新用途 本发明涉及一种新用途，具体地是一种治疗和/或预防以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病的方法的用途。
哺乳动物肽神经激肽B(NKB)属于速激肽(TK)肽家族，该家族还包含P物质(SP)和神经激肽A(NKA)。药理学和分子生物学研究表明TK受体存在三种亚型(NK1、NK2和NK3)，NKB优先与NK3受体结合，尽管这种以及其他速激肽识别各种NK受体的能力几乎差异不大(Maggi等，1993，J.Auton.Pharmacol.，13，23-93)。
选择性肽类NK3受体拮抗剂已众所周知(Drapeau，1990 Regul.Pept.，31，125-135)，肽类NK3受体激动剂的研究表明，NKB通过激活NK3受体，在调节气管、皮肤、脊索和nigro-striatal通路的神经传递中起着关键作用(Myers及Undem，1993，J.Phisiol.，470，665-679；Counture等，1993，Regul.Peptides，46，426-429；Mccarson及Krause，1994，J.Neurosci.，14(2)，712-720；Arenas等.1991，J.Neurosci.，11，2332-8)。
Rome诊断标准(见Gut，1999；45(Suppl.II)1143-1147)确定功能性肠紊乱包括以下明显不同的类别：过敏性肠综合征(IBS)、功能性腹胀、功能性便秘和功能性腹泻。一般认为，IBS包括并发于诸如以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征、以便秘为主要特征的过敏性肠综合征及交替过敏性肠综合征(alternater irritable bowel syndrome)等疾病的不适和/或疼痛(Gut，1999；45(Suppl.II)1169-1177)。此外，Rome诊断标准确定功能性腹痛与功能性肠紊乱不同，功能性腹痛包括功能性腹痛综合征及未指明的功能性腹痛。
Gastroenterology 1999，116，1124-1131报道了大鼠中通过电生理学和行为学研究，揭示了NK3受体在结肠直肠膨胀反应中的作用。国际专利申请(公开号为98/18762和00/21931的)公开了所述的NK3受体拮抗剂，可用于治疗与NK3受体相关的疾病，包括过敏性肠综合征(IBS)以及许多其他的疾病。
公开号为95/32948的国际专利申请公开了选择性NK3拮抗剂。据公开，这些化合物对以下疾病的治疗具有活性：肺病(哮喘、慢性堵塞性肺病-COPD-、气道高反应性、咳嗽)、皮肤病及搔痒(例如，特应性皮炎以及皮肤风块及红肿)、神经炎及CNS疾病(帕金森病、运动失调、焦虑症以及精神病)；也可用于治疗：惊厥疾病(例如癫痫)、肾病、尿失禁、眼炎、炎性疼痛、饮食失调(食物吸收抑制)、过敏性鼻炎、神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)、牛皮癣、亨廷顿氏病及忧郁症。
WO95/32948公开的一个具体化合物为其中实施例85的化合物(S)-N-(α-乙基苄基)-3-羟基-2-苯基喹啉-4-家甲酰胺(化合物(I))。
令人吃惊地发现化合物(1)具有治疗以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病的活性。具体地包括功能性肠紊乱和功能性腹痛。功能性肠紊乱包括特定的过敏性肠综合征，尤其是以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征、便秘为主要特征的过敏性肠综合征和交替过敏性肠综合征。已经表明化合物(1)尤其适于治疗以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征。
因此，本发明提供了一种治疗和/或预防以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征地疾病的方法，该方法包括使用有效量的无毒可药用NK3受体拮抗剂，例如化合物(I)，或其可药用衍生物，其中以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病选自过敏性肠综合征、功能性腹胀、功能性便秘、功能性腹泻，其它肠疾病以及功能性腹痛。
适当地，本发明提供了一种治疗和/或预防以肠紊乱为特征的疾病的方法。
适当地，本发明提供了一种治疗和/或预防以内脏疼痛为特征的疾病的方法。
以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的合适的疾病选自过敏性肠综合征、功能性腹胀、功能性便秘、功能性腹泻和功能性腹痛。
具体的过敏性肠综合征包括以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征、以便秘为主要特征的过敏性肠综合征和交替性过敏性肠综合征。
一种合适的过敏性肠综合征为以便秘为主要特征的过敏性肠综合征。
一种合适的过敏性肠综合征为交替过敏性肠综合征。
优选的过敏性肠综合征为以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征。
适当地，功能性腹痛包括功能性腹痛综合征和未指明的功能性腹痛。优选地，功能性腹痛包括功能性腹痛综合征。
合适的NK3拮抗剂，包括在公开号为95/32948的国际专利申请明确以及一般地公开的化合物，在此处引入其内容作为参考，一如专利WO95/32948在此完全公开。
优选的NK3拮抗剂为式(I)化合物或其可药用溶剂合物，或其可药用盐，
其中：
Ar为任选取代的苯基、萘基或C5-7环链二烯基，或任选取代的单或稠合杂环基团，该杂环具有芳香特性，包含5～12环原子及在环中或各环中包含多达4个选自S、O、N的杂原子；
R为线性或支链C1-8烷基、C3-7环烷基、C4-7环烷基烷基、任选取代的苯基或苯基C1-6烷基、任选取代的包含多达4个选自O、N杂原子的五元杂芳环、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基烷基、二C1-6烷基氨基烷基、C1-6酰基胺基烷基、C1-6烷氧基烷基、C1-6烷基羰基、羧基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、氨基羰基、C1-6烷基氨基羰基、二C1-6烷基氨基羰基、卤代C1-6烷基；或为基团-(CH2)p-，当环化到Ar时，p为2或3；
R1及R2可相同或不同，独立地为氢或C1-6线性或支链烷基，或一起形成-(CH2)n-基团，其中n表示3、4或5；或R1与R一起形成基团-(CH2)q-，其中q为2、3、4或5；
R3及R4可相同或不同，独立地为氢、C1-6线性或支链烷基、C1-6链烯基、芳基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、硝基、氰基、羧基、酰胺基、磺胺基、C1-6烷氧羰基、三氟甲基、酰氧基、苯二甲酰亚氨基、氨基、单及二C1-6烷基氨基、-O(CH2)r-NT2，其中r为2、3或4及T为氢或C1-6烷基或与临近的氮形成基团
或
其中V及V1独立地为氢或氧，u为0、1或2；-O(CH2)s-OW，其中s为2、3或4，并且W为氢或C1-6烷基；羟基烷基、氨基烷基、单或二烷基氨基烷基、酰基胺基、烷基磺酰氨基、氨基酰氨基、单或二烷基氨基酰氨基；在喹啉母核存在多达4个R3取代基；或R4为基团-(CH2)t-，当与R5环化为芳基时，其中t为1、2或3；
R5为支链或线性C1-6烷基、C3-7环烷基、C4-7环烷基烷基、任选取代的芳基，或任选取代的单个或稠合杂环基团，该杂环具有芳香特征，包含5～12环原子及在环或各环中包含多达4个选自S、O、N的杂原子；
X为O、S或N-C≡N。
合适的哺乳动物为人类。
特别地，本发明涉及一种治疗和/或预防人类或非人类哺乳动物中以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病的方法，该方法包括使用有效量无毒的可药用式(I)化合物，或其可药用衍生物。
合适地，本发明涉及治疗和/或预防以肠功能紊乱疾病，特别地以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征。
优选地，本发明涉及治疗和/或预防腹泻。
Ar的实例为苯基，其任选被羟基、卤素、C1-6烷氧基或C1-6烷基取代。卤素的实例为氯及氟，C1-6烷氧基的实例为甲氧基及C1-6烷基的实例为甲基。
Ar为杂环基团的实例为噻吩基及吡啶基。
Ar为C5-7环链二烯基的实例为环己二烯基。
R的实例如下：
C1-8烷基：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、庚基；
苯基C1-6烷基：苄基；
羟基C1-6烷基：-CH2OH、-CH2CH2OH、CH(Me)OH；
氨基C1-6烷基：-CH2NH2；
二C1-6烷基氨基烷基：-CH2NMe2；
C1-6烷氧基烷基：CH2OMe；
C1-6烷基羰基：COMe；
C1-6烷氧羰基：COOMe；
C1-6烷氧羰基C1-6烷基：CH2COOMe；
C1-6烷基氨基羰基：CONHMe；
二C1-6烷基氨基羰基：CONMe2、CO(1-吡咯烷基)；
卤素C1-6烷基：三氟甲基；
-(CH2)p-，此时当与Ar环化时：
R1及R2为C1-6烷基的实例为甲基；R1与R共同形成基团-(CH2)q-的实例为螺环戊烷。
R3及R4的实例为甲基、乙基、正丙基、正丁基、甲氧基、羟基、氨基、氯、氟、溴、乙酰氧基、2-(二甲氨基)乙氧基、2-(邻苯二甲酰亚氨基)乙氧基、氨基乙氧基、2-(1-吡咯烷基)乙氧基、邻苯二甲酰亚氨基、二甲氨基丙氧基、二甲氨基乙酰氨基、乙酰氨基、二甲氨基甲基及苯基。
R5的实例为环己基、苯基，如上述Ar任选被取代；R5为杂环基团的实例为呋喃基、噻吩基、吡咯基(pyrryl)、噻唑基、苯并呋喃基及吡啶基。通式(I)的一组优选化合物为：
Ar为苯基，任选被C1-6烷基或卤素取代；噻吩基或C5-7环二烯基；
R为C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基；
R1及R2各为氢或C1-6烷基；
R3为氢、羟基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷基；
R4为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、氨基、卤素、氨基烷氧基、单或二烷基氨基烷氧基、单或二烷基氨基烷基、邻苯二甲酰亚氨基烷氧基、单或二烷基氨基酰氨基及酰胺基；
R5为苯基、噻吩基、呋喃基、吡咯基及噻唑基。
通式(I)的另一组优选化合物为：
Ar为苯基、2-氯苯基、2-噻吩基或环己二烯基；
R为甲基、乙基、正丙基、-COOMe、-COMe；
R1及R2各为氢或甲基；
R3为氢、甲氧基或羟基；
R4为氢、甲基、乙基、甲氧基、羟基、氨基、氯、溴、二甲氨基乙氧基、2-(邻苯二甲酰亚氨基)乙氧基、氨基乙氧基、2-(1-吡咯烷基)乙氧基、二甲氨基丙氧基、二甲氨基乙酰氨基、乙酰氨基及二甲氨基甲基；
R5为苯基、2-噻吩基、2-呋喃基、2-吡咯基、2-噻唑基及3-噻吩基；
及X为氧。
上述通式(I)范围内的部分优选化合物具有通式(1a)：
其中：
R、R2、R3及R4如通式(I)所定义，Y及Z可相同或不同，各为通式(I)所定义的Ar。
式(Ia)化合物中特别优选的一组化合物为式(Ib)化合物，其中，基团R向下及H向上。
最优选的式(I)化合物为化合物(I)。
式(I)化合物或其衍生物，例如盐或溶剂合物为可药用的或基本上纯净的形式。经可药用形式尤其地是指可药用水平的纯度，不包括常规的药用添加剂，如稀释剂及载体，以及不包含在常规剂量时认为有毒的物质。
基本上纯净的形式通常包含至少50％(不包括常规使用的药用添加剂)，优选75％，更优选90％及更优选95％的(I)化合物或其盐或溶剂合物。
一种优选的可药用形式为晶体，包括其在药用组合物中的这种形式。当为盐及溶剂合物时，附加的离子及溶剂部分必须无毒。
如上所述，合适的可药用衍生物包括可药用盐和/或溶剂合物。
式(I)化合物可药用盐的实例包括与常规药用酸的酸加成盐，例如马来酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、乙酸、富马酸、水杨酸、柠檬酸、乳酸、苯乙醇酸、酒石酸、琥珀酸、苯甲酸、抗坏血酸及甲磺酸。
式(I)化合物的可药用溶剂合物的实例包括水合物。
式(I)化合物可具有至少一个不对称中心，因而可存在不止一种立体异构体。本发明的治疗可包括其所有的异构体形式及其混合物，包括消旋体。
其它的NK3拮抗剂被公开于专利申请WO99/36424、WO00/39114、WO95/28931、WO96/05203、EP776893、WO98/54191、EP673928、WO94/26735及WO97/10229中。上述专利公开在此处引入参考，一如其中各个专利的内容在此单独完全地引入。一种具体的NK3拮抗剂为([[二氯苯基)(三甲氧基苯甲酰基)吗啉基]乙基]螺[苯并(c)噻吩哌啶]氧化物。一种具体的NK3拮抗剂为R113281。一种具体的NK3拮抗剂为N10A。一种具体的NK3拮抗剂为N5A1。一种具体的NK3拮抗剂为SR-142801。一种具体的NK3拮抗剂为SSR-146977。一种具体的NK3拮抗剂为Cam-2425。一种具体的NK3拮抗剂为MDL-105212。
根据所选具体化合物的制备方法可制备出NK3拮抗剂，例如式(I)化合物及化合物(I)可根据WO95/32948或WO99/14196公开的方法制备。其它NK3拮抗剂，例如R113281、N10A、N5A1、SR-142801、SSR-146977、Cam-2425及MDL-105212相应地可根据例如WO99/36424、WO00/39114、WO95/28931、WO96/05203、EP776893、WO98/54191、EP673928、WO94/26735及WO97/10229公开的方法进行制备。
本发明方法中的化合物，例如化合物(I)，可通过与合适的有机或无机酸反应生成可药用酸加成盐。
本发明方法中化合物，例如化合物(I)的溶剂合物，可通过从合适溶剂中结晶或重结晶形成。例如，水合物可通过从水溶液或含水有机溶剂中结晶或重结晶进行制备。
其它NK3拮抗剂，例如R113281、N10A、N5A1、SR-142801、SSR-146977、Cam-2425及MDL-105212可药用衍生物适当地包括WO99/36424、WO00/39114、WO95/28931、WO96/05203、EP776893、WO98/54191、EP673928、WO94/26735及WO97/10229中公开的那些化合物。
本发明方法中的化合物，例如化合物(I)，为NK3受体拮抗剂的活性，在标准的测试中进行评估，实验表明其对以速激肽以过度刺激为特征的临床疾病，特别是此处公开的疾病具有潜在的治疗作用。相关测试包括此处公开的实验。
此处使用的＂以肠紊乱为特征的疾病＂包括以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征，以便秘为主要特征的过敏性肠综合征，交替性过敏性肠综合征，功能性腹胀，功能性便秘及功能性腹泻。
具体地，以肠紊乱为特征的疾病包括以腹泻为主要特征的过敏性肠综合征。
具体地，以肠紊乱为特征的疾病包括以便秘为主要特征的过敏性肠综合征。
具体地，以肠紊乱为特征的疾病包括交替性过敏性肠综合征。
具体地，以肠紊乱为特征的疾病包括其它肠病。
此处使用的＂其它肠病＂包括具有下述症状的疾病，例如腹痛、腹急(urgency)、腹胀、排便不尽及劳损(straining)，尤其是腹急、腹胀、排便不尽及劳损。
本发明还提供了一种治疗和/或预防人类或非人类哺乳动物中以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病的方法，该方法包括使用有效量无毒的可药用NK3受体拮抗剂，例如化合物(I)，或其可药用衍生物。
本发明还提供了一种NK3拮抗剂，如化合物(I)或其可药用衍生物，用于治疗和/或预防以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病。
本发明还提供了一种NK3拮抗剂，如化合物(I)或其可药用衍生物，在制备用于治疗和/或预防以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病的药物中的用途。合适地，其中以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病选自过敏性肠综合征、功能性腹胀、功能性便秘、功能性腹泻、其它肠疾病、功能性腹痛。
本发明进一步提供了一种药物组合物，该组合物包含NK3拮抗剂，例如式(I)化合物或其可药用盐或其可药用溶剂合物，以及可药用载体，用于治疗和/或预防以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病，合适地其中以肠功能紊乱和/或内脏疼痛为特征的疾病选自过敏性肠综合征、功能性腹胀、功能性便秘、功能性腹泻、其它肠疾病、功能性腹痛。
本发明的药物及组合物，可将本发明化合物与合适载体的混合物进行制备。其可按常规方式包含稀释剂、粘合剂、填充剂、崩解剂、矫味剂、着色剂、润滑剂或防腐剂。
这些常规赋形剂可用于例如制备用于治疗疾病的已知药物的组合物。
优选地，本发明药物组合物为单位剂量形式及适用于医疗或兽医领域剂量形式。例如，该制剂可做成附有手写或打印使用说明的包装形式，其用作治疗疾病的药物。
本发明化合物使用的合适剂量范围视具体的化合物及患者的疾病而定。其也尤其地取决于活性与吸收能力、使用频率及给药途径之间的关系。
本发明化合物或组合物可制备成经任何途径给药的制剂，优选地制成单位剂量形式或患者可以单位剂量自己给药的形式。优选地，该组合物适于经口服、直肠、局部、肠胃外给药，静脉内或肌肉给药。可制成有效成份的缓释制剂。
组合物可制成例如，片剂、胶囊、sachets、vials、散剂、颗粒剂、锭剂、可复溶散剂或液体制剂，例如溶液或混悬剂，或栓剂。
例如适合口服的组合物可包含常规的赋形剂，如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；制片润滑剂，例如硬脂酸镁；崩解剂，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮，淀粉乙醇酸钠盐或微晶纤维素；或可药用硬化剂(setting agent)，硫酸月桂醇酯单钠盐。
固体组合物可以常规方法制备，例如混合、填充、压片等。采用反复的混合将有效成份分散于使用了大量填充剂的组合物中。当组合物为片剂、散剂或锭剂时，可使用任何适合制备固体药用组合物的载体，例如硬脂酸镁、淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、谷物淀粉剂及白垩。片剂可根据常规制剂操作中的已知方法进行包衣，特别是采用肠衣。组合物也可制成可吸收胶囊，例如含化合物的凝胶，必要时加入载体或其它赋形剂。
适合口服的液体组合物可制成乳剂、糖浆、或西也剂，或为干制剂，使用用水或其它合适溶媒复溶。这些组合物可包含常规的添加剂，例如助悬剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶、氢化可食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、山梨醇单油酸酯，或阿拉伯胶；含水或非水溶媒，包括食用油，例如杏仁油、精制椰子油、油脂，例如甘油、或丙二醇、或乙醇、甘油、水或生理盐水；防腐剂，例如甲基或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸；以及必要时加入常规的矫味剂及着色剂。
本发明化合物也可不经口腔给药。根据常规制剂方法，组合物可制成例如用于直肠给药的栓剂。其也可制备成注射剂，水溶液或非水溶液、在可药用液体中的混悬剂或乳剂，例如无菌无热原的水或可胃肠外使用的油或液体混合物。该液体可包括细菌抑制剂、抗氧化剂或其它防腐剂，缓冲液或调节达到与血液等张的溶质、增稠剂、助悬剂或其它可药用添加剂。这些制剂可制成单位剂量的安培或可供注射的装置中，或制成多剂量形式，例如可适量取药的瓶装形式，或用于制备注射用的固体或浓缩物制剂。
本发明有效化合物也可通过鼻腔或口腔吸入给药。其可制成包含本发明化合物及合适载体的喷雾制剂，例如任选悬于烃类抛射剂中进行给药。
优选的喷雾制剂包含微粉化的化合物颗粒，以及表面活性剂，溶剂或防止悬浮颗粒沉淀的分散剂。优选地，化合物颗粒大小为2～10微米。
本发明有效化合物其它给药途径包括采用膏剂skin-patch的透皮吸收制剂。优选制剂包含本发明化合物，其分散于与皮肤相粘贴的对压力敏感的粘合剂中，由此，化合物自粘合剂透过皮肤进入患者体内。为使透皮制剂以固定速率吸收，可使用现有技术中公知的压力敏感粘合剂，例如天然橡胶或硅树脂。
如上所述，化合物有效剂量视使用的具体化合物、患者病况及使用频率、给药途径而定。单位剂量一般包含20～1000mg，优选地包含30～500mg，特别是50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg。组合物可每天使用一次或多次，例如每日2、3或4次，70公斤体重的成年人的总日剂量通常为100～3000mg。或者，单位剂量包含2～20mg有效成份并以多个单位进行给药，必要时，按前述每日剂量给药。
具体的NK3拮抗剂的剂量及制剂包括上述专利申请中已公开的剂量及制剂。
根据本发明使用方法，用本发明的化合物进行给药无不可接受的毒理学效果。
本发明化合物作为NK3配体的活性，通过测定其抑制放射标记的NK3配体，[125I]-[Me-Phe7]-NKB或[3H]-Senktide与豚鼠及人NK3受体结合的能力而进行评价(Renzetti等，1991，Neuropeptide，18，104-114；Buell等，1992，FEBS，299(1)，90-95；Chung等，1994，Biochem.Biophys.Res.Commun.，198(3)，967-972)。在平衡条件下，结合分析测定单个化合物降低[125I]-[Me-Phe7]-NKB及[3H]-Senktide与NK3受体特异性结合50％所需的浓度(IC50)。通过2-5个单独实验，每个实验重复两次或三次的结合试验，得到每个受试化合物的平均IC50值。本发明最有效化合物的IC50值为1-1000nM；具体地，在豚鼠皮质膜竞争[3H]-Senktide试验中，实施例22、47、48及85的化合物的替代Kis(nM)分别为5.6、8.8、12.0、4.8(n＝3)。本发明的NK3-拮抗剂的活性，通过测定其抑制senktide诱导豚鼠回肠(Maggietal，1990，Br.J.Pharmacol.，101，996-1000)及兔离体虹膜括约肌的收缩的能力(Hall等.，1991，Eur.J.Pharmacol.，199，9-14)，以及人NK3受体介导的Ca++迁移(Mochizuki等，1994，J.Biol.Chem.，269，9651-9658)的能力进行评价。豚鼠及兔的体外功能性分析为每个化合物提供了的3～8个单独实验的平均KB值。其中KB为在senktide的浓度-反应曲线上，产生2倍右向位移的单个化合物的浓度。人受体功能分析可确定单个化合物降低50％(IC50值)Ca++迁移所需的的浓度，该迁移为激动剂NKB诱导。在所述的分析中，本发明的化合物具有拮抗剂活性。
为避免误解，本说明书引用的所有公开，包括但不限于专利以及专利申请，在此引入作为参考，此处作为参考的专利及专利申请，一如其中的各个公告的内容在此具体明确引入作为参考，一如其被完全列出。
本发明化合物在上述疾病中的治疗效力可用啮齿动物疾病模型进行测定。
本发明用下述实验数据进行举例说明，但不限于这些实验数据。
附图
以下为附图概述。
附图1：显示化合物(I)抑制上行兴奋性反射；
附图2：显示化合物(I)对正常的未敏化动物的小肠道转运缺乏明显效果；
附图3：显示化合物(I)对卵白蛋白(egg-albumen)敏化模型的小肠道转运的效果；及
附图4：显示化合物(I)对大鼠结肠直肠敏感性及紧张(tone)的效果。
实验结果
化合物(1)不影响正常肠道的活动
口服5、15及50mg/kg的化合物(1)对大鼠胃排空不产生明显的或统计学上显著的效果，采用酚红法(phenol red method)进行测定。
本研究使用的高剂量类似于显示出对肠有疼痛抑制(anti-nociceptive)的活性(见下)，与化合物(I)对大鼠NK-3受体的低亲和力(相对于其对人或豚鼠的该受体变种的较高亲和力而言)相一致。与此形成对照的是，标准对照，口服20mg/kg的硫酸吗啡产生显著的且具有统计学意义的胃排空降低(见表1)。该效果是期望的并验证了本测试体系的有效性。
表1：使用化合物(I)、硫酸吗啡、酚红及溶媒后
大鼠肠道排空的比例： 组别 口服处理 剂量 (mg/kg) ％胃排空 1 2 3 4 5 6 单用酚红 溶媒 化合物(I) 化合物(I) 化合物(I) 硫酸吗啡 - - 5 15 50 20 0.0 60.6 55.2 50.7 62.4 30.8**
与溶媒处理组相比差异显著：**p＜0.01
口服5、15及50mg/kg的化合物(1)对大鼠肠道活动也不产生明显的或具有统计学意义的影响，采用了碳餐测定法(charcoal meal test)。因而，在每个测试剂量下，每个化合物(I)处理组中碳餐移动距离类似于溶媒组中的距离。与此相反，与溶媒组相比，口服10mg/kg的硫酸吗啡产生显著的且具有统计学意义的胃肠活动下降(见表2)。该效果是期望的并验证了本测试体系的有效性。
表2：化合物(I)、硫酸吗啡及溶媒对大鼠胃肠活动的影响，
用碳餐测定法进行测定组别口服处理 剂量 (mg/kg)组别碳餐移动平 均距离％肠线总长度±SD ％相对溶媒处理动 物的变化 1 2 3 4 5溶媒化合物(1)化合物(I)化合物(I)硫酸吗啡 - 5 15 50 10 53.0±7.6 46.9±5.3 52.1±7.1 50.4±8.6 37.4±12.4 - -11.5 -1.7 -4.9 -29.4
SD＝标准差
与溶媒处理组相比统计差异显著：**p＜0.01
化合物(1)对豚鼠肠神经元的慢兴奋性突触后电位的抑制
以化合物(I)分析了四个神经元，以确定其对慢兴奋性突触后电位的效果。
慢兴奋性突触后电位(low EPSP)用高频(20Hz)电刺激1秒而产生，然后用于与神经节相连的外周节间链(circumferential intemodal strand)上。可获得慢兴奋性突触后电位的基线，一旦消退后，将化合物(1)以0.1μM的浓度透过制剂铺满。在持续的扩散过程中，测定了各时间间隔的慢兴奋性突触后电位。药物循环至少30分钟后，与基线水平相比，所有四个神经元的去极化峰值的降低都超过50％。其中一个神经元被100％阻断，在受刺激时其甚至显示出抑制性突触后电位(IPSP)。其它三个神经元中都表现了被阻断的活性，为去极化峰值的60-80％。两个神经元充填生物胞素，并与链亲和素及TexasRed反应，用荧光显微法显示了Dogiel type II形态学特征。
化合物(I)对豚鼠离体结肠的拉紧-诱导反射的抑制活性
在反射研究中，将5-7cm长的结肠悬浮于温热的、氧饱和的生理盐水中以使8mm长的金属条可被插入腔中，并经由一条穿过肠壁的线与滑轮系统相连，该系统可使不同重量牵引金属条并使肠扩张。力传导装置通过金属条双边各5mm的小金属钩连接到结肠壁上。使用6、12或20g重量产生的大肠壁扩张引起节律收缩扩张，以及肛侧的舒张。12及20g引起类似活动，尽管扩张肛侧的舒张似乎更加明显，但口腔的兴奋反应无异于6g重量的效果。250nM的化合物(I)施用30-45分钟，其将以扩张依赖性的方式降低扩张效果，并在扩张的高水平，该效果更明显(见下图)。这些数据表明化合物(I)对NK受体的拮抗机制降低了扩张引起的上行或下行反射。由于在高扩张重量下，化合物(I)对肠反射的作用更明显，因而，NK3受体及IPAN活性的相应慢兴奋性突触后电位成份可能在更大程度上影响由强刺激或可能导致病理损伤的刺激引起的反射。
数据如下图1所示，显示了不存在及存在化合物(I)及其被冲洗后上行兴奋反射的变化，该反射由6、12或20g扩张引起，测定曲线下面积，以g·s(克·秒)表示。
化合物(I)卵白蛋白敏化对大鼠小肠道转运增加的抑制作用
总结及结论
口服15mg/kg化合物(I)对NK3受体的拮抗机制首次得到阐明，对由卵白蛋白刺激引起的大鼠小肠转运时间的延长有抑制作用。这些数据有力地支持了NK3受体涉及肠功能的病理变化(而不是生理变化)。
目的
由卵白蛋白免疫刺激引起大鼠小肠转运时间延长在此前已经用于证实5-HT3受体拮抗剂alosetron矫正紊乱的肠转运的活性。(Clayton NM.SargentR.Butler A.Gale J.MaxwellMP.Hunt AA.Barrett VJ.Cambridge D.Bountra C.Humphrey PP.The pharmacological properties of the novel selective 5 -HT3receptor antagonist，alosetron，and its effects on normal and perturbed smallintestinal transit in the fasted rat.Neurogastroenterology & Motility.11(3)：207-17，1999 Jun.)。该模型可以提供用alosetron的重要数据以及肠道刺激与NK3受体的潜在关系(Gay J，Fioramonti J，Garcia-Villar R，Edmonds-Alt X，Bueno L(1999)Gut，44，497-503.)，化合物(I)效果用该模型进行研究。
结果
在正常的未敏化的动物中，口服化合物(I)15mg/kg并不显著影响小肠转运(见下图2)。然而，在卵白蛋白敏化模型中，卵白蛋白敏化后可见的转运增加，将极大地被用15mg/kg化合物(I)的预处理所抑制(见附图3)。
讨论
这些数据用化合物(I)首次证实，与NK3受体不涉及肠道正常的活动机制的情况相反，该受体在介导肠道紊乱的活动机制方面发挥显著作用。此外，由于这些数据及该模型的使用，使关联这些体外数据(证实NK3受体涉及IPAN的慢兴奋性突触后电位活性；在人离体结肠中证实NK3受体激活能够抑制非胆碱能神经兴奋活性)与体内肠病理之间的重要性成为可能。
化合物(I)对肠道疼痛的抑制作用
清醒大鼠口服化合物(I)50mg/kg，在30、45及60mmHg扩张压力下，结肠直肠区域具有显著的抑制疼痛反映效果，而不影响结肠直肠紧张(见下图4)。口服化合物(I)30mg/kg作用类似，且仅在最高扩张压力下有统计学意义。最低剂量的化合物(1)(口服10mg/kg)经测试无抑制疼痛活性。
这些数据表明选择性NK-3受体的拮抗机制可降低肠对有害膨胀的敏感性。