一种远志的有效部位及其用途.pdf

本发明涉及一种远志的有效部位，是来源于远志的活性成分——远志总苷，其主要包括酮苷、糖酯和皂苷类化合物。其为将远志的根或根皮粉碎后，先使用水或/和醇作进行提取；然后上大孔树脂柱，使用水、甲醇、乙醇、丙酮、或50～95v％的乙醇或丙酮的水溶液进行洗脱；收集洗脱液，干燥，即得含量达50％以上的远志有效部位；其制备方法还包括脱脂过程，即先使用极性较小的有机溶剂对远志进行提取，或是使用极性较小的有机溶剂对提取液进行萃取。该远志的有效部位与药学上可接受的载体或其他适宜赋形剂相结合，按照常规方法制成经口服给药的内用剂型和非口服给药的注射剂或其它剂型，可用于制备预防和治疗老年性痴呆的药物。

1、  一种远志的有效部位，其为由如下的方法得到：
1)提取：将远志的根或根皮粉碎至10～20目，使用水或/和醇作为提取溶剂进行提取；
2)树脂吸附：将步骤1)得到的提取液浓缩，上大孔树脂柱，先用3～4个柱体积的水洗去杂质，然后用洗脱溶剂进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位；
所述的洗脱溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮、50～95v％的乙醇或丙酮的水溶液。

2、  如权利要求1所述的远志的有效部位，其特征在于，所述步骤1)的远志为远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志Polygala sibirica L.。

3、  如权利要求1所述的远志的有效部位，其特征在于，所述步骤1)的提取溶剂中水和醇的混合物是50～95v％的乙醇水溶液。

4、  如权利要求1所述的远志的有效部位，其特征在于，所述步骤1)的提取为加入6～8倍量的提取溶剂提取2～3次，然后在室温下浸渍提取24～48h/次；或为用20～70kHz的超声波提取15～30min/次；或在60～80℃加热提取1～2h/次；或回流提取1～2h/次。

5、  如权利要求1所述的远志的有效部位，其特征在于，所述步骤2)所采用的树脂柱中填充的树脂为D系列、HPD系列、HP系列、XAD系列或AB-8大孔吸附树脂。

6、  如权利要求1所述的远志的有效部位，其特征在于，所述D系列的大孔吸附树脂为D-101型；HPD系列的大孔吸附树脂为HPD-500型；HP系列大孔吸附树脂为HP-20、XAD系列大孔吸附树脂为XAD-4。

7、  如权利要求1所述的远志的有效部位，其特征在于，所述步骤2)的洗脱溶剂为60～70％的乙醇或甲醇的水溶液。

8、  如权利要求1所述的远志的有效部位，其制备方法还包括在步骤1)中或之后进行脱脂，具体步骤如下：
在步骤1)中，将远志的根或根皮粉碎至10～20目之后，先用6～8倍量的极性较小的有机溶剂对远志或卵叶远志的根或根皮进行提取2～3次，残渣再用水或/和醇作为提取溶剂提取；
或是在步骤1)的提取之后，将提取液浓缩至不含有机溶剂，加入水，制成密度为1.1～1.2g/ml的悬浮液，再用极性较小的有机溶剂进行萃取3～4次，分出水相。

9、  如权利要求8所述的远志的有效部位，其特征在于，所述极性较小的有机溶剂为石油醚、汽油、环己烷、正己烷或乙醚。

10、  一种远志的有效部位在制备预防和治疗老年性痴呆药物中的用途。

一种远志的有效部位及其用途
技术领域
本发明涉及一种中药材的有效部位及其用途，具体地说是涉及远志的有效部位及其在制备预防和治疗老年性痴呆药物中的用途。
背景技术
远志为常见中药，始载于《神农本草经》，列为上品，被视为养命之要药，具有安神益智、祛痰、消肿等功效(国家药典委员会编，中华人民共和国药典一部，2000：123)。据对《本经》、《本草纲目》和《中医药大辞典》等医书中益智药物的统计表明，远志是出现几率最高的中药之一，并且其益智作用比较全面。但是目前远志的应用还主要停留在祛痰、镇咳方面，如中国药典收载的远志的流浸膏和酊剂就是用于祛痰、镇咳的。
近年来随着老年性痴呆病的加重，人们积极地寻找能够有效预防和治疗该疾病的药物。已有研究表明，使用80％乙醇对远志根的提取物BT-11以10mg/kg腹腔注射给药时，能够明显逆转东莨菪碱导致的大鼠认知功能障碍；预防性地给予这种远志提取物(0.5，3和5μg/ml)能够剂量依赖性地降低由谷氨酸(1mM)、Aβ(10μM)及由淀粉样前体蛋白(APP)的C-末端碎片(CT105)(10μM)所诱导的细胞死亡(ParkCH，et al.Journal ofNeuroscience Research，2002，70：484-492)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种远志的有效部位。
本发明的再一目的在于提供所述远志的有效部位的用途。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：
本发明提供的远志的有效部位，其为由如下地方法得到：
1)提取：将远志的根或根皮粉碎至10～20目，使用水或/和醇作为提取溶剂进行提取；
2)树脂吸附：将步骤1)得到的提取液浓缩，上大孔树脂柱，先用3～4个柱体积的水洗去杂质，然后用洗脱溶剂进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位；
所述的洗脱溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮、或50～95v％的乙醇或丙酮的水溶液。
所述步骤1)的远志包括远志Polygala tenuifolia Willd.和卵叶远志Polygala sibiricaL.。
所述步骤1)的提取溶剂中水和醇的混合物是50～95v％的乙醇水溶液。
所述步骤1)的提取为加入6～8倍量的提取溶剂提取2～3次，可以是在室温下浸渍提取24～48h/次；或为用20～70kHz的超声波提取15～30min/次；或在60～80℃加热提取1～2h/次；或回流提取1～2h/次。
所述步骤2)所采用的树脂包括D系列、HPD系列、HP系列、XAD系列和AB-8大孔吸附树脂。
所述D系列的大孔吸附树脂优选D-101型；HPD系列的大孔吸附树脂优选HPD-500型；HP系列大孔吸附树脂优选HP-20、XAD系列大孔吸附树脂优选XAD-4。
洗脱溶剂优选为60～70％的乙醇或甲醇的水溶液。
本发明提供的远志有效部位，其制备方法还包括在步骤1)中或之后进行脱脂，
具体步骤如下：
在步骤1)中，将远志的根或根皮粉碎至10～20目之后，先用6～8倍量的极性较小的有机溶剂对远志或卵叶远志的根或根皮进行提取2～3次，残渣再用水或/和醇作为提取溶剂提取；
或是在步骤1)的提取之后，将提取液浓缩至不含有机溶剂，加入水，制成密度为1.1～1.2g/ml的悬浮液，再用极性较小的有机溶剂进行萃取3～4次，分出水相。
所述极性较小的有机溶剂包括石油醚、汽油、环己烷、正己烷、乙醚等。
脱脂过程以2～4次为最佳。
本发明提供的远志的有效部位，是来源于远志的活性成分--远志总苷，其主要包括酮苷、糖酯和皂苷类化合物(如图1所示)，以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯为对照品，采用紫外分光光度法在330nm波长处测定吸收度，该远志有效部位中远志总苷的含量达50％以上。
本发明堤供一种所述远志的有效部位在制备预防和治疗老年性痴呆药物中的用途。将远志有效部位，即远志总苷作为抗老年痴呆症的有效成分，使之与药学上可接受的载体或其他适宜赋形剂相结合，按照常规方法制成经口服给药的内用剂型和非口服给药的注射剂或其它剂型，可以临床用于预防和治疗老年痴呆症。
本发明首次分离出了远志的有效部位总苷，并利用脱脂、溶剂提取和大孔吸附树脂法，得到了纯度较高的远志总苷。本发明提供的远志的有效部位的制备方法工艺操作简便，生产成本低，适于工业化生产。而且，通过水迷宫试验证明远志总苷在50mg/kg时，能够拮抗东莨菪碱导致的记忆障碍，提示了该远志总苷可作为活性成分在制备预防和治疗老年痴呆症药物中的应用。
附图说明
图1为本发明实施例1～3分离制备出的远志总苷与各标准品对照的TLC图谱；薄层板为硅胶GF₂₅₄高效薄层预制板(Merck公司)，展开剂为CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层，显色为①10％硫酸乙醇喷洒  105℃烘烤3～5分钟，②紫外灯下(365nm)观察荧光，③紫外灯下(254nm)观察荧光；其中1为3，6’-二芥子酰基蔗糖酯，2为实施例1的总苷，3为polygalaxanthone III，4为实施例2的总苷，5为tenuifoliose Q，6为实施例3的总苷，7为onjisaponin J。
具体实施方式
实施例1、
取远志(Polygala tenuifolia Willd)药材的根100g粉碎至20目，先用600mL石油醚回流提取0.5h，共提取3次。然后滤出远志的残渣，用600mL70v％乙醇进行回流提取，每次lh，共3次。合并提取液，减压浓缩至近干，得稠浸膏34.99g，溶于少量水中，上HPD-500型大孔树脂，先用3个柱体积的水洗去杂质，然后用65v％乙醇进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位——远志总苷11.10g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为50.52％。
实施例2、
取卵叶远志(Polygala sibirica L.)药材的根皮100g粉碎至10目，先用700mL正己烷回流提取0.5h，共提取2次。然后滤出远志的残渣，用700mL50v％乙醇在70kHz的超声波中提取2次，每次15min。合并提取液，浓缩提取液，上HP-20型大孔树脂，先用4个柱体积的水洗去杂质，然后用60％甲醇进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位——远志总苷10.76g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为54.32％。
实施例3、
取卵叶远志(Polygala sibirica L.)药材的根皮100g粉碎至20目，用800mL50％乙醇回流提取3次，每次2h。合并提取液，减压浓缩至近干，得稠浸膏36.94g，悬浮于少量的水中，用石油醚进行萃取脱脂，共四次。所余水层浓缩至少量，上AB-8型大孔吸附树脂，先用4个柱体积的水洗去杂质，再用60v％乙醇进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位——远志总苷10.93g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为60.45％。
实施例4、
取远志(Polygala tenuifolia Willd)药材的根70g粉碎至20目，用500mL 95％乙醇回流提取3次，每次3h。合并提取液，减压回收溶剂近干，得稠浸膏29.54g。将其悬浮于水中，先用环己烷进行萃取脱脂，共3次。然后分出水层，浓缩至少量，上D-101型大孔树脂，先用3个柱体积的水洗去杂质，再用70v％乙醇进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位——远志总苷4.32g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为52.93％。
实施例5、
取卵叶远志(Polygala sibirica L.)药材的根80g粉碎至10目，用480ml水回流提取3次，每次2h.。合并提取液，减压浓缩至少量，上D-101型大孔树脂，先用3个柱体积的水洗去杂质，然后用60v％乙醇进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位7.56g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为50.63％。
实施例6、
取远志(Polygala tenuifolia Willd)药材的根皮100g粉碎至10目，用800ml95v％的乙醇水溶液在室温下浸渍提取2次，每次48h。合并提取液，减压浓缩至近干，得稠浸膏34.15g，悬浮于少量的水中，用石油醚进行萃取脱脂，共四次。然后分出水层，浓缩至少量，上HPD-500型大孔树脂，先用4个柱体积的水洗去杂质，然后用60v％的丙酮水溶液进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位11.45g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为55.43％。
实施例7、
取远志(Polygala tenuifolia Willd)药材的根100g粉碎至15目，用700ml50v％的乙醇水溶液在60C加热提取2次，每次1.5h。合并提取液，减压浓缩至近干，得稠浸膏36.15g，悬浮于少量的水中，用石油醚进行萃取脱脂，共三次。然后分出水层，浓缩至少量，上AB-8型大孔树脂，先用4个柱体积的水洗去杂质，然后用60％乙醇进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位9.44g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为50.43％。
实施例8、
取卵叶远志(Polygala sibirica L.)药材的根皮100g粉碎至20目，用650ml 70v％的乙醇水溶液用50kHz的超声波提取3次，每次20min。合并提取液，减压浓缩至近干，得稠浸膏36.38g，悬浮于少量的水中，用石油醚进行萃取脱脂，共三次。然后分出水层，浓缩至少量，上XAD-4型大孔树脂，先用3个柱体积的水洗去杂质，然后用65％甲醇进行洗脱，直至薄层色谱检识无明显斑点(展开剂CHCl₃∶MeOH∶H₂O/65∶35∶10下层)为止；收集洗脱液，干燥，即得远志有效部位9.14g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯计为57.43％。
实施例9、远志总苷对东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍的影响
选取ICR系小鼠100只，次日进行水迷宫训练，每天每只动物重复训练4次。以跑表测定反应时间(小鼠自起点至终点所需时间)，同时记录小鼠每次游入盲端的错误次数。经4天训练后，筛选反应时间相近的64只小鼠作为入选实验动物。按反应时间差异分别将雌雄小鼠随机分为四组：蒸馏水对照组、脑复康阳性对照药组、实施例4制得的远志总苷50mg/kg和250mg/kg给药组，每组雌雄小鼠各8只。每天上午进行水迷宫训练，每只小鼠重复测定3次，记录每组小鼠每次游入盲端的错误次数和出现错误的动物的只数。下午给药或蒸馏水，连续训练和给药8天(给药及蒸馏水体积为0.2ml/10g BW)。各组小鼠反应时间及错误次数相近后，经禁食不禁水过夜，各组分别于给药或蒸馏水30分钟后腹腔注射东莨菪碱1mg/kg，给东莨菪碱后30分钟，测定各组小鼠反应时间及错误次数和只数。每只小鼠重复测定3次，计算其平均值及平均出现障碍的次数，结果见表1。
               表1  远志总苷对ICR系小鼠东莨菪碱诱导记忆缺失作用的拮抗
组别       剂量     动物数           给药前                            给药后          
mg/kg                           反应时间          错误次数        反应时间           错误次数
                                (秒)              (次)            (秒)               (次)
远志总苷   50       16          14.41±7.88       27              15.20±4.46^**     34^△△
脑复康组   500      15          15.98±11.62      42              14.15±5.41^**     37^△△
对照组              15          18.82±10.81      32              26.44±11.26#      92^◆◆
t检验：给药前后比较  #p＜0.05
       与对照组比较 ^**p＜0.01
普哇松分布检验：给药前后比较  ◆◆p＜0.01
                与对照组比较  △△p＜0.01；
从表1的结果可以看出远志总苷(50mg/kg)组和脑复康组对于给予东莨菪碱30分钟后的小鼠的反应时间和错误次数均明显小于对照组(p＜0.01)，由此说明，远志总苷对于东莨菪碱导致的小鼠记忆缺失作用具有明显的拮抗作用。
该实验结果提示了本发明提供的远志有效部位可作为活性成分在制备预防和治疗老年痴呆症药物中应用。