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1、(10)申请公布号 CN 102838539 A(43)申请公布日 2012.12.26CN102838539A*CN102838539A*(21)申请号 201210079238.9(22)申请日 2012.03.23201110166364.3 2011.06.21 CNC07D 215/54(2006.01)C07D 401/12(2006.01)C07D 417/12(2006.01)C07D 405/14(2006.01)C07D 401/14(2006.01)A61K 31/4709(2006.01)A61P 35/00(2006.01)(71)申请人苏州迈泰生物技术有限公司地址 。
2、215600 江苏省苏州市张家港市国泰北路1号F栋2楼(72)发明人朱惠霖 殷建明 陶军华(74)专利代理机构苏州创元专利商标事务所有限公司 32103代理人孙仿卫 汪青(54) 发明名称喹啉烯酰胺衍生物及其在制备抗恶性肿瘤药物中的用途(57) 摘要本发明涉及一种新型的喹啉烯酰胺衍生物及其在制备预防和/或治疗抗恶性肿瘤药物中的用途。本发明的喹啉烯酰胺衍生物是理想的高效双重非可逆性EGFR及HER2激酶抑制剂，可用于治疗或预防乳腺癌、卵巢癌、胃肠癌、食管癌、肺癌、头颈部鳞癌、胰腺癌、表皮鳞癌、前列腺癌、神经胶质瘤和鼻咽癌等多种恶性肿瘤疾病。(66)本国优先权数据(51)Int.Cl.权利要求书3。
3、页 说明书7页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 3 页 说明书 7 页1/3页21.具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其中：R1为C1C12烃基，CH2F，CHF2，C2C12氟代烃基，C2C12氯代烃基；或者，R1为-CkH2k-1O，其中k为36之间的整数；R2为氟、氯、溴、碘或氰基；R3为氟、氯、溴、碘、-OCiH2iC6H4X、-OCiH2iC5H4N、-OCiH2iC4H3N2或-OCiH2iC3H2N3，其中X代表氟、氯，溴或碘，i为1、2或3；R4为氟、氯、溴、碘、氰基、-CF3、-CHF2、-CH2。
4、F、-CONH2或-CCH；n为0、1、2或3；A为五元或六元饱和或非饱和以及取代和未被取代的杂环结构，取代或未被取代的苯环，或者A为-NR5R6，其中，R5和R6独立地为氢、C1C12的烃基，所述具有通式(I)的化合物、其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物中，非交换性的氢未被取代，或部分或全部被氘取代。2.根据权利要求1所述的具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其特征在于：式(I)中，R1为C1C6饱和烃基，C1C6氟代烃基或四氢呋喃基；R2、R3、R4、n以及A的定义同权利要求1。3.根据权利要求2所述的具有通式(I)的化合物，。
5、其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其特征在于：R1为甲基、乙基、丙基、异丙基或二氟甲基。4.根据权利要求1所述的具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其特征在于：式(I)中，R2为氯，R3为氟、-OCH2C6H4F、-OCH2C6H4Cl或-OCH2C5H4N；R1、R4、n及A的定义同权利要求1。5.根据权利要求1所述的具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其特征在于：式(I)中，n为0或1；R1、R2、R3、R4以及A的定义同权利要求1。6.根据权利要求1所述的具有通式(I)的化合物，。
6、其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其特征在于：式(I)中，A为-N(CH3)2、-N(CH3)CH2CH3、-N(CH3)权 利 要 求 书CN 102838539 A2/3页3CH2Ph、咪唑或吡啶基，以及未取代和为烷基取代的丁内酰胺和戊内酰胺中的一种，R1、R2、R3、R4以及n的定义同权利要求1。7.根据权利要求6所述的具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其特征在于：A为8.根据权利要求1所述的具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，其特征在于：所述化合物为如下结构式表示的七种化合物。
7、中的一种：9.权利要求1至8中任一项权利要求所述的具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物在制备预防和/或治疗与EGFR及HER2激酶功能有关的适应症的药物中的用途。权 利 要 求 书CN 102838539 A3/3页410.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述与EGFR及HER2激酶功能相关的适应症包括乳腺癌、卵巢癌、胃肠癌、食管癌、肺癌、头颈部鳞癌、胰腺癌、表皮鳞癌、前列腺癌、神经胶质瘤和鼻咽癌。权 利 要 求 书CN 102838539 A1/7页5喹啉烯酰胺衍生物及其在制备抗恶性肿瘤药物中的用途技术领域0001 本发明涉及喹啉烯酰胺衍生物及。
8、其在制备预防和/或治疗恶性肿瘤的药物中的用途。背景技术0002 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR，HER1/erbB1)家族是跨膜的受体型酪氨酸激酶中最具有代表性的分子之一，具有广泛的生物学功能。表皮生长因子和转化生长因子-等多种配体可与EGFR细胞外部分结合，将有丝分裂信号向细胞内传递，从而调控细胞周期，调节细胞正常分化，促进损伤修复。EGFR还可活化其下游的血管表皮生长因子受体(vascular epidermal growth factor receptor，VEGFR)，促进实体瘤微血管网形成。因此EGFR在肿瘤细胞的发生、发。
9、展、分化、修复及转移中发挥着重要的作用。研究表明，在乳腺癌、大肠癌、肺癌、头颈部鳞癌和胰腺癌等多种上皮细胞来源的肿瘤中都存在着EGFR基因的异常活化、扩增以及过度表达。以EGFR作为治疗靶点的研究很多，其中以其单克隆抗体及酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor，TKI)最为成功。TKI作用于EGFR细胞内部，与ATP竞争性结合，抑制激酶的活性和磷酸化，并封闭EGFR酪氨酸激酶ATP结合位点从而达到特异性抑制EGFR的目的。0003 人类表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor，HER2/neu，erbB-2。
10、)是一个跨膜受体，在许多表皮肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、鼻咽癌等中过度表达，约2530的原发性乳腺癌存在HER2/neu基因的过度表达。发明内容0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种新型的喹啉烯酰胺衍生物，其是理想的EGFR及HER2激酶抑制剂，可用于有效预防或治疗乳腺癌、卵巢癌、胃肠癌、食管癌、肺癌、头颈部鳞癌、胰腺癌、表皮鳞癌、前列腺癌、神经胶质瘤和鼻咽癌等多种恶性肿瘤疾病。0005 为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：0006 具有通式(I)的化合物，其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物，0007 说 明 书CN 102838539 A2。
11、/7页60008 其中：0009 R1为C1C12烃基，CH2F，CHF2，C2C12氟代烃基，C2C12氯代烃基；或者，R1为-CkH2k-1O，其中k为36之间的整数；0010 R2为氟、氯、溴、碘或氰基；0011 R3为氟、氯、溴、碘、-OCiH2iC6H4X、-OCiH2iC5H4N、-OCiH2iC4H3N2或-OCiH2iC3H2N3，其中X代表氟、氯，溴或碘，i为1、2或3；0012 R4为氟、氯、溴、碘、氰基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CONH2或-CCH；0013 n为0、1、2或3；0014 A为五元或六元饱和或非饱和以及取代和未被取代的杂环结构，取代或未被取代的。
12、苯环，或者A为-NR5R6，其中，R5和R6独立地为氢、C1C12的烃基，0015 所述具有通式(I)的化合物、其可药用盐、水合物，前药或以任何形式代谢形成的代谢产物中，非交换性的氢未被取代，或部分或全部被氘取代。0016 根据本发明的一个方面，式(I)中，R1为C1C6饱和烃基或C1C6氟代烃基；R2、R3、R4、n以及A的定义同上。优选地，R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、氟代甲基例如二氟甲基等。0017 根据本发明的又一方面，式(I)中，R2为氯，R3为氟、-OCH2C6H4F、-OCH2C6H4Cl或-OCH2C5H4N；R1、R4、n及A的定义同上。0018 根据本发明的一个优选方面，。
13、式(I)中，n为0或1；R1、R2、R3、R4以及A的定义同上。0019 根据本发明的又一方面，式(I)中，A为-N(CH3)2、-N(CH3)CH2CH3、-N(CH3)CH2ph、咪唑或吡啶基，以及未取代和为烷基取代的丁内酰胺和戊内酰胺中的一种，R1、R2、R3、R4以及n的定义同上。0020 根据一个具体方面，A为0021 根据本发明，代表性的化合物如下：0022 说 明 书CN 102838539 A3/7页70023 根据本发明，所述的化合物，其不仅包括单一的某种化合物形式，还包括多种结构满足通式(I)要求的化合物的混合物形式，以及同一化合物的不同异构体形式例如外消旋体、对映异构体、。
14、非对映异构体等。所述的可药用盐包括但不限于盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、苯酸盐、甲基苯磺酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、没食子酸盐、柠檬酸盐等。所述的“具有通式(I)的化合物的前药“指一种物质，当采用适当的方法施用后，可在受试者体内进行代谢或化学反应而转变成结构式(I)的至少一种化合物或其盐。0024 根据本发明，所述的“烃基”，除非另有说明，包括脂肪烃基和芳香烃基，其中，脂肪烃基可以是直链、支链或环形式。0025 本发明中所述化学基团-CkH2k-1O涵盖所有满足该式要求的基团，且由“-”连接的原子与其它基团连接。满足CkH2k-1O的代表性的。
15、基团为四氢呋喃基。0026 本发明化合物的制备可以通过化学领域众所周知的那些类似的方法的合成途径，说 明 书CN 102838539 A4/7页8特别是根据本文包含的描述合成本发明的化合物。试剂一般从商业来源获得或易于使用本领域技术人员众所周知的方法制备。0027 由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：0028 本发明提供的化合物是新型的喹啉烯酰胺衍生物，其是理想的高效双重非可逆性酪氨酸激酶抑制剂，通过作用于EGFR细胞内部分与ATP竞争性结合，抑制激酶的活性和磷酸化，并封闭EGFR酪氨酸激酶ATP结合位点从而达到特异性抑制EGFR的目的。因此本发明化合物可用于制备治疗或预。
16、防各种与EGFR和HER2激酶功能有关的适应症，包括但不限于乳腺癌、卵巢癌、胃肠癌、食管癌、肺癌、头颈部鳞癌、胰腺癌、表皮鳞癌、前列腺癌、神经胶质瘤和鼻咽癌等多种恶性肿瘤疾病。具体实施方式0029 下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明并不限于以下实施例。0030 实施例10031 0032 式Ia化合物可通过如下合成路线获得：0033 0034 式Ia化合物的制备方法具体包括如下步骤：0035 (1)、制备中间体2：在0下，边搅拌边将中间体1a(0.514g，2.8mmol)的四氢呋喃溶液(10ml)慢慢滴加到中间体1(0.5g，1.12mmol)中。反应液慢慢升温到常温，搅。
17、拌反应3说 明 书CN 102838539 A5/7页9小时。然后用饱和碳酸氢钠停止和稀释反应，再用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和氯化钠溶液冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩并在真空干燥，硅胶柱纯化得到中间体2(500mg，75.2)【m/s：MH+：593.4】。0036 (2)、制备式Ia化合物：在室温下，边搅拌边将中间体2(500mg，0.84mmol)慢慢加到N-甲基苄胺(307mg，2.5mmol)和碳酸钾(233mg，1.69mmol)的乙腈溶液(20ml)中。搅拌反应12小时后，加水稀释，再用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和氯化钠溶液冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩并在真空干燥，纯化得到目标产品。
18、(200mg，37.5)。0037 对得到的目标产品Ia进行了氢核磁共振1H-NMR(400MHz，MeOD)和质谱测试，结果如下：0038 1H-NMR谱图中吸收峰：8.93(s，1H)，8.52(dd，1H)，8.28-8.27(dd，1H)，7.87-7.83(t，1H)，7.66-7.64(d，1H)，7.36-7.21(m，7H)，7.09-6.96(m，4H)，6.49-6.45(d，1H)，5.17(s，2H)，4.22-4.17(m，2H)，3.52(s，2H)，3.20-3.19(br，2H)，2.19(s，1H)，1.53-1.49(t，3H)。0039 m/s：MH+：6。
19、33.3。计算得出产品具有分子式C36H33ClN6O3，精确分子质量为632.23。0040 实施例20041 式Ib化合物，其化学结构式如下：0042 0043 式Ib化合物可通过如下合成路线获得：0044 0045 式Ib化合物的制备方法具体步骤如下：0046 在0下，边搅拌边将中间体1(500mg，1.12mmol)慢慢加到中间体1b(470mg，2.8mmol)的四氢呋喃溶液(50ml)中，再滴加N，N-二异丙基(146mg，1.12mmol)。反应液慢慢升温到常温，搅拌反应3小时。然后加水稀释反应液，再用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和氯化钠溶液冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩并在真空干燥。
20、，硅胶柱纯化得到目标产品(300mg，46.4)。说 明 书CN 102838539 A6/7页100047 对得到的目标产品Ia进行了氢核磁共振1H-NMR(400MHz，DMSO)和质谱测试，结果如下：0048 1H-NMR谱图中吸收峰：9.80(s，1H)，9.67(s，1H)，9.04(s，1H)，8.67(dd，1H)，8.66(dd，1H)，8.49(s，1H)，7.90-7.86(m，2H)，7.68-7.58(m，4H)，7.41-7.36(m，4H)，7.28-7.21(m，2H)，5.29(s，2H)，4.35-4.30(m，2H)，1.51-1.48(t，3H)。0049。
21、 m/s：MH+：577.2。计算得出产品具有分子式C32H25ClN6O3，精确分子质量为576.17。0050 药效试验0051 一、化合物酶活性测试：0052 1、试验方法0053 化合物的半抑制浓度IC50(把酶活性抑制至50时所需的化合物的浓度)是以固定的酶混合特定底物及不同浓度的待测化合物来测定的。所用的测定方法是卡尺移位分析(Caliper Mobility Shift Assay)，所测定的激酶为EGFR和HER2，所应用的标准参照化合物为星形孢菌素(staurosporine)。0054 2、试验结果0055 表1总结了化合物酶活性抑制实验结果。结果显示目标化合物Ia和Ib对。
22、EGFR激酶具有非常强的抑制作用，同时，结果显示目标化合物Ia对HER2激酶也具有很强的抑制作用。0056 表1化合物酶活性抑制实验结果0057 0058 二、肿瘤细胞抑制试验：0059 1、试验方法0060 (1)、化合物：体外研究中先将测试化合物溶于100DMSO中，再稀释至所需浓度，DMSO的终浓度为0.1。将0.1(v/v)的DMSO加入培养基作为溶剂对照，共9个浓度梯度，重复测试二次。0061 (2)、肿瘤细胞系：所测肿瘤细胞系在含10胎牛血清的RPMI10培养基中，于5CO2，37孵箱中培养。所测肿瘤细胞系为：BT474、MDA-MB-231、SK-Br-3、A431、H292、H1975以及HCC827。0062 (3)、MTS方法：细胞接种于96孔板中，每孔3000个细胞，并在5CO2，37增湿培养箱中孵育过夜。第二天将测试化合物加入孔内后，再孵育72小时。使用MTS检测细胞的活性。计算IC50(与DMSO对照组相比使细胞生长受到50抑制所需的药物浓度，使用GraphPad Prism软件的非线性回归分析进行计算)。0063 2、试验结果说 明 书CN 102838539 A10。