无细胞基质移植物的制备及应用 技术领域本发明涉及生物医学领域，具体地说是涉及一种分离自天然物质的无细胞基质移植物，成分为胶原和弹性纤维，无细胞成分，无抗原性。这种移植物是极有用的支架材料，能够促进肌细胞和上皮/内皮细胞等再生，利于肌肉等组织器官功能恢复。这种无细胞基质移植物可以分离自体，也可分离同种异体，或异体组织器官。
背景技术膀胱重建在治疗排尿功能紊乱疾病中有重要作用，低容量膀胱，高膀胱内压，或二者兼具是其适应症。理想的材料应该具有组织相容性和可靠的机械性质，抵抗膀胱腔外感染源，抵抗或耐受膀胱腔内感源染，易于外科移植。材料应该能够维持肾功能，提供合适的低压储尿功能，允许随意的完全的尿排空功能。为达此目的，自体扩大手术方法，各种各样合成的或天然材料均曾被用于研究。
合成材料不理想，因为异物反应可引起结石形成，皱缩，感染，排斥反应，漏尿和移植物移位。所以，合成材料最初作为临时移植物以利膀胱再生。大多数研究证实移行上皮可以在移植物内表面再生，但是没有功能性逼尿肌再生。用于膀胱重建的天然材料大都随时间延长而皱缩。
应用自体小肠或大肠进行自体扩大的肠-膀胱成形术已有获得较好改善尿动力情况的报告。因为许多综合征，包括酸中毒、破裂、粘膜增生、慢性细菌感染、结石形成、还有潜在骨质疏松症和恶变倾向，促使人们继续寻找其他合适的材料。胃膀胱成形术解决了部分上述问题，但是消化性溃疡、穿孔、血尿/排尿困难综合征、代谢性碱中毒抵消了其相对于小肠替代的潜在优越性。胃肠移植物总体来说能够增加膀胱容量和顺应性，这样可以保护上尿路和肾脏功能。不幸的是，他们不能支持正常排尿功能，需要经常间断置管排尿或其他手段完成膀胱排空功能。
发明内容为了克服以上材料功能上的不足之处，作者曾经进行了用天然的生物可降解材料作为支架促进宿主膀胱壁成分生长的尝试，获得了令人鼓舞的试验结果。这种方法再生的膀胱壁组织显示了一种提供功能性膀胱扩大术的潜在方法，即不牺牲排尿能力的膀胱扩大手术。
本项发明提供了这样一种材料，是分离自肌性组织器官(如膀胱、心脏、输尿管、尿道等)的基质移植物，有完整的胶原和弹性纤维框架构成，没有细胞成分，抗渗漏，肌肉细胞可以在移植物内生长，上皮或内皮细胞可在其表面生长。
本项发明提供了这种基质移植物制备和应用方法：
一、基质移植物制备方法提供了一种用机械的，化学的和酶学方法制备无细胞基质成分的方法。这种方法去除了细胞和细胞成分，仅保留胶原纤维和弹性纤维。例如，膀胱无细胞基质移植物这样准备：
(a)切取膀胱，制备膀胱壁；
(b)用化学试剂和酶初步去除膀胱壁中细胞内成分，制备出基质中间产物；然后
(c)溶解去除上述初步制备基质中间产物中的细胞膜和细胞内脂质成分，制备出基本上由胶原纤维和弹性纤维构成地膀胱无细胞基质材料。
二、基质移植物应用方法此项发明提供了一种促进损伤或病变的肌肉功能性再生的方法。这种方法中，损伤或病变组织去除后由器官特异性无细胞基质替代。周围组织中的前体细胞、肌肉细胞、上皮/内皮细胞等长入支架材料中，这样肌肉等组织得以再生，器官功能得以恢复。
一个较好的具体实例是，恢复部分切除膀胱的功能，方法如下：
(a)去除膀胱损伤部分；然后
(b)用膀胱无细胞基质移植物替代部分切除膀胱促进膀胱再生，恢复膀胱功能。
还有另一方面，此项发明提供了一种促进损伤和病变组织生长和愈合的方法，即用无细胞基质移植物替代损伤或病变组织，无细胞基质移植物由胶原和弹性纤维构成，来自器官特异性组织。
实施例1
例如，兔膀胱无细胞基质移植物这样准备：
(a)切取供体兔膀胱，制备膀胱壁：
(b)用化学试剂和酶初步去除膀胱壁中细胞内成分，制备出基质中间产物；然后
(c)溶解去除上述初步制备基质中间产物中的细胞膜和细胞内脂质成分，制备出基本上由胶原纤维和弹性纤维构成的兔膀胱无细胞基质材料。
兔膀胱无细胞基质材料制备流程如图1所示。
兔膀胱制备膀胱无细胞基质移植物(BAMG)由胶原纤维和弹性纤维构成，无细胞成分如图2电镜图片(10,000×)所示。
实施例2
用兔膀胱制备膀胱无细胞基质移植物(BAMG)，恢复部分切除膀胱的功能，方法如下：
(a)去除兔膀胱损伤部分；然后
(b)用兔膀胱无细胞基质移植物替代部分切除膀胱促进膀胱再生，恢复膀胱功能。
手术后12周HE染色(×100)兔宿主(左)和移植物(右)的膀胱壁三层结构基本相同，如图3所示。
【附图说明】
图1显示由天然兔膀胱制备膀胱无细胞基质移植物(BAMG)的工作流程。
图2显示兔膀胱制备的膀胱无细胞基质移植物(BAMG)电镜图片(10,000×)。
图3手术后12周HE染色兔宿主(左)和移植物(右)的膀胱壁三层结构。(100×)。