、-N(R5)C(X2)-、-N(R5)S(O)n1-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自为O或S，R5为H或C1～C5烷基，n1是1-2的整数；和B1选自下面的(a)～(j)：

        -Z1-R7          (c)                             -Z1-T2-B2            (h)

其中，R6和R8各自为H、卤素、羟基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低级烷基；R7和R9各自独立地为卤素、羟基、巯基、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9为相同或者不同；
是含有1～2个杂原子的C5～C6元饱和或不饱和杂环，其中，杂原子选自O、S和N，优选为

更优选为，在2位和6位或2位和5位被取代的C1(吡啶基)、在2位和5位或2位和4位被取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)；Z1为C1～C10直链或支链烷基，优选为C2～C5直链或支链烷基或环烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自独立地为H或甲基，其中当Z2为甲基时Z3是H，当Z3为甲基时Z2是H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自独立地为O或S；B2选自所述(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2为0～3的整数，n3为0～5的整数，n4为1～5地整数，n5和n6各自独立地为1～6的整数；
(2)R2和R3每个各自地独立为H、-PO3H2、膦酸酯基团(phosphonate)、硫酸酯基团(sulfate)、C3～C7环烷基、C2～C7链烯基、C2～C7炔基、C1～C7烷酰基、C1～C7直链或支链烷基或糖，其中糖为单糖，例如葡糖醛酸基、葡糖基或半乳糖基；
(3)R4为OCH3、SCH3或NR10R11，其中R10和R11各自独立地为H或C1～5烷基；
(4)X为O或S。)
优选地，在<式1>的化合物中，
(1)R1是-T1-B1；
其中T1为-N(R5)C(X2)-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自为O，R5各自为H或C1～C5烷基，和B1选自下面的(a)～(j)，

       -Z1-R7           (c)                             -Z1-T2-B2           (h)

其中，R6和R8各自为H、卤素、羟基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低级烷基；R7和R9各自独立地为卤素、羟基、巯基(硫醇)、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9为相同或不同；
为含有1～2个杂原子的C5～C6元饱和或不饱和杂环，其中杂原子选自O、S和N，优选为

更优选：在2位和6位或2位和5位被取代的C1(吡啶基)、在2位和5位或2位和4位被取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)，取代基的键接可以在对称或不对称位置；Z1为C1～C10直链或支链烷基，优选为C2～C5直链或支链烷基或环烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自独立地为H或甲基，其中当Z2为甲基时Z3为H，当Z3为甲基时Z2为H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自为O或S；B2选自所述的(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2为0～3的整数，n3为0～5的整数，n4为1～3的整数，n5和n6各自独立为1～3的整数；
(2)R2和R3各自独立地为C3～C7环烷基或C1～C7烷基；
(3)R4为SCH3或OCH3；
(4)X为O或S。
优选地，<式1>的化合物包括：
1)6-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基(methylsulfanyl)-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯(heptalen)-7-基]-烟酰胺(nicotineamide)；
2)5-硝基氧甲基-呋喃-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
3)N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
4)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
5)6-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
6)5-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
7)N-[(7S)-3-环戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
8)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
9)2-氟-N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
10)2-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
11)N-[(7S)-3-环戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
12)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
13)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
14)3-氟-N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
15)N-[(7S)-3-环戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
16)4-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
17)2-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
18)3-羟基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
19)3，5-二-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
20)2-羟基-4-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
21)4-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
22)3-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；
23)2-(3-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；
24)3-(2-硝基氧-乙基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
25)3-硝基氧苯甲酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
26)4-硝基氧丁酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
27)3-硝基氧甲基-苯甲酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
28)4-硝基氧丁酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；
29)3-硝基氧甲基-苯甲酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
30)4-硝基氧丁酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
31)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
32)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；
33)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄基酯；
34)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄基酯；
35)2-亚硝基硫代-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
36)3-亚硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
37)3-氟-5-亚硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
38)3-亚硝基硫甲基(thiomethyl)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
39)3-氟-5-亚硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-苯甲酰胺；
40)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
41)3-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；
42)3-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-苯甲酰胺；
43)2-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；或
44)2-(2-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺。
本发明也提供了<式1>所示化合物的药学上可接受的盐。当本发明的化合物完全为碱性时，本发明的药学上可接受的盐可以包括该化合物的酸加成盐。这样的酸加成盐包括含有无机酸的盐，所述无机酸可提供药学上可接受的阴离子，例如卤化氢，或者，这样的酸加成盐含有机酸，或者为含有硫酸或磷酸的盐，或者含有三氟乙酸、柠檬酸或马来酸的盐。例如，通过构成合适的盐，它可以包括氢氯化物、氢溴化物、膦酸盐、硫酸盐、烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、醋酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐和酒石酸盐(tartarates)。当本发明的化合物完全为酸性时，其药学上可接受的盐可包括提供了药学上可接受的阳离子的无机盐或有机盐。所述无机盐包括钠盐、钾盐、钙盐或镁盐等，所述有机酸盐包括甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、哌啶盐或吗啉盐等。
本发明也提供了<式1>所示三环衍生物的制备方法。本发明三环衍生物的制备方法在下列方案1～方案8中被描述。具体而言，在<式1>中，当R1为-T1-B1和B1为所述(a)、(b)、(c)、(d)和(e)之一时，按照方案1～方案6制备所述衍生物。同时，在<式1>中，当R1为-T1-B1和B1为所述(f)、(g)、(h)、(i)和(j)之一时，按照方案7和方案8制备所述衍生物。在方案1～方案8中，<式1>的具体化合物由通式(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIl)、(IIm)、(IIn)、(IIo)和(IIp)表示。
<方案1>

<方案2>

<方案3>

<方案4>

<方案5>

<方案6>

<方案7>

<方案8>

在上述方案中，E分别为下面的E1～E6；

其中，X1、X2和X3各自为O或S。
在上述方案中，D为和R2、R3、R4和X与在<式1>中的定义相同；
R5为H或低级烷基(lower alkyl)；X1、X2和X3各自独立地为O或S；Hal1和Hal2为卤素；通式(IV)和(IX)的Hal1和Hal2各自为相同或者不同的卤素，例如F、Cl、Br或I；P为常规的羟基保护基，例如甲氧基甲基、叔丁基二甲基甲硅烷基或苯甲基；Y和Y′为相同或不同，并分别地表示下面的通式(a′)、(b′)、(c′)、(d′)和(e′)，

其中，R6、R8、R9、Z1、Z2、Z3、n2、n3、n4、n5和n6均与在<式1>中的定义相同，n7和n8为1～2的整数。
本发明的三环衍生物的制备方法被更具体地在下面予以阐述。
<方法1>
根据用于制备式(IIa)和(IIb)的化合物的本发明方法1，通过使式(III)的胺化合物与式(IV)的卤素化合物进行酰胺化反应，制备由式(V)所示的化合物，此为步骤1。在步骤1中，可以不用碱，但是反应一般是在有溶剂例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙醚、甲苯或或二甲基甲酰胺等的情况下进行，在吡啶、三乙胺、二乙基异丙基胺(diethylisopropylamine)或N-甲基吗啉等存在时，这些溶剂对酰胺化反应没有影响，通常上述碱是对于酰胺化反应可接受的。反应温度不受具体限制，但通常可以在低温或高温下进行，优选在室温下进行。
在步骤2中，分别通过硝化反应和亚硝化反应，完成在上述步骤1中制备的式(V)化合物向式(IIa)的硝基氧化合物(nitrooxy compound)(n7＝2)和式(IIa)的亚硝基氧化合物(nitrosooxy compound)(n7＝1)的转化。硝化反应需要可以将卤素转化为硝酸根的化合物，并且在存在氯仿、乙腈、乙腈和水溶液的混合物或二氯甲烷的条件下-这些都是不影响反应的溶剂，使用硝酸银(AgNO3)、t-丁基硝酸胺(Bu4NNO3)等，进行此反应。亚硝化反应也可以使用可以将卤素转化为硝肟酸酯(nitrosate)的化合物，在存在氯仿、乙腈、乙腈和水溶液的混合物、水溶液或二氯甲烷的条件下-这些也是不影响反应的溶剂，优选使用亚硝酸银(AgNO2)或亚硝酸钠(NaNO2)进行此反应。反应温度不受具体限制，但通常在低温或高温下进行，优选在室温下进行。
产生式(IIa)的化合物的另一个方法如下；将式(III)的化合物与式(VI)的化合物进行反应，生成式(VII)的化合物，然后，完成式(VII)的化合物向式(IIa)的化合物的转化。式(III)的化合物与式(VI)的化合物的反应在偶联剂存在下进行，例如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI)、1-羟基苯并三唑水合物(HOBT)或1，3-双环乙基碳二亚胺(DCC)。该反应可以在没有溶剂的情况下进行，但是，通常，在对反应没有负效应的溶剂中，例如乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷等，在有碱的情况下进行该反应，例如4-二甲基氨基吡啶、吡啶、三乙胺、二乙基异丙胺、N-甲基吗啉或二甲基苯胺等，这些碱可以被用在酰胺化反应中。反应温度不受具体限制，但通常在低温或高温下进行，优选在室温下进行。通过将醇与三苯基膦(PPh3)、溴代琥珀酰亚胺(N-bromosuccineimide)(NBS)和硝酸银或亚硝酸银反应，完成式(VII)的化合物向式(IIa)的化合物的直接转化。在对反应无影响的溶剂中进行此反应，所述溶剂例如氯仿、乙腈、二氯甲烷、乙腈与二氯甲烷的混合物等。反应温度不受具体限制，但通常在低温或室温下进行。用于将式(VII)的化合物转化为式(IIa)的化合物的另一个方法如下；首先完成式(VII)的化合物向式(V)的卤素化合物的转化，然后再完成式(V)的卤素化合物向式(IIa)的转化。此时，在氯仿、乙腈、二氯甲烷等存在的条件下-这些是对反应没有负效应的溶剂，通过使用一般将羟基转化为卤素的试剂，进行向卤素化合物的转化，所述试剂例如三溴膦(tribromophosphin)、四溴甲烷等。反应温度不受具体限制，但通常在低温或室温下进行。
本发明方法1的用于制备式(IIb)化合物的过程如下；将式(VII)的醇中的氢转化为离去基团例如甲磺酸(mesylate)、甲苯磺酸酯(tosylate)或triplate，然后与硫代乙酸钾反应，生成硫代乙酸酯化合物。在碱存在下，将此化合物水解，生成式(VIII)的化合物。此时，碱选自可以水解酯化合物的常规碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾或硫代甲醇钠(sodium thiomethoxide)。优选醇溶液例如甲醇或乙醇作为该反应的溶剂。反应温度不受具体限制，但通常可以在低温或高温下进行，优选在室温下进行。在酸性环境下，式(VIII)的化合物与亚硝酸钠反应，导致式(VIII)的化合物转化为式(IIb)的亚硝基硫代化合物。所述反应的溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、乙腈和水溶液的混合物或二氯甲烷等，这些溶剂都不影响反应。反应温度不受具体限制，但通常可以在低温或高温下进行，优选在室温下进行。
<方法2>
根据本发明的方法2，制备式(IIc)和(IId)的化合物。具体而言，在步骤1中，完成式(III)的化合物与式(IX)的化合物的反应，以生成式(X)的化合物。进行本反应，其类似于方法1中所述的步骤-其中通过酰胺化反应完成式(III)的化合物向式(V)的化合物的转化。
在步骤2中，通过硝化反应与亚硝化反应，完成在步骤1中制备的式(X)的化合物向式(IIc)的化合物的转化。进行本反应，其类似于方法1中所述的步骤-其中完成了式(V)的化合物向式(IIa)的化合物的转化。
生成(IIc)的化合物的另一种方法如下；将式(III)的化合物与式(XI)的化合物反应，生成式(XII)的化合物，然后完成式(XII)的化合物向式(IIc)的化合物的转化。将式(XI)的化合物与式(III)的化合物进行反应，其类似于方法1中所述的步骤-其中通过酰胺化反应完成式(III)的化合物向式(V)的化合物的转化。完成式(XII)的化合物向式(IIc)的化合物的转化，其反应条件与在与方法1中式(VII)的化合物转化为式(IIa)的化合物时的反应条件相同。
完成式(XII)的化合物向式(IId)的化合物的转化，其反应条件与在方法1中式(VII)的化合物转化为式(IIb)的化合物时的反应条件相同。
<方法3>
按照本发明的方法3，制备式(IIe)和式(IIf)的化合物。具体而言，在步骤1中，完成式(XIV)的化合物与式(IV)的化合物的反应，生成式(XV)的化合物。本方法中的该反应为醇(X2＝O)或硫醇(X2＝S)与酰基或硫酰基卤化物的酯化反应，此反应在酯化反应通常可接受的碱的存在下进行。优选的碱为吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、二乙基异丙基胺(diethylisopropylamine)、2，6-二甲基吡啶、氢化钠(NaH)、碳酸铯或氢氧化钠，而且可以与相转移催化剂例如苄基三乙基氯化铵(benzyltriethylammoniumchloride)一起被使用。同样，上述反应优选在对反应没有负效应的溶剂中进行，例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二乙醚、甲苯、二甲基甲酰胺、乙腈或水溶液。反应温度不受具体限制，但通常在低温或高温下进行，优选在室温下进行。
在步骤2中，通过硝化反应与亚硝化反应，完成在步骤1中制备的式(XV)的化合物向式(IIe)的化合物的转化。按类似于方法1中所述的步骤-其中完成了式(V)的化合物向式(IIa)的化合物的转化-进行此反应。
制备式(IIe)的化合物的另一个方法如下；将式(XIV)的化合物与在醇基上具有保护基团的式(VI’)的化合物进行反应，生成式(XVII)的化合物，然后通过去保护反应，生成式(XVIII)的化合物。完成所生成的化合物向式(IIe)的化合物的转化。通过醇(X2＝O)或硫醇(X2＝S)与羧酸或硫代羧酸的酯化反应，进行式(XIV)的化合物与式(VI’)的化合物的反应。在补充有酸例如盐酸、硫酸、十二烷基苯磺酸或p-甲苯磺酸的水溶液中，在室温或者高温(elevated temperature)下，进行此反应，或者，在与方法1中式(III)的化合物转化为式(VII)的化合物时的反应条件相同的条件下进行此反应。另一种酯化反应是在不影响反应的溶剂中，通过Misunobu反应，使用三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯来进行。溶剂优选选自二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二乙醚、甲苯或乙腈。反应温度不受具体限制，但通常在低温或室温下进行。通过在普通有机合成中已知的方法进行醇基的保护和去保护反应。
将式(XIV)的化合物和式(XVI)的化合物进行反应，生成式(XVIII)的化合物，其类似于方法3中描述的另一步骤-其中完成了式(XIV)的化合物向式(XV)的化合物的转化。
在与方法1中式(VII)的化合物转化为式(IIa)的化合物时的条件相同的条件下，进行式(XVIII)的化合物向式(IIe)的化合物的转化。
在与方法1中将式(VII)的化合物转化为式(IIb)的化合物时的条件相同的条件下，进行式(XVIII)的化合物向式(IIf)的化合物的转化。
<方法4>
按照本发明的方法4，制备式(IIg)和式(IIh)的化合物。具体而言，在步骤1中，完成式(III)的化合物与式(XX)的化合物的反应，生成式(XXI)的化合物。
当式(IIg)的化合物为亚磺酰胺(sulfinylamide)(n8＝1)时，在对反应没有负效应的溶剂例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二乙醚、甲苯或二甲基甲酰胺中，在没有碱或在存在可用于酰胺化反应的碱例如吡啶、三乙胺、二乙基异丙基胺、N-甲基吗啉或二甲苯胺的条件下，将式(III)的化合物与式(XX)的亚磺酰卤(sulfinylhalide)进行反应。反应温度不受具体限制，但通常可以在低温或高温下进行，优选在室温下进行。
当式(IIg)的化合物为磺酰胺(sulfonylamide)(n8＝2)时，在对反应没有负效应的溶剂例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二乙醚、甲苯或二甲基甲酰胺中，在没有碱或在存在一般可用于酰胺化反应的碱例如吡啶、三乙胺、二乙基异丙基胺、N-甲基吗啉、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸钾的条件下，将式(III)的化合物与式(XX)的磺酰卤(sulfonylhalide)进行反应。反应温度不受具体限制，但通常可以在低温或高温下进行，优选在室温下进行。
在步骤2中，在与方法1中将式(VII)的化合物转化为式(IIa)的化合物时的条件相同的条件下，将步骤1中制备的式(XXI)的化合物转化为式(IIg)的化合物。
在与方法1中将式(VII)的化合物转化为式(IIb)的化合物时的条件相同的条件下，将步骤1中制备的式(XXI)的化合物转化为式(IIh)的化合物。
<方法5>
按照本发明的方法5，式(IIi)和式(IIj)的化合物被制备如下。在步骤1中，将式(III)的化合物与醇基上具有保护基的式(XXIII)的化合物反应，随后进行去保护反应。将来自上述反应的式(XXIV)的化合物转化为式(IIi)的化合物。此时，利用偶联剂，例如碳酰二氯(carbonyl dichloride)、triphosgen、二碳酸二叔丁酯或1，1’-羰基二咪唑等，将式(III)的化合物与式(XXIII)的化合物进行反应。所述反应可以在没有碱或有碱存在的条件下进行，所述碱一般是酰胺化反应可以接受的，例如吡啶、三乙胺、二乙基异丙基胺、N-甲基吗啉或二甲苯胺，在对反应没有负效应的溶剂中进行，所述溶剂例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二乙醚、乙醇和二甲基甲酰胺。反应温度不受具体限制，但通常在低温或室温下进行。通过一般的有机合成中已知的方法进行去保护反应。
在步骤2中，在与方法1中将式(VII)的化合物转化为式(IIa)的化合物时的条件相同的条件下，将步骤1中制备的式(XXIV)的化合物转化为式(IIi)的化合物。
在与方法1中将式(VII)的化合物转化为式(IIb)的化合物时的条件相同的条件下，将步骤1中制备的式(XXIV)的化合物转化为式(IIj)的化合物。
<方法6>
按照本发明的方法6，式(IIk)和式(IIl)的化合物被制备如下。在步骤1中，将式(III)的化合物与醇基上具有保护基的式(XXVI)的化合物进行反应，随后进行去保护反应。然后，将式(XXVII)的化合物转化为式(IIk)的化合物。此时，在对反应没有负效应的溶剂例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二乙醚、苯、乙腈等中，在没有碱或有酰胺化反应可接受的碱的条件下，所述的碱例如吡啶、三乙胺、二乙基异丙基胺或N-甲基吗啉等，进行式(III)的化合物与式(XXVI)的化合物的反应。反应温度不受具体限制，但通常在低温或室温下进行。通过一般的有机合成中已知的方法进行醇基的保护和去保护反应。
在步骤2中，在与方法1中将式(VII)的化合物转化为式(IIa)的化合物的条件相同的条件下，将步骤1中制备的式(XXVII)的化合物转化为式(IIk)的化合物。
在与方法1中将式(VII)的化合物转化为式(IIb)的化合物的条件相同的条件下，将步骤1中制备的式(XXVII)的化合物转化为式(IIl)的化合物。
<方法7>
按照本发明的方法7，按类似于在方法3中所述的步骤，由式(XXIX)的化合物制备式(IIm)和式(IIn)的化合物。
<方法8>
按照本发明的方法8，式(IIo)和式(IIp)的化合物被制备如下。在步骤1中，将式(XXIX)的化合物与式(IX’)的化合物进行反应，生成式(XXXIV)的化合物。在醚化反应可接受的碱存在的条件下，通过醇(X2＝O)或硫醇(X2＝S)与烷基卤(alkylhalide)的醚化反应进行此反应。作为适合此目的的碱，氢化钠(NaH)、叔丁醇钾(t-BuOK)、n-BuLi、氢氧化钠、氢氧化钾，以及相转移催化剂例如苄基三乙基氯化铵等，或冠醚是优选的。优选在对反应无负效应的溶剂中进行所述反应，所述溶剂例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二乙醚、甲苯、二甲基甲酰胺、水溶液、二甲亚砜或苯等。反应温度不受具体限制，但通常可以在低温或高温下进行，在低温或室温下进行所述反应。
在步骤2中，通过硝化反应或亚硝化反应，完成在上述步骤1中制备的(XXXIV)的化合物向式(IIo)的化合物的转化。按类似于在方法1中描述的步骤进行此反应，在所述方法1的步骤中完成了式(V)的化合物向式(IIa)的化合物的转化。
制备式(IIo)的化合物另一个方法如下。将式(XXIX)的化合物与醇基上具有保护基的式(XI’)的化合物进行反应，随后进行去保护反应，生成式(XXXV)的化合物。完成式(XXXV)的化合物向式(IIo)的化合物的转化。在与方法8中通过醚化反应完成的式(XXIX)的化合物向式(XXXIV)的化合物的转化反应的条件相同的条件下，将式(XXIX)的化合物与式(XI’)的化合物进行反应。
将式(XXXV)的化合物转化为式(IIo)的化合物，其反应条件与方法1中用于将式(VII)的化合物转化为式(IIa)的化合物的反应条件相同。
将式(XXXV)的化合物转化为式(IIp)的化合物，其反应条件与方法1中用于将式(VII)的化合物转化为式(IIb)的化合物的反应条件相同。
可以通过常用的方法分离和纯化由上述反应获得的靶化合物，所述方法例如柱色谱法、重结晶等。
本发明也提供含有<式1>所示的三环衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分的药物组合物。
本发明的三环衍生物或其药学上可接受的盐对癌细胞系显示出非常强的细胞毒性，而其对试验动物具有比秋水仙碱或紫杉醇注射剂低得多的毒性。
当将本发明的三环衍生物施用于移植了人肺癌细胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠时，肿瘤的大小和重量依照剂量成比例地显著减少。
对于HUVEC细胞，本发明的三环衍生物也具有强的抗血管生成活性。
因此，本发明的三环衍生物或其药学上可接受的盐可以被有效地用作抗癌剂、抗增殖剂和血管生成抑制剂。
除三环衍生物或其药学上可接受的盐之外，本发明的组合物另外可以包括至少一种活性组分，其与所述的三环衍生物或其药学上可接受的盐具有相同或相似的功能。
所述三环衍生物或其药学上可接受的盐可以口服或者肠胃外给药，而且可以被制备成药物制剂的一般形式。通过与常用的填料、增量剂(entenders)、粘结剂、湿润剂、崩解剂、稀释剂例如表面活性剂或赋形剂混合，本发明的三环衍生物或其药学上可接受的盐可以被制备以用于口服或肠胃外给药。用于口服的固态制剂为片剂、丸药、粉剂、粒剂和胶囊。通过混合一种或多种合适的赋形剂，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖和明胶等，制备这些固态制剂。除简单的赋形剂之外，可以使用润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石粉等。用于口服的液态制剂为悬液、溶液、乳剂和糖浆，而且除通常所使用的简单的稀释剂例如水和液体石蜡之外，上述制剂可以含有各种不同的赋形剂，例如湿润剂、增甜剂、芳香剂和防腐剂。用于肠胃外给药的制剂为灭菌水溶液、水不溶性赋形剂、悬液、乳剂、冻干剂(lyophilizedagent)和栓剂。除含有活性化合物之外，水不溶性赋形剂和悬液也可以含有丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、可注射酯如ethylolate等。栓剂可含有witepsol、macrogol、吐温61(tween61)、可可脂、月桂油(laurin butter)、甘油和明胶。
本发明的组合物可以被制备为口服或肠胃外给药(例如静脉注射、皮下注射、腹膜腔注射或局部注射)，根据重量、年龄、性别、健康状况和患者的饮食以及给药方法、排泄率和疾病严重程度来决定剂量。本发明的三环衍生物优选的有效剂量为3～300mg/kg(体重)，给药次数为每天一次或几次。
实施例
本发明的这些实践性的且目前为优选的实施方案是阐述性的，如下列实施例所示。
然而，本发明并不限于下列实施例。
按照在[EP 0493064；Synthetic Communications 1997，27(2)，293-296]中所述的方法制备用于下列实施例的7-脱乙酰秋水仙碱(7-Deacetylcolchicine)。
按照在(WO 9421598；Bioorganic & Medicinal Chemistry，Vol 5，No.12，pp2277-2282，1997)中所述的方法制备7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氢-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮。
按照在(J.Med.Chem，1985，28，1204-1208)中所述的方法制备硫代脱羰秋水仙碱(Thiodemecolcine)。
按照在(WO 9611184)中所述的方法制备(7S)-7-氨基-3-环戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氢-5H-苯并[a]庚搭烯-9-酮、(7S)-7-氨基-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氢-5H-苯并[a]庚搭烯-9-酮、(7S)-7-氨基-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氢-5H-苯并[a]庚搭烯-9-酮。
实施例1：
6-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-烟酰胺的制备
<步骤1>6-羟甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-烟酰胺的制备

按照在(Bioorg.Med.Chem.Lett，1996，6，3025-3028)中所述的方法合成6-羟甲基-烟酸。
在0℃，将EDCI(308mg，1.60mmol)加入到7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氢-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮(300mg，0.80mmol)、6-羟甲基烟酸(135mg，0.88mmol)和DMAP(60mg，0.48mmol)溶于10ml乙腈的溶液中。在室温下将反应化合物搅拌2小时。加入水结束反应，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(乙酸乙酯∶甲醇＝8∶1)纯化残余物，生成244mg靶化合物(收率：60％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.07-2.15(m，1H)，2.31-2.44(m，2H)，2.45(s，3H)，2.56-2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.66(q，J＝10.2Hz，2H)，4.90-4.93(m，1H)，6.56(s，1H)，7.13(t，J＝9.1Hz，2H)，7.40(d，J＝10.2Hz，1H)，7.52(s，1H)，8.15(dd，J＝2.2，5.8Hz，1H)，8.80(d，J＝6.9Hz，1H)，8.96(s，1H)
<步骤2>6-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-烟酰胺的制备

在-35℃，将在实施例1的步骤1制备的化合物(100mg，0.19mmol)和三苯基膦(57mg，0.21mmol)溶于乙腈/二氯甲烷(1.25ml/0.5ml)中，将NBS(42mg，0.23mmol)加入其中。反应混合物被搅拌20分钟。然后，在室温下将硝酸银(40mg，0.23mmol)逐滴缓慢加入此反应混合物中，在室温下将反应混合物搅拌18小时。加入水结束反应，并用氯仿萃取水层。通过无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(氯仿∶甲醇＝10∶1)纯化残余物，生成18mg靶化合物(收率：35％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.09-2.13(m，1H)，2.31-2.43(m，2H)，2.46(s，3H)，2.55-2.64(m，1H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.93-4.98(m，1H)，5.50(s，2H)，6.56(s，1H)，7.16(t，J＝10.9Hz，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，7.40(d，J＝10.6Hz，1H)，7.59(s，1H)，8.27(dd，J＝2.2，5.8Hz，1H)，8.77(d，J＝7.3Hz，1H)，9.08(s，1H)
实施例2～4
按类似于实施例1中所述的过程合成实施例2-实施例4的化合物，并通过如下所述的方法制备中间体。
<中间体1>5-羟甲基-呋喃-2-羧酸的制备
按照在(Helv.Chim.Acta，1926，9，1068)中所述的方法合成5-羟甲基-呋喃-2-羧酸。
<中间体2>3-羟甲基苯甲酸的制备

将间苯二甲酸二乙酯(9.100g，40.95mmol)溶于四氢呋喃(20ml)中。然后，将硼氢化锂(lithiumborohydride)(11.26ml，22.52mmol，2M四氢呋喃溶液)逐滴缓慢加入其中，并将反应混合物回流3小时。加入水结束反应，并用乙酸乙酯萃取水层。通过无水硫酸镁干燥组合的有机层，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残余物，生成5.76g 3-羟甲基苯甲酸乙酯(收率：77.1％，无色液体)。
将上述制备的酯化合物(1.317g，7.311mmol)溶于乙醇(6ml)中。然后将2NNaOH水溶液(11.0ml，21.93mmol)逐滴缓慢加入其中，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。用1％HCl水溶液中和此反应混合物，用乙酸乙酯萃取，并用饱和NaCl溶液洗涤。将组合的有机层通过无水硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(乙酸乙酯∶甲醇＝5∶1)纯化残余物，生成1.03g靶化合物(收率：99.2％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ4.66(s，2H)，7.44(t，J＝7.7Hz，1H)，7.58(d，J＝7.7Hz，1H)，7.92(d，J＝7.7Hz，1H)，8.04(s，1H)
实施例2：5-硝基氧甲基-呋喃-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.37-2.51(m，3H)，2.46(s，3H)，2.61-2.92(m，1H)，3.74(s，3H)，3.93(s，3H)，3.98(s，3H)，4.82-4.85(m，1H)，4.85(d，J＝13.2Hz，1H)，4.90(d，J＝13.2Hz，1H)，6.39(s，1H)，6.58(s，1H)，6.64(s，1H)，7.16(d，J＝10.6Hz，1H)，7.42(d，J＝10.2Hz，1H)，7.72(s，1H)，8.99(s，1H)
实施例3：N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.42(t，J＝6.6Hz，6H)，2.22-2.27(m，1H)，2.34-2.49(s，2H)，2.54-2.57(m，1H)，3.75(s，3H)，3.96(s，3H)，4.59-4.63(m，1H)，4.93-4.97(m，1H)，5.23(q，J＝13.0Hz，2H)，6.56(s，1H)，7.15(d，J＝10.6Hz，1H)，7.18-7.25(m，1H)，7.33(d，J＝8.0Hz，2H)，7.46(d，J＝10.2Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.88(s，1H)，8.40(s，1H)
实施例4：N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.49(t，J＝6.9Hz，3H)，2.17-2.24(m，1H)，2.34-2.47(m，2H)，2.45(s，3H)，2.49-2.58(m，1H)，3.75(s，3H)，3.97(s，3H)，4.12-4.15(m，2H)，4.89-4.96(m，1H)，5.24(q，J＝12.0Hz，2H)，6.56(s，1H)，7.15(d，J＝10.2Hz，1H)，7.21-7.25(m，1H)，7.31-7.35(m，1H)，7.41(d，J＝10.6Hz，1H)，7.60(s，1H)，7.71(d，J＝7.3Hz，1H)，7.78(s，1H)，8.23(s，1H)
实施例5：6-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制备
<步骤1>6-羟甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制备

按照与实施例1的步骤1相似的过程，通过使用6-羟甲基吡啶-2-羧酸(23mg，0.17mmol)，获得35mg靶化合物(收率：53％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.45(s，3H)，2.33-2.50(m，3H)2.52-2.73(m，1H)，3.75(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(S，3H)，4.28(d，J＝14Hz，1H)，4.44(d，J＝14Hz，1H)4.86-4.92(m，1H)，6.57(s，1H)，7.13(d，J＝10.4Hz，1H)，7.37-7.48(m，4H)，7.73(s，1H)，9.80(d，J＝8Hz，1H)
<步骤2>6-溴甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制备

将在步骤1制备的化合物(50mg，0.098mmol)溶于二氯甲烷(6ml)中。然后，在0℃，将三溴膦(PBr3，0.005ml，0.05mmol)逐滴缓慢加入其中，并将反应化合物在室温下搅拌3小时。加入甲醇结束反应。将组合的有机层通过无水硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(氯仿∶甲醇＝99∶1)纯化残余物，生成40mg靶化合物(收率：71％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.06-2.14(m，1H)，2.33-2.41(m，1H)，2.41(s，3H)，2.46-2.54(m，1H)2.58-2.63(m，1H)，3.72(s，3H)，3.90(s，3H)，3.95(S，3H)，4.55(d，J＝2.8Hz，2H)，4.77-4.83(m，1H)，6.57(s，1H)，7.04(d，J＝10.4Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.31(d，J＝10.4Hz，1H)，7.58(d，J＝7.6Hz，1H)，7.78(t，J＝7.6Hz，1H)，7.90(d，J＝8.0Hz，1H)，8.53(d，J＝7.6Hz，1H)
<步骤3>6-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制备

将在步骤2中制备的化合物(40mg，0.070mmol)溶解在乙腈中(3ml)。然后，将硝酸银(23mg，0.14mmol)逐滴缓慢加入其中，并将反应化合物在室温下搅拌12小时。用水洗涤此反应混合物，并减压浓缩。经柱色谱法(氯仿∶甲醇＝99∶1)纯化残余物，生成17mg靶化合物(收率：44.7％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.03-2.10(m，1H)，2.33-2.41(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.54(m，1H)2.58-2.65(m，1H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.95(S，3H)，4.77-4.83(m，1H)，5.63(d，J＝3.2Hz，2H)，6.58(s，1H)，7.06(d，J＝10.4Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.31(d，J＝10.4Hz，1H)，7.53(d，J＝7.6Hz，1H)，7.88(t，J＝8.0Hz，1H)，8.02(d，J＝7.2Hz，1H)，8.39(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例6～24
按类似于在实施例5中所述的过程合成实施例6-实施例24的化合物，并通过如下所述的方法制备中间体。
<中间体3>6-羟甲基-吡啶-2-羧酸的制备

将6-羟甲基-吡啶-2-羧酸乙酯(200mg，1.1mmol)(J.Amer.Chem.Soc，1982，104，2251-2257)溶解在甲醇(1ml)中。然后，将2N NaOH水溶液(1ml)逐滴缓慢加入其中，并将反应化合物在室温下搅拌1小时。用2N HCl将此反应混合物酸化(pH＝3)。将溶剂减压浓缩，然后将其溶于甲醇，并过滤。减压浓缩滤液，生成150mg靶化合物(收率：89％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ5.05(s，2H)，8.34(d，J＝8.0Hz，1H)，8.47(d，J＝8.0Hz，1H)8.73(d，J＝8.0Hz，1H)
<中间体4>5-羟甲基-噻吩-2-羧酸的制备

将噻吩-2，5-二羧酸(4g，23.3mmol)溶于甲醇(300ml)中。将催化量的硫酸缓慢加入其中。回流反应混合物，生成3.8g噻吩-2，5-二羧酸二甲酯(收率：81.7％，白色固体)。在氮气氛，室温下，将噻吩-2，5-二羧酸二甲酯(3.7g，18.84mmol)溶于无水四氢呋喃(50ml)中。在0℃，将2.0M硼氢化锂四氢呋喃溶液(5.5ml，11mmol)逐滴缓慢加入其中。反应混合物被回流3小时，生成2.1g5-羟甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(收率：64.7％，白色固体)。将5-羟甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(2.1g，12.2mmol)溶解在甲醇(20ml)中。将2N NaOH水溶液(15ml)缓慢加入其中。反应混合物在室温下被搅拌1小时，生成1.75g靶化合物(收率：89％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.90(Br，1H)，4.79(d，J＝0.8Hz，2H)，6.97(d，J＝4Hz，1H)，7.66(d，J＝4Hz，1H)
<中间体5>2-氟-3-羟甲基-苯甲酸的制备

将2-氟间苯二甲酸(3g，16.3mmol)(J.Amer.Chem.Soc.，1943，65，2308)溶于甲醇(150ml)中。向其中缓慢加入催化量的硫酸。回流反应混合物。减压浓缩生成物以去除溶剂，并将其溶于乙酸乙酯。用饱和碳酸钠洗涤合并的有机层，通过无水硫酸钠进行干燥，并减压浓缩。经柱色谱法(乙酸乙酯∶己烷＝1∶2)纯化残余物，生成3.1g2-氟-间苯二甲酸二甲酯(收率：88％，白色固体)。在氮气氛，室温下，将噻吩-2，5-二羧酸二甲酯(3.1g，14.6mmol)溶于无水四氢呋喃(50ml)中。在0C，将2.0M硼氢化锂四氢呋喃溶液(4.4ml，8.7mmol)缓慢加入其中。将反应混合物回流3小时。用1N HCl水溶液酸化此反应混合物，减压浓缩以去除溶剂，并用氯仿萃取。通过无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，并减压浓缩溶剂。经柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇＝99∶1)纯化残余物，生成1.5g2-氟-3-羟甲基-苯甲酸甲酯(收率：58％，白色固体)。将2-氟-3-羟甲基-苯甲酸甲酯(1.3g，7.6mmol)溶于甲醇(20ml)中。向其中缓慢加入2N NaOH水溶液(14ml)。反应混合物在室温下被搅拌1小时。用2N HCl酸化(pH＝3)此反应混合物。溶剂被减压浓缩，然后溶于甲醇中并过滤。减压浓缩滤液，生成1.15g靶化合物(收率：88％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ4.58(d，J＝5.2Hz，2H)，5.37(t，J＝5.2Hz，1H)7.28(t，J＝8Hz，1H)，7.68(t，J＝8Hz，1H)，7.74(t，J＝8Hz，1H)
<中间体6>3-氟-5-羟甲基-苯甲酸的制备
<步骤1>3-氟-5-羟甲基-苯甲酸甲酯的制备

将5-氟间苯二甲酸二甲酯(1.6g，7.54mmol)(J.Org.Chem；1969，34，1960-1961)溶于四氢呋喃(15ml)中。然后，在0℃将2.0M硼氢化锂四氢呋喃溶液(2.6ml，5.27mmol)逐滴缓慢加入其中，并将反应混合物回流3小时。用1N HCl水溶液酸化此反应混合物，将其减压浓缩，以去除溶剂，并用氯仿萃取。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。经柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇＝99∶1)纯化残余物，生成800mg靶化合物(收率：57％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.92(d，J＝1.6Hz，3H)，4.75(d，J＝4Hz，2H).7.29-7.32(m，1H)，7.61(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，7.8(d，J＝0.8Hz，1H)
<步骤2>3-氟-5-羟甲基-苯甲酸的制备

按照与在中间体3的方法中相似的过程，通过使用在步骤1中制备的化合物，获得1.6g靶化合物(收率：94％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ4.66(d，J＝0.8Hz，2H)，7.33-7.36(m，1H)，7.56-7.59(m，1H)，7.83-7.84(m，1H)
<中间体7>4-氟-3-羟甲基-苯甲酸的制备
<步骤1>4-氟-间苯二甲酸的制备

将4-氟-3-甲基-苯甲酸(2.52g，16.346mmol)和高锰酸钾(10.33g，65.382mmol)溶于水溶液中(300ml)，并将该混合物回流1天。将反应混合物过滤，并在室温下冷却所生成的溶液，然后将浓HCl溶液加入其中。加热所生成的固体，直到它被完全熔化为止。将温度再次降至室温，然后过滤该固体，生成2.08g靶化合物(收率：69.1％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.32(dd，J＝10.4，8.6Hz，1H)，8.21-8.25(m，1H)，8.59(dd，J＝7.0，2.4Hz，1H)
<步骤2>4-氟-间苯二甲酸二甲酯的制备

将在步骤1中制备的化合物(2.08g，11.29mmol)溶于甲醇(30ml)中。然后，向其中加入10滴浓硫酸。将反应混合物回流1天，用饱和碳酸氢钠水溶液中和，并用氯仿萃取。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，生成2.21g靶化合物(收率：92.2％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.96(s，3H)，3.97(s，3H)，7.22(dd，J＝10.3，8.8Hz.1H)，8.20-8.23(m，1H)，8.64(dd，J＝7.0，2.2Hz，1H)
<步骤3>4-氟-3-羟甲基-苯甲酸甲酯和2-氟-5-羟甲基-苯甲酸甲酯的制备

将在步骤2中制备的化合物(104.5mg，0.493mmol)溶于四氢呋喃溶液(4ml)中。然后，将2M硼氢化锂四氢呋喃溶液(0.123ml，0.246mmol)缓慢加入其中。将反应混合物回流1天。用水结束反应。然后，在0℃，用1M HCl溶液将pH调整为5。用乙酸乙酯萃取。将组合的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残余物，生成4-氟-3-羟甲基-苯甲酸甲酯(45.4mg，收率：50.1％，无色液体)和2-氟-5-羟甲基-苯甲酸甲酯(15.4mg，收率：17.0％，无色液体)。
4-氟-3-羟甲基-苯甲酸甲酯：
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.73(t，J＝5.1Hz，1H)，3.90(s，3H)，4.78(d，J＝5.1Hz，2H)，7.07(dd，J＝9.2，9.2Hz，1H)，7.93-7.97(m，1H)，8.14(dd，J＝7.1，2.2Hz，1H)
2-氟-5-羟甲基-苯甲酸甲酯：
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.96(t.J＝4.4Hz，1H)，3.94(s，3H)，4.70(d，J＝4.4Hz，2H)，7.13(dd，J＝10.6，8.4Hz，1H)，7.52-7.56(m，1H)，7.92(dd，J＝7.0，2.2Hz，1H)
<步骤4>4-氟-3-羟甲基-苯甲酸的制备

按照与在中间体3的方法中相似的过程，通过使用在步骤3中制备的化合物(1.074g，5.380mmol)，获得0.906g靶化合物(收率：91.3％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ4.69(s，2H)，7.13(dd，J＝9.9，8.8Hz，1H)，7.90-7.97(m，1H)，8.16(dd，J＝7.3，2.2Hz，1H)
<中间体8>2-氟-5-羟甲基-苯甲酸的制备

按照与在中间体3的方法中相似的过程，通过使用在中间体7的步骤3中制备的2-氟-5-羟甲基-苯甲酸甲酯，获得靶化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ4.61(s，2H)，7.17(dd，J＝11.0，8.4Hz，1H)，7.55-7.59(m，1H)，7.93(dd，J＝7.1，2.4Hz，1H)
<中间体9>3-羟基-5-羟甲基-苯甲酸的制备

在氮气氛，0℃下，将5-羟基-间苯二甲酸甲酯(300mg，1.42mmol)溶于四氢呋喃(20ml)中。将硼氢化锂(30mg，0.7mmol)加入其中。在室温下，反应混合物被搅拌3小时。加入水结束反应，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)纯化残余物。将所得到的3-羟基-5-羟甲基-苯甲酸甲酯(170mg，0.93mmol)溶于甲醇(1ml)中。向其中加入1N NaOH水溶液(1ml)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。用2N HCl酸化此反应混合物(pH＝3)。将溶剂减压浓缩，然后溶于甲醇中并过滤。将滤液减压浓缩，生成150mg靶化合物(收率：96％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ3.87(s，3H)，4.57(s，2H)，7.02(s，1H)，7.31(s，1H)，7.48(s，1H)
<中间体10>3，5-二-羟甲基-苯甲酸的制备
<步骤1>3，5-二-羟甲基-苯甲酸甲酯的制备

将苯-1，3，5-三羧酸三甲酯(1.010g，4.003mmol)溶于四氢呋喃(15ml)中。然后，降温至0℃，并向其中缓慢加入硼氢化锂(0.160g，4.003mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。缓慢加入水(0.15ml)和15％NaOH水溶液(0.15ml)，以结束反应。再次加入水溶液(0.45ml)。减压浓缩溶剂。经柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)纯化残余物，生成0.34g靶化合物(收率43.1％，无色液体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ3.91(s，3H)，4.66(s，4H)，7.59(s，1H)，7.93(s，2H)
<步骤2>3，5-二-羟甲基-苯甲酸的制备

按照与在中间体3的方法中相似的过程，通过利用在步骤1中制备的化合物(1.50g，7.65mmol)，获得0.617g靶化合物(收率：44.3％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ5.21(s，4H)，7.55(s，1H)，7.92(s，2H)
<中间体11>2-羟基-4-羟甲基-苯甲酸的制备
<步骤1>2-羟基-4-羟甲基-苯甲酸甲酯的制备

将2-羟基-4-甲基-苯甲酸甲酯(166mg，1mmol)溶于CCl4(1.5ml)中。向其中加入NBS(177mg，1mmol)和过氧化苯甲酰(benzoyl peroxide)(5mg，0.02mmol)。将反应混合物在70℃搅拌12小时。然后，用水洗涤反应混合物，经无水硫酸钠干燥，并过滤。将溶剂减压浓缩。经柱色谱法(二氯甲烷∶己烷＝1∶4)纯化残余物，生成4-溴甲基-2-羟基-苯甲酸甲酯(130mg，收率：53％，白色固体)。将所产生的化合物(130mg，0.53mmol)溶于水溶液(1.5ml)和1，4-二噁烷(1.5ml)中，并将混合物在90℃搅拌12小时。用氯仿萃取反应混合物。经无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(乙酸乙酯∶己烷＝1∶4)纯化残余物，生成55mg靶化合物(收率：57％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.95(s，3H)，4.71(d，J＝6Hz，2H)，6.88(d，J＝8Hz，1H)，6.99(s，1H)，7.82(d，J＝8Hz，1H)，10.79(s，1H)
<步骤2>2-羟基-4-羟甲基-苯甲酸的制备

按照与在中间体3的方法中相似的过程，通过利用在步骤1中制备的化合物，获得45 mg靶化合物(收率：90％，白色固体)。
<中间体12>4-羟甲基-噻吩-2-羧酸的制备
<步骤1>A：4-甲基-噻吩-2-羧酸，
B：3-甲基-噻吩-2-羧酸的制备

在氮气氛，室温下，将2.5M n-丁基锂(12.2ml，30.55mmol)溶于二乙醚(1ml)中。向其中缓慢加入溶于二乙醚中的3-甲基-噻吩(3g，30.55mmol)。将混合物回流2小时。使反应室冷却至0℃，并将干冰缓慢加入其中。用45ml水结束反应。萃取并去除二乙醚层。用1N HCl溶液酸化水层，并用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)纯化残余物，生成靶化合物A(900mg，白色固体)和B(650mg，白色固体)。
<步骤2>4-溴甲基-噻吩-2-羧酸甲酯的制备

将在步骤1中制备的4-甲基-噻吩-2-羧酸(900mg，6.33mmol)溶于甲醇(15ml)中。向其中缓慢加入催化量的硫酸。回流反应混合物，生成4-甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(890mg，收率：90％，，白色固体)。将4-甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(200mg，1.28mmol)和NBS(215mg，1.216mmol)以及催化量的过氧化苯甲酰溶于四氯化碳溶液(5ml)中。将反应混合物回流(70℃)3小时，生成165mg靶化合物(收率：55％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ3.89(s，3H)，4.46(s，2H)，7.49(s，1H)，7.80(s，1H)
<步骤3>4-羟甲基-噻吩-2-羧酸的制备

将在步骤2中制备的化合物(150mg，0.638mmol)溶于1，4-二噁烷(1.5ml)和水(1.5ml)中。向其中缓慢加入硝酸银(130mg，0.765mmol)。将反应混合物在室温下搅拌12小时，生成4-羟甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(60mg，收率：55％，白色固体)。在室温下将此化合物(60mg，0.348mmol)溶于甲醇(1ml)中。向其中缓慢加入1N NaOH水溶液(1ml)，并将此反应混合物在室温下搅拌1小时，生成50mg靶化合物(收率：95％，白色固体)。
<中间体13>3-羟甲基-噻吩-2-羧酸的制备
<步骤1>3-溴甲基-噻吩-2-羧酸甲酯的制备

按照在中间体12中的步骤2的方法中相似的过程，通过使用在中间体12的步骤1中制备的3-甲基-噻吩-2-羧酸(650mg，4.57mmol)，获得750mg靶化合物(收率：79％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ3.90(s，3H)，4.91(s，2H)，7.18(d，J＝5.2Hz，1H)，7.46(d，J＝5.2Hz，1H)
<步骤2>3-羟甲基-噻吩-2-羧酸的制备

按照在中间体12中的步骤3的方法中相似的过程，通过使用在步骤1中制备的化合物(750mg，3.19mmol)，获得210mg靶化合物(收率：92％，白色固体)。
<中间体14>(3-羟甲基-苯基)-乙酸的制备

将间甲苯基乙酸乙酯(1g，5.6mmol)、NBS(948mg，5.33mmol)和催化量的过氧化苯甲酰溶于四氯化碳(15ml)中。将反应混合物回流(70℃)3小时，生成(3-溴甲基-苯基)-乙酸乙酯(600mg，收率：42％，白色固体)。将(3-溴甲基-苯基)-乙酸乙酯(130mg，0.50mmol)和碳酸钙(300mg，3mmol)溶于水(2ml)和1，4-二噁烷(2ml)中。回流反应化合物，生成(3-羟甲基-苯基)-乙酸乙酯(85mg，收率：87％，白色固体)。将(3-羟甲基-苯基)-乙酸乙酯(85mg，0.43mmol)在室温下溶于甲醇(1ml)中。向其中加入1N NaOH水溶液(1ml)。在室温下将反应混合物搅拌1小时，生成65mg靶化合物(收率：91％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ3.66(s，2H)，4.57(s，2H)，7.21-7.32(m，4H)
<中间体15>3-(2-羟基-乙基)-苯甲酸的制备

将间苯二甲酸(5g，30mmol)溶于甲醇(50ml)中。向其中加入催化量硫酸。在回流下将反应混合物搅拌12小时，生成间苯二甲酸二甲酯(5.2g，收率：90％，白色固体)。将间苯二甲酸二甲酯(5.2g，26.7mmol)溶于四氢呋喃(30ml)中。将2M硼氢化锂四氢呋喃(13ml，26.7mmol)加入其中。回流反应混合物，生成3-羟甲基-苯甲酸甲酯(2.7g，收率：63％，无色液体)，并将3-羟甲基-苯甲酸甲酯(200mg，1.20mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中。将PCC(388mg，1.8mmol)加入其中。反应混合物在室温下被搅拌3小时，生成3-甲酰-苯甲酸甲酯(140mg，收率：72％，白色固体)。在氮气氛下，将(甲氧基甲基)三苯基氯化鎓((methoxymethyl)triphenylphosphonium chloride)(770mg，2.24mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中。在-78℃将1M NaHMDS四氢呋喃(2ml，2.04mmol)缓慢加入其中，并将反应混合物搅拌1小时。将溶于四氢呋喃(2ml)的3-甲酰-苯甲酸甲酯(160mg，0.975mmol)缓慢加入其中。在室温下，将反应混合物搅拌24小时，生成3-(2-甲氧基乙烯基)-苯甲酸甲酯(121mg，收率：65％，白色固体)。将3-(2-甲氧基乙烯基)-苯甲酸甲酯(120mg，0.63mmol)溶于四氢呋喃(3ml)中。向其中加入4M HCl(2ml)，并将反应混合物在室温下搅拌24小时，生成3-(2-氧代-乙基)-苯甲酸甲酯(60mg，收率：54％，白色固体)。将3-(2-氧代-乙基)-苯甲酸甲酯(60mg，0.036mmol)溶于乙醇(2ml)中。在0℃，向其中加入NaBH4(25mg，0.67mmol)，并将混合物搅拌1小时，生成3-(2-羟乙基)-苯甲酸甲酯(50mg，收率：84％，白色固体)。将3-(2-羟乙基)-苯甲酸甲酯(50mg，0.28mmol)溶于甲醇(1ml)中。向其中加入1NNaOH水溶液(1ml)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，生成43mg靶化合物(收率：95％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.32(br，1H)，2.89(t，J＝6.4Hz，2H)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H)，7.36(t，J＝7.6Hz，1H)，7.42(d，J＝5.6Hz，1H)，7.88(d，J＝8.8Hz，1H)，7.89(s，1H)
实施例6：5-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.07-2.11(m，1H)，2.32-2.45(m，2H)，2.45(s，3H)，2.53-2.56(m，1H)，3.71(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(S，3H)，4.84-4.91(m，1H)，5.46(s，2H)，6.56(s，1H)，6.95(d，J＝3.6Hz，1H)，7.13(d，J＝10.8Hz，1H)，7.37(d，J＝10.8Hz，1H)，7.58(d，J＝4.0Hz，1H)，7.61(s，1H)，8.50(d，J＝6.8Hz，1H)
实施例7：N-[(7S)-3-环戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.61-1.73(m，2H)，1.85-2.00(m，6H)，2.21-2.65(m，4H)，2.44(s，3H)，3.75(s，3H)，3.93(s，3H)，4.82-4.88(m，1H)，4.92-5.00(m，1H)，5.16(dd，J＝12，31.2Hz，2H)，6.55(s，1H)，7.13-7.17(m，2H)，7.28(d，J＝6.4Hz，1H)，7.41(d，J＝10.8Hz，1H)，7.68-7.70(m，1H)，7.72(s，1H)，7.78(s，1H)，8.78(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例8：N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.49(t，J＝6.9Hz，3H)，1.93-1.98(m，1H)，2.31-2.39(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.49(m，1H)，2.51-2.59(m，1H)，3.73(s，3H)，3.96(s，3H)，4.11-4.14(m，2H)，4.83-4.86(m，1H)，5.53(d，J＝12.8Hz，1H)，5.59(d，J＝12.4Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.07(d，J＝10.2Hz，1H)，7.10-7.15(m，1H)，7.20-7.28(m，1H)，7.31(d，J＝10.2Hz，1H)，7.57(t，J＝6.4Hz，1H)，7.97(t，J＝6.9Hz，1H)
实施例9：2-氟-N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.41(q，J＝6.0Hz，6H)，1.92-1.99(m，1H)，2.31-2.40(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.52(m，1H)，2.55-2.60(m，1H)，3.72(s，3H)，3.94(s，3H)，4.57-4.63(m，1H)，4.83-4.89(m，1H)，5.53(d，J＝12.8Hz，1H)，5.59(d，J＝12.4Hz，1H)，6.57(s，1H)，7.07(d，J＝10.6Hz，1H)，7.15-7.19(m，1H)，7.23-7.27(m，1H)，7.34(d，J＝10.2Hz，1H)，7.56(t，J＝7.1Hz，1H)，7.7(t，J＝7.5Hz，1H)
实施例10：2-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.95-2.02(m，1H)，2.31-2.54(m，2H)，2.43(s，3H)，2.59-2.63(m，1H)，3.73(s，3H)，3.87(s，3H)，3.92(s，3H)，4.82-4.88(m，1H)，5.51(d，J＝12.8Hz，1H)，5.60(d，J＝12.8Hz，1H)，6.58(s，1H)，7.06(d，J＝10.6Hz，1H)，7.22-7.27(m，2H)，7.28(s，1H)，7.32(d，J＝10.6Hz，1H)，7.54-7.58(m，1H)，7.93-7.98(m，1H)
实施例11：N-[(7S)-3-环戊氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.61-1.73(m，2H)，1.85-2.00(m，6H)，2.35-2.52(m，4H)，2.42(s，3H)，3.72(s，3H)，3.93(s，3H)，4.82-4.88(m，2H)，5.57(dd，J＝12.8，37.6Hz，2H)，6.55(s，1H)，7.05(d，J＝10.4Hz，1H)，7.09-7.13(m，1H)，7.26(d，J＝7.2Hz，2H)，7.32(d，J＝10.4Hz，1H)，7.55-7.59(m，1H)，7.96-8.00(m，1H)
实施例12：3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.31-2.45(m，3H)，2.46(s，3H)，2.59-2.63(m，1H)，3.75(s，3H)，3.93(s，3H)，3.98(S，3H)，4.90-4.95(m，1H)，5.11(dd，J＝12.8，45.6Hz，2H)，6.57(s，1H)，7.03(d，J＝7.6Hz，1H)，7.19(d，J＝8.8Hz，1H)，7.30-7.33(m，1H)，7.42(d，J＝10.8Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.68(s，1H)，8.76(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例13：N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基)-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.50(t，J＝6.9，3H)，2.33～2.42(m，3H)，2.46(s，3H)，2.51～2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.98(s，3H)，4.11～4.16(m，2H)，4.90～4.93(m，1H)，5.05(d，J＝12.4，1H)，5.17(d，J＝12.4，1H)，6.56(s，1H)，7.03(d，J＝7.3，1H)，7.20(d，J＝10.6，1H)，7.31(d，J＝9.1，1H)，7.45(d，J＝10.6，1H)，7.55(s，1H)，7.69(s，1H)，8.88(d，J＝7.3，1H)
实施例14：3-氟-N-[(7S)-3-异丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.37～1.44(m，6H)，2.34～2.41(m，3H)，2.46(s，3H)，2.51～2.58(m，1H)，3.75(s，3H)，3.96(s，3H)，4.57～4.62(m，1H)，4.91～4.95(m，1H)，5.05(d，J＝12.4，1H)，5.17(d，J＝12.4，1H)，6.56(s，1H)，7.03(d，J＝8.4，1H)，7.20(d，J＝10.6，1H)，7.31(d，J＝7.3，1H)，7.45(d，J＝10.6，1H)，7.55(s，1H)，7.70(s，1H)，8.91(d，J＝7.3，1H)
实施例15：N-[(7S)-3-环戊氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.64～1.69(m，2H)，1.83～1.98(m，6H)，2.35～2.43(m，3H)，2.46(s，3H)，2.51～2.58(m，1H)，3.74(s，3H)，3.94(s，3H)，4.82～4.84(m，1H)，4.91～4.94(m，1H)，5.04(d，J＝12.4，1H)，5.16(d，J＝12.4，1H)，6.55(s，1H)，7.02(d，J＝8.4，1H)，7.20(d，J＝10.6，1H)，7.31(d，J＝7.3，1H)，7.45(d，J＝10.2，1H)，7.55(s，1H)，7.70(s，1H)，8.93(d，J＝6.9，1H)
实施例16：4-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.22-2.51(m，3H)，2.46(s，3H)，2.55-2.63(m，1H)，3.76(s，3H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.90-4.97(m，1H)，5.10(d，J＝12.1Hz，1H)，5.35(d，J＝12.1Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.86(dd，J＝9.2，8.8Hz，1H)，7.18(d，J＝10.3Hz，1H)，7.43(d，J＝10.3Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.76-7.80(m，1H)，7.91(dd，J＝6.80，2.2Hz，1H)，8.93(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例17：2-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.94-2.01(m，1H)，2.31-2.54(m，2H)，2.43(s，3H)，2.58-2.63(m，1H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.81-4.87(m，1H)，5.36(s，2H)，6.57(s，1H)，7.06(d，J＝10.3Hz，1H)，7.16-7.28(m，2H)，7.26(s，1H)，7.33(d，J＝10.3Hz，1H)，7.51-7.55(m，1H)，7.99(dd，J＝7.3，2.6Hz，1H)
实施例18：3-羟基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.30-2.43(m，6H)，2.56-2.57(m，1H)，3.61(s，3H)，3.90(s，3H)，3.92(s，3H)，4.82-4.85(m，1H)，5.00(dd，J＝30.8Hz，12.8Hz，2H)，6.56(s，1H)，6.62(s，1H)，7.11(s，2H)，7.16-7.19(m，2H)，7.41(d，J＝10.8Hz，1H)，7.66(s，1H)，8.57(brs，1H，NH)，8.78(brs，1H，OH)
实施例19：3，5-二-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.29-2.51(m，3H)，2.46(s，3H)，2.60-2.62(m，1H)，3.77(s，3H)，3.93(s，3H)，3.99(s，3H)，4.94-4.98(m，1H)，5.18(s，4H)，6.58(s，1H)，7.20(d，J＝10.6Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.45(d，J＝10.6Hz，1H)，7.77(s，2H)，7.81(s，1H)，9.12(d，J＝7.0Hz，1H)
实施例20：2-羟基-4-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.25-2.63(m，4H)，2.47(s，3H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(S，3H)，4.85-4.92(m，1H)，5.27(d，J＝4.8Hz，2H)，6.53(d，J＝8.4Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.61(s，1H)，7.20(d，J＝10.4Hz，1H)，7.42(d，J＝10Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.72(d，J＝8Hz，1H)，9.13(d，J＝6.8Hz，1H)，12.29(s，1H)
实施例21：4-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.21-2.29(m，1H)，2.34-2.46(m，5H)，2.51-2.58(m，1H)，3.71(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(S，3H)，4.88-4.95(m，1H)，5.18(dd，J＝12.8，20Hz，2H)，6.56(s，1H)，7.17(d，J＝10.4Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.41(d，J＝10.4Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.74(s，1H)，8.81(d，J＝6.4Hz，1H)
实施例22：3-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.04-2.17(m，1H)，2.30-2.45(m，5H)，2.57-2.64(m，1H)，3.73(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(S，3H)，4.67-4.88(m，1H)，5.66(d，J＝13.6Hz，1H)，5.80(d，J＝13.6Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.02(d，J＝4.4Hz，1H)，7.08(d，J＝10.4Hz，1H)，7.26(d，J＝4.4Hz，1H)，7.29(d，J＝10.4Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.45(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例23：2-(3-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.82-1.95(m，1H)，2.21-2.28(m，1H)，2.31-2.42(m，1H)，2.45(s，3H)，2.47-2.53(m，1H)，3.51(d，J＝14.0Hz，1H)，3.64(s，3H)，3.66(d，J＝14.0Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.93(s，3H)，4.66-4.72(m，1H)，5.40(s，2H)，6.51(s，1H)，7.11(d，J＝10.4Hz，1H)，7.24-7.38(m，5H)，7.48(s，1H)，7.90(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例24：3-(2-硝基氧-乙基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.05-2.11(m，1H)，2.17-2.56(m，2H)，2.46(s，3H)，2.56-2.60(m，1H)，2.81-2.91(m，2H)，3.69(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.45(t，J＝6.8，Hz，2H)，4.89-4.95(m，1H)，6.56(s，1H)，7.12-7.24(m，3H)，7.39(d，J＝10.4Hz，1H)，7.61-7.64(m，2H)，7.69(s，1H)，8.22(d，J＝6.8Hz，1H)
实施例25：3-硝基氧-苯甲酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯的制备
<步骤1>3-氯甲基-苯甲酸-{5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基(carbamonyl)]-吡啶-2-基}-甲酯的制备

将在实施例1步骤1中制备的化合物(100mg，0.19mmol)溶于3ml二氯甲烷中。将3-(氯甲基)苯甲酰氯(0.030ml，0.21mmol)和三乙胺(0.082ml，0.59mmol)缓慢加入其中，并使混合物在室温下反应10分钟。加入水结束反应，并用二氯甲烷萃取水层。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(乙酸乙酯)纯化残余物，生成99mg靶化合物(收率：79％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.14-2.16(m，1H)，2.30-2.39(m，1H)，2.43-2.45(m，1H)，2.48(s，3H)，2.68-2.96(m，1H)，3.67(s，3H)，3.90(s，3H)，3.91(s，3H)，4.83-4.93(m，1H)，4.88(s，2H)，5.51(s，2H)，6.77(s，1H)，7.27(s，1H)，7.52(t，J＝7.7Hz，1H)，7.65-7.70(m，2H)，8.05(d，J＝7.7Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.28(d，J＝10.6Hz，1H)，9.02(s，1H)
<步骤2>3-硝基氧基-苯甲酸-{5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基}-甲酯的制备

将步骤1中制备的化合物(90mg，0.13mmol)和碘化钠(31mg，0.20mmol)溶于3ml丙酮中，并使混合物在室温下反应1天。加入水结束反应，并用乙酸乙酯萃取水层。在减压下浓缩溶剂。将反应浓缩物与硝酸银(30mg，0.045mmol)溶于5ml乙腈中，并使反应在室温下反应1小时。加入水结束反应，并用乙酸乙酯萃取水层。在减压下浓缩溶剂。经短柱色谱(乙酸乙酯)和PLC纯化残余物，生成26mg靶化合物(收率：29％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.09-2.17(m，1H)，2.35-2.41(m，2H)，2.44(s，3H)，2.55-2.58(m，1H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.92-4.95(m，1H)，5.45(s，2H)，5.47(s，2H)，6.56(s，1H)，7.13(d，J＝10.2Hz，1H)，7.35(t，J＝9.1Hz，2H)，7.50(t，J＝8.5Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.62(d，J＝7.3Hz，1H)，8.14(d，J＝8.3Hz，2H)，8.24(dd，J＝2.2，6.2Hz，1H，ArH)，8.36(d，J＝6.9Hz，1H)，9.09(s，1H)
实施例26～34
按类似于在实施例25中所述的过程合成实施例26-实施例34的化合物，通过如下所述的方法制备中间体。
<中间体16>2-羟基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

将2-羟基-苯甲酸(203mg，1.47mmol)、EDCI(385mg，2.01mmol)和HOBt(271mg，2.01mmol)溶于二甲基甲酰胺(10ml)中。将三乙胺(0.37ml，2.67mmol)加入其中，并将混合物在室温下搅拌1天。将7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲磺酰-6，7-二氢-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮(500mg，1.34mmol)加入其中，并将混合物在室温下搅拌1天。加入水结束反应，并用二乙醚萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶5)纯化残余物，并在甲醇中重结晶，生成516mg靶化合物(收率：78％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.14-2.17(m，1H)，2.31-2.37(m，1H)，2.40-2.44(s，1H)，2.45(s，3H)，2.56-2.60(m，1H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.85-4.92(m，1H)，6.56(s，1H)，6.64(d，J＝7.7Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.15(d，J＝10.6Hz，1H)，7.22(d，J＝7.3Hz，1H)，7.38(d，J＝10.6Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)
<中间体17>3-羟基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

按照与在中间体16的制备方法中相似的过程，通过使用3-羟基苯甲酸(497mg，1.33mmol)，获得558mg靶化合物(收率：85％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.07-2.15(m，1H)，2.18-2.35(m，6H)，3.55(s，3H)，3.80(s，3H)，3.84(s，3H)，4.53-4.56(m，1H)，6.81(s，1H)，6.92(d，J＝6.8Hz，1H)，7.10(s，1H)，7.15-7.31(m，5H)，8.98(d，J＝7.6Hz，1H，-NH)，9.70(s，1H，-OH)
实施例26：4-硝基氧丁酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6 7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.06-2.16(m，1H)，2.08-2.11(m，2H)，2.31-2.49(m，1H)，2.45(s，3H)，2.57(t，J＝7.1Hz，2H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.52(t，J＝6.4Hz，2H)，4.91-4.94(m，1H)，5.21(s，2H)，6.56(s，1H)，7.13(d，J＝10.9Hz，1H)，7.21-7.25(m，1H)，7.38(d，J＝10.6Hz，1H)，7.52(s，1H)，8.22(d，J＝8.0Hz，1H)，9.05(s，1H)
实施例27：3-硝基氧甲基-苯甲酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.84-1.92(m，1H)，2.33-2.60(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.54(m，1H)2.55-2.60(m，1H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(S，3H)，4.74-4.81(m，1H)，5.51(s，2H)5.57(d，J＝4.0Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.04(d，J＝10.4Hz，1H)，7.25(d，J＝10.4Hz，1H)，7.54-7.60(m，2H)，7.65(d，J＝7.6Hz，1H)，7.87(t，J＝8.0Hz，1H)，7.99(d，J＝7.6Hz，1H)，8.21(s，2H)，8.22(s，1H)，8.41(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例28：4-硝基氧丁酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氧基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.02-2.09(m，1H)，2.11-2.18(m，2H)，2.21-2.40(m，2H)，2.43(s，3H)，2.47-2.56(m，1H)，2.63(t，J＝7.2Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(S，3H)，4.57(t，J＝6.4Hz，2H)，4.77-4.83(m，1H)，5.30(d，J＝4.8Hz，2H)，6.58(s，1H)，7.05(d，J＝10.4Hz，1H)，7.25(S，1H)，7.32(d，J＝10.4Hz，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.84(t，J＝8.0Hz，1H)，7.98(d，J＝8.0Hz，1H)，8.45(d，J＝6.8Hz，1H)
实施例29：3-硝基氧甲基-苯甲酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.48-1.55(m，1H)，1.83-1.89(m，1H)，2.22-2.39(m，2H)，2.42(s，3H)，3.62(s，3H)，3.87(s，3H)，3.92(s，3H)，4.63-4.70(m，1H)，5.54(s，2H)，6.47(s，1H)，6.89(d，J＝7.4Hz，1H)，7.03(d，J＝10.2Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.23(d，J＝10.1Hz，1H)，7.35(t，J＝7.3Hz，1H)，7.54(t，J＝7.4Hz，1H)，7.58(t，J＝7.6Hz，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H)，7.83(d，J＝7.7Hz，1H)，8.26(m，2H)
实施例30：4-硝基氧丁酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.60-1.90(m，1H)，2.10-2.14(m，2H)，2.26-2.39(m，1H)，2.44(s，3H)，2.46-2.51(m，1H)，2.56-2.61(m，1H)，2.80(t，J＝7.1Hz，2H)，3.70(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(s，3H)，4.55(t，J＝6.2Hz，2H)，4.74-4.81(m，1H)，6.57(s，1H)，6.82(d，J＝6.9Hz，1H)，7.08(d，J＝10.6Hz，1H)，7.13(d，J＝9.1Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.28-7.36(m，1H)，7.47(t，J＝9.9Hz，1H)，7.68(d，J＝9.5Hz，1H)
实施例31：3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.05-2.15(m，1H)，2.23-2.59(m，6H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.90-5.00(m，1H)，5.49(s，2H)，6.56(s，1H)，7.03(d，J＝10.4Hz，1H)，7.27(s，2H)，7.34(d，J＝8.8Hz，2H)7.53-7.65(m，2H)，7.76(s，1H)，7.77(d，J＝6.4Hz，1H)，8.13(m，3H)
实施例32：4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.04-2.18(m，3H)，2.25-2.60(m，6H)，2.65(t，J＝6.8Hz，2H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.56(t，J＝6.4Hz，2H)，4.87-4.94(m，1H)，6.56(s，1H)，7.08-7.12(m，2H)，7.26-7.35(m，2H)，7.48(s，1H)，7.59(s，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.75(d，J＝7.6Hz，1H，-NH)
实施例33：3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄基酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.05-2.18(m，1H)，2.31-2.47(m，2H)，2.40(s，3H)，2.55-2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.90-4.96(m，1H)，5.24(s，2H)，5.44(s，2H)，6.56(s，1H)，7.09(d，J＝10.6Hz，1H)，7.27(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.36(d，J＝10.6Hz，1H)，7.44(d，J＝7.6Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.0，7.6Hz，1H)，7.58(d，J＝8.0Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.91(s，1H)，8.05(d，J＝7.6Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.18(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例34：4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄基酯

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.00-2.14(m，3H)，2.31-2.51(m，4H)，2.44(s，3H)，2.56-2.60(m，1H)，3.75(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.49(t，J＝6.2Hz，2H)，4.89-4.95(m，1H)，4.99(d，J＝12.4Hz，1H)，5.04(d，J＝12.4Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.11(d，J＝10.6Hz，1H)，7.26(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.35-7.37(m，2H)，7.54(s，1H)，7.76(d，J＝8.0Hz，1H)，7.81(s，1H)，8.00(d，J＝7.6Hz，1H)
实施例35：2-亚硝基硫代-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备
<步骤1>2-巯基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

在硫代水杨酸(115mg，0.75mmol)中加入过量亚硫酰氯，并将混合物在加热下搅拌1天。减压浓缩反应混合物以去除亚硫酰氯，从而得到氯化合物。将7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氢-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮(243mg，0.62mmol)溶于纯化的二氯甲烷中。将三乙胺(0.26ml，1.86mmol)缓慢加入其中。在0℃，将溶于二氯甲烷的硫代水杨酸氯化物(thiosalycilic chloride)也加入其中，并将混合物搅拌30分钟。加入水结束反应，并用氯仿萃取水层。通过无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(氯仿∶甲醇＝12∶1)纯化残余物，得到210mg靶化合物(收率：66％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.06-2.17(m，1H)，2.33-2.49(m，2H)，2.42(s，3H)，2.54-2.59(m，1H)，3.72(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(s，3H)，4.86-4.93(m，1H)，6.56(s，1H)，7.06(d，J＝10.6Hz，1H)，7.14(t，J＝7.5Hz，1H)，7.24(d，J＝7.7Hz，1H)，7.31(d，J＝10.6Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.58(d，J＝7.3Hz，1H)，7.63(t，J＝8.6Hz，2H)
<步骤2>2-亚硝基硫-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

将在步骤1中制备的化合物(40mg，0.078mmol)溶于甲醇中。将1N HCl水溶液(3ml)加入其中。将溶于水(1.5ml)的亚硝酸钠(NaNO2，6.5mg，0.094mmol)也加入其中，并将化合物在室温下搅拌1小时。加入碳酸氢钠结束反应，并用氯仿萃取水层。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(氯仿∶甲醇＝12∶1)纯化残余物，并在甲醇中重结晶，生成34.1mg靶化合物(收率：81％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.07-2.14(m，1H)，2.31-2.37(m，1H)，2.42(s，3H)，2.45-2.48(m，1H)，2.54-2.59(m，1H)，3.72(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.88-4.94(m，1H)，6.56(s，1H)，7.06(d，J＝10.6Hz，1H)，7.10(t，J＝7.5Hz，1H)，7.21(t，J＝6.9Hz，1H)，7.31(d，J＝10.6Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.64(t，J＝8.6Hz，2H)，7.72(d，J＝7.3Hz，1H)
实施例36：3-亚硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

将3-氯甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氢苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺(119.8mg，0.228mmol)和碘化钠(136，5mg，0.911mmol)溶于丙酮(15ml)中，并将混合物在55℃搅拌1天。用氯仿萃取反应混合物，并用饱和氯化钠水溶液洗涤。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物和亚硝酸银(125.5mg，0.812mmol)溶于乙腈(5ml)中，并将此混合物在室温下搅拌1天。用氯仿萃取反应混合物。通过无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(乙酸乙酯∶氯仿＝4∶1)纯化残余物，生成35.4mg靶化合物(收率：32.4％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.35-2.55(m，3H)，2.48(s，3H)，2.62-2.66(m，1H)，3.76(s，3H)，3.84(d，J＝12.8Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.26(d，J＝12.8Hz，1H)，4.91-4.97(m，1H)，6.58(s，1H)，6.96(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.22(d，J＝10.6Hz，1H)，7.26-7.30(m，2H)，7.44-7.47(m，2H)，7.86(s，1H)，9.30(d，J＝6.8Hz，1H)
实施例37：3-氟-5-亚硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺
按类似于在实施例36中所述的过程合成靶化合物。

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.04～2.20(m，1H)，2.47(s，3H)，2.52～2.62(m，2H)，2.67～2.72(m，1H)，3.81(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.71(s，2H)，4.93～4.96(m，1H)，6.42(d，J＝6.2，1H)，6.58(s，1H)，7.14～7.21(m，2H)，7.30(d，J＝8.4，1H)，7.42(s，1H)，7.53(d，J＝10.6，1H)
实施例38：3-亚硝基硫甲基N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备
<步骤1>甲磺酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄酯的制备

将3-羟甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺(252.5mg，0.497mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，并降温至0℃。将甲磺酰氯(42.4μl，0.547mmol)和三乙胺(0.104ml，0.745mmol)加入其中，并将混合物在室温下搅拌2小时。用氯仿萃取反应混合物。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(乙酸乙酯∶氯仿＝3∶2)纯化残余物，生成182.3mg靶化合物(收率：62.6％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.14-2.21(m，1H)，2.31-2.50(m，2H)，2.46(s，3H)，2.57-2.62(m，1H)，2.85(s，3H)，3.76(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.87-4.94(m，1H)，5.06(d，J＝12.7Hz，1H)，5.10(d，J＝12.7Hz，1H)，6.57(s，1H)，7.14(d，J＝10.6Hz，1H)，7.28(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.38-7.42(m，2H)，7.56(s，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，8.24(d，J＝7.7Hz，1H)
<步骤2>硫代乙酸-S-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苄酯的制备

将在步骤1中制备的化合物(182.3mg，0.311mol)溶于丙酮(6ml)中，并降温至0℃。在0℃向该溶液缓慢加入硫代乙酸钾(53.2mg，0.467mmol)，并将混合物搅拌1小时。用氯仿萃取反应混合物。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，生成173.6mg靶化合物(收率：98.6％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.05-2.14(m，1H)，2.30(s，2H)，2.32-2.49(m，2H)，2.44(s，3H)，2.52-2.61(m，1H)，3.74(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.01(d，J＝13.9Hz，1H)，4.05(d，J＝13.9Hz，1H)，4.87-4.93(m，1H)，6.56(s，1H)，7.10(d，J＝10.3Hz，1H)，7.21(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.32-7.36(m，2H)，7.49(s，1H)，7.64-7.71(m，3H)
<步骤3>3-巯基甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

将在步骤2中制备的化合物(165.2mg，0.292mol)溶于甲醇(6ml)中，并降温至0℃。在0℃，向其中缓慢加入硫代甲醇钠(sodium thiomethoxide)(21.5mg，0.307mmol)，并将混合物在室温下搅拌30分钟。通过加入0.1N HCl水溶液结束反应。用氯仿萃取反应混合物，并用饱和氯化钠水溶液洗涤。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(乙酸乙酯∶氯仿＝1∶1)纯化残余物，生成182.3mg靶化合物(收率：62.6％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.70(t，J＝7.3Hz，1H)，2.12-2.19(m，1H)，2.31-2.50(m，2H)，2.18(s，3H)，2.57-2.61(m，1H)，3.58(d，J＝7.3Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.89-4.95(m，1H)，6.57(s，1H)，7.12(d，J＝10.3Hz，1H)，7.19(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.34(d，J＝7.7Hz，1H)，7.37(d，J＝10.3Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.59(d，J＝7.7Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.93(d，J＝7.3Hz，1H)
<步骤4>3-亚硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

将在步骤3中制备的化合物(101.2mg，0.193mol)溶于甲醇(3ml)和二甲基甲酰胺(3ml)中，并降温至0℃。在0℃，将0.1N HCl水溶液(3ml)和亚硝酸钠(16.0mg)缓慢加入其中，并将混合物在室温下搅拌2小时。用氯仿萃取反应混合物，并用饱和碳酸钠溶液洗涤。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(乙酸乙酯∶氯仿∶己烷＝3∶2∶1.5)纯化残余物，生成19.5mg靶化合物(收率：18.3％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.08-2.16(m，1H)，2.31-2.51(m，2H)，2.45(s，3H)，2.57-2.61(m，1H)，3.57(s，3H)，3.80(s，2H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.89-4.96(m，1H)-6.57(s，1H)，7.10(d，J＝10.3Hz，1H)，7.25(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.36(d，J＝10.3Hz，1H)，7.38(d，J＝7.7Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.68(d，J＝7.7Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.79(d，J＝7.0Hz，1H)
实施例39：3-氟-5-亚硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺
按类似于在实施例38中所述的过程合成实施例39的靶化合物。

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.30～2.48(m，3H)，2.44(s，3H)，2.56～2.59(m，1H)，3.57(q，J＝13.9，16.5，2H)，3.73(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.97～5.03(m，1H)，6.57(s，1H)，7.02(d，J＝8.4，1H)，7.15(d，J＝10.6，1H)，7.39(d，J＝10.2，1H)，7.43(s，1H)，7.64(d，J＝9.1，1H)，7.73(s，1H)，8.96(d，J＝7.3，1H)
实施例40：3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备
<步骤1>3-氟-5-羟甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

将脱乙酰秋水仙碱(150mg，0.42mmol)、3-氟-5-羟甲基-苯甲酸(85mg，0.50mmol)和HOBt(67mg，0.50mmol)溶于二甲基甲酰胺溶液(2ml)中，并降温至0℃。在0℃，将EDCI(95mg，0.50mmol)缓慢加入其中，并在室温下搅拌此混合物。加入水结束反应，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经柱色谱法(氯仿∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残余物，生成110mg靶化合物(收率：52％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.40-2.58(m，3H)，2.62-2.69(m，1H)，3.64-3.78(m，1H)，3.74(s，3H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.07(S，3H)，4.23-4.28(m，1H)，4.81-4.88(m，1H)，6.58(s，1H)，6.87(d，J＝9.2Hz，1H)，6.97(d，J＝9.2Hz，1H)，7.03(d，J＝10.4Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.50(d，J＝10.4Hz，1H)，7.96(s，1H)，9.64(d，J＝6.0Hz，1H)
<步骤2>3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

按照与在实施例5的步骤2和3中相似的过程，通过使用在步骤1中制备的化合物(90mg，0.18mmol)，获得30mg靶化合物(收率：30％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.38-2.49(m，3H)，2.58-2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.05(S，3H)，4.89-4.93(m，1H)，4.94(d，J＝12.8Hz，1H)，5.10(d，J＝12.8Hz，1H)，6.58(s，1H)，6.96(d，J＝8.4Hz，1H)，7.01(d，J＝10.4Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.48(d，J＝10.4Hz，1H)，7.89(s，1H)，9.25(d，J＝6.4Hz，1H)
实施例41：3-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备
<步骤1>3-氯甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

将硫代脱羰秋水仙碱(50mg，0.129mmol)和吡啶(0.012ml，0.154mmol)溶于二氯甲烷中，并降温至0℃。在0℃，向其中缓慢加入3-(氯甲基)苯甲酰氯(0.022ml，0.154mmol)，并在室温下搅拌此混合物。加入水结束反应，并用乙酸乙酯萃取水层。将组合的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(氯仿∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残余物，生成45mg靶化合物(收率：67％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.24-2.38(m，2H)，2.44(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.25(s，3H)，3.72(s，3H)，3.91(s，3H)，3.92(s，3H)，4.54(s，2H)，5.05(br，1H)，6.57(s，1H)，7.06(d，J＝10.0Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.22-7.41(m，5H)
<步骤2>3-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

按照与实施例25的步骤2相似的过程，通过使用在步骤1中制备的化合物(45mg，0.085mmol)，获得40mg靶化合物(收率：83％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.24-2.38(m，2H)，2.44(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.24(s，3H)，3.71(s，3H)，3.91(s，3H)，3.92(s，3H)，4.77(br，1H)，5.58(s，2H)，6.85(s，2H)，7.21(d，J＝10.0Hz，1H)，7.29(d，J＝10.4Hz，1H)，7.40-7.53(m，4H)
实施例42：3-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备
<步骤1>3-氟-5-羟甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

在氮气氛下，将3-氟-5-羟甲基-苯甲酸(52mg，0.309mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中。在0℃，将氯甲酸乙酯(0.022ml，0.231mmol)和TEA(0.042ml，0.309mmol)缓慢加入其中，并在0℃将混合物搅拌30分钟。将吡啶(0.012ml，0.154mmol)和硫代脱羰秋水仙碱(60mg，0.154mmol)也加入其中，并将混合物在室温下搅拌3小时。加入水结束反应，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(氯仿∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残余物，生成30mg靶化合物(收率：21％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.76(br，1H)，2.24-2.38(m，2H)，2.44(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.23(s，3H)，3.72(s，3H)，3.93(s，3H)，3.97(s，3H)，4.65(s，2H)，5.02(br，1H)，6.57(s，1H)，6.92(s，1H)，6.99-7.24(m，4H)，7.34(s，1H)
<步骤2>3-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制备

按照与实施例5的步骤2和3相似的过程，通过使用在步骤1中制备的化合物(55mg，0.101mmol)，获得20mg靶化合物(收率：37％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.22-2.41(m，2H)，2.45(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.24(s，3H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.95(s，3H)，5.02(br，1H)，5.39(s，2H)，6.57(s，1H)，7.05-7.24(m，5H)，7.34(s，1H)
实施例43：2-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺的制备
<步骤1>(3-氟-5-羟甲基-苯基)-乙酸的制备

将在中间体6的步骤1中制备的化合物(2.5g，13.57mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中。向其中缓慢加入PBr3(1.15ml，12.21mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时，生成3-溴甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(1.6g，收率：50％，白色固体)。将3-溴甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(1.5g，6.1mmol)、KCN(1.6g，24.4mmol)和18-冠-6(820mg，3.1mmol)溶于乙腈(10ml)中。在室温下，将反应混合物搅拌18小时，生成3-氰甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(900mg，收率：77％，白色固体)。将3-氰甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(900mg，4.65mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中。向其中缓慢加入2M硼氢化锂四氢呋喃(2.3ml，4.6mmol)，并回流混合物，生成(3-氟-5-羟甲基-苯基)-乙腈(430mg，收率：56％，白色固体)。将(3-氟-5-羟甲基-苯基)-乙腈(400mg，2.42mmol)和氢氧化钾(1.34g，23.8mmol)溶于乙醇(10ml)和水(5ml)中。回流反应混合物24小时，生成356mg靶化合物(收率：80％，白色固体)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)；δ3.62(s，2H)，4.59(s，2H)，6.94(d，J＝9.6Hz，1H)，7.04(d，J＝9.6Hz，1H)，7.08(s，1H)
<步骤2>2-(3-氟-5-羟甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺的制备

按照与实施例40的步骤1相似的过程，通过使用在步骤1中制备的化合物(30mg，0.16mmol)，获得58mg靶化合物(收率：70％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.92-2.01(m，1H)，2.19-2.40(m，2H)，2.41(s，3H)，2.46-2.52(m，1H)，3.46(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.52(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.63(s，3H)，3.89(s，3H)，3.91(s，3H)，4.64-4.74(m，1H)，4.75(s，2H)，6.53(s，1H)，6.86-6.94(m，3H)，7.07(d，J＝10.8Hz，1H)，7.13(s，1H)，7.30(d，J＝10.8Hz，1H)，7.39(s，1H)
<步骤3>甲磺酸3-氟-5-[(7S)-(1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基氨基甲酰基)-甲基]-苄酯的制备

按照与实施例38的步骤1相似的过程，通过使用在步骤2中制备的化合物(58mg，0.107mmol)，获得60mg靶化合物(收率：90％，黄色固体)。
<步骤4>2-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺的制备

按照与实施例25的步骤2相似的过程，通过使用在步骤3中制备的化合物(60mg，0.097mmol)，获得30mg靶化合物(收率：83％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.92-1.98(m，1H)，2.22-2.42(m，2H)，2.46(s，3H)，2.49-2.52(m，1H)，3.50(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.65(s，3H)，3.66(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.93(s，3H)，4.64-4.74(m，1H)，5.37(s，2H)，6.52(s，1H)，6.97(d，J＝8.8Hz，1H)，7.11-7.17(m，3H)，7.35(d，J＝10.8Hz，1H)，7.50(s，1H)，8.04(d，J＝7.2Hz，1H)
实施例44：2-(2-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氢-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺
按类似于实施例43中所述的过程合成实施例44的化合物，通过如下所述的方法制备中间体。

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.89-1.93(m，1H)，2.26-2.29(m，1H)，2.34-2.40(m，1H)，2.43(s，3H)，2.49-2.54(m，1H)，3.61(s，3H)，3.62(d，J＝15.2Hz，1H)，3.72(d，J＝15.2Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.92(s，3H)，4.70-4.75(m，1H)，5.49(s，2H)，6.53(s，1H)，7.06-7.11(m，2H)，7.25-7.31(m，2H)，7.35(t，J＝7.6Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.57(d，J＝7.2Hz，1H)
<中间体18>(2-氟-5-羟甲基-苯基)-乙酸的制备

按照与实施例43的步骤1相似的过程，通过使用在中间体5中制备的化合物(2.2g，11.94mmol)，获得400mg靶化合物(收率：90％，白色固体)。
试验 实施例1：对癌细胞系的细胞毒性试验
通过被开发用于测量药物的体外抗癌活性的磺酰罗丹明-B(sulforhodamine-B)(SRB)方法(1989，National Cancer Institute(NCI))，测量对A549(Korea ResearchInstitute of Chemical Technology)、SK-OV-3(Korea Research Institute of ChemicalTechnology)、SK-MEL-2(Korea Research Institute of Chemical Technology)、HCT-15(Korea Research Institute of Chemical Technology)和MCF7(Korea Cell Line Bank，Seoul National University School of medicine)细胞的细胞毒性。用0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液分离细胞，以5×103～2×104个细胞/孔的浓度制备细胞悬液。然后，按100μl/孔将悬液分配到96孔细胞培养板中，将其在37℃，5％CO2培养箱中培养24小时。在本发明的实施例中制备的化合物被用作样品。具体而言，在化合物被用作样品之前，将其溶于二甲亚砜，并用RPMI 1640培养基稀释。所用样品的最终浓度在1μM～0.00001μM之间变化。从96孔细胞培养板移出培养基，然后按100μl/孔，加入稀释的样品溶液，之后在37℃，5％CO2培养箱中进一步培养48小时。从加入样品之刻起收集Tz(零时刻)细胞培养板。培养完成时，从每个孔以及Tz板中移走培养基，然后按100μl/孔加入10％三氯乙酸(TCA)。细胞培养板在4℃被放置1小时，以使细胞固定在细胞培养板的底部。在细胞被完全固定之后，用水洗涤板5-6次，以完全去除残留的三氯乙酸溶液，并在室温下将水分完全干燥。将0.4％磺酰罗丹明-B溶于1％乙酸溶液中，制备染色溶液。用染料将细胞染色30分钟，该染料以100μl的量加入到完全干燥的板的每个孔中。然后，用1％乙酸溶液洗涤板5-6次，以去除残留的未与细胞结合的磺酰罗丹明-B。之后，在室温下干燥细胞培养板。按100μl孔将10mM Tris溶液加入其中，以溶解染料，并用微平板读数器测定在520nm处的光密度(OD)。
样品对癌细胞的ED50(抑制癌细胞生长达50％时的浓度，50％有效剂量，nM/ml)被计算如下。带着样品开始进行培养之际的OD值被定为Tz(零时刻)值。在没有样品的情况下被培养的孔的OD值被定为对照值(C)。用样品进行预处理的孔的OD值被定为试验值(T)。在计算Tz，C和T之后，通过下面的<数学公式1>测定样品的细胞毒性。
<数学公式1>
T≤Tz，(T-Tz)/(C-Tz)×100
T＞Tz，(T-Tz)/Tz×100
基于根据<数学公式1>获得的细胞毒性程度，通过使用lotus程序的回归分析计算ED50，其为可抑制癌细胞生长达50％的程度时的浓度。
通过与如上所述相同的方法，也计算出紫杉醇(paclitaxel)、阿霉素(doxorubicin)和秋水仙碱的各自ED50，它们被用作对照。
结果如表1所示。
<表1>
对癌细胞系的细胞毒性(NT：未进行试验)    实施例  细胞毒性[ED50：nM]  A549    SK-OV-3    SK-MEL-2    HCT15    MCF-7    紫杉醇  0.3    1.2    0.1    0.1    0.9    阿霉素  13.0    47.0    16.0    25.0    50.0    秋水仙碱  21.0    18.0    6.0    9.0    NT    实施例1  1.8    1.0    0.4    0.6    NT    实施例2  15.8    9.3    5.4    2.3    2.9    实施例3  2.4    4.0    1.0    4.8    2.3    实施例4  0.01    0.01    0.01    0.03    0.01    实施例5  1.0    1.0    3.1    4.4    NT    实施例6  0.70    0.37    0.08    0.27    0.16    实施例7  ＞50    ＞50    ＞50    ＞50    ＞50    实施例8  0.02    0.04    0.01    0.03    0.01    实施例9  0.49    0.34    0.22    0.64    0.13    实施例10  0.28    0.23    0.12    0.39    0.09    实施例11  ＞50    ＞50    ＞50    ＞50    39.0    实施例12  0.05    0.27    0.11    0.05    0.03    实施例13  0.13    0.18    0.04    0.11    0.02    实施例14  28.2    30.6    32.8    9.9    11.2    实施例1 5  30.2    ＞50    22.5    23.4    18.8    实施例16  1.6    1.0    1.0    1.0    NT    实施例17  0.21    0.19    0.17    0.19    0.08    实施例18  8.1    3.8    1.0    5.3    NT    实施例19  23.5    34.8    31.0    10.1    8.2    实施例20  3.93    1.83    2.47    1.03    1.15    实施例21  0.97    0.59    0.29    0.13    0.10    实施例22  1.11    1.41    0.87    0.95    0.21    实施例23  5.4    5.6    3.5    3.4    3.3    实施例25  8.8    5.4    14.0    15.0    NT    实施例26  21.0    ＞50.0    47.0    ＞50.0    NT    实施例27  5.0    16.0    7.0    2.0    NT    实施例28  6.0    15.0    4.0    3.0    NT    实施例29  1.1    3.0    0.9    0.8    NT
    实施例30    3.6    8.2    3.6    5.2    NT    实施例31    1.10    3.0    0.9    0.8    NT    实施例32    6.2    1.0    0.05    0.08    NT    实施例33    3.8    6.6    2.9    1.0    NT    实施例34    0.06    0.01    0.01    0.01    0.01    实施例35    ＞50    ＞50    41.9    20.9    24.7    实施例36    2.9    1.1    0.1    0.7    NT    实施例37    ＞50    38.8    9.4    7.5    10.3    实施例38    2.4    4.1    3.3    3.0    NT    实施例39    40.7    28.2    ＞50    9.9    5.0    实施例40    43.9    45.6    60.7    24.3    10.5    实施例41    ＞50    ＞50    ＞50    36.4    47.3    实施例42    ＞50    ＞50    ＞50    ＞50    ＞50
如表1所示，本发明的三环衍生物对癌细胞系显示出很强的细胞毒性。
试验 实施例2：本发明的三环衍生物对肿瘤生长的抑制效果
为了调查本发明的三环衍生物对肿瘤生长的抑制效果，进行了下面的试验。
试验样品一直被储存在冰箱中。不同剂量的化合物被施于试验动物；在实施例8中制备的化合物的剂量为10mg/kg，在实施例12中制备的化合物的剂量分别是1、3、10mg/kg，阳性对照的剂量为2.5mg/kg(紫杉醇(Taxol))和2mg/kg(阿霉素(Adriamycin))。将实施例12的化合物溶于4％吐温80(tween 80)中，将阳性对照紫杉醇溶于5％乙醇+25％cremophor+75％PBS的混合溶剂中。所制备的样品要经历沉淀过程，因此在给药之前要适当地进行探头超声处理(tip sonication)，以使样品分散充分。
使用7周龄雌性S.P.F.BALB/c裸鼠作试验动物，其由日本Charles River Co.提供。在试验之前，试验动物被置于高效滤网(Hepa-filter)室中适应一周。在该实验室中，温度为21±2℃，湿度为55±5％，并自动重复12-小时光和暗循环。用放射性射线灭菌固体饲料(CheilJedang)，通过高压灭菌灭菌饮用水。饲料和水由动物任意取食。在此试验中被使用的癌细胞系是NCI-H460(人肺肿瘤细胞系)，由韩国生命科学与生物技术研究所(Korea Research Institute of Bioscience andBiotechnology)提供。
将储存在液氮中的肿瘤细胞系解冻，并于37℃，5％CO2培养箱中培养必需的时间。培养结束时，回收所有细胞，并使用PBS将培养液的细胞浓度调整为3×107个细胞/ml。以每只小鼠0.3ml，将调整的细胞培养液皮下注射入位于右肩胛带和胸壁之间的腋窝中。从移植后第二天起，用样品溶液，以0.2ml/20g重量，对NCI-H460异种移植裸鼠每天进行腹膜内给药，一天一次。
移植肿瘤细胞之后，通过使用游标卡尺，以三维测量每个个体内的肿瘤体积，如下面的<数学公式2>所示。
<数学公式2>
肿瘤体积＝(长×宽×高)/2
测量动物的体重变化，一周三次。杀掉每只异种移植的裸鼠，以分离肿瘤，然后称重肿瘤。
通过t-检验，比较试验组与对照组的所有测试结果，观察两组之间是否存在任何显著差别。
肿瘤的体积变化和重量被显示表2和图1、3和5中，小鼠的体重变化被显示在表3、图2和图4中。
<表2>试验组剂量(mg/kg)  肿瘤体积(mm2)肿瘤重量(mg)  0天 第4天  第7天  第9天 第11天  第14天第14天V.C-10  0.0±    0.0 28.3±   8.1  53.5±    13.7  98.3±    25.5 167.5±   43.8  295.2±    62.21171.2±  383.5V.C-20  0.0±    0.0 26.7±   3.8  49.6±    12.3  80.9±    26.7 138.2±   54.9  289.0±    53.11087.9±  300.5实施例810  0.0±    0.0 18.0±   3.7*  25.2±    12.8**  29.6±    13.8*** 35.2±   14.0***  44.5±    15.0***143.4±  57.8***实施例121  0.0±    0.0 20.7±   3.1  49.2±    12.2  78.1±    13.0 146.5±   8.8  299.3±    41.5950.9±  174.83  0.0±    0.0 16.9±   5.1*  31.2±    11.7*  49.7±    15.8** 96.1±   26.1**  206.8±    48.0*714.5±  103.8*10  0.0±    0.0 16.1±   6.7*  24.6±    9.8**  35.2±    12.9*** 69.4±   26.9***  103.0±0390.9±0紫杉醇2.5  0.0±    0.0 17.5±   4.6***  32.7±    3.8**  47.2±0 -  --阿霉素2  0.0±    0.0 21.8±   8.3  33.7±    8.7*  47.6±    16.2** 81.6±   24.5**  138.1±    39.9***534.1±  87.9
※显著性检验(t-检验)：*(p＜0.05)，**(p＜0.01)，***(p＜0.001)，
V.C-1：4％吐温80，
V.C-2：5％乙醇+25％cremophor+75％PBS
<表3>试验组剂量(mg/kg)动物数量(n) 体重变化(％) 第 1天 第 3天 第 7天 第 9天 第 11天 第 14天V.C-106 100.0±   0.0 105.4±   2.5 108.7±   2.4 107.2±   3.7 107.8±   4.6 107.8±   3.2V.C-206 100.0±   0.0 106.9±   2.4 110.5±   1.5 108.5±   2.6 109.0±   52.6 108.9±   3.6实施例8105 100.0±   0.0 103.5±   2.2 99.8±  4.3** 92.3±   4.1*** 89.3±   3.7*** 89.4±   5.3***实施例1216 100.0±   0.0 105.0±   1.4 104.2±   5.3 99.6±   4.4** 97.5±   3.6** 98.3±   3.2***36 100.0±   0.0 102.8±   2.0 101.8±   4.2** 99.3±   3.3* 99.1±   2.8** 94.5±   3.9***106(第14天-2) 100.0±   0.0 103.9±   0.9 92.2±   3.5*** 89.4±   2.0** 92.3±   2.9*** 93.4±0紫杉醇2.56(第9天-2，第11天，第14天-1) 100.0±   0.0 106.0±   1.5 99.2±   4.0*** 97.1±0 - -阿霉素26 100.0±   0.0 105.0±   4.1 103.9±   5.5 100.5±   4.6* 96.4±   3.5*** 85.1±   1.8***
※显著性检验(t-检验)：*(p＜0.05)，**(p＜0.01)，***(p＜0.001)，
V.C-1：4％吐温80，
V.C-2：5％乙醇+25％cremophor+75％PBS
如表2和图1、3和5所示，当NCI-H460异种移植的BALB/c裸鼠被施予本发明的三环衍生物(在实施例8和12中制备)时，与仅被施予溶剂(V.C-1、V.C-2)，或仅被施予阳性对照(紫杉醇、阿霉素)时比较，其肿瘤的大小和重量得以显著减少。具体而言，在实施例12的化合物的情况中，在10mg/kg的剂量下，肿瘤的体积和重量比1mg/kg的剂量时减少很多。在实施例8的化合物的情况中，当其被施予10mg/kg的时候，肿瘤体积的抑制率显示为85％。因此，肿瘤体积和重量的减少率可以与本发明三环衍生物的剂量成比例增长。
如表3以及图2和图4所示，当NCI-H460异种移植的BALB/c裸鼠被施予本发明的三环衍生物(在实施例8和12中制备)时，与仅被施予溶剂(V.C-1、V.C-2)，或被施予阳性对照(紫杉醇、阿霉素)时比较，其体重减少大约10％。
因此，本发明的三环衍生物使肿瘤的体积和重量随剂量而变小和变轻，而且也显示出极佳的抗癌效果。因此，本发明的三环衍生物可被有效用作抗癌剂和抗增殖剂。
试验 实施例3：本发明的三环衍生物对HUVEC细胞的毛细管样管形成的抑制效果(毛细管样管形成试验(Capillary-like tube formation assay))
在本试验中使用的Matrigel是BioCoat的产品。使用前在冰箱中解冻Matrigel24小时。将解冻matrigel、96孔细胞培养板和黄色吸头(tip)置于冰上。然后，以40μl将matrigel分配至细胞培养板的每个孔中。在37℃培养箱中，细胞培养板进行30分钟的聚合。在无血清培养基中，细胞培养板各个孔被接种180μl HUVEC细胞溶液(2×104个细胞/ml)以及20μl的实施例12化合物(0.3、1、3、10和30μg/ml)，之后进一步培养24小时。
在显微镜下观察管结构的形成，以研究血管生成的抑制活性。
以夫马菌素(Fumagilin)和阿霉素(doxorubicin)作阳性对照。
结果示于图6中。
如图6所示，在高于0.3μg/ml的剂量时，本发明的三环衍生物(在实施例12中制备)具有血管生成抑制活性，其与剂量为10μg/ml的夫马菌素阳性对照一样具有良好的效果。进一步地，本发明的三环衍生物(在实施例12中制备)在剂量超过10μg/ml时，完全抑制了血管生成。
因此，本发明的三环衍生物可被有效地用作血管生成抑制剂。
试验 实施例4：急性毒性试验(Acute toxicity test)
重量为25-35g(SPF，SLC Co.，日本)的5周龄ICR小鼠被用作试验动物。对于每一种化合物的试验，提供一对雌性和雄性小鼠。安排T2、T3、T4和T5组(每组10只动物)用于实施例12中制备的化合物的急性毒性试验。将实施例12的化合物溶于溶剂[5％DMSO；20％吐温80；75％PBS(-)]中，其被注射入小鼠的腹腔(剂量如表4所示)，然后观察7天。对照组(T1)仅被施予溶剂，而没有实施例12的化合物。结果被显示在表4中。
为了比较，按照与上面所述相同的方法，将秋水仙碱注射入试验动物体内。用秋水仙碱处理的组由6只鼠组成。试验结果被显示在表5中。
由Bristol Myers Sqibb Co.生产的紫杉醇也被用于比较，按照与上面所述相同的方法进行注射和急性毒性试验。结果被显示在表6中。
<表4>
在实施例12中制备的化合物的急性毒性试验
  组动物数量   剂量   (mg/kg)    试验天数(死亡)    1    2    3    4    5    6    7  合计  T110   溶剂    -    -    -    -    -    -    -  0/10  T210   30    -    -    -    -    -    -    -  0/10  T310   40    -    -    -    -    -    -    -  0/10  T410   50    -    -    -    -    -    -    -  0/10  T510   60    -    -    -    -    -    -    -  0/10
<表5>
秋水仙碱的急性毒性试验  组动物数量   剂量   (mg/kg)    试验天数(死亡)    1    2    3    4    5    6    7    合计  T16   溶剂    -    -    -    -    -    -    -    0/6  T26   0.5    -    -    -    -    -    -    -    0/6  T36   1.0    -    -    -    -    -    -    -    0/6  T46   2.0    -    -    1    -    -    2    -    3/6  T55   5.0    -    3    -    1    1    -    -    5/5
<表6>
紫杉醇的急性毒性试验    组动物数量   剂量   (mg/kg)    试验天数(死亡)    1    2    3    4    5    6    7    合计    T1    5   4.0    -    -    -    -    -    -    -    0/5    T2    5   6.0    -    1    -    -    -    -    -    1/5    T3    5   9.0    -    -    -    -    2    -    -    2/5    T4    5   13.0    2    2    -    -    -    -    -    4/5    T5    5   20.0    5    -    -    -    -    -    -    5/5
如表4、5和6所示，天然秋水仙碱对小鼠的毒性经证实为LD50＝2mg/kg，这与较早的报道值LD50＝1.6mg/kg[Medicinal Research Reviews，Vol.8，No.1，77-94(1988)]非常相似。紫杉醇注射剂，paclitaxel的毒性为LD50＝9-13mg/kg(静脉给药)。然而，本发明实施例12的化合物的毒性为LD50＝60mg/kg，其比秋水仙碱的毒性弱30倍，也比紫杉醇注射剂的毒性弱。因此，本发明的化合物被证明对正常细胞具有比秋水仙碱或紫杉醇注射剂低的毒性。
工业实用性
本发明的三环衍生物对癌细胞系具有很强的细胞毒性，而对动物本身具有比秋水仙碱或紫杉醇注射剂低的毒性。本发明的三环衍生物进一步减少肿瘤的体积和重量，并极好地抑制HUVEC细胞的血管生成。因此，所述衍生物可有效地被用作抗癌剂、抗增殖剂以及血管生成抑制剂。另外，本发明的三环衍生物可以容易地被获得，而且由于其具有的水可溶性，它们可以容易地被制成口服或注射用制剂。