《四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法.pdf（4页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 103150489 A(43)申请公布日 2013.06.12CN103150489A*CN103150489A*(21)申请号 201210454991.1(22)申请日 2012.11.14G06F 19/16(2011.01)(71)申请人无锡力盟生物科技有限公司地址 214000 江苏省无锡市锡山区锡山经济开发区芙蓉中三路99号(72)发明人石铁流 方钊(74)专利代理机构无锡华源专利事务所(普通合伙) 32228代理人冯智文(54) 发明名称四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法(57) 摘要本发明涉及一种四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法，包括如下步骤：（1）挑选。
2、差异表达基因，（2）作用靶点预测分析，（3）通路富集分析，（4）选择步骤（3）所得富集通路中与四物汤治疗痛经作用相关的通路，并筛选出所述通路下富集的靶点，即得四物汤治疗痛经作用靶点。本发明提供了一种快速、精确的四物汤治疗辐射作用靶点的筛选方法，通过本发明可成功筛选出四物汤治疗痛经的作用靶点（靶向蛋白），有助于从分子层面解释其治疗痛经的作用机理，为治疗痛经的天然药物的开发以及其他中药确切作用靶点的筛选提供了新思路。(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书2页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书2页(10)申请公布号 CN 103150489 ACN 。
3、103150489 A1/1页21.一种四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法，其特征在于包括如下步骤：（1）挑选差异表达基因：从基因表达谱数据库GEO中下载编号为GSE23610的基因芯片数据，得到经高浓度四物汤处理的乳腺癌细胞MCF-7和的经二甲基亚砜处理的乳腺癌细胞MCF-7的表达谱数据，以前者作为试验组，后者作为对照组，挑选出二者差异表达基因；（2）作用靶点预测分析：利用中药数据库TCMID搜集得到四物汤作用靶点，并将其与步骤（1）所得差异表达基因进行交集，得到四物汤预测作用靶点；（3）通路富集分析：对步骤（2）所得预测作用靶点进行通路富集分析； （4）选择步骤（3）所得富集通路中与四物汤治。
4、疗痛经作用相关的通路，并筛选出所述通路下富集的靶点，即得四物汤抗辐射作用靶点。2.根据权利要求1所述四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法，其特征在于：步骤（1）中，设定P值小于0.05，倍数变化值大于1.5。3.根据权利要求1所述四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法，其特征在于：步骤（3）所述通路富集分析工具为网络分析软件Cytoscape的插件ClueGO，设定P 值小于0.05。权 利 要 求 书CN 103150489 A1/2页3四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法技术领域0001 本发明属于生物信息技术领域，具体涉及利用基因芯片技术和中药数据库来筛选四物汤治疗痛经作用靶点的方法。背景技术0002。
5、 四物汤首见于宋代太平惠民和剂局方，由熟地、当归、白芍、川芎配伍而成。四物汤在临床广泛应用，历来被视为补血调经之基本方，用以治月经不调，痛经等症，症见眩晕、耳聋、惊惕、唇爪无华。方中当归补血养肝，和血调经；熟地滋养阴血；佐以白芍和营养肝，使以川芎，活血行滞。四药合用，则补中有通，补而不滞。0003 但是，四物汤作为调经良方，其作用靶点和作用机制尚不清楚。因此，寻找一种科学、精确的方法用以筛选四物汤治疗痛经的作用靶点，从而探寻其分子层面的作用机制十分必要。发明内容0004 针对现有技术存在的上述问题，本申请人经过研究，提供一种快速、精确的四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法。通过本发明方可成功筛选出。
6、四物汤治疗痛经的作用靶点（靶向蛋白），有助于从分子层面解释其治疗痛经的作用机理。0005 本发明的技术方案如下：一种四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法，包括如下步骤：（1）挑选差异表达基因：从基因表达谱数据库GEO中下载编号为GSE23610的基因芯片数据，得到经高浓度四物汤处理的乳腺癌细胞MCF-7和的经二甲基亚砜处理的乳腺癌细胞MCF-7的表达谱数据，以前者作为试验组，后者作为对照组，挑选出二者差异表达基因；（2）作用靶点预测分析：利用中药数据库TCMID搜集得到四物汤作用靶点，并将其与步骤（1）所得差异表达基因进行交集，得到四物汤预测作用靶点；（3）通路富集分析：对步骤（2）所得预测作用靶。
7、点进行通路富集分析； （4）选择步骤（3）所得富集通路中与四物汤治疗痛经作用相关的通路，并筛选出所述通路下富集的靶点，即得四物汤抗辐射作用靶点。 其进一步的技术方案为：步骤（1）中，设定P值（P- value）小于0.05，倍数变化值(Fold change大于1.5。0006 步骤（3）所述通路富集分析工具为网络分析软件Cytoscape的插件ClueGO，设定P 值（P-value）小于0.05。0007 本发明有益的技术效果在于：本发明将基因芯片技术和中药靶点数据库创造性地结合起来，提供了一种快速、精确说 明 书CN 103150489 A2/2页4的四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法；运。
8、用本发明方法成功地筛选出两个四物汤治疗痛经作用的靶点（靶向蛋白），即原癌基因蛋白fos，转录因子AP-1，有助于从分子层面解释其治疗痛经的作用机理，为治疗痛经的天然药物的开发以及其他中药确切作用靶点的筛选提供了新思路。具体实施方式0008 下面结合实施例，说明本发明具体的实施方式。0009 一种四物汤治疗痛经作用靶点的筛选方法，具体包括如下步骤：1.挑选差异表达基因从基因表达谱数据库GEO中下载编号为GSE23610的基因芯片数据；得到经高浓度四物汤（质量浓度为2.56mg/ml）处理的乳腺癌细胞MCF-7和的经二甲基亚砜（质量分数为0.001%）处理的乳腺癌细胞MCF-7的表达谱数据，以前者。
9、作为试验组，后者作为对照组，挑选出二者差异表达基因；在该步骤中，设定P值小于0.05，倍数变化值大于1.5，共计得到2405个差异表达基因。0010 2.四物汤作用靶点预测分析从中药数据库TCMID (http:/www.megabionet.org/tcmid/) 中，搜集得到102个四物汤的靶点数据；由于mRNA水平的上下调与其编码蛋白质的增加与减少并不完全正相关，因此我们利用搜集到的上述靶点的标识（symbol）与步骤1所得2405个差异表达基因进行交集，共计得到20个四物汤预测作用靶点。0011 3.通路富集分析 在步骤3所得20个四物汤预测作用靶点的基础上，利用网络分析软件Cytos。
10、cape 2.6的插件ClueGO 做通路富集分析；在该步骤中，设定P值小于0.05，共计得到40条通路。0012 4.选择步骤3所得富集通路中与四物汤治疗痛经作用相关的通路，并筛选出所述通路下富集的靶点，即得四物汤抗辐射作用靶点。0013 选择“转录因子DREAM介导的痛觉抑制通路”作为与四物汤治疗痛经作用相关的通路，该通路已被证实可通过调节前强啡肽原的表达来抑制痛觉（Cheng HY, Pitcher GM, Laviolette SR, Whishaw IQ, Tong KI, Kockeritz LK, Wada T, Joza NA, Crackower M, Goncalves J。
11、, Sarosi I, Woodgett JR, Oliveira-dos-Santos AJ, Ikura M, van der Kooy D, Salter MW, Penninger JM, DREAM is a critical transcriptional repressor for pain modulationJ.Cell,2002,108(1):31-43.）；筛选该通路下富集的四物汤预测作用靶点，共得到两个靶点（靶向蛋白），即原癌基因蛋白fos，转录因子AP-1，相关研究已证实，上述两个靶点与痛觉的传递密切相关（Naranjo JR, Mellstr?m B, Achava。
12、l M, Sassone-Corsi P, Molecular pathways of pain: Fos/Jun-mediated activation of a noncanonical AP-1 site in the prodynorphin geneJ. Neuron，1991,6（4）：607-617.），证明四物汤通过靶向这两个蛋白产生镇痛效果，从而达到治疗痛经的目的。0014 综上所述，本发明方法成功筛选出四物汤治疗痛经的分子作用靶点。0015 以上所述的仅是本发明的优选实施方式，本发明不限于以上实施例。可以理解，本领域技术人员在不脱离本发明的基本构思的前提下直接导出或联想到的其他改进和变化，均应认为包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书CN 103150489 A。