一种抗骨质疏松的中药提取物及其制法 技术领域
本发明涉及医药技术领域，系以菟丝子、五味子、蛇床子为原料制备的中药提取物，即采用诸药合提或单味药提取后混合的工艺方法制备，以及将其用于制备防治骨质疏松的药物或食品的用途。
背景技术
骨质疏松症是老年人和绝经后妇女的常见病和多发病，目前临床上有雌激素、钙制剂和双磷酸盐类等药物可供选择，但因为副作用严重，远期疗效欠佳，很大程度上制约了其广泛应用。
菟丝子、五味子、蛇床子均为常用中药，收载于多版《中华人民共和国药典》。菟丝子主要含槲皮素、紫云英苷等黄酮类成分，具滋补肝肾、固精缩尿，安胎，明目、止泻的作用。五味子主要含有五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素等木脂素类成分，具收敛固涩、益气生津、补肾宁心的作用。蛇床子主要含蛇床子素、香柑内酯、欧前胡素等香豆素类成分，具温肾壮阳、燥湿、祛风、杀虫作用。《备急千金要方》收载仅以此3味中药等份用于治疗阳痿，或仅以菟丝子2份，五味子2份，蛇床子1份用于治疗五劳七伤虚羸无力。《本草纲目》收载亦仅以此3味中药等份用于治疗阳痿。并且，《备急千金要方》和《本草纲目》中均将原料粉碎混合制成简易水丸，工艺粗陋落后，应用范围非常有限。现代亦未见以此3味药组方配伍用于临床的报道，更未见以此三味药用作抗骨质疏松药物的报道。
发明内容
本发明以菟丝子、五味子、蛇床子为原料制备提取物用于制备防治骨质疏松药物。其提取物可采用三味药合提或单味药单提后混合的方法制备，其可以与药学上可接受的辅料制备成任何常用药物剂型。经动物实验证明其对骨质疏松症具有显著的防治作用。本发明提取物可采用以下两种方法制备：
方法一、合提法：
(1)配方和配比：菟丝子1～5份，五味子1～5份，蛇床子1～5份；
(2)制备提取液：分别按比例称取各原料药粗粉，混合，将上述原料粗粉浸泡于适量提取溶剂中，提取溶剂为0～95％乙醇或甲醇水溶液，按常规渗漉至黄酮类、木脂素类和香豆素类成分检定反应呈阴性为止，收集渗漉液，得提取液。本步骤也可采用5～10倍提取溶剂回流提取一到多次，得提取液。
本步骤所用提取溶剂优选30～95％乙醇或甲醇，特别优选95％乙醇。回流提取时优选8倍提取溶剂，回流3次，每次2小时。
(3)浓缩干燥
将上述提取液减压回收溶剂至无醇味，过滤得滤液。将滤液干燥后粉碎，即得本发明粉末。
(4)压片
若将所得提取物粉末与片剂常用辅料混合、压片，即得片剂，也可按常规制成丸剂、膏剂、合剂等不同剂型。
方法二、单提后混合：
(1)配方和配比：菟丝子1～5份，五味子1～5份，蛇床子1～5份；
(2)制备提取液：分别按比例称取各原料药粗粉，分别将上述各原料粗粉浸泡于适量提取溶剂中，提取溶剂为0～95％乙醇或甲醇水溶液，分别按常规渗漉，菟丝子、五味子、蛇床子分别渗漉至黄酮类、木脂素类、香豆素类成分检定反应呈阴性为止，收集各渗漉液，得各单味药提取液；本步骤也可分别采用5～10倍提取溶剂回流提取一到多次，得各单味药提取液。
本步骤提取溶剂优选30～95％乙醇或甲醇。特别优选：菟丝子提取溶剂为95％乙醇；五味子提取溶剂为90％乙醇；蛇床子提取溶剂为95％乙醇。
(3)浓缩干燥：
分别将上述菟丝子、五味子、蛇床子各单味药提取液减压回收至无醇味，过滤得滤液，滤液分别干燥后粉碎得粉末A、B、C。
(4)混合
将所得粉末A、B、C混合，即得本发明提取物；
(5)压片
将所得提取物粉末与片剂常用辅料混合、压片，可得片剂，也可按常规制成丸剂、膏剂、合剂等不同剂型。
本发明提取物经动物实验证明具有显著的防治骨质疏松的作用，故可用于制备防治骨质疏松的药物或食品。
具体实施方式
现结合实施例对本发明作详细描述。
实施例1合提法制备本发明提取物
(1)制备提取液
取菟丝子粗粉1kg、五味子粗粉1kg、蛇床子粗粉1kg，浸泡于3000ml95％乙醇中，放置过夜，按常规渗漉，控制渗漉速度3～5ml/分钟，渗漉过程中随时添加溶剂，渗漉至黄酮类、木脂素类、香豆素类成分检定反应呈阴性为止，收集渗漉液，即为提取液。
(2)制备提取物：将上述提取液减压回收溶剂至无醇味，过滤除去悬浮物和不溶性杂质，再将滤液干燥后粉碎，即得提取物粉末165.0g，TLC检定含黄酮类、木脂素及香豆素类成分，以总香豆素含量为指标，用HPLC法测定总香豆素含量23.55％。
(3)制备片剂：
配方及配比：
提取物粉末 100g
淀粉 40g
乳糖 30g
微晶纤维素 30g
7％淀粉浆 适量
硬脂酸镁 1％
按上述配比将提取物粉末、淀粉、乳糖、微晶纤维素分别过80目筛，混匀，再过40目筛3次，将上述混合粉用7％淀粉浆制软材，过24目筛粒，50℃干燥2小时，干燥颗粒过30目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，得片剂1000片。
实施例2合提法制备本发明提取物
提取溶剂选用水，其余同实施例1，得提取物粉末180.40g，TLC检定含黄酮类、木脂素、香豆素类成分，HPLC法测定总香豆素含量2.20％。
已有研究表明香豆素类成分具有明确的抗骨质疏松作用，实施例2与实施例1比较，尽管提取物粉末得率稍高，但其中香豆素类成分含量远低于实施例1，质量较差，药理实验结果亦充分证明了这一点，因此实施例1为最佳制备方法。
实施例3合提法制备本发明提取物
用8倍量95％乙醇回流提取3次，每次2小时，其余同实施例1，得提取物粉末216.0g。TLC检定含黄酮类、木脂素及香豆素类成分，HPLC法测定总香豆素含量19.54％。
实施例4单提法制备本发明提取物
分别称取菟丝子粗粉1kg、五味子粗粉1kg、蛇床子粗粉1kg，各浸泡于1000ml95％乙醇中，分别按常规渗漉至黄酮类、木脂素类、香豆素类成分检定反应呈阴性为止，收集渗漉液，得各单味药提取液；分别将各单味药提取液减压回收至无醇味，过滤得滤液。将菟丝子滤液干燥后粉碎，得粉末A123.33g；将五味子滤液干燥后粉碎，得粉末B147.15g。将蛇床子滤液干燥后粉碎，得粉末C92.40g。将A、B、C混合，即得本发明提取物粉末，TLC检定含黄酮类、木脂素及香豆素类成分，HPLC法测定总香豆素含量12.68％。
药理实验
维甲酸可造成骨质疏松症，羟乙基膦酸钠是目前临床上用于防治骨质疏松的药物。通过药理实验，观察本发明中药提取物防治骨质疏松作用。
1实验材料
1.1动物
SD大鼠第二军医大学实验动物中心提供
1.2药物
羟乙基膦酸钠第二军医大学药学院新药评价中心提供用0.5％CMC配成2.0％混悬液
维甲酸上海第六制药厂批号200106012用0.5％CMC配成1.5％混悬液
提取物1由实施例1制备用0.5％CMC配成相当于原药材2g/ml混悬液
提取物2由实施例2制备用0.5％CMC配成相当于原药材2g/ml混悬液
CMC上海化学试剂公司
1.3仪器
QCT-骨密度分析系统美国LACA公司
2方法与结果
2.1对实验性骨质疏松症的预防作用
大鼠50只，随机分为5组，每组10只，即正常对照组(溶剂组)、模型对照组、阳性对照组(羟乙基膦酸钠组)，提取物1组、提取物2组，除正常对照组外，其余各组大鼠均灌胃给予维甲酸0.5ml/kg，每天1次，连续14天，给予维甲酸的同时，各用药组按表1地给药剂量灌胃给药，每天1次，连续28天，正常对照组及模型组给予0.5％CMC，服用量均为每公斤体重0.5ml，其间每周称体重1次，并据此调整给药用量。第29天断头处死，取大鼠双侧股骨，剥净肉及其它组织，其中一侧股骨在双能X线骨密度仪上作大鼠股骨扫描，测出骨密度(g/cm2)，然后于120℃烘干一小时，再置于mnffer炉内200℃、400℃、600℃、800℃各灰化2小时，灰化结束冷却后，称灰重(Wash·g)，用6N HCL提取钙、磷后测定骨灰钙、骨灰磷含量。
另一侧股骨制作脱钙石蜡切片，显微镜下观察骨结构。(详见徐叔云主编《药理实验方法学》第三版，人民卫生出版社，1561～1568页)结果见表1。由表1可见，本发明提取物1组、提取物2组大鼠的股骨股密度、骨灰重、骨钙含量及骨磷含量均明显高于模型组，接近正常对照组和阳性对照组，表明本发明提取物对骨质疏松症具有显著的预防作用。
从病理切片可见，模型组的骨皮质均有疏松、变薄及骨小梁疏松、变细乃至消失的病理改变。各给药组及阳性对照组仅有个别动物的骨皮质变薄及骨小梁变细的改变，并且例数少、病变轻，亦表明本发明提取物对骨质疏松症具有显著的预防作用。
2、2对实验性骨质疏松症的治疗作用
大鼠50只，随机分为5组，每组10只，即正常对照组(溶剂组)、模型对照组、阳性对照组(羟乙基膦酸钠组)，提取物1组、提取物2组，除正常对照组外，各组大鼠均灌胃维甲酸0.5ml/kg，每天1次，连续14天，第15天各用药组按表2中给药剂量灌胃给药，每天1次，连续28天，正常对照组及模型组给予0.5％CMC，服用量均为0.5ml/kg，其间每周称体重1次，并据此调整给药用量。观察指标同实验2.1，结果见表2。
由表2可见，提取物1组、提取物2组大鼠股骨骨密度、骨灰重、骨钙含量及骨磷含量均明显高于模型组，与正常对照组比较亦处于同一水平，表明本发明提取物对骨质疏松症具有显著的治疗作用
从病理切片可见，模型组的骨皮质均有疏松、变薄及骨小梁疏松、变细和消失的病理改变。各给药组及阳性对照组仅有个别动物的骨皮质变薄及骨小梁变细的改变，并且病变较轻，亦表明本发明提取物对骨质疏松症具有显著的治疗作用。
本发明提取物的制备方法简单，成本低廉，防治骨质疏松症效果显著，无毒副作用，因而可用于制备防治骨质疏松症的药物或食品。
表1本发明中药提取物对实验性骨质疏松症的预防作用
组别 剂量 股骨骨密度 股骨骨灰重 股骨骨灰钙g/100g骨 股骨骨灰磷
g/cm2 wash(g) 灰 g/100g骨灰
正常对照组 0.5％CMC 0.224±0.009 0.250±0.006 31.03±0.72 18.06±0.45
模型对照组 0.5％CMC 0.208±0.006* 0.214±0.003* 29.08±0.50* 17.23±0.40*
羟乙基膦 50mg/kg 0.219±0.015** 0.264±0.005** 30.90±0.42** 18.27±0.410**
酸钠组
提取物1组 2.0g/kg 0.225±0.008** 0.240±0.009** 30.09±0.66** 17.84±0.32**
提取物2组 2.0g/kg 0.221±0.006** 0.251±0.005** 31.50±0.50** 18.09±0.17**
注：①x±sD②与正常对照组比较*P＜0.05③与模型对照组比较**P＜0.05
表2本发明中药提取物对实验性骨质疏松症的治疗作用
组别 剂量 股骨骨密度 股骨骨灰重 股骨骨灰Ca 股骨骨灰P
g/cm2 wash(g) Cag/100g骨灰 Pg/100g骨灰
正常对照组 0.5％CMC 0.210±0.007 0.248±0.007 31.89±0.90 17.96±0.56
模型对照组 0.5％CMC 0.189±0.009* 0.210±0.004* 30.23±0.33* 17.23±0.33*
羟乙基膦 50mg/kg 0.212±0.013** 0.242±0.007** 30.90±0.42** 17.67±0.30**
酸钠组
提取物1组 2.0g/kg 0.214±0.003** 0.245±0.010** 31.30±0.50** 17.76±0.20**
提取物2组 2.0g/kg 0.217±0.005** 0.251±0.004** 31.49±0.40** 17.88±0.42**
注：①x±SD②与正常对照组比较*P＜0.05③与模型对照组比较**P＜0.05