药物及药物试剂盒 【技术领域】
本发明涉及一种含有前列腺素化合物和氧化氮(以下称为“NO”)供体化合物的混合物的药物，该药物对治疗高眼压和青光眼有效。
背景技术
目前，在治疗高眼压和青光眼中，基本上使用滴眼剂溶液和内用药来降低眼压。可以举出的滴眼剂溶液的例子为：β-受体阻滞剂如马来酸噻吗洛尔、盐酸卡替洛尔、盐酸苯呋洛尔和盐酸倍他洛尔；交感神经兴奋剂如肾上腺素和盐酸地匹福林；副交感神经兴奋剂如盐酸毛果芸香碱和卡巴胆碱；α-受体阻滞剂如布那唑嗪；αβ-受体阻滞剂如尼普地洛；和前列腺素衍生物如异丙基乌诺前列酮和拉坦前列素。可以举出的内用药的例子为：乙酰唑胺等碳酸酐酶抑制剂、醋甲唑胺和双氯非那胺。
在许多情况下，只使用上述一种药物不能完全控制眼压。因此，越来越多地组合使用上述两种或多种药物。然而，有时组合使用上述药物并不能显著降低眼压，因此，对这些药物进行选择非常困难。
【发明内容】
因此，本发明的一个目的是提供一种药物，该药物显著降低由于高眼压和青光眼引起的眼压，特别地，在组合使用常规药物无效的情况下，本发明提供一种有效降低眼压的药物。
为了达到上述目的，本发明的发明人对含有前列腺素化合物和NO供体化合物的药物进行了广泛研究。
在上述药物中，已知单独使用前列腺素化合物有效降低眼压。然而，还不完全了解这种疗效的作用机理。通常认为这种疗效是由于增强了色素层巩膜流动率。对于该原因，有几种意见。一种意见认为前列腺素F2α引起MMP的分泌。MMP降解睫状体的平滑肌纤维的细胞外基质(色素层巩膜外流途径)，因此，降低外流阻力并增强外流。(Lutjen-Drecoll E.和Tamm E.，Exp.Eye.Res 47，761-769，1988)。另一种意见认为睫状体的平滑肌纤维变松弛并且细胞间隙增大，因此，降低外流阻力并增强外流(Poyer JF.，Inv.Opht.Vis.Sci.36，2461-2465，1995)。
本发明地发明人对以下关于前列腺素的报道特别关注。由于前列腺素化合物(特别是前列腺素F2α的衍生物)与前列腺素受体结合，刺激了磷脂酶A2，由此引起产生花生四烯酸并将其从生物膜磷脂释放。所述花生四烯酸由环加氧酶的作用转变成前列腺素G2，然后转变成内生性前列腺素的各种形式。这种情况下，产生前列腺素E2和前列腺素F2α并使睫状肌变松弛，藉此增强色素层巩膜流动率，结果，使眼压降低(Y.K.Sardar，Exp.Eye.Res.63，305，1996等)。
本领域已知NO供体化合物降低眼压的疗效。由NO供体化合物释放的氧化氮激活鸟苷环化酶，而鸟苷环化酶增加环GMP的量(S.A.Waldman等，J.Biol.Chem 259，5946，1984)，并导致眼压降低(J.A.Nathanson等，Invest.Ophthal.Vis.Sci.Abstr.29，323，1988)。
通常，组合有效降低眼压的几种成份并不能大大提高整体疗效。然而，本发明的发明人基于以下假设进行研究：前列腺素化合物和NO供体化合物的混合物可以显著降低眼压，其中，由NO供体化合物释放的氧化氮不但激活鸟苷环化酶，而且激活环加氧酶(D.Salvemini等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90，7240，1993)，因此，提高了前列腺素化合物的眼压降低机理中花生四烯酸的转变。结果，本发明人发现实际上这种组合对降低眼压非常有效，由此完成了本发明。
因此，本发明提供了一种含有前列腺素化合物和NO供体化合物的药物。
本发明还提供了一种使用上述药物，治疗和/或预防高眼压和青光眼的方法。
由于治疗高眼压和青光眼非常困难，很多情况下使用常规降低眼压的药物不能完全治愈这些病症。尝试使用这些药物的各种组合，导致疗效没有提高或者只是轻微提高，不能显著提高对这些病症的治疗。
在本发明含有前列腺素化合物和NO供体化合物的组合的药物中，NO供体化合物释放氧化氮，而所述氧化氮提高前列腺素化合物降低眼压机理中的花生四烯酸的转变，由此显示两种化合物在显著提高降低眼压的疗效中的协同效果。因此，所述药物不仅对常见的高眼压和青光眼病人有效，而且对组合使用多种常规药物不能显著降低眼压的病人也有效。
【具体实施方式】
本发明药物中使用的前列腺素化合物，可以为所有的药学可接受的前列腺素化合物、其衍生物和其类似物，其中衍生物包括其药学可接受的酯和盐。
可举出的前列腺素化合物的例子为，但不限于，天然存在的前列腺素如前列腺素(以下称为“PG”)D1、PGE1、PGE2、PGE3、PGF1α、PGF2α、PGF3α、PGG2、PGH2、PGI2和PGI3，血栓烷A2，拉坦前列素，异丙基乌诺前列酮，PGF2α1-异丙基酯，PGF2α1-异丙基酯-15-戊酮的盐，和15-脱氧PGF2α。这些前列腺素化合物可以单独使用也可以两种或多种组合使用。
在给出的上述例子中，优选使用前列腺素F2α衍生物作为本发明药物中的前列腺素化合物，特别优选PGF2α、拉坦前列素和异丙基乌诺前列酮。
在本发明的药物中，前列腺素化合物的用量优选为药物总量的0.0001-0.05w/v％，特别优选0.001-0.01w/v％。
本发明药物中使用的NO供体化合物，可以为在体内释放NO(氧化氮)的NO供体化合物。NO供体化合物的例子包括，但不限于，尼普地洛、硝酸甘油、硝酸异山梨酯、硝普钠、N-亚硝基乙酰青霉胺、3-吗啉基-盐酸悉尼亚胺、S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)、S-亚硝基谷胱甘肽、4-苯基-3-氧化恶二唑腈(4-フェニル-3-フロキサンカルボニトリル)、精氨酸和亚硝酸钠。这些NO供体化合物可以单独使用也可以两种或多种组合使用。
在上述NO供体化合物中，特别优选尼普地洛。已知尼普地洛除了释放NO，在α，β-受体阻滞中也有效，而α，β-受体阻滞增强治疗高眼压和青光眼的疗效。
在本发明的药物中，NO供体化合物的用量优选为药物总量的0.01-5w/v％，特别优选0.1-1.0w/v％。
本发明的药物可以采用滴眼剂溶液等形式使用，其中，可以将前列腺素化合物和NO供体化合物组合于一种单一制剂中或者每种化合物为单独制剂并以药物试剂盒等形式顺次施用。
在本发明的药物中，为了方便起见，使用同时含有两种化合物的单一制剂是有利的。另一方面，鉴于可以确定施用方法并且可以控制每种化合物的施用量，使用每种化合物的单独制剂也是有利的。
优选以滴眼剂溶液形式使用本发明的药物。所述滴眼剂溶液可以是在单独容器中分别含有前列腺素化合物和NO供体化合物或在同一容器中同时含有前列腺素化合物和NO供体化合物。
上述药物制剂中，按照制剂的形式，可以合适地使用常用的碱性物质、溶解剂、增溶剂、溶剂、湿润剂、乳化剂、赋形剂、粘着剂、粘稠剂、结合剂、防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、表面活性剂、抗菌剂、pH调节剂等。
实施例
采用实施例进一步更具体地描述本发明，其不应解释为对本发明的限制。
实施例1
单独制备含有0.25w/v％尼普地洛的100ml水溶液和含有0.005w/v％拉坦前列素的100ml水溶液，并将它们组合放入单一包装中，以制备药物试剂盒。
实施例2
单独制备含有0.1w/v％硝普钠的100ml水溶液和含有0.005w/v％拉坦前列素的100ml水溶液，并将它们组合放入单一包装中，以制备药物试剂盒。
实施例3和4
采用如表1所示的成份和含量制备实施例3和4的药物。
表1 实施例3 实施例4尼普地洛0.25g硝普钠0.10g拉坦前列素0.005g拉坦前列素0.005g纯净水适量纯净水适量总量100mL总量100mL
试验例1
使用玻璃体内施用了100μl的5w/v％的高渗盐溶液的家兔作为高眼压模型。在玻璃体内施用高渗盐溶液后，施用每种滴眼剂溶液50μl，此后60分钟和120分钟检测眼压。
使用的滴眼剂溶液为：生理盐溶液，0.005w/v％拉坦前列素水溶液(拉坦前列素)，0.25w/v％尼普地洛水溶液(尼普地洛)，拉坦前列素和尼普地洛的组合(实施例1)，和0.5w/v％吲哚美辛水溶液(吲哚美辛)、拉坦前列素和尼普地洛的组合。
当组合使用尼普地洛和拉坦前列素时，首先施用尼普地洛，此后5分钟施用拉坦前列素。进一步，当使用吲哚美辛时，在施用尼普地洛之前5分钟施用吲哚美辛。结果见表2，其中眼压变化(mmHg)，即施用后眼压变化以平均值±标准误差表示。
表2滴眼剂溶液 样品数 眼压变化(mmHg) 60分钟 120分钟生理盐溶液 6 24.8±1.7 16.2±1.6拉坦前列素 6 22.7±1.2 9.8±1.9尼普地洛 6 14.7±1.7* 7.3±1.6*尼普地洛+拉坦前列素(实施例1) 6 5.3±3.3**++b 1.7±2.7**+吲哚美辛+尼普地洛+拉坦前列素 6 13.3±3.7*+ 8.2±1.7*
*：P＜0.05，**：P＜0.01(杜奈特多次对比检验，与生理盐溶液比较)
+：P＜0.05，++：P＜0.01(杜奈特多次对比检验，与拉坦前列素溶液比较)
b：P＜0.05(杜奈特多次对比检验，与尼普地洛比较)
试验例2
使用玻璃体内施用了100μl的5w/v％的高渗盐溶液的家兔作为高眼压模型。在玻璃体内施用高渗盐溶液后，施用每种滴眼剂溶液50μ1，此后60分钟和120分钟检测眼压。
使用的滴眼剂溶液为：0.1w/v％硝普钠水溶液(硝普钠)，硝普钠和0.005w/v％拉坦前列素水溶液(拉坦前列素)的组合(实施例2)，和0.5w/v％吲哚美辛水溶液(吲哚美辛)、拉坦前列素和硝普钠的组合。
当组合使用硝普钠和拉坦前列素时，首先施用硝普钠，此后5分钟施用拉坦前列素。进一步，当使用吲哚美辛时，在施用硝普钠之前5分钟施用吲哚美辛。结果见表3，其中眼压降低(mmHg)，即施用后眼压变化以平均值±标准误差表示。
表3滴眼剂溶液 样品数 眼压降低(mmHg) 60分钟 120分钟硝普钠 5 18.0±2.4 9.4±2.5硝普钠+拉坦前列素(实施例2) 5 4.8±3.9 -2.8±1.3**吲哚美辛+硝普钠+拉坦前列素 5 22.8±2.9## 12.4±6.3##
**：P＜0.01(杜奈特多次对比检验，与硝普钠比较)
##：P＜0.01(杜奈特多次对比检验，与硝普钠+拉坦前列素溶液比较)
上述试验例1和2的结果显示：与单独使用NO供体化合物和前列腺素化合物相比，NO供体化合物和前列腺素化合物的组合使用显著地抑制了眼压升高。随着吲哚美辛的加入，这种组合使用的疗效消失了。这说明，通过NO供体化合物和拉坦前列素的组合使用而具有的预防眼压升高的疗效是由于环加氧酶活化的结果。由拉坦前列素激活磷脂酶A2和NO激活环加氧酶而产生的内生性花生四烯酸衍生物的协同效果导致加强产生各种内生性前列腺素，据信内生性前列腺素刺激产生PGE2，而已知PGE2对家兔的眼压降低有效。
工业应用性
与单独使用前列腺素化合物和NO供体化合物相比，含有前列腺素化合物和NO供体化合物的组合的药物显著地抑制眼压升高。
因此，本发明的药物对治疗患有高眼压和青光眼的人有效。