一种抗癌新药的制备方法 所属技术领域
本发明涉及抗肿瘤药物技术领域，特别是涉及一种从动物体内提取有效成分的抗癌药物的制备。
背景技术
肿瘤化疗是肿瘤治疗的三大支柱之一，虽然现在已有多种抗癌药物，临床化疗也已取得了显著成绩，但是，仍有许多常见肿瘤如非小细胞肺癌、胃肠道肿瘤、原发性肝癌、恶性黑色素瘤等化疗疗效不满意。并且这些抗癌药物大都有严重的毒、副作用，严重影响了临床疗效。继续研究开发新的高效低毒的抗癌药物，仍是一个重要课题。壁虎属于爬行动物门蜥蜴目壁虎科壁虎属，又称天龙、守宫等，中药多以其干虫体研碎入药，与其他药物一起，用于肿瘤和结核的治疗，例如公开号为CN1279988A的“一种治疗肿瘤的药”的专利申请的原料中就含有壁虎(守宫)，但自壁虎体内提取抗癌药物有效成分目前尚未见有报道。
【发明内容】
本发明的目的就是要提供一种抗癌药物的制备方法，从而制取一种新型抗癌药物，以提高癌症的临床疗效。
为实现上述目的，本发明抗癌药物的制备方法是：将新鲜壁虎去除内脏后用蒸馏水洗净，置于搅拌机中搅碎后用酸性乙醇溶液浸泡12-36小时，采取渗滤法或冷浸法提取，回收乙醇得浸膏，加足量蒸馏水稀释，过滤除去析出的杂质，水液碱化，过滤后滤液用氯仿或乙醚或乙酸乙酯萃取2次，将萃取液在温度为2-5℃的冷藏箱内放置24-36小时，沉淀析出并过滤除去杂质，滤液在60-80℃水浴中用薄膜蒸发器浓缩，浓缩后在40-50℃温度下进行恒温烘干，粉碎过120目筛，制得药物有效成分，溶于甲醇中待用；按照与上述药物有效成分重量比1-3∶1的比例取卵磷脂或/和磷酸酯或/和胆固醇溶于无水乙醇中，并将上述两种溶液混合，超声至完全乳化，加入钙离子后再加入EDTA，用薄膜蒸发器除去有机溶剂，制成磷脂薄膜大单层脂质体，然后制成所需剂型即可。
在上述方法中最好是取卵磷脂、磷酸酯、胆固醇三种成分溶于无水乙醇中，三种成份的重量比为卵磷脂∶磷酸酯∶胆固醇＝0.5-1.5∶1.5-2.5∶1-2。
在上述方法中是将制得的磷脂薄膜脂质体臭氧灭菌15-30分钟，也可采用环氧乙烷灭菌或Co60照射灭菌，然后分装制成胶囊；或者将制得地磷脂薄膜脂质体低温冷冻干燥，制成冻干粉针。
经多年临床验证，由本发明制备的抗癌药物对缓解癌症症状、提高病人生活质量、延长病人生命等方面具有明显效果，临床应用无明显骨髓抑制和重要器官损害，是一种高效、广谱、低毒的抗肿瘤药物。体内抑瘤实验证明可抑制肿瘤生长，并使肿瘤组织坏死面积增加。体外抑瘤实验证明对多种肿瘤细胞有抑制作用。用相当于人用量的20倍剂量喂养C57小鼠，未发现小鼠中毒现象。
临床应用
对86例中晚期非小细胞性肺癌疗效观察，统计学处理结果如下：
1.肿块改变 完全缓解率(CR)3.4％，部分缓解率(PR)50％，少有缓解率(MR)36％；
2.生活质量 Karnofsky评分：用药前为59.5±5.3分，服药30天后为73.6±4.2分，统计学分析两者有显著差异性(P＜0.005)；
3.生存时间 本发明药物为13.6±1.8个月。
体外抑瘤实验(结果见表1)
表1 本发明药物与ADM、5-Fu对MCA-38的抑瘤作用(MTT法)
分组 A B C D E F G
ADM浓度 0.625 1.25 2.5 5.0 10.0 20.0
OD(X) 0.288 0.201 0.197 0.189 0.182 0.160 0.670
杀伤率 57.0 70.0 70.6 71.8 72.9 76.1
5-Fu浓度 18.75 37.50 75.00 150.00 300.00 600.00
OD(X) 1.900 1.784 1.699 1.678 1.635 1.492
杀伤率 2.0 7.9 12.3 15.0 15.6 23.0
本药浓度 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
OD(X) 1.009 0.921 0.813 0.632 0.410 1.203
杀伤率 16.1 23.4 32.4 47.5 65.9 67.8
注：1、体外实验说明本发明药物对MCA-38有明显的抑制作用；
2、各种药物的平均浓度参考各药物临床用量定。
体内抑瘤实验
将十六只C57小鼠按雌雄和大小配对后，随机分成两组(实验组和对照组)，在左后肢肌肉内种植MCA-38肿瘤细胞悬液0.1ml(5.5×100000个/ml)，对照组常规喂养，实验组24小时后用喂养法给本药(实验结果见表2)。
表2、对照与实验组肿瘤重量的比较
分组 数量 瘤重 抑瘤率
对照组 8 1.65±0.42
实验组 8 1.05±0.34 36.4
病理片显示实验组肿瘤组织内坏死面积增加。
实施例一
将新鲜壁虎去除内脏后用蒸馏水洗净，置于搅拌机中搅碎后用酸性乙醇溶液浸泡12小时，采取渗滤法或冷浸法提取，回收乙醇得浸膏，加足量蒸馏水稀释，过滤除去析出的杂质，水液碱化，过滤后滤液用氯仿萃取2次，将萃取液在温度为3℃的冷藏箱内放置24小时，沉淀析出并过滤除去杂质，滤液70℃水浴中用薄膜蒸发器浓缩，浓缩后在40℃温度下进行恒温烘干，粉碎过120目筛，制得药物有效成分或采用CO2超临界萃取法得药物有效成分，溶于甲醇中待用；按照与上述药物有效成分重量比2∶1比例取卵磷脂和胆固醇(两者重量比为1∶1)溶于无水乙醇中，并将上述两种溶液混合，超声至完全乳化，加入钙离子，再加入EDTA，用薄膜蒸发器除去有机溶剂，制成磷脂薄膜大单层脂质体，然后臭氧灭菌20分钟，分装制成每粒0.4克的胶囊。
实施例二
将新鲜的壁虎去内脏后用蒸馏水洗净，置搅拌机中搅碎后用酸性乙醇溶液浸泡24小时，回收乙醇后加足量蒸馏水稀释，过滤除去析出的脂类杂质，水液碱化，滤液用氯仿萃取2次，将萃取液在温度为5℃的冷藏箱内放置36小时，沉淀析出并过滤除去杂质，滤液在60℃水浴中用薄膜蒸发器浓缩，浓缩物在50℃温度下进行恒温烘干，粉碎过120目筛，制得药物有效成分(或采用CO2超临界萃取法得药物有效成分)，溶于甲醇中待用；按照总量与上述药物有效成分重量比1∶1的比例取卵磷脂、磷酸酯和胆固醇溶于无水乙醇中，三种成分的重量比为卵磷脂∶磷酸酯∶胆固醇＝1∶2∶1.5。将上述两种溶液混合，超声至完全乳化，加入钙离子再加入EDTA，用薄膜蒸发器除去有机溶剂，并用氮气流吹尽有机溶剂，制成磷脂薄膜大单层脂质体，然后低温冷冻干燥制成冻干粉针。