抗GPIIB/IIIA重组抗体描述
本发明涉及新的核酸序列，该序列编码针对血小板膜蛋白的人自
身抗体并编码抗独特型抗体，本发明还涉及人抗体新的氨基酸序列，
以及上述核酸序列和氨基酸序列在诊断和治疗疾病中的用途。
自身免疫性血小板减少性紫癜(AITP)是免疫病，其特征在于与正
常或升高的巨核细胞生成相关的血小板数目降低。因抗血小板自身抗
体的存在使得网状内皮系统(脾，肝脏和骨髓)中的血小板破坏增加。
可在约75％AITP患者中检测到的这些自身抗体绝大多数针对的是血小
板膜糖蛋白(GP)IIb/IIIa和Ib/IX。在一个和相同的患者中可发现几
种不同的自身抗体特异性(参见Berchtold和Wenger，血液81(1993)，
1246-1250；Kiefel等，英国血液学杂志，79(1991)，256-262；
McMillan等，血液70(1987)，1040和Fujisawa等，血液79(1991)；
1441)。然而，由于从AITP患者得到的自身抗体的量有限，目前仍难
以鉴定结合表位并确定自身抗体的致病重要性。使用杂交瘤技术
(Kunicki等，人抗体杂交瘤1(1990)83-95)仅能从AITP患者的淋巴
细胞中得到一些可与GPIIb/IIIa AIPT反应的人单克隆抗体。
据报道，健康个体中也存在抗多种自身抗原的天然自身抗体，例
如抗人血小板的细胞内和细胞骨架成分的自身抗体(Guilbert等，免
疫学杂志，128(1982)，2779-2787；Hurez等，欧洲免疫学杂志，23
(1993)，783-789和Pfueller等，临床实验免疫学，79(1990)，
367-373)。健康个体血清中存在的一些自身抗体也可抗血小板膜蛋白
(Souberbielle，欧洲血液学杂志，56(1996)，178-180)。然而，这
些天然自身抗体的作用及其与疾病相关性自身抗体的关系仍是未知
的。
皮质类固醇可用于治疗AITP，约一半患者在4周内对服用强的松
产生反应；然而，长期减轻症状很少见。静脉内施用高剂量的免疫球
蛋白(IVIgG)被推荐用于紧急治疗表现出严重出血或血小板数目极低
的患者。大多数患者在接受这一治疗之后，血小板数目快速地，但通
常为瞬时地增加。皮质类固醇和IVIgG在治疗AITP中的作用机理仍是
未知的。Berchtold等(血液74(1989)，2414-2417和Berchtold和
Wenger，血液81(1993)，1246-1250)进行的研究揭示出IVIgG中存
在的抗独特型抗体可抑制自身抗体与血小板糖蛋白的结合。
本申请需解决的问题是鉴定新的DNA序列，该序列负责自身抗体
与GPIIb/IIIa的结合。可使用此方法制备可用的新型药物制品，该制
品可用于改善AITP的诊断和治疗。
令人惊奇地是：使用健康人供体的外周循环B细胞制备人抗体重
链和轻链的组合噬粒展示文库之后，可以鉴定自身抗体的结合序列。
人抗体重链和轻链Fab片断展示于丝状噬菌体M13的表面之后，可以
鉴定出对GPIIb/IIIa表现出特异性结合的噬菌体克隆。
为此，将噬粒文库连续地与缺乏GPIIb/IIIa的血小板机能不全的
血小板(负选择)和正常的血小板(正选择)接触。几轮选择和通过感染
大肠杆菌进行扩增之后，得到23个克隆，它们能与GPIIb/IIIa复合
物结合。使用针对GPIIb/IIIa的单克隆抗体库进行抑制研究，产生两
组克隆：两组都被特异于GPIIb/IIIa复合物的单克隆抗体抑制，一组
还被GPIIb特异性的单克隆抗体抑制。对克隆进行DNA分析，显示出
2种不同的抗GPIIb/IIIa噬菌体克隆的存在，这进一步证实了上述发
现。这些结果表明可从健康个体的基因组克隆2种GPIIb/IIIa特异性
的噬菌体克隆，即自身抗体，这些克隆能识别属于GPIIb/IIIa复合物
的构象表位。抑制研究还确定了两种噬菌体克隆都能抑制AITP患者的
血小板相关性自身抗体与纯化的GPIIb/IIIa的结合，因此可能识别与
AITP相关的GPIIb/IIIa表位。由于噬菌体克隆含有得自健康个体基
因组之天然自身抗体的抗原结合序列，因此，此发现可导致对AITP中
血小板相关性自身抗体的新认识。
另外，将抗GPIIb/IIIa噬菌体克隆用作抗原，可以使用这些新的
噬菌体克隆产生针对抗GPIIb/IIIa自身抗体的重组型抗独特型抗
体。以此方法得到的重组型抗独特型抗体构成了令人感兴趣的临床方
法，可以替代IVIgG的使用。
序列表SEQ ID NO：1-8(自身抗体)和SEQ ID NO：9-18(抗独特型
抗体)中显示了所鉴定的噬菌体克隆的核苷酸序列和由这些核苷酸序
列推定的氨基酸序列。
I.自身抗体
本发明的第一方面涉及编码自身抗体的核酸，因此，本发明的部
分主题是编码人抗体重链或其功能衍生物或其片断，包含选自下组的
CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
V L P F D P I S M D V (I)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
A L G S W G G W D H Y M D V (II)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源
性的氨基酸序列的核苷酸序列，和
(d)编码具有同等的与GPIIb/IIIa结合之能力的氨基酸序列的核苷酸
序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR1区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G Y S W R (III)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S Y A M H (IV)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源
性的氨基酸序列的核苷酸序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR2区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D I S Y S G S T K Y K P S L R S (V)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
V I S Y D G S N K Y Y A D S V K G (VI)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源
性的氨基酸序列的核苷酸序列。
本发明的第二方面是编码人抗体轻链或其功能衍生物或其片断，
包含选自下组的CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
A T W D D G L N G P V (VII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
A A W D D S L N G W V (VIII)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源
性的氨基酸序列的核苷酸序列，和
(d)编码具有同等的与GPIIb/IIIa结合之能力的氨基酸序列的核苷酸
序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR1区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S G S S S N I R S N P V S (IX)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S G S S S N I G S N T V N (X)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源
性的氨基酸序列的核苷酸序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR2区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G S H Q R P S (XI)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S N N Q R P S (XII)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源
性的氨基酸序列的核苷酸序列。
II.抗独特型抗体
本发明的第二方面涉及编码抗独特型抗体的核酸，因此，本发明
的部分主题是编码人抗体重链或其功能衍生物或其片断、包含选自下
组的CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
V R D L G Y R V L S T F T F D I (XIII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D G R S G S Y A R F D G M D V (XIV)
(c)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
M G S S V V A T Y N A F D I (XV)
(d)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D A D G D G F S P Y Y F P Y (XVI)
(e)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
L R N D G W N D G F D I (XVII)
(f)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D S E T A I A A A G R F D I (XVIII)
(g)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
E D G T T V P S Q P L E F (XIX)
(h)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G S G S Y L G Y Y F D Y (XX)
(i)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G L R S Y N Y G R N L D Y (XXI)
(j)编码与(a)，(b)，(c)或(d)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至
少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列，
(k)编码具有同等的与抗GPIIb/IIIa的自身抗体结合之能力的氨基酸
序列的核苷酸序列。
该新的核酸还优选含有CDR1区域，其选自：编码表7a所示氨基
酸序列N F A M S，S Y T M H，D Y A L H或S H Y W S的核苷酸序
列，编码氨基酸序列T Y Y W S的核苷酸序列，编码表7b所示氨基酸
序列D Y G M H，S H T I S，K Y A I H或E L S M H的核苷酸序列
和编码与上述氨基酸序列之一具有至少80％、优选至少90％同源性的氨
基酸序列的核苷酸序列。
该新的核酸还优选含有选自下组的CDR2区域：
编码表7a所示下述氨基酸序列G I S G G G L L T H Y A(D/N)S V K G，
L I S Y D G S N K Y Y A D S V K G，
G I S W D S T S I G Y A D S V K G或
F I Y D G A R T R F N P S L R S
的核苷酸序列；
编码氨基酸序列YIYYSGNTNYNPSLKS的核苷酸序列；
编码表7b所示下述氨基酸序列
A I S Y D G S N K Y Y A D S V K G，
G I T P I F G T V N Y A Q K F Q G，
A I S S N G G N T Y Y A D S V K G或
G F D P E D G E T I Y A Q K F Q G
的核苷酸序列；和编码与上述氨基酸序列之一具有至少80％、优选至
少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
本发明的另一部分主题是编码人抗体轻链或其功能衍生物或其片
断、包含选自下组的CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
C S Y V H S S T N (XXII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
Q V W D N T N D Q (XXIII)
(c)编码与(a)或(b)的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性
的氨基酸序列的核苷酸序列，和
(d)编码具有同等的与抗GPIIb/IIIa的自身抗体结合之能力的氨基酸
序列的核苷酸序列。
优选该新的核酸还含有选自下述的CDR1区域：编码表7a所示氨
基酸序列T G T S S A I G N Y N F V P的核苷酸序列，编码表7b
所示氨基酸序列G G Y K I G S K S V H的核苷酸序列和编码与上述
氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸
序列。
另外，优选该新的核酸还含有选自下述的CDR2区域：编码表7a
所示氨基酸序列E G S K R P S的核苷酸序列，编码表7b所示氨基酸
序列E D S Y R P S的核苷酸序列和编码与上述氨基酸序列具有至少
80％，优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
在本发明的意义上，术语“人抗体链的功能性衍生物”指的是至
少包括上文所定义的重链和/或轻链CDR3区域的多肽，适当时，该多
肽与人抗体的相关互补链(或该链的衍生物)一起能形成抗体衍生物，
该衍生物对抗原具有等同于非衍生化抗体所具有的识别特异性。优选
这种抗体衍生物对相关抗原的结合常数至少为10-6l/mol，优选为至
少10-8l/mol。
通过例如使用重组DNA技术缺失，取代和/或插入编码相关多肽的
基因区段可制备人抗体链的功能衍生物。
单链抗体可由例如H和L链的可变区或者一个或两个H链结构域
组成，适当时还可具有恒定区，这是特别优选的抗体链或抗体功能衍
生物。这种构建体的制备描述于Hoogenboom等，免疫学评论，
130(1992)，41-68；Barbas III，Methods：Companion Methods
Enzymol，2(1991)，119和Pluckthun，免疫化学(1994)，Marcel
Dekker Inc.，第9章，210-235。
在本发明的意义上，术语“同等的结合能力”指的是结合亲和性
和/或特异性(即表位识别)与具体公开序列所具有的相同。
本发明的另一部分主题是含有至少1拷贝新核酸的载体，此载体
可以是原核载体或真核载体。质粒，粘粒和噬菌体是原核载体的例子，
这种载体详细描述于例如Sambrook等，分子克隆，实验室手册，第2
版(1989)，冷泉港实验室出版社的第1-4章中。优选原核载体为质粒
或噬菌体。
另一方面，载体也可以是真核载体，例如酵母载体，昆虫载体(杆
状病毒)或哺乳动物载体(质粒载体或病毒载体)。真核载体的例子描述
于Sambrook等，文献同上，第16章和Winnacker，基因和克隆，Eine
Einfuhrung fur die Gentechnologie[基因和克隆，基因工程导言]
(1985)，VCH Verlagsgesellschaft，尤其是第5，8和10章。
本发明的另一部分主题是表达新核酸的细胞，或被新核酸或新载
体转化的细胞。细胞可以是原核细胞(如革兰氏阴性细菌细胞，尤其是
大肠杆菌)或真核细胞(如酵母，植物或哺乳动物细胞)。适当细胞和将
新核酸导入这种细胞的方法的例子见于上述参考文献中。
本发明的另一部分主题是由新核酸编码的多肽，尤其是重组多
肽。特别优选多肽含有人抗体H链和/或L链的可变区。
特别优选的是表现出抗体特性，其亚单位成分是重链或其功能衍
生物和轻链或其功能衍生物的多肽。该多肽可由两个独立的链组成或
以单链多肽的形式存在。
本发明的另一部分主题是抗新多肽的抗体，所述抗体针对的是负
责识别抗原的多肽区域。此抗体可以是多克隆的抗血清，单克隆抗体
或者多克隆或单克隆抗体的片断(如Fab，F(ab)2，Fab’或F(ab’)2片
断)。优选此抗体针对的是新多肽抗体之重链和/或轻链CDR3区域，或
其部分区域。通过用含有新CDR3区域的肽或多肽免疫实验动物，并从
实验动物中分离所得的多克隆抗体，即可使用已知方法得到这种抗
体。另外，根据Kohler和Milstein的方法或其改良方法，通过将实
验动物中产生抗体的B细胞与白血病细胞融合可得到单克隆抗体。另
外，通过以新多肽为抗原，筛选适当的噬粒文库，例如健康人供体的
噬粒文库，也可得到针对新多肽CDR3区域的重组抗体。
本发明还涉及药物组合物，其含有上述核酸、载体、多肽、抗体
或细胞作为有效成分，适当时还添加有其它活性成分和药学上常用的
佐剂、添加剂或赋形剂。
该药物组合物可用于制备诊断或治疗剂。诊断用途的例子是诊断
AITP或AITP诱因。另一个优选的诊断用途是监测AITP疾病的进程。
该药物组合物作为诊断剂的用途包括例如检测将新多肽表达为抗
体的B细胞亚群。通过核酸杂交试验(适当时需先进行扩增)可在核酸
水平上检测此抗体。另一方面，通过使用抗原或与多肽特异性反应的
抗体进行的免疫测定法可在蛋白质水平上检测此抗体。
另外，该新的药物组合物也可用于治疗领域，尤其是预防或治疗
AITP。此治疗用途可基于例如刺激抗自身抗体之抗体的产生。为此，
可给患者施用新的自身抗体多肽，从而引发和/或刺激抗独特型抗体的
形成。在此方面，根据常规的免疫方法即可进行给药(Fox等，J.
Pharmacol.Exp.Ther.279(1996)，1000-1008；Whittum-Hudson
等，天然药物2(1996)，1116-1121；Jardieu，免疫学最新观点，
7(1995)，779-782)。另一方面，通过施用适当的反义核酸可特异性地
抑制抗体基因的表达。可给患者施用该新的抗独特型抗体多肽以直接
抑制自身抗体的活性。
对新的自身抗体多肽的研究表明：这些多肽令人惊奇地可抑制血
纤蛋白原与血小板的结合，因此，新的自身抗体多肽和抗独特型抗体
多肽(适当时可联合使用这两种多肽)可在心肌梗塞或中风，或静脉形
成血栓并发肺栓塞或局部缺血等之后用作调节血液凝结，尤其是预防
血栓的药剂。
鼠单克隆抗体，如单克隆抗体7E3(参见美国专利5440020)或其片
断(如可商购的Fab片断ReoPro)，或短的合成肽已被用作血纤蛋白
原的拮抗剂以用于治疗的目的。然而，鼠单克隆抗体和抗体片断的缺
点在于具有免疫原性，当用于治疗人患者时会产生不必要的副反应，
而短肽一般会很快地降解。与已知的药剂相比，该新多肽的优点在于
它们由来源于人的氨基酸序列组成，因此表现出的不必要的副作用比
相应的鼠抗体或抗体片断的小，而由于其大小比肽大，因此它不会象
肽那样快速地降解。
因此，本发明涉及新的核酸、尤其是编码自身抗体多肽的核酸、
含有此核酸的载体、被上述核酸或载体转化的细胞，由核酸编码的多
肽、含有一种或多种上述物质的药物组合物用于制备影响尤其是抑制
血纤蛋白原与血小板之结合的药剂的用途。优选使用药剂调节血液凝
结，尤其是溶解血栓和/或防止血栓形成。根据已建立的鼠抗体或抗体
片断的施用方法可施用该新的药物组合物。
本发明的另一部分主题是分离表达核酸的噬粒克隆的方法，所述
核酸编码抗GPIIb/IIIa之自身抗体或编码针对这些自身抗体的抗独
特型抗体，所述方法的特征在于由人供体的淋巴细胞制备噬粒文库，
通过亲和选择，包括负和正选择步骤分离所需的噬粒克隆。优选此方
法还包括从克隆中分离编码抗体的核酸和/或使用编码抗体的核酸表
达重组的抗体链或其衍生物或其片断。
下列实施例、图和序列表也对本发明作出解释，其中
SEQ ID NO.1表示新抗体(噬粒克隆PDG7)H链的核苷酸序列，其中H
链构架区(FR)1从bp1延伸至90，互补决定区(CDR)1为bp91至105，
FR2为bp106至147，CDR2为bp148至195，FR3为bp196至291，CDR3
为bp292至324，FR4为bp325至357。
SEQ ID NO.2表示对应于SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的氨基酸序列，
其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，
CDR2为AA50至65，FR3为AA66至97，CDR3为AA98至108，FR4为
AA109至119。
SEQ ID NO.3表示新多肽(噬粒克隆PDG7)L链的核苷酸序列，其中FR1
从bp1延伸至60，CDR1为bp61至99，FR2为bp100至144，CDR2为
bp145至165，FR3为bp166至261，CDR3为bp262至294，FR4为bp295
至333。
SEQ ID NO.4表示对应于SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的氨基酸序列，
其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至33，FR2为AA34至48，
CDR2为AA49至55，FR3为AA56至87，CDR3为AA88至98，FR4为
AA99至111。
SEQ ID NO.5表示新多肽(噬粒克隆PDG13)H链的核苷酸序列，其中FR1
从bp1延伸至90，CDR1为bp91至109，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至336，FR4为
bp337至369。
SEQ ID NO.6表示对应于SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的氨基酸序列，
其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，
CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至112，FR4为
AA113至123。
SEQ ID NO.7表示新多肽(噬粒克隆PDG13)L链的核苷酸序列，其中FR1
从bp1延伸至60，CDR1为bp61至99，FR2为bp100至144，CDR2为
bp145至165，FR3为bp166至261，CDR3为bp262至294，FR4为bp295
至333。
SEQ ID NO.8表示对应于SEQ ID NO.7所示核苷酸序列的氨基酸序列，
其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至33，FR2为AA34至48，
CDR2为AA49至55，FR3为AA56至87，CDR3为AA88至98，FR4为
AA99至111。
SEQ ID NO.9表示新多肽(噬粒克隆AI-X16)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至288，CDR3为bp289至336，FR4为
bp337至369。
SEQ ID NO.10表示对应于SEQ ID NO.9所示核苷酸序列的氨基酸序列，
其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，
CDR2为AA50至66，FR3为AA67至96，CDR3为AA97至112，
FR4为AA113至123。
SEQ ID NO.11表示新多肽(噬粒克隆AI-X16)L链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至60，CDR1为bp61至102，FR2为bp103至147，CDR2
为bp148至168，FR3为bp169至264，CDR3为bp265至291，FR4为
bp292至375。
SEQ ID NO.12表示对应于SEQ ID NO.11所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至34，FR2为AA35至
49，CDR2为AA50至56，FR3为AA57至88，CDR3为AA89至97，FR4
为AA98至125。
SEQ ID NO.13表示新多肽(噬粒克隆AI-X20)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至195，FR3为bp196至291，CDR3为bp292至333，FR4为
bp334至366。
SEQ ID NO.14表示对应于SEQ ID NO.13所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至65，FR3为AA66至97，CDR3为AA98至111，FR4
为AA112至122。
SEQ ID NO.15表示新多肽(噬粒克隆AI-X39)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至339，FR4为
bp340至372。
SEQ ID NO.16表示对应于SEQ ID NO.15所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至113，FR4
为AA114至124。
SEQ ID NO.17表示新多肽(噬粒克隆AI-X40)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至297，CDR3为bp298至339，FR4为
bp340至372。
SEQ ID NO.18表示对应于SEQ ID NO.17所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至99，CDR3为AA100至113，
FR4为AA114至124。
SEQ ID NO.19表示新多肽(噬粒克隆AI-X2)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至195，FR3为bp196至291，CDR3为bp292至327，FR4为
bp328至360。
SEQ ID NO.20表示对应于SEQ ID NO.19所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至65，FR3为AA66至97，CDR3为AA98至109，FR4
为AA110至120。
SEQ ID NO.21表示新多肽(噬粒克隆AI-B14)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至336，FR4为
bp337至369；
该序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第9位可以是G，第13
位为G，15位为G，91位为A，92位为G，98位为C，149位为T，205
位为A，228位为A，251位为A，253位为T和/或284位为A。变异
的结果是相应氨基酸序列(参见SEQ ID NO.22)中第3位可以为Q，而
第5位为V，31位为S，33位为A，50位为V，69位为T，76位为K，
84位为N，85位为S和/或95位为Y。
SEQ ID NO.22表示对应于SEQ ID NO.21所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至112，FR4
为AA113至123。
SEQ ID NO.23表示新多肽(噬粒克隆AI-B18)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至333，FR4为
bp334至366；
该核苷酸序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第13位可以是G，
第16位为C，56位为A，94位为T，97位为G，155位为T，173位为
C，223位为T，252位为T或C，261位为G，267位为G，271位为A，
275位为C和/或277位为G。变异的结果是相应氨基酸序列(参见SEQ
ID NO.24)中第3位可以为Q，而第5位为V，6位为Q，19位为K，32
位为Y，33位为A，52位为I，58位为A，75位为S，84位为S，87
位为R，89位为E，91位为T，92位为A和/或93位为V。
SEQ ID NO.24表示对应于SEQ ID NO.23所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至111，FR4
为AA112至122。
SEQ ID NO.25表示新多肽(噬粒克隆AI-B24)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至330，FR4为
bp331至363；
该核苷酸序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第9位可以是G，
第13位为G，15位为G，31位为G，46位为A，67位为G，89位为G，
92位为G，93位为C，98位为G，102位为G，140位为G，141位为G，
145位为G，149位为T，157位为T，158位为A，160位为G，166位
为A，173位为A，235位为T，251位为A，290位为C和/或293位为
A。变异的结果是相应氨基酸序列(参见SEQ ID NO.26)中第3位为Q，
而第5位为V，11位为V，16位为R，23位为A，30位为S，31位为
S，33位为G，34位为M，47位为W，49位为A，50位为V，53位为Y，
54位为D，56位为S，58位为K，79位为L，84位为N，97位为A和
/或98位为K。
SEQ ID NO.26表示对应于SEQ ID NO.25所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至110，FR4
为AA111至121。
SEQ ID NO.27表示新多肽(噬粒克隆AI-B24)L链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至60，CDR1为bp61至96，FR2为bp97至138，CDR2
为bp139至159，FR3为bp160至255，CDR3为bp256至282，FR4为
bp283至366；
该核苷酸序列中可见下列变异：第4位可以是C或T，而第37位可以
是G，第40位为A，50位为G，67位为A，72位为T，133位为A，136
位为T，138位为T或C，148位为G，160位为T，161位为T，162
位为T或C，200位为C，217位为T，218位为G，220位为A或C，
269位为G，271位为T，272位为G，275位为G和/或282位为T或C。
变异的结果是相应氨基酸序列(参见SEQ ID NO.28)中第2位为L，而
第13位为G，14位为K，17位为R，23位为N，24位为N，45位为I，
47位为Y，50位为D，54位为F，67位为T，73位为S，74位为R，
90位为S，91位为S，92位为S和/或94位为H。
SEQ ID NO.28表示对应于SEQ ID NO.27所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至32，FR2为AA33至
46，CDR2为AA47至53，FR3为AA54至85，CDR3为AA86至94，FR4
为AA95至122。
SEQ ID NO.29表示新多肽(噬粒克隆AI-B38)H链的核苷酸序列，其中
FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2
为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至333，FR4为
bp334至366；
该核苷酸序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第9位可以是G，
第13位为G，15位为A和/或16位为C。变异的结果是相应的氨基酸
序列中第3位为Q，而第5位为V和/或第6位为Q。
SEQ ID NO.30表示对应于SEQ ID NO.29所示核苷酸序列的氨基酸序
列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至
49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至111，FR4
为AA112至122。
图1显示出因加入抗独特型抗体phab AI-X17而使自身抗体phab
(PDG-X)与GPIIb/IIIa的结合受到抑制。
图2显示出因加入抗独特型抗体phab AI-B而使自身抗体phab(PDG-B)
与血小板的结合受到抑制。
图3显示出自身抗体phab与未经处理的和经EDTA处理的血小板的结
合。
图4显示出由自身抗体phab引起的对血纤蛋白原与GPIIb/IIIa结合
的抑制作用。
图5-7显示出由抗体7E3和抗体片断ReoPro引起的对自身抗体phab
与GPIIb/IIIa结合的抑制作用。
实施例
1.鉴定自身抗体序列
1.1.分离自身抗体
自身抗体得自12个AITP患者(8个患原发性AITP，3个患与SLE
相关的AITP，1个患与斯耶格伦综合征相关的AITP)，制备方法如下：
4℃下将患者血浆与纯化的GPIIb/IIIa保温过夜，随后于室温下用
0.2mol/l甘氨酸和0.15mol/l NaCl，pH2.5洗脱15分钟。100,000g
离心30分钟之后，用1mol/l Tris-HCl中和上清液，对Tris缓冲的
盐溶液(TBS)透析过夜。
提取血浆时，所有患者皆为血小板减少症(血小板数目＜150×
109/l)，其骨髓中的巨核细胞正常或增大，没有其它可测形式的免疫
性血小板减少症。
1.2.分离纯化的抗原
所用抗原为纯化的GPIIb/IIIa，它是GPIIIa的胞质片断(氨基酸
721-744)和GPIIIa的细胞外片断(氨基酸468-690)(Beardsley，Blut
59(1989)，47-51和Phillips等，酶学方法，215(1992)，244-263)。
1.3.分离血小板以用于淘选和免疫印迹
通过差速离心取自健康人供体的经EDTA抗凝结的血样来制备富
含血小板的血浆。通过2000g离心15分钟分离出血小板，然后用含有
50mmol/l柠檬酸钠，100mmol/l NaCl和125mmol/l葡萄糖的柠檬酸
缓冲液(pH6.2)洗涤6次，最后重新悬浮于相同缓冲液中。
使用相同的富集方法从患有格兰茨曼I型血小板功能不全病的14
岁男孩体内得到功能不全的血小板。
1.4.单克隆抗体
使用了识别复合形式的GPIIb/IIIa的鼠单克隆抗体和选择性识
别GPIIb或GPIIIa的抗体。这些抗体是使用相应的抗原，通过常规的
免疫方法分离得到的，它们与AITP不相关。所述抗体的分离描述于
Kouns等(生物化学杂志267(1992)，18844-18851)，Steiner等
(Biochim.Biophys.Acta 1119(1992)，12-21)和Haring等(美国国
家科学院院报82(1985)，4837-4841)。
1.5.噬粒文库
使用得自健康、预先免疫过的人供体的外周血淋巴细胞，根据
Vogel等(欧洲免疫学杂志，24(1994)，1200-1207)所述的方法制备组
合Fab文库。除了Taq聚合酶(Perkin Elmer，NJ，USA)外，所有酶
和寡核苷酸都得自Boehringer Mannheim GmbH(Mannheim，德国)。通
过PCR扩增Fab分子H和L链的引物，VCSM13辅助噬菌体和大肠杆菌
菌株XL-Blue都得自Stratacyte(La Jolla，CA，美国)。噬粒pComb3
得自Scripps Research Institute(La Jolla，CA，美国)。按Barbas
III和Lerner(Methods：Companion Methods Enzymol，2(1991)，119)
所述进行克隆，转化至XL-Blue细胞和制备phab。用4％(w/v)聚乙二
醇8000和3％(w/v)NaCl沉淀phab，重新悬浮于PBS，pH7.4中。所
得表达文库含有1×107特异性。
1.6.分离GPIIb/IIIa特异性phab
利用总共5轮亲和选择(“淘选”)制备GPIIb/IIIa特异性phab。
用5×107个功能不全的血小板预吸附(负选择)之后，将phab与108个
正常的血小板一起保温45分钟(正选择)。然后用0.05mol/l柠檬酸钠，
pH2.5洗脱结合的phab，并用1mol/l Tris缓冲液中和。每一轮淘选
之后，通过滴定噬菌体集落形成单位监测GPIIb/IIIa特异性phab
的富集。5轮选择之后，发现洗脱的phab被富集了100倍以上。
更仔细地分析第4轮选择之后所得phab库的GPIIb/IIIa特异
性。为此，随机选择40个phab克隆，在免疫斑点试验中确定其结合
特异性。将1微升正常的和功能不全的血小板(109个/ml)，以及纯化
的GPIIb/IIIa(500μg/ml)滴加至硝酸纤维素条上(Millipor公司，
Bedford，MA，美国)。将条置于含0.15％酪蛋白的TBS(TBS-酪蛋白)
中封闭，然后与用TBS-酪蛋白稀释的phab一起保温过夜。用TBS-0.1％
吐温20(TBS-吐温)洗涤3次后，与用TBS-酪蛋白稀释1000倍的辣根
过氧化物酶缀合的多克隆兔抗噬菌体抗体(Vogel等，文献同上)保温
之后，用4-氯-1-α-萘酚(Merck，Darmstadt，德国)检测结合的phab。
还检测了滴加前通过加热(70℃)或酸处理(0.5N HCl，pH2)变性蛋
白质之后phab与血小板和纯化的GPIIb/IIIa的结合。
在40个随机选择的克隆中，23个(57.5％)与GPIIb/IIIa反应，
而17个未表现出任何结合。保温前通过加热或pH2处理变性抗原之
后，未观察到抗GPIIb/IIIa与phab的结合，从而阐明phab的结合
需要完整的GPIIb/IIIa。在阴性phab中检测Fab的存在情况揭示出
15个克隆(88％)不含任何Fab分子。2个不与GPIIb/IIIa结合的Fab
阳性克隆对GPIIb/IIIa可能有低结合亲和性。
1.7.Fab分析
为了检测阳性phab的κ，λ和Fd链，将抗GPIIb/IIIa phab滴加
至硝酸纤维素上，将滤膜与已用TBS-酪蛋白稀释1000倍的经过氧化
物酶标记的小鼠抗人λ，κ(The Binding Site Limited，Birmingham，
英国)和Fd抗体(得自HP6045杂交瘤细胞系，ATCC1757，Rockville，
MD，美国)保温4小时，然后通过化学发光法(ECL，Amersham，
Switzerland，Zurich，Switzerland)显色。检测15个随机选择的抗
GPIIb/IIIa Fab克隆的κ，λ和Fd链，结果表明Fd链存在于12个克
隆(80％)中，而λ链存在于所有克隆中。
通过将集中的phab与多种浓度的血小板一起预保温以定量测定
Fab与血小板上GPIIb/IIIa的结合。然后通过免疫斑点法分析上清
液。在此方面，确定每个血小板结合1-3×104个phab。这表明每个血
小板上约10-50％GPIIb/IIIa分子可以被phab占据。
1.8.鉴定phab结合表位
通过使用多种单克隆抗体(见1.4.)进行抑制试验来测定phab的
表位特异性。在双份重复试验中，各将1微升融化的正常和功能不全
的血小板(109个/ml)，纯化的GPIIb/IIIa(500μg/ml)，GPIIIa的肽
片断(氨基酸468-690，500μg/ml)和GPIIb/IIIa的胞质区段
(500μg/ml)滴加至硝酸纤维素条上。封闭后，将phab克隆(0.4μg/ml
Fab)在加或不加单克隆抗体(1μg/ml)的情况下保温过夜。使用经过氧
化物酶标记的抗噬菌体抗体和4-氯-1-α-萘酚检测结合的phab。
在这些研究中鉴定出两组phab克隆，A组(5个克隆)被所有抗体
的汇集物中度抑制，但被GPIIb/IIIa复合物特异性抗体强烈抑制。抗
GPIIb抗体没有反应。B组(10个克隆)被所有抗体的汇集物完全抑制，
但被复合物特异性抗体和IIb特异性抗体抑制的程度较低。两组与
GPIIIa特异性的抗体都未表现出反应。使用血小板或纯化的
GPIIb/IIIa作为抗原也得到相同的结果。未发现phab与胞质肽或
GPIIIa的胞外片断结合。
这些结果概述于表1。
表1
抑制phab结合(平均值±SD，％)
用于抑制的单克隆抗体群
A组phab克隆(n＝5)
B组phab克隆(n＝10)
血小板
纯化的
GPIIb/IIIa
血小板
纯化的
GPIIb/IIIa
(1)Anti-GPIIB
0
0
49.1±5.9
49.4±9.2
(2)Anti-GPIIIa
0
0
0
0
(3)Anti-GPIIb/IIIa复合物
77.8±2.9
43.6±2.1
58.6±4.4
45.5±8.0
所有抗体的汇集物(1)-(3)
47.6±7.7
33.0±10.8
95.9±2.7
97.5±7.5
1.9.抑制试验
通过抑制试验测定抗GPIIb/IIIa phab对患者自身抗体与
GPIIb/IIIa结合的封闭作用。为此，使用两个按上文所述鉴定的phab
克隆(PDG16和PDG31)。
从1∶3至1∶1000连续稀释洗脱的患者自身抗体，分析其与纯化
的GPIIb/IIIa的结合。通过免疫斑点试验可以实现此目的。在3份重
复试验中，各将100ng纯化的GPIIb/IIIa滴加至硝酸纤维素条上，然
后用TBS-酪蛋白封闭滤膜。为了用phab封闭AITP自身抗体与
GPIIb/IIIa的结合，将滤膜条与1011个phab保温1小时，然后与不
同稀释度的AITP自身抗体保温4小时。使用经过氧化物酶标记的抗人
IgG-Fc抗体和ECL检测结合的自身抗体。
抗GPIIb/IIIa phab抑制得自8个AITP患者的自身抗体的结合。
对PTG16，PTG31和两种phab的汇集物的抑制范围分别为10至46％，
32至60％和20至67％。这些phab对得自4个AITP患者的自身抗体的
结合没有影响。两组都含有得自原发性AITP患者和与疾病相关之AITP
患者的自身抗体。
所得结果概述于表2。
表2
对纯化的GPIIb/IIIa之结合的抑制作用(％)
AITP患者
Phab克隆
PDG16
Phab克隆
PDG31
两个Phab克隆
的汇集物
WS16
13
19
40
WS37
14
20
36
KC
24
22
28
KK
22
22
40
KP
10
36
60
WS2
25
55
65
KS
60
56
64
KL
0
15
10
KG
0
0
0
KM
0
0
0
KE
0
0
0
KR
0
0
0
1.10.DNA序列分析
使用NukleobondAX PC 20纯化试剂盒(Macherey-Nagel AG，
Oensingen，Switzerland)从4个A组phab克隆和4个B组phab克
隆中纯化质粒DNA。
使用PRISM Ready Reaction DyeDeoxy Terminator Cycle
Sequencing试剂盒，在ABI373A测序系统上进行核酸测序。引物得自
Microsynth，Balgach，Switzerland。使用下列引物测定H链的序列：
Chγ1(5’-CGC TGT GCC CCC AGA GGT-3’)和PCH(5’-GGC CGC AAA TTC TAT
TTC AAG G-3’)。使用下列引物测定L链的序列：cλ(5’-GAG ACA CAC
CAG TGT GGC-3’)，Ck(5’-CAC AAC AGA GGC AGT TCC-3’)和PCL(5’-CTA
AAC TAG CTA GTC TCC-3’)。将由DNA序列推定的氨基酸序列与
GenEMBL-Genbank相比较，株系被定为VH和Vλ家族。
通过自动测序分析各组中的4个phab克隆(A组：PDG7，PDG8，
PDG10和PDG16；B组：PDG13，PDG17，PDG31和PDG37)的VH和Vλ核
苷酸序列，并与已知株系的基因序列相比较(表3和4)。各组中H和L
链推定的氨基酸序列之间有100％的同源性。与之形成对照的是，A组
和B组H链氨基酸序列之间的同源性仅为36.9％，L链氨基酸序列之间
的同源性为81.9％。
就H链而言，A组克隆与VH4家族株系基因VH4.11(Sanz等，EMBO
J.8(1989)，3741-3748)的序列同一性程度最高。构架区(FR)有7个
氨基酸差异，互补决定区(CDR)有8个氨基酸的差异。B组克隆与VH3
家族最同源的1.9III株系序列(Berman等，EMBO J.7(1988)，727-
738)在FR内有4个氨基酸不同，在CDR内有1个氨基酸不同。
就L链而言，A组和B组克隆与Vλ1家族DPL2株系基因序列
(Williams和Winter，欧洲免疫学杂志，323(1993)，1456)同源性最
高。A组克隆在FR内有9个氨基酸差异，在CDR内有10个氨基酸的
差异，B组克隆在FR内有1个氨基酸差异，在CDR内有2个氨基酸的
差异，所得结果简述于表3和4。
表3
A. 重链
克隆 FR1 CDR1 FR2 CDR2 _____ FR3 CDR3 FR4
VH4.11 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS SYYWS WIRQPPGKGLEWIG YIYYSGSTNYNPSLKS RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR
PDG7 --K-L---------------N-----R--- G-S-R ----S--------- D-S-----K-K---R- ---L-------------N-------------- VLPFDPISMDV WGKGTTVTVSS
PDG8 ------------------------------ ----- -------------- ---------------- -------------------------------- VLPFDPISMDV WGKGTTVTVSS
PDG10 ------------------------------ ----- -------------- ---------------- -------------------------------- VLPFDPISMDV WGKGTTVTVSS
PDG16 ------------------------------ ----- -------------- ---------------- -------------------------------- VLPFDPISMDV WGKGTTVTVSS
1.9III QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS SYGMH WVRQAPGKGLEWVA VISYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
PDG13 --K-L------------------------- --A-- -------------- ----------------- --A----------------------------R ALGSWGGWDHYMDV WGKGTTVTVSS
PDG17 ------------------------------ ----- -------------- ----------------- -------------------------------- ALGSWGGWDHYMDV WGKGTTVTVSS
PDG31 ------------------------------ ----- -------------- ----------------- -------------------------------- ALGSWGGWDHYMDV WGKGTTVTVSS
PDG37 ------------------------------ ----- -------------- ----------------- -------------------------------- ALGSWGGWDHYMDV WGKGTTVTVSS
HB5255 --Q-V------------------------- ----- -------------- ----------------- --T----------------------------- DRPIARWTYGGMDV WGQGTTVTVSS
B. 轻链
克隆 FR1 CDR1 FR2 CDR2 FR3 CDR3 FR4
DPL2 VLTQPPSASGTPGQRVTISC SGSSSNIGSNTVN WYQQLPGTAPKLLIY SNNQRPS GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC AAWDDSLNG
PDG7 -V------------W----- -------R--P-S --H-V---------F GSH---- -------------------R----G-AG---- -T---G---PV FGGGTKLTVLSQP
PDG8 -------------------- ------------- --------------- ------- -------------------------------- ----------- FGGGTKLTVLSQP
PDG10 -------------------- ------------- --------------- ------- -------------------------------- ----------- FGGGTKLTVLSQP
PDG16 -------------------- ------------- --------------- ------- -------------------------------- ----------- FGGGTKLTVLSQP
DPL2 VLTQPPSASGTPGQRVTISC SGSSSNIGSNTVN WYQQLPGTAPKLLIY SNNQRPS GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC AAWDDSLNG
PDG13 -V------------------ ------------- --------------- ------- -------------------------------- ---------WV FGGGTKLTVLGQP
PDG17 -------------------- ------------- --------------- ------- -------------------------------- ----------- FGGGTKLTVLGQP
PDG31 -------------------- ------------- --------------- ------- -------------------------------- ----------- FGGGTKLTVLGQP
PDG37 -------------------- ------------- --------------- ------- -------------------------------- ----------- FGGGTKLTVLGQP
FR：构架区；CDR：互补决定区。给出顶端序列(VH4.11；1.9III；DPL2)
是为了进行比较，它们各代表最密切相关的已知株系基因序列的推定
的氨基酸序列。虚线表示相同。M85255指的是EMPL/GenBank参照号，
表示人抗GPIIb自身抗体2E7推定的氨基酸序列(Kunicki等，自身免
疫学杂志，4(1991)，433-446)。对重链而言，前3个氨基酸(QVK)由
pComb3载体序列确定。
表4显示出A组和B组克隆与已知的株系V基因序列之间氨基酸
同源性的排布。
重链
轻链
PDG phab克隆
VH家族
株系基因
同源性(％)
Vλ家族
株系基因
同源性(5)
A组：7，8，10，16
VH4
VH4.11
84.3
VλI
DPL2
81.4
B组：13，17，31，37
VH3
1.9III
95.1
VλI
DPL2
97.1
2.鉴定抗独特型抗体序列
2.1 phab克隆AI-X
根据实施例1所述的方法，使用噬粒技术鉴定抗独特型抗体的序
列。将实施例1中选定的克隆PDG16用作抗原，没有阴性的预先选择。
使用组合phab文库的汇集物测定外周血B淋巴细胞的非免疫文库
和已被红细胞固定化的外周血淋巴细胞文库，和得自扁桃体的B淋巴
细胞非免疫文库的特异性。
分析4轮淘选之后所得的phab库，为此，随机选择40个phab克
隆，测定它们的结合特异性，选定克隆中有25个能与抗GPIIb/IIIa
phab反应。这些抗独特型phab克隆属于两组：I组(3个克隆)仅与A
组自身抗体phab克隆(PDG7，8，10和16)反应，而II组phab克隆(共
22个克隆)与A组和B组phab克隆、鼠抗GPIIb/IIIa单克隆抗体、
纯化的血清免疫球蛋白(IVIgG)或其F(ab’)2片断以及抗IgE Fab都能
反应。14个phab克隆(III组)不与上述任何物质反应。1个IV组phab
克隆仅与抗GPIIb/IIIa抗体反应。这些特异性试验的结果简述于表
5a中。
对I组phab克隆(AI-X16，17和24)进行的DNA序列分析表明除
了CDR2区域的1个氨基酸外，重链编码序列完全相同，而轻链编码序
列完全相同。与已知株系基因序列的比较结果表明与VH3 H链序列约
有85％的同源性，与V-λII L链家族序列约有90％同源性。在II，III
和IV组phab克隆中各取1个代表，对其进行H链基因的DNA序列分
析，序列分析的结果和与已知株系基因序列的比较结果简述于表6和
7a。
抑制试验的结果示于图1，利用免疫斑点试验测定纯化的GPIIb
/IIIa对AI-X17与PDG-A结合的抑制作用。将660和220ng PDG-A phab
分别滴加至硝酸纤维素滤膜上，将抗原与浓度范围为50μg/ml至
50ng/ml的GPIIb/IIIa保温2小时，与缓冲溶液保温2小时作为对照，
然后再与噬菌体克隆AI-X17(终浓度为1012/ml)保温2小时。使用过氧
化物酶缀合的多克隆兔抗噬菌体抗体，通过电化学发光法检测结合的
噬菌体。
发现AI-X17 phab(I组)能抑制A组抗体phab(PDG-X)与IIb/IIIa
糖蛋白的结合，这证明AI-X17能识别PDG-A上的抗原结合位点。
测定结合PDG-A的另一个克隆AI-X2的序列，与克隆AI-X20，39
和40类似，此克隆仅具有重链而无轻链。重链自身(可能是作为二聚
体)能以足够的特异性和亲和性与抗原(即PDG-A)结合。
2.2 phab克隆AI-B
根据实施例2.1所述的方法，使用噬粒技术鉴定其它抗独特型抗
体的序列，将实施例1中选择的克隆PDG-B用作抗原。
共选择40个phab克隆，测定其结合特异性。选定克隆中的34个
与抗GPIIb/IIIa phab反应，这些抗独特型phab克隆属于3组：
I组(14个克隆)仅与B组抗体phab克隆反应，而II组phab
克隆(共8个克隆)与A组和B组phab克隆均反应，III组phab
克隆(共12个克隆)还与鼠单克隆抗GPIIb/IIIa抗体、纯化的血
清免疫球蛋白(IVIgG)或其F(ab’)2片断以及抗IgE Fab反应。6
个phab克隆(IV组)不与上述任何物质反应。这些特异性试验的结
果简述于表5b中。
对I组phab克隆(AI-14，18，24和38)进行DNA序列分析的结果
简述于表6和7b。克隆AI-B14，18和38仅具有重链。
AI-B14和17是相同的，AI-B34和40也与AI-B18相同。
AI-B phab对PDG-B与血小板之结合的抑制作用示于图2。利用
流式细胞计数分析测定这种抑制作用。为此，使用辅助噬菌体作为对
照，在存在或缺乏AI-B phab时，将富含血小板的血浆(共107个血小
板)与生物素化的PDG-B保温。用低聚甲醛固定血小板，用R-藻红蛋
白(RPE)标记的链霉亲和素检测结合的PDG-B。FACScan仪器中的计数
为10,000，记录荧光的平均值(±SD)。克隆AI-B18，24和38获得最
强的抑制作用(＞60％)。结合抑制作用表明AI-B克隆能与PDG-B上的抗
原结合位点相互作用。
表5a
结合于
AIX phab克隆 PDGA PDGB 抗-IgE Fab 抗-GPIIb/IIIa SG F(ab’)2
mAb
I组：16，17，24 3 + - - - - -
II组： 22 + + + + + +
1，2，3，4，5，6，7，9，11，13，
14，23，26，27，28，29，33，
35，36，37，38，40
III组： 14 - - - - - -
8，10，12，15，18，19，21，22，
25，30，31，32，34，39
IV组：20 1 - - - + - -
表5b
AI-B 结合于
phab克隆n PDG-X PDG-B 抗-IgE 抗-GPIIb/IIIa IvIgG IvIgG
Fab mAb F(ab’)2
14
(AI-B5，7，8，14，17，18，23，24， - + - - - -
30，31，33，34，38，40)
8 + + - - - -
12 + + + + + +
6 - - - - - -
表6
抗Id噬菌体克隆
H链 L链
抗独特型
Phab-克隆 VH家族 株系基因 同源性 Vλ家族 株系基因 同源性
(AI-X和AI-B) (％)* (％)*
AI-X16，AI-X24 VH3 DP47 88 Vλ2 DPL10 88
AI-X17 VH3 DP47 87 VΛ2 DPL10 88
AI-X39 VH3 DP49 94 - - -
AI-X40 VH3 DP31 95 - - -
AI-X20 VH4 DP71 78 - - -
AI-B14，AI-B17 VH3 DP46 91 - - -
AI-B18 VH1 DP10 85 - - -
AI-B24 VH3 DP49 81 VΛ3 3h 82
AI-B38 VH1 DP5 98 - - -
*各个phab克隆的氨基酸序列与已知株系V基因序列的最高同源性(以
％表示)。
表7a
A. 重链
克隆 FR1 CDR1 FR2 CDR2 FR3 CDR3 FR4
DP47 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS SYAMS WVRQAPGKGLEWVS AISGSGGSTYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
AIX16 Q-K---------H----------------D NF--- -------------- G---G-LL-H------- ------N--R--V------------------- VRDLGYRVLSTFTFDI WGQGTKVTVSS
AIX24 ------------------------------ ----- -------------- ----------------- -------------------------------- ---------------- -----------
AIX17 ------------------------------ ----- -------------- ------------N---- -------------------------------- ---------------- -----------
DP49 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS SYGMH WVRQAPGKGLEWVA VISYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
AIX39 --K-L-------H----------------- --T-- -------------- L---------------- --A-----------------K----------- DGRSGSYARFDGMDV WGQGTTVTVSS
DP31 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFD DYAMH WVRQAPGKGLEWVS GISWNSGSIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKD
AIX40 Q-K-L------------------------- ---L- -------------- ----D-T---------- ------------------------------V-- MGSSVVATYNAFDI WGQGTMVTVSS
DP71 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS SYYWS WIRQPPGKGLEWIG YIYYSGSTNYNPSLKS RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR
AIX20 --K-L--------------------DV--R -H--- -L------------ F--DGAR-RF----R- --SL-M-P-K-------G------S------- DADGDGFSPYYFPY WGQGIPVSVSS
B.轻链
克隆 FR1 CDR1 FR2 CDR2 FR3 CDR3 FR4
DPL10 QSALTQPASVSGSPGQSITISC TGTSSDVGSYNLVS WYQQNPGKAPKLMIY EVSKRPS GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC CSYAGSSTF
AIX16 VV------------------ -----AI-N--F-P --------------- -G----- ----------------------------E--- ---VH---N WVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSS
AIX24 -------------------- -------------- --------------- ------- -------------------------------- --------- ----------------------------
AIX17 -------------------- -------------- --------------- ------- -------------------------------- --------- ----------------------------
25
FR：构架区；CDR：互补决定区。给出顶端序列(DP47；DP49；DP31；DP71
和DPL10)是为了进行比较，它们各代表最密切相关的已知株系序列。
虚线表示相同。对重链而言，前3个氨基酸(QVK)由pComb3载体序列
确定。
表7b
A.重链
克隆 FR1 CDR1 FR2 CDR2 FR3 CDR3 FR4
DP-46 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS SYAMH WVRQAPGKGLEWVA VISYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
AI-B14 --K-L------------------------- D-G-- -------------- A---------------- --S------N-------ST---------F--- DSETAIAAAGRFDI WGQGTMVTVSS
AI-B17 ------------------------------ ----- -------------- ----------------- ------------------------------ -------------- -----------
DP-10 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS SYAIS WVRQAPGQGLEWMG GIIPIFGTANYAQKFQG RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
AI-B18 --K-LE------------M----------- -HT-- -------------- --T-----V-------- ---P-------------R--T-DDSGI----- EDGTTVPSQPLEF WGQGTRVTVSS
DP-49 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS SYGMH WVRQAPGKGLEWVA VISYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
AI-B24 --K-L-----L----G------S------N K-AI- -----------Y-S A--SN-G-T-------- ------------V----S------------VR GSGSYLGYYFDY WGQGTLVTVSS
DP-5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLT ELSMH WVRQAPGKGLEWMG GFDPEDGETIYAQKFQG RVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAT
AI-B38 Q-K-LE------------------------ ----- -------------- ----------------- ------------------------------- GLRSYNYGRNLDY WGQGTLVTVSS
B.轻链
克隆 FR1 CDR1 FR2 CDR2 FR3 CDR3 FR4
VL3h SYVLTQPPSVSVAPGKTARITC GGNNIGSKSVH WYQQKPGQAPVLVIY YDSDRPS FIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYC QVHDSSSDH
AI-B24 -V----------RQ--T--- --YK------- -------------V- E--Y--- E------------M-----TG----------- ----NTN-Q TIFGGGTKLTVLRQPKAAPSVTLFPPSS
FR：构架区；CDR：互补决定区。给出顶端序列(DP46；DP10；DP49；DP5
扣VL3h)是为了进行比较，它们各代表最密切相关的已知株系序列。
虚线表示相同。对重链而言，前3个氨基酸(QVK)由pComb3载体序列
确定。
3.自身抗体多肽对血纤蛋白原与血小板之结合的影响
3.1方法
分析Fab与经EDTA预处理的血小板的结合
将富含血小板的血浆与10mM EDTA保温30分钟，加入生物素化的
PDG-B和PDG-A多肽，室温下将混合物保温1小时，使用藻红蛋白标
记的链霉亲和素通过流式细胞计数分析测定PDG-A和PDG-B与血小板
的结合。
聚集实验
新鲜制备富含血小板的血浆(250×109/l)，将其保存于5％CO2中。
在缺乏或存在PDG-A或PDG-B的情况下(最大量为10微克Fab)，通过
不同稀释度的ADP(最大浓度为410μM)激活血浆。在Rodell 300BD-5
aggregometer(Baxter AG，Dudingen，Switzerland)中测定聚集作
用。在随后的实验中，加入PDG-A或PDG-B之后再将多克隆的抗Fab
抗血清加入激活的血小板中。
血纤蛋白原结合试验
用0.5μg/ml GPIIb/IIIa包被ELISA板的孔，并用溶于Tris-缓
冲盐溶液的3.5％牛血清白蛋白封闭之。在缺乏或存在PDG-A，PDG-B
或作为对照的抗IgE Fab(最大浓度为23μg/ml)的情况下，以不同的
浓度(最大为0.08μg/ml)加入血纤蛋白原(Kabi Diagnostics，
Stockholm，Sweden)。用大鼠抗人血纤蛋白原抗体、生物素化的小鼠
抗大鼠抗体和由链霉亲和素和生物素化的辣根过氧化物酶组成的缀合
物(Amersham Pharmacia Biotech Europe GmbH，Dubendorf，
Switzerland)，使用ELISA Easy Reader(EAR340AT，SLT Instruments，
Austria)，在405nm下测定结合的血纤蛋白原。
使用单克隆抗体7E3和抗体片断ReoPro的竞争试验
在存在或缺乏鼠单克隆抗体7E3或其Fab片断ReoPro(Fab总量
范围为1014至1010)的情况下，将富含血小板的血浆(230×109/l)与
PDG-B或PDG-A(分别为200和400μg/ml)一起保温1.5小时。用等体
积的1％低聚甲醛固定之后，使用藻红蛋白标记的链霉亲和素通过流式
细胞计数分析测定PDG-B和PDG-A与血小板的结合。
3.2结果
检测的重组型抗GPIIb/IIIa Fab自身抗体片断未表现出与经
10mM EDTA预处理的血小板的结合，这表明自身抗体片断仅识别构象
完整的抗原(图3)。
在使用富含血小板之血浆的聚集实验中，PDG-A和PDG-B都不能
抑制聚集。在血纤蛋白原的浓度比血清中的低104至106倍的血纤蛋白
原结合试验中，PDG-A和PDG-B完全抑制血纤蛋白原的结合(图4)。当
将使用类似的富集方法得到的抗IgE Fab用作对照时，没有抑制作用
出现。这些结果表明PDG-A和PDG-B均与GPIIb/IIIa上的血纤蛋白原
结合位点强有力地相互作用。
在用鼠单克隆抗GPIIb/IIIa抗体7E3或其可商购的Fab片断
ReoPro进行的研究中，它们都能抑制血纤蛋白原与激活的GPIIb/
IIIa结合，PDG-B与血小板的结合被选择性地和完全地抑制(图5和
7)。与之形成对照的是，7E3或ReoPro都未显著抑制PDG-A与血小
板的结合。
序列表
1)一般资料：
(i)申请人：
(A)姓名：ASAT AG Applied Science & Technology
(B)街道：Baarerstrasse 77
(C)城市：Zug
(E)国家：瑞士
(F)邮政编码：6302
(ii)发明题目：重组抗体
(iii)序列数：30
(iv)计算机可读形式：
(A)介质类型：软盘
(B)计算机：IBM PC兼容机
(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
(D)软件：PatentIn Release #1.0，Version #1.30(EPO)
(vi)原始申请资料：
(A)申请号：DE 19723904.8
(B)申请日：06-JUN-1997
(vi)原始申请资料：
(A)申请号：DE 19755227.7
(B)申请日：12-DEC-1997
(vi)原始申请资料：
(A)申请号：DE 19820663.1
(B)申请日：08-MAY-1998
(2)SEQ ID NO：1的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：357个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..357
(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCG GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCG GAG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
ACC CTG TCC CTC AAC TGC ACT GTC TCT GGT CGC TCC ATC AGT GGT TAC 96
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Thr Val Ser Gly Arg Ser Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
TCT TGG AGA TGG ATC CGG CAG TCT CCA GGG AAG GGA CTA GAG TGG ATT 144
Ser Trp Arg Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
GGG GAT ATC TCT TAT AGT GGG AGT ACC AAG TAC AAA CCC TCC CTC AGG 192
Gly Asp Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Lys Pro Ser Leu Arg
50 55 60
AGT CGA GTC ACC CTG TCA GTA GAC ACG TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG 240
Ser Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
AAG CTG AAT TCG GTG ACC GCT GCG GAC ACG GCC GTC TAT TAC TGT GCG 288
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
CGA GTC TTG CCC TTT GAC CCG ATC TCG ATG GAC GTC TGG GGC AAA GGG 336
Arg Val Leu Pro Phe Asp Pro Ile Ser Met Asp Val Trp Gly Lys Gly
100 105 110
ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 357
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
(2)SEQ ID NO：2的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：119个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Thr Val Ser Gly Arg Ser Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Ser Trp Arg Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Lys Pro Ser Leu Arg
50 55 60
Ser Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Leu Pro Phe Asp Pro Ile Ser Met Asp Val Trp Gly Lys Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
(2)SEQ ID NO：3的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：333个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..333
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：
GTG GTG ACT CAG CCA CCC TCA GCG TCT GGG ACC CCC GGG CAG TGG GTC 48
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Trp Val
120 125 130 135
ACC ATC TCT TGT TCT GGG AGC AGC TCC AAC ATC AGA AGT AAT CCT GTT 96
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Arg Ser Asn Pro Val
140 145 150
AGC TGG TAT CAC CAG GTC CCA GGC ACG GCC CCC AAA CTC CTC ATC TTT 144
Ser Trp Tyr His Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Phe
155 160 165
GGT AGT CAT CAG CGG CCC TCA GGG GTC CCT GAC CGA TTC TCT GGC TCC 192
Gly Ser His Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
170 175 180
AAG TCG GGC ACC TCC GCC TCC CTG GCC ATC CGT GGG CTC CAA TCT GGG 240
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Arg Gly Leu Gln Ser Gly
185 190 195
GAT GCT GGT GAC TAT TAC TGT GCA ACA TGG GAT GAC GGC CTC AAT GGT 288
Asp Ala Gly Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Gly Leu Asn Gly
200 205 210 215
CCG GTG TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA AGT CAG CCC 333
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro
220 225 230
(2)SEQ ID NO：4的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：111个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Trp Val
1 5 10 15
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Arg Ser Asn Pro Val
20 25 30
Ser Trp Tyr His Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Phe
35 40 45
Gly Ser His Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Arg Gly Leu Gln Ser Gly
65 70 75 80
Asp Ala Gly Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Gly Leu Asn Gly
85 90 95
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
(2)SEQ ID NO：5的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：369个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..369
(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCT GGG AGG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
115 120 125
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Sar Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
130 135 140
GCT ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
145 150 155
GCA GTT ATA TCA TAT GAT GGA AGC AAT AAA TAC TAC GCA GAC TCC GTG 192
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
160 165 170 175
AAG GGC CGA TTC GCC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT 240
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
180 185 190
CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT 288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
195 200 205
GCG AGA GCG CTG GGG AGC TGG GGG GGT TGG GAC CAC TAC ATG GAC GTC 336
Ala Arg Ala Leu Gly Ser Trp Gly Gly Trp Asp His Tyr Met Asp Val
210 215 220
TGG GGC AAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 369
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
225 230
(2)SEQ ID NO：6的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：123个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Leu Gly Ser Trp Gly Gly Trp Asp His Tyr Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：7的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：333个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..333
(xi)序列描述：SEQ ID NO：7：
GTG GTG ACT CAG CCA CCC TCA GCG TCT GGG ACC CCC GGG CAG AGG GTC 48
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val
125 130 135
ACC ATC TCT TGT TCT GGA AGC AGC TCC AAC ATC GGA AGT AAT ACT GTA 96
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Sar Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val
140 145 150 155
AAC TGG TAC CAG CAG CTC CCA GGA ACG GCC CCC AAA CTC CTC ATC TAT 144
Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
160 165 170
AGT AAT AAT CAG CGG CCC TCA GGG GTC CCT GAC CGA TTC TCT GGC TCC 192
Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
175 180 185
AAG TCT GGC ACC TCA GCC TCC CTG GCC ATC AGT GGG CTC CAG TCT GAG 240
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu
190 195 200
GAT GAG GCT GAT TAT TAC TGT GCA GCA TGG GAT GAC AGC CTG AAT GGT 288
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly
205 210 215
TGG GTG TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGT CAG CCC 333
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
220 225 230
(2)SEQ ID NO：8的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：111个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val
1 5 10 15
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly
85 90 95
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
(2)SEQ ID NO：9的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：369个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..369
(xi)序列描述：SEQ ID NO：9：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTT CAC CCC GGG GGG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
115 120 125
TCC CTG AGA CTC TCT TGT GCA GCC TCT GGA TTT ACG TTT GAC AAC TTT 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asn Phe
130 135 140
GCC ATG AGC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGG CTG GAG TGG GTC 144
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
145 150 155
TCA GGC ATT AGT GGT GGT GGT CTT TTG ACA CAC TAC GCA GAC TCC GTG 192
Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Leu Leu Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
160 165 170 175
AAG GGC CGG TTC ACC ATC TCC AGA AAC AAT TCC AGG AAC ACT GTA TAC 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ser Arg Asn Thr Val Tyr
180 185 190
CTA CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAA GAC ACG GCC GTG TAT TAT TGT 288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
195 200 205
GTG AGA GAT CTG GGC TAT AGA GTA CTT TCG ACT TTT ACT TTT GAT ATC 336
Val Arg Asp Leu Gly Tyr Arg Val Leu Ser Thr Phe Thr Phe Asp Ile
210 215 220
TGG GGC CAG GGG ACA AAG GTC ACC GTC TCT TCA 369
Trp Gly Gln Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Ser
225 230
(2)SEQ ID NO：10的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：123个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asn Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Leu Leu Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ser Arg Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Leu Gly Tyr Arg Val Leu Ser Thr Phe Thr Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：11的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：375个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..375
(xi)序列描述：SEQ ID NO：11：
GTG GTG ACT CAG CCT GCC TCC GTG TCT GGG TCT CCT GGA CAG TCG ATC 48
Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile
125 130 135
ACC ATC TCC TGC ACT GGA ACC AGC AGT GCT ATT GGG AAT TAT AAC TTT 96
Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Ala Ile Gly Asn Tyr Asn Phe
140 145 150 155
GTC CCC TGG TAC CAA CAG CAC CCA GGC AAA GCC CCC AAA CTC ATG ATT 144
Val Pro Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile
160 165 170
TAT GAG GGC AGT AAG CGG CCC TCA GGG GTT TCT AAT CGC TTC TCT GGC 192
Tyr Glu Gly Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly
175 180 185
TCC AAG TCT GGC AAC ACG GCC TCC CTG ACA ATC TCT GGG CTC CAG GCT 240
Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala
190 195 200
GAG GAC GAG GCT GAG TAT TAC TGC TGC TCA TAT GTT CAT AGT AGC ACT 288
Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Val His Ser Ser Thr
205 210 215
AAT TGG GTG TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGT CAG CCC 336
Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
220 225 230 235
AAG GCT GCC CCC TCG GTC ACT CTG TTC CCA CCC TCC TCT 375
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
240 245
(2)SEQ ID NO：12的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：125个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：12：
Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile
1 5 10 15
Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Ala Ile Gly Asn Tyr Asn Phe
20 25 30
Val Pro Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile
35 40 45
Tyr Glu Gly Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Val His Ser Ser Thr
85 90 95
Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO：13的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：366个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..366
(xi)序列描述：SEQ ID NO：13：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCA GGA CCA GGA CTG GTG AAG CCC TCG GAG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
130 135 140
ACC CTG TCT CTC ACC TGC ACT GTC TCT GAT GTC TCC ATC AGA AGT CAT 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Val Ser Ile Arg Ser His
145 150 155
TAC TGG AGT TGG CTC CGG CAG CCC CCA GGG AAG GGA CTG GAG TGG ATT 144
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
160 165 170
GGG TTT ATC TAT GAC GGT GCG AGA ACC AGG TTC AAC CCC TCC CTC AGG 192
Gly Phe Ile Tyr Asp Gly Ala Arg Thr Arg Phe Asn Pro Ser Leu Arg
175 180 185
AGT CGA GTC TCC CTT TCA ATG GAC CCA TCC AAG AAG CAG TTT TCC CTG 240
Ser Arg Val Ser Leu Ser Met Asp Pro Ser Lys Lys Gln Phe Ser Leu
190 195 200 205
AAA CTG GGG TCT GTG ACC GCT GCG GAC TCG GCC GTC TAC TAC TGT GCG 288
Lys Leu Gly Ser Val Thr Ala Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
AGA GAC GCG GAT GGA GAT GGC TTC AGC CCA TAC TAC TTT CCC TAC TGG 336
Arg Asp Ala Asp Gly Asp Gly Phe Ser Pro Tyr Tyr Phe Pro Tyr Trp
225 230 235
GGC CAG GGA ATC CCG GTC TCC GTC TCC TCG 366
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ser Val Ser Ser
240 245
(2)SEQ ID NO：14的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：122个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：14：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Val Ser Ile Arg Ser His
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Asp Gly Ala Arg Thr Arg Phe Asn Pro Ser Leu Arg
50 55 60
Ser Arg Val Ser Leu Ser Met Asp Pro Ser Lys Lys Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Gly Ser Val Thr Ala Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Ala Asp Gly Asp Gly Phe Ser Pro Tyr Tyr Phe Pro Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ser Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：15的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：372个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..372
(xi)序列描述：SEQ ID NO：15：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAC CCT GGG AGG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val His Pro Gly Arg
125 130 135
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
140 145 150
ACT ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
155 160 165 170
GCA CTT ATA TCA TAT GAT GGA AGC AAT AAA TAC TAC GCA GAC TCC GTG 192
Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
175 180 185
AAG GGC CGA TTC GCC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTA TAT 240
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
190 195 200
CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT 288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
205 210 215
GCG AAA GAT GGC CGG AGT GGG AGC TAC GCC AGG TTC GAC GGT ATG GAC 336
Ala Lys Asp Gly Arg Ser Gly Ser Tyr Ala Arg Phe Asp Gly Met Asp
220 225 230
GTC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 372
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
235 240 245
(2)SEQ ID NO：16的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：124个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：16：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val His Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Arg Ser Gly Ser Tyr Ala Arg Phe Asp Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：17的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：372个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..372
(xi)序列描述：SEQ ID NO：17：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG CCT GGC AGG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
125 130 135 140
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
145 150 155
GCC CTG CAC TGG GTC CGT CAA GCT CCA GGG AAG GGC CTG GAG TGG GTC 144
Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
160 165 170
TCA GGT ATT AGT TGG GAT AGT GGT ACC ATA GGC TAT GCG GAC TCT GTG 192
Ser Gly Ile Ser Trp Asp Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
175 180 185
AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAC GCC AAG AAC TCC CTG TAT 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
190 195 200
CTG CAA ATG AAC AGT CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCC TTG TAT TAC TGT 288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
205 210 215 220
GTA AAA GAT ATG GGG TCT TCG GTA GTG GCT ACG TAC AAT GCT TTT GAT 336
Val Lys Asp Met Gly Ser Ser Val Val Ala Thr Tyr Asn Ala Phe Asp
225 230 235
ATC TGG GGC CAA GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCT TCA 372
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
240 245
(2)SEQ ID NO：18的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：124个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：18：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asp Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Met Gly Ser Ser Val Val Ala Thr Tyr Asn Ala Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：19的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：360个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：mRNA的cDNA
(vii)直接来源：
(B)克隆：AI-X2
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..360
(xi)序列描述：SEQ ID NO：19
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCA GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCG GAG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
125 130 135 140
ACC CTG TCC CTC ACC TGC ACT GTC TCT GGT GGC TCC TTC AGT ACT TAC 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Phe Ser Thr Tyr
145 150 155
TAT TGG AGC TGG ATC CGG CAG CCC CCA GGG AAG GGA CTG GAG TGG ATT 144
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
160 165 170
GGG TAT ATC TAT TAC AGT GGG AAC ACC AAC TAC AAC CCC TCC CTC AAG 192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
175 180 185
AGT CGA GCC ACC ATA TCA GTA GAC ACG TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG 240
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
190 195 200
AAG CTG AGC TCT GTT ACC GCC GCA GAC ACG GCC GTA TAT TAC TGT GCG 288
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
205 210 215 220
AGA CTG CGT AAC GAT GGC TGG AAT GAT GGC TTT GAT ATC TGG GGC CAA 336
Arg Leu Arg Asn Asp Gly Trp Asn Asp Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln
225 230 235
GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCT TCA 360
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
240
(2)SEQ ID NO：20的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：120个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：20：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Arg Asn Asp Gly Trp Asn Asp Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：21的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：369个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：mRNA的cDNA
(vi)原始来源：
(A)生物体：人
(vii)直接来源：
(B)克隆：AI-B14
(viii)基因组中的位置：
(A)染色体/区段：14
(B)作图位置：q32.3
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..369
(xi)序列描述：SEQ ID NO：21
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCT GGG AGG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
125 130 135
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT GAC TAT 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
140 145 150
GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
155 160 165
GCA GCT ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAC AAA TAC TAT GCA GAC TCC GTG 192
Ala Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
170 175 180
AAG GGC CGA TTC TCC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAC AAT ACG CTA TAT 240
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Tyr
185 190 195 200
CTG CAA ATG AGC ACC CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTC TAT TTC TGT 288
Leu Gln Met Ser Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
205 210 215
GCG AGA GAT TCG GAA ACG GCA ATA GCG GCA GCT GGA CGG TTT GAT ATC 336
Ala Arg Asp Ser Glu Thr Ala Ile Ala Ala Ala Gly Arg Phe Asp Ile
220 225 230
TGG GGC CAA GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCT TCA 369
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
235 240
(2)SEQ ID NO：22的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：123个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：22：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Glu Thr Ala Ile Ala Ala Ala Gly Arg Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：23的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：366个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：mRNA的cDNA
(vi)原始来源：
(A)生物体：人
(vii)直接来源：
(B)克隆：AI-B18
(viii)基因组中的位置：
(A)染色体/区段：14
(B)作图位置：q32.3
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..366
(xi)序列描述：SEQ ID NO：23
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GCT GAG GTG AAG AAG CCT GGG TCC 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
125 130 135
TCG GTG ATG GTC TCC TGC AAG GCT TCT GGA GGC ACC TTC AGC AGC CAT 96
Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser His
140 145 150 155
ACT ATC AGC TGG GTG CGG CAG GCC CCT GGA CAA GGC CTT GAG TGG ATG 144
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
160 165 170
GGA GGG ATC ACC CCT ATC TTT GGT ACA GTG AAC TAC GCA CAG AAG TTC 192
Gly Gly Ile Thr Pro Ile Phe Gly Thr Val Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
175 180 185
CAG GGC AGA GTC ACC ATT ACC GCG GAC GAA CCC ACG AGC ACA GCC TAC 240
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Pro Thr Ser Thr Ala Tyr
190 195 200
ATG GAA CTG AGG AGC CTG ACA TCT GAC GAC TCG GGC ATC TAT TAC TGT 288
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Gly Ile Tyr Tyr Cys
205 210 215
GCG AGA GAA GAT GGC ACT ACA GTA CCA AGT CAA CCC CTT GAG TTC TGG 336
Ala Arg Glu Asp Gly Thr Thr Val Pro Ser Gln Pro Leu Glu Phe Trp
220 225 230 235
GGC CAG GGA ACC CGG GTC ACC GTC TCC TCT 366
Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
240 245
(2)SEQ ID NO：24的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：122个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：24：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Thr Pro Ile Phe Gly Thr Val Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Pro Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Gly Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Gly Thr Thr Val Pro Ser Gln Pro Leu Glu Phe Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：25的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：363个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：mRNA的cDNA
(vi)原始来源：
(A)生物体：人
(vii)直接来源：
(B)克隆：AI-B24
(viii)基因组中的位置：
(A)染色体/区段：14
(B)作图位置：q32.3
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..363
(xi)序列描述：SEQ ID NO：25
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTC CAG CCT GGG GGG 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
125 130 135
TCC CTG AGA CTC TCC TGT TCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AAT AAA TAT 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
140 145 150
GCA ATA CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGA CTG GAA TAT GTT 144
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
155 160 165 170
TCA GCT ATT AGT AGT AAT GGG GGT AAC ACA TAC TAC GCA GAC TCC GTG 192
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
175 180 185
AAG GGC AGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG GTG TAT 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
190 195 200
CTT CAA ATG AGC AGT CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT 288
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
205 210 215
GTT AGA GGA AGT GGG AGC TAC TTA GGA TAC TAC TTT GAC TAC TGG GGC 336
Val Arg Gly Ser Gly Ser Tyr Leu Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
220 225 230
CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA 363
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
235 240
(2)SEQ ID NO：26的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：121个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：26：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Ser Gly Ser Tyr Leu Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：27的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：366个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：mRNA的cDNA
(vi)原始来源：
(A)生物体：人
(vii)直接来源：
(B)克隆：AI-B24
(viii)基因组中的位置：
(A)染色体/区段：22
(B)作图位置：q11
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..366
(xi)序列描述：SEQ ID NO：27
GTG GTG ACT CAG CCA CCC TCG GTG TCA GTG GCT CCA AGA CAG ACG GCC 48
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Arg Gln Thr Ala
125 130 135
ACG ATT ACC TGT GGG GGA TAC AAG ATT GGA AGT AAA AGT GTC CAC TGG 96
Thr Ile Thr Cys Gly Gly Tyr Lys Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp
140 145 150
TAC CAA CAG AAG CCA GGC CAG GCC CCT GTA TTG GTC GTC TAT GAG GAT 144
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Glu Asp
155 160 165
TCC TAC CGG CCC TCA GAG ATC CCT GAG CGA TTC TCT GGC TCC AAC TCT 192
Ser Tyr Arg Pro Ser Glu Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
170 175 180 185
GGG AAC ATG GCC ACC CTG ACC ATC ACC GGG GTC GAA GCC GGG GAT GAG 240
Gly Asn Met Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu
190 195 200
GCC GAC TAC TAC TGT CAG GTG TGG GAT AAT ACT AAT GAT CAG ACG ATA 288
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Thr Asn Asp Gln Thr Ile
205 210 215
TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA CGT CAG CCC AAG GCT GCC 336
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln Pro Lys Ala Ala
220 225 230
CCC TCG GTC ACT CTG TTC CCG CCC TCC TCT 366
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
235 240
(2)SEQ ID NO：28的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：122个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：28：
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Arg Gln Thr Ala
1 5 10 15
Thr Ile Thr Cys Gly Gly Tyr Lys Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Glu Asp
35 40 45
Ser Tyr Arg Pro Ser Glu Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
50 55 60
Gly Asn Met Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu
65 70 75 80
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Thr Asn Asp Gln Thr Ile
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
115 120
(2)SEQ ID NO：29的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：366个碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：mRNA的cDNA
(vi)原始来源：
(A)生物体：人
(vii)直接来源：
(B)克隆：AI-B38
(viii)基因组中的位置：
(A)染色体/区段：14
(B)作图位置：q32.3
(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..366
(xi)序列描述：SEQ ID NO：29
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GCT GAG GTG AAG AAG CCT GGG GCC 48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
125 130 135
TCA GTG AAG GTC TCC TGC AAG GTT TCC GGA TAC ACC CTC ACT GAA TTA 96
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
140 145 150
TCC ATG CAC TGG GTG CGA CAG GCT CCT GGA AAA GGG CTT GAG TGG ATG 144
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
155 160 165 170
GGA GGT TTT GAT CCT GAA GAT GGT GAA ACA ATC TAC GCA CAG AAA TTC 192
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
175 180 185
CAG GGC AGA GTC ACC ATG ACC GAG GAC ACA TCT ACA GAC ACG GCC TAC 240
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
190 195 200
ATG GAG CTG AGC AGC CTG AGA TCT GAG GAC ACG GCC GTG TAT TAC TGT 288
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
205 210 215
GAG ACA GGT CTG AGG TCG TAC AAC TAT GGT CGT AAC CTT GAC TAT TGG 336
Glu Thr Gly Leu Arg Ser Tyr Asn Tyr Gly Arg Asn Leu Asp Tyr Trp
220 225 230
GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA 366
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
235 240
(2)SEQ ID NO：30的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：122个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：30：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Glu Thr Gly Leu Arg Ser Tyr Asn Tyr Gly Arg Asn Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120