治疗心脑血管疾病的复方黄芪制剂及其制备方法 技术领域：本发明是一种治疗心脑血管疾病的复方黄芪制剂及其制备方法，属于中药的技术领域。
技术背景：心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均是当今世界上最常见和危害最大的疾病之一，在许多国家里已成为人口死亡的主要原因之一；据调查，近年来的发病率有逐年增高趋势，而且中、青年患者不断增加，心脑缺血性疾病已成为危害我国人民健康的常见病、多发病；为了达到防治目的，许多发明人及药品企业做了大量的研究，也提供了一些治疗的产品；如：专利申请号为：01129112、名称为“治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制作方法”，本发明人曾参与完成了一份名称为“一种治疗心脑血管疾病的药物制剂及其制备方法”、专利申请号：200410022288.9的专利申请，这两份专利申请都使用了丹参这种药材；问题是：丹参是文献报道过敏反应发生频率极高的中药，其有效成分丹参酮是具有生化活性基因的化学成分可以成为半抗原，所以它们的适用人群上存在一定的问题；而且本申请人在研究过程中发现，银杏内酯在空气中与氧接触易引起内酯环的破裂，从而使内酯的提取得率降低，总内酯含量很低；而研究表明银杏叶主要含黄酮、内酯两类活性成分，内酯具有捕获游离基、抑制血小板活化因子、促进血液循环及脑代谢等功能，可用于治疗冠心病、心绞痛、老年痴呆症和皮肤病、脱发等多种疾病，并能增强记忆功能，所以如何提高内酯的含量直接影响产品的疗效；另外，由于患类似疾病的患者众多，所以需要向市场提供更多的、效果显著的、没有副作用的治疗药品。鉴于这些情况，寻找一种药材配伍简单、治疗效果理想，没有毒副作用，制备工艺合理有效地治疗药物制剂成了人们急需解决的事情。
发明内容：本发明的目的在于：提供一种治疗心脑血管疾病的复方黄芪制剂及其制备方法；本发明针对现有技术，根据心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均因血管窄缩、血流量减少等原因致使供血不足引发疾病的原理，采用黄芪和银杏配伍做成制剂；它具有活血化淤、通脉舒络、改善血循环和代谢作用。例如冠心病是冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血，缺氧而引起心脏病，两药合用，可起到改善心肌代谢作用、增加冠状动脉血流，改善心肌的血供以缓解心绞痛的作用。本发明不仅对于治疗心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效，还可以用于肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病。而且本发明为纯中药制剂，其不良反应小、可供病人长期使用。
本发明是这样构成的：按照重量组分计算，它主要由黄芪1～99份，或者是相应重量分经提取后得到的黄芪提取物与银杏99～1份，或者是相应重量分经提取后得到的银杏提取物制作而成。准确的说：按照重量组分计算，它主要由黄芪20～80份，或者是相应重量分经提取后得到的黄芪提取物与银杏80～20份，或者是相应重量分经提取后得到的银杏提取物制作而成。优选处方为：按照重量组分计算，它由黄芪50份，或者是相应重量分经提取后得到的黄芪提取物与银杏50份，或者是相应重量分经提取后得到的银杏提取物制作而成。
本发明所述的制剂为：注射剂、包括：注射液、粉针、冻干粉针，片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微丸剂、颗粒剂、丸剂、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、口服液体制剂、凝胶剂、煎膏剂、微丸剂、分散片剂、浸膏剂和膜剂。准确的说：所述的制剂为：注射剂、包括：注射液、粉针、冻干粉针，片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、分散片剂、软胶囊剂、微丸剂、凝胶剂。
本发明所述的治疗心脑血管疾病的复方黄芪制剂的制备方法：取黄芪，加水煎煮，合并水煎液，滤过，减压浓缩，再精制、浓缩，干燥后粉碎，即得黄芪提取物；取银杏，粉碎成粗粉，乙醇回流，收集提取液，回收乙醇，再精制、浓缩，干燥后再与黄芪提取物混合均匀，然后分别制成不同的制剂。具体地：
取黄芪，加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加5倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别低温离心过滤，在4～6℃的低温下以2500r/min，30min的条件进行离心，弃去沉淀，干燥、混匀，然后分别制成不同的制剂。
取黄芪提取物、银杏细粉或提取物混合均匀，加入注射用水，并加0.9％氯化钠，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.01％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，补加注射用水至全量，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得大输液制剂。
取黄芪提取物、银杏细粉或提取物混合均匀，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.1％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，按12mg/ml的比例加入甘露醇，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，冻干条件：-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，即得冻干粉针剂。
取黄芪提取物、银杏细粉或提取物混合均匀，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.1％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，按12mg/ml的比例加入甘露醇，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，冷冻干燥或喷雾干燥，分装，即得粉针剂。
取黄芪提取物、银杏细粉或提取物混合均匀，加入注射用水，加0.01％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，补加注射用水至全量，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得注射液。
与现有技术相比，本发明具有活血化淤、通脉舒络、改善血循环和代谢作用。例如冠心病是冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血，缺氧而引起心脏病，两药合用，可起到改善心肌代谢作用、增加冠状动脉血流，改善心肌的血供以缓解心绞痛的作用。本发明不仅对于治疗心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效，还可以用于肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病。而且本发明为纯中药制剂，其不良反应小、可供病人长期使用。黄芪性甘、微温，具有补气升阳、益卫固表等功用；银杏叶能扩张冠动脉和脑血管，增加心脑的血流量，改善心脑代谢，恢复正常功能；降低血液粘稠度，增进红细胞的变形能力，改善微循环；具有高效的防治血小板聚集，微血栓形成和脂质代谢紊乱作用。本发明采用黄芪和银杏配伍做成制剂，对冠心病发病和发展的各个环节有广泛的治疗作用，对循环系统及机体其他重要机能有改善和调节作用，能改善心功能，扩张冠状动脉，改善冠脉循环，增加心肌微循环灌流，降低血小板聚集率，防栓、溶栓，保护心肌缺血，增加体力和降低耗氧量，调节免疫功能。
本申请人在研究过程中发现，银杏内酯在空气中与氧接触易引起内酯环的破裂，从而使内酯的提取得率降低，总内酯含量很低；而研究表明银杏叶主要含黄酮、内酯两类活性成分，内酯具有捕获游离基、抑制血小板活化因子、促进血液循环及脑代谢等功能，可用于治疗冠心病、心绞痛、老年痴呆症和皮肤病、脱发等多种疾病，并能增强记忆功能，所以如何提高内酯的含量直接影响产品的疗效；通过一系列实验，本申请人采用氮气保护提取，可降低氧浓度，减少内酯与氧的接触时间，总内酯含量明显提高；通过PH值的调节，抑制其在注射液中的水解；选择的粉针剂剂型，也有利于银杏内酯的稳定。
申请人进行了一系列实验，可以证明本发明提供的药物具有有效的效果；
实验例1：提取工艺研究
银杏内酯具有捕获游离基、抑制血小板活化因子、促进血液循环及脑代谢等功能，是本产品的起效成分之一，提取工艺直接影响产品的疗效和质量。
项目 无氮气保护 无氮气保护 有氮气保护 有氮气保护
溶剂 70％乙醇 60％乙醇 70％乙醇 60％乙醇
得率％ 2.4 2.2 2.8 2.5
总黄酮含量％ 23.5 22.8 26.9 26.7
总内酯含量％ 6.1 6.0 7.0 6.4
结果显示：本发明的提取工艺合理可行，有效成分提取率高。
实验例2：成型工艺及稳定性研究
(1)成型工艺条件研究
①注射剂pH值的选择：银杏内酯在过酸或过碱的条件下，易发生酯的水解，我们对6种不同pH值的注射液40℃放置3个月，分别考察其稳定性。
0月 3月
pH值 色泽 澄明度 萜内酯(mg/ml) 色泽 澄明度 萜内酯(mg/ml)
5.5 淡黄色 差 2.50 黄棕色 差 2.01
6.0 淡黄色 澄明 2.49 黄棕色 差 2.13
6.5 淡黄色 澄明 2.41 淡黄色 澄明 2.32
7.0 淡黄色 澄明 2.45 淡黄色 澄明 2.42
7.5 黄棕色 澄明 2.55 黄棕色 差 1.98
8.0 黄棕色 差 2.52 黄棕色 差 2.01
结果显示，采用本发明所选用的辅料所制得的制剂质量稳定，可控；使得本发明所得的产品成型性好.
②冷冻干燥条件筛选：根据冻干处方及用药量，按支架剂筛选时的冻干条件进行冷冻干燥，条件及结果见表
实验结果显示：-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时为最佳冷冻条件。
(2)制剂稳定性考查：
①本发明粉针剂
②本发明注射液
③本发明大输液制剂
结果表明，本发明提供的制剂质量稳定。
实验例3：药效学实验
(1)对大鼠脑血管通透性的影响
取健康雄性Wistar大鼠70只，按体重分层次随机分为7组，每组10只：①假手术组；②生理盐水对照组；③维脑路通对照组(0.04g/kg)；④黄芪水针对照组(7.2g生药/kg)；⑤银杏水针对照组(7.2g生药/kg)；⑥本发明水针组(7.2g生药/kg)。第②-⑥组各大鼠分别腹腔注射7.2ml/kg，每天1次，连续3天。末次给药1hr后，给各组各鼠腹腔注射戊巴比妥钠溶液麻醉，仰位固定于手术台上。颈部正中切口，分离两侧颈总动脉。静脉注射0.5％伊文斯蓝溶液10ml/kg，5min后，第①组各鼠不结扎、第②-⑥组各鼠结扎双侧颈总动脉。3hr后处死，断头，开颅取脑，分析天平称重。将各脑浸泡于5ml甲酰胺中，在45℃恒温箱中温育72hr。取温育液，用722型分光光度计在620nm处测定吸收度，根据标准曲线计算出各脑内的伊文斯蓝含量(μg/g脑重)，结果见表
大鼠脑血管通透性的影响
剂量 伊文斯蓝含量
组别 动物数
(g/kg) (μg/g)
假手术组 10 2.96±0.32
生理盐水模型组 10 4.55±1.25
维脑路通组 10 0.04 3.10±0.86
黄芪水针对照组 10 7.2 3.35±1.50
银杏水针对照组 10 7.2 3.24±0.12
本发明水针组 10 7.2 3.12±0.65
结果表明，本发明组方疗效优于由黄芪、银杏单独用药，具有协同增效的作用且效果比较明显。
(2)对血瘀模型家兔血液流变性的影响
实验1组：丹参、银杏药液；实验2组：黄芪、银杏、丹参药液；实验3组：本发明药液
家兔48只，随机分为6组，每组8只，♀♂各半，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组及实验1、2、3组。各组动物先耳缘静脉注射(iv)给药。空白及模型对照组注射生理盐水(NS)1ml/kg，阳性药组iv葛根素注射液30mg/kg(以NS配成30mg/ml)，实验组分别注射0.25mg/ml的药液(以NF配成)，给药量均为1ml/kg，连续给药两周(14d)，于给药的第2、13d，除空白对照组外，各兔分别经耳缘静脉注10％高分子右旋糖酐5ml/kg，每日两次，造成血瘀模型。末次给药h后，再次注射10％高分子右旋糖酐5ml/kg，15min后，心脏采取空腹血6ml，进行血液流变学指标检测，其中血小板聚集率用LBY-NJ2型血小板聚集仪，采用比浊法测定：其它采用LBY-N6A+旋转式锥板粘度仪测定。
对家兔血小板聚集和纤维蛋白原的影响(x±s，n＝6)
组别 剂量(mg/kg) 体重(kg) 血小板聚集(％) 纤维蛋白原(g/L)
空白组 - 2.31±0.15 15.54±2.46 2.53±1.16
模型组 - 2.45±0.08 38.27±15.05 2.73±1.41
阳性药组 30 2.37±0.11 12.74±3.47 3.12±1.83
实验1组 0.25 2.35±0.23 14.77±1.25 2.62±0.36
实验2组 0.25 2.42±0.15 14.49±3.14 2.57±1.23
实验3组 0.25 2.41±0.14 14.02±1.25 2.52±2.34
结果显示，本发明制剂疗效好，而且没有选用丹参，不会有其带来的不良反应和过敏反应。
(3)对四氯化炭引起家兔实验性肝损伤的影响
家兔随机分为4组：正常对照组、ccl4(0.1ml/kg)模型组、ccl4+联苯双酯(60mg/kg)组、ccl4+本发明药物组合物组。腹腔注射ccl4后，各组动物连续灌胃给药5天，末次给药后1小时处死动物，取血并立即解剖，取肝脏进行组织化学及病理学检查。结果表明：本发明药物组合物大剂量组有降低SGPT值趋势；病理检查本发明组肝组织中LDH含量较损伤组有明显增加，肝小叶中央带LDH含量有所增加，肝糖原分布均匀，肝小叶中央带及周围带糖原比损伤组有所增加；高剂量组对肝细胞胞浆疏松、脂肪样变、嗜酸性及坏死均有明显保护作用。本发明药物组合物的保护作用与联苯双酯组相似。
分组 动物数 SGPT(X±SD)
正常对照组 10 34.45±2.85
模型对照组 10 513.13±20.12
联苯双酯组 10 215.42±53.45
本发明片剂组 10 220.12±17.20
结果表明，本发明的制剂还可以用于肝损伤的治疗。
具体的实施方式：
本发明的实施例1：黄芪990g、银杏10g
取黄芪，加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加3倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别醇沉，弃去沉淀，干燥、混匀，加入大豆油，混匀，滴入甲基硅油中冷却，即得滴丸剂。本产品口服、一日三次、每次2粒。
本发明的实施例2：黄芪10g、银杏990g
取黄芪，加1倍量水煎煮1次，每次5小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加2倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别过树脂，乙醇洗脱液干燥、混匀，加入甲基纤维素2％，加水湿润，制成颗粒，干燥，加入3％羧甲基淀粉钠，压片，即得分散片剂。
本发明的实施例3：黄芪500g、银杏500g
取黄芪，加5倍量水煎煮2次，每次2小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加8倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别用萃取法精制，干燥、混匀，加入2％低取代羟丙基纤维素，挤出—滚圆法制丸，干燥，即得微丸剂。
本发明的实施例4：黄芪800g、银杏200g
取黄芪，加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加5倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别低温离心过滤，在4～6℃的低温下以2500r/min，30min的条件进行离心，弃去沉淀，干燥、混匀，加入注射用水，并加0.9％氯化钠，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.01％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，补加注射用水至全量，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得大输液制剂。
本发明的实施例5：黄芪200g、银杏800g
取黄芪，加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加5倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别低温离心过滤，在4～6℃的低温下以2500r/min，30min的条件进行离心，弃去沉淀，干燥、混匀，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.1％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，按12mg/ml的比例加入甘露醇，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，冻干条件：-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，即得冻干粉针剂。
本发明的实施例6：黄芪500g、银杏500g
取黄芪，加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加5倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别低温离心过滤，在4～6℃的低温下以2500r/min，30min的条件进行离心，弃去沉淀，干燥、混匀，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.1％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，按12mg/ml的比例加入甘露醇，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，冷冻干燥或喷雾干燥，分装，即得粉针剂。
本发明的实施例7：黄芪500g、银杏500g
取黄芪，加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加5倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别低温离心过滤，在4～6℃的低温下以2500r/min，30min的条件进行离心，弃去沉淀，干燥、混匀，加入注射用水，加0.01％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值6.5～7.0，补加注射用水至全量，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得注射液。
本发明的实施例8：黄芪500g、银杏500g
取黄芪，加3倍量水煎煮4次，每次3小时，合并水煎液，滤过，减压浓缩，即得黄芪提取液；取银杏，加5倍量70％乙醇70℃下加氮气保护提取3次，每次1小时，减压回收乙醇，得银杏提取液，提取液分别低温离心过滤，在4～6℃的低温下以2500r/min，30min的条件进行离心，弃去沉淀，干燥、混匀，压制法制丸，即得软胶囊剂。