氨基酸锌盐与抗抑郁药的药物组合物及其医药用途.pdf

氨基酸锌盐与抗抑郁药的药物组合物及其医药用途
    【技术领域】

    本发明涉及一种药物组合物，其包括氨基酸锌盐，抗抑郁药和/或药用载体或赋形剂。本发明还涉及氨基酸锌盐与抗抑郁药或化合物混合或联合在制备抗抑郁药中的用途。

    背景技术

    传统单胺假说认为，抗抑郁剂通过增加突触间隙单胺递质(去甲肾上腺素、5-羟色胺、多巴胺)浓度发挥治疗作用。现在临床上常用的抗抑郁剂都是作用于单胺系统，通过影响单胺递质重吸收或代谢发挥作用，如去甲肾上腺素、5-羟色胺重吸收抑制剂及单胺氧化酶抑制剂等。但现有抗抑郁剂起效慢，一般需要一周到两周；尤其是大多数抗抑郁剂存在严重副作用；而且有20-30％病人对任何类型的抗抑郁剂不起作用。因此，提高抗抑郁剂药效、降低毒副作用、开发新的抗抑郁药物是十分需要的。

    【发明内容】

    本发明人经研究现已出人意料发现将氨基酸锌盐与已知的抗抑郁药联合使用，可在保持或提高已知抗抑郁药作用同时，明显降低已知抗抑郁药的用量，从而显示出氨基酸锌盐与已知抗抑郁药之间的协同作用，降低了抗抑郁药的副作用，但氨基酸锌盐本身并无抗抑郁作用。本发明基于上述发现现已完成。

    因此，本发明第一方面涉及一种药物组合物，其包括氨基酸锌盐和抗抑郁药。

    本发明再一方面涉及氨基酸锌盐与抗抑郁药混合或结合在制备用于抗抑郁药物中的用途。

    本发明再一方面涉及氨基酸锌盐作为抗抑郁药的增效剂。

    本发明再一方面涉及治疗抑郁症的方法，其包括将氨基酸盐与抗抑郁药混合或联合给于患有抑郁症的患者。

    根据本发明，适用于本发明的氨基酸锌盐可是任何氨基酸的锌盐，其包括但不限于已知的人体必需氨基酸或非必需氨基酸的锌盐，举例讲如组氨酸锌。

    根据本发明，适用于本发明的抗抑郁药可是任何抗抑郁药，其包括但不限于：丙米嗪，盐酸氟西汀或维拉发新等。

    根据本发明，氨基酸锌盐与抗抑郁药之间的联用比例原则上讲无任何限定，但优选抗抑郁药的量：氨基酸锌盐的量为1∶1-1∶3。

    根据本发明，本发明中的氨基酸锌盐可市购或按本领域已知方法或文献中相关方法制备，举例讲，组氨酸锌可通过将氯化锌溶于组氨酸溶液中制备。

    根据本发明，本发明中所述的氨基酸锌盐与抗抑郁药混合或联合用药可包括但不限于氨基酸锌盐与抗抑郁药混合在一起如放在一个药盒或药品包装装置中使用，或氨基酸锌与抗抑郁药放在不同的包装中一起使用。进一步讲，本发明所述的氨基酸锌盐与抗抑郁药联用包括但不限于氨基酸锌盐与抗抑郁药同时使用，或分开使用如一个先用，一个后用，先用和后用的时间间隔可由本领域技术人员确定，例如立即至几小时以内联用。

    【具体实施方式】

    下面的实施例用于进一步说明本发明，但其不意味着对本发明的任何限制。

    制备例1

    组氨酸锌的制备

    将15.516mg L-组氨酸位于1000ml蒸馏水中，得L-组氨酸浓度为100μmol的水溶液。将氯化锌75mg加入100μmol组氨酸至25ml混均，浓度为3mg/ml，再按1∶0.6的比例等比例稀释成不同浓度的组氨酸锌溶液。用100μmol浓度的组氨酸溶液作为溶剂对照。

    下面生物活性试验中所用材料与方法说明

    受试动物、受试药品与试剂

    雄性昆明种小鼠(20-24g，二级，合格证号：BDW95007)和Wistar大鼠(220-260g，二级，合格证号：BDW95012)均由军事医学科学院实验动物中心提供；丙米嗪(imipramine，IMI)均购自美国Sigma公司；盐酸氟西汀(批号931201)购于常州四药厂；维拉发新购自浙江仙居欣宏医药化工有限公司；氯化锌(ZnCl₂)购于北京北化精细化学品有限公司；L-组氨酸(L-Histidine)购于北京化学试剂公司。

    小鼠强迫游泳实验

    原理：强迫性游泳是利用动物不能逃逸出恶劣环境，造成动物行为绝望(behavioral despair)而设计的一种稳定、可靠的抑郁模型。这种行为绝望(表现为动物在强迫性游泳期间的不动行为)类似于临床抑郁状态。具有抗抑郁作用的药物可显著缩短绝望动物的不动时间.

    方法：昆明种雄性小鼠，20-24克。在实验前24、5、1小时，分别给动物腹腔(或皮下)注射10ml/kg不同剂量受试药，最后一次给药后1小时，将小鼠放入高20cm，直径10cm的圆柱型玻璃缸中，每缸一只，缸中水深10cm，水温25℃，小鼠游泳2分钟后，立即开始观察，观察持续4分钟，累计动物游泳的不动时间(秒，即动物后肢无动作时间)。

    实验内容与剂量比值：

    a小鼠腹注丙米嗪强迫游泳实验，剂量设计为2.16-10mg.kg^-1五个组(比值：1∶0.6)；

    b小鼠皮下注射组氨酸强迫游泳实验，剂量设计为3.89-30mg.kg^-1五个组(比值：1∶0.6)；

    c小鼠皮下注射维拉新强迫游泳实验，剂量设计为13.72-40mg.kg^-1四个组(比值：1∶0.7)；

    d小鼠皮下分别注射丙米嗪、维拉发新、氟西汀与组氨锌(1∶3)联用的强迫游泳实验，联用剂量设计为3.11-24mg.kg^-1五个组(比值：1∶0.6)。

    e小鼠皮下分别注射丙米嗪、维拉发新与组氨锌(1∶1)联用的强迫游泳实验，复方剂量设计为0.5-12mg.kg^-1五个组(比值：1∶0.5)。

    大鼠强迫游泳实验

    原理：同小鼠强迫游泳

    方法：Wistar雄性大小鼠，220-260克。将大鼠置于直径18cm，高40cm玻璃缸，盛28℃水温的自来水，水深23cm，游泳15分钟，取出立即用布将皮毛上的水擦干，再用红外电暖炉烤干。试游后24小时，分别在试验前24、5、1小时给动物皮下注射1ml/kg不同剂量的受试药，最后一次给药后1小时，将动物置入上述同条件水缸中，观察在5分钟，并累计动物游泳的不动时间(秒，即动物后肢无动作时间)。

    实验内容与剂量比值：

    a.大鼠皮下分别注射丙米嗪、维拉发新与组氨锌(1∶3)联用的强迫游泳实验，复方剂量设计为3.11-24mg.kg^-1五个组(比值：1∶0.6)。

    b.大鼠皮下分别注射丙米嗪、维拉发新与组氨锌(1∶1)伍用复方强迫游泳实验，复方剂量设计为1.50-12mg.kg^-1四个组(比值：1∶0.5)。

    配制方法：使用溶剂为蒸馏水或100μmol浓度的组氨酸溶液。按动物给药容量及剂量比值(小鼠腹腔或皮下注射为10ml.kg^-1，大鼠皮下注射为(1ml.kg^-1)，

    用等比稀释成所需浓度，所有组氨酸锌及联用母液用100μmol组氨酸溶液溶解后，用蒸馏水等比稀释成系列浓度。

    数据统计处理：数据用均数±标准差表示。多组均数显著性检验用方差分析，两组间均数显著性比较用t检验。

    实验结果

    实施例

    小鼠腹腔注射丙米嗪对强迫游泳不动时间的影响

    小鼠腹腔注射丙米嗪(IMI)2.16-10mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，IMI 6mg.k^-1和10mg.kg^-1组均可显著降低小鼠强迫游泳不动时间；而IMI其他剂量组对小鼠强迫游泳的不动时间未见有显著性影响(见表1)。

    表1.小鼠腹腔注射丙米嗪对强迫游泳的影响

       药物与剂量      动物数         强迫游泳不动时间

       (mg.kg^-1)      (n)            (S，X±SD)

    溶剂对照  -        16             104.0±65.1

    IMI       2.16     10             72.7±35.5

              3.60     10             85.8±67.4

              6.00     10             41.7±27.7^**

              10.00    10             57.0±35.4^*

    溶剂对照为蒸馏水、丙米嗪(IMI)均为实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05；^**P＜0.01与溶剂对照组比较。

    小鼠皮下注射维拉发新对强迫游泳的影响

    小鼠皮下注射维拉发新(VEN)13.72-40mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，除小剂量组之外，其他各剂量组均显著降低小鼠强迫游泳不动时间(见表2)。

    表2.小鼠皮下注射维拉发新对强迫游泳的影响

    药物与剂量        动物数       强迫游泳不动时间

    (mg.kg^-1)        (n)          (S，X±SD)

    溶剂对照          14           124.9±48.2

    VEN-13.72         12           95.4±45.2

        22.50         12           58.4±47.6^***

        28.00         12           67.7±46.3^**

        40.00         12          49.3±54.6^***

    溶剂对照为蒸馏水、维拉发新(VEN)均为实验前24、5和1小时3次给药。^**P＜0.01，^***P＜0.001与溶剂对照组比较。

    小鼠皮下注射组氨酸锌对强迫游泳的影响

    皮下注射组氨酸锌(HIS-Zn²⁺)3.89-30mg.kg^-1对小鼠强迫游不动时间未见显著影响。高剂量组动物(HIS-Zn²⁺30mg.kg^-1(3mg.ml^-1))给药后19小时(第2次给药时)，注射部位发现有轻度水肿，同时伴有体重下降(见表3)。

    表3.小鼠皮下注射组氨酸锌对强迫游泳不动时间及体重增长的影响

       药物与剂量      动物数        强迫游泳不动时间     体重(g，M±SD)变化

       (mg.kg^-1)      (n)           (S，X±SD)           给药前       给药后

    溶剂对照   -       10            128.5±42.9          25.2±1.5    25.5±2.0

    IMI        6.00    10            88.9±51.6^*         25.2±1.5    25.9±2.0

    HIS-Zn²⁺  3.89    9             97.9±54.1           25.3±1.3    26.3±1.9

               6.48    10            122.5±55.2          25.4±1.4    26.0±1.9

               10.80   10            96.9±46.7           25.4±1.4    26.0±1.7

               18.00   10            107.4±45.4          25.5±1.6    25.1±2.0

               30.00   9             113.4±67.9          25.2±1.4    24.2±1.4^*

    溶剂对照为组氨酸100μmol；阳性对照药为丙米嗪(IMI)；组氨酸锌(HIS-Zn²⁺)均为实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05；与溶剂对照组比较。

    综上实验结果表明：丙米嗪或维拉发新分别腹腔和皮下注射多次给药，分别在6mg.kg^-1和22.5mg.kg^-1以上剂量，显著降低小鼠强迫游泳不动时间，显示有抗抑郁作用。而小鼠皮下注射组氨酸锌13.72-40mg.kg^-1，未显示有明显的抗抑郁作用。

    实施例2，IMI与HIS-Zn²⁺不同配比复方对小鼠强迫游泳的影响IMI与HIS-Zn²⁺按1∶3或1∶1两种不同配比组成IMI-Zn(1∶3)、IMI-Zn(1∶1)两种复方。

    小鼠皮下注射IMI-Zn(1∶3)复方3.11-24mg.kg^-1。与溶剂对照组比较，其中5.18mg.kg^-1和8.64mg.kg^-1组对小鼠强迫游泳不动时间有显著减少。IMI用量降低3倍(见表4)。

    小鼠皮下注射IMI-Zn(1∶1)复方0.75-12mg.kg^-1。与溶剂对照组比较，其中3mg/kg可显著减少小鼠强迫游泳不动时间。等效情况下，IMI用量降低4倍(见表5)。

    表4.小鼠皮下注射IMI-Zn(1∶3)复方对强迫游泳的影响

    IMI-Zn(1∶3)复方配比剂量(mg.kg^-1)    动物数         强迫游泳不动时间

    组别          IMI        HIS-Zn²⁺    (n)            (S，X±SD)

    溶剂对照      -          -            18             94.3±52.0

    阳性对照      6.00       -            16             47.6±37.8^*

    3.11          0.78       2.33         16             65.3±62.0

    5.18          1.30       3.89         16             61.3±45.4^*

    8.64          2.16       6.48         16             51.4±28.7^**

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、阳性对照(IMI)与IMI-Zn²⁺复方均在实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05；与溶剂对照组比较。

    表5.小鼠皮下注射IMI-Zn²⁺(1∶1)复方对强迫游泳的影响

    IMI-Zn²⁺(1∶1)复方配比剂量       动物数

                                                      强迫游泳不动时间

             (mg.kg^-1)

    组别         IMI       HIS-Zn²⁺   (n)            (S，X±SD)

    溶剂对照     -         -           19             113.4±60.0

    阳性对照     6.00      -           12             70.8±39.4^*

    3.00         1.50      1.50        12             71.9±57.3^*

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、阳性对照(IMI)与IMI-Zn²⁺复方均在实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05与溶剂对照组比较。

    表4和表5说明在小鼠强迫游泳模型上，IMI与Zn²⁺有显著的协同抗抑郁作用。

    实施例3 VEN与HIS-Zn²⁺不同配比复方对小鼠强迫游泳的影响VEN与HIS-Zn²⁺组成二种不同配比的VEN-Zn²⁺复方(1∶3和1∶1)。

    小鼠皮下注射VEN-Zn²⁺(1∶3)复方3.11-24mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，在5.18-24mg.kg^-1剂量范围内可联合剂量范围均可显著降低小鼠强迫游泳不动时间(见表6)。

    小鼠皮下注射复方VEN-Zn²⁺(1∶1)0.75-12mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，其中6mg.kg^-1和12mg.kg^-1可非常显著减少小鼠强迫游泳不动时间(见表7)。而单独给予同量的VEN(6mg.kg^-1)对小鼠强迫游泳无显著性影响。在此HIS-Zn²⁺在1∶1配伍复方中，显示有较强的协同抗抑郁作用。

    表6.小鼠皮下注射VEN-Zn²⁺(1∶3)对强迫游泳的影响

    VEN-Zn²⁺(1∶3)复方配比剂量           动物数

                                                      强迫游泳不动时间

           (mg.kg^-1)

    组别          VEN         HIS-Zn²⁺   (n)         (S，X±SD)

    溶剂对照      -           -           16          115.9±45.6

    VEN           6.00        -           16          97.6±40.1

    3.11          0.78        2.33        12          99.6±79.9

    5.18          1.30        3.89        12          79.3±56.9^*

    8.64          2.16        6.48        12          97.3±43.6

    14.40         3.60        10.80       12          63.3±53.0^**

    24.00         6.00        18.00       12          70.5±55.9^*

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、维拉发新(VEN)与VEN-Zn²⁺复方均在实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05，^**P＜0.01；与溶剂对照组比较。

    表7.小鼠皮下注射VEN-Zn²⁺(1∶1)复方对强迫游泳的影响

    VEN-Zn²⁺(1∶1)复方配比剂量       动物数

                                                 强迫游泳不动时间

           (mg.kg^-1)

    组别        VEN      HIS-Zn²⁺   (n)         (S，X±SD)

    溶剂对照    -        -           16          114.1±48.6

    VEN         6.00     -           12          85.0±47.8

    0.75        0.38     0.38        12          104.6±45.9

    1.50        0.75     0.75        12          85.8±48.9

    3.00        1.50     1.50        12          100.3±51.6

    6.00        3.00     3.00        12          57.7±53.9^**

    12.00       6.00     6.00        12          49.1±35.8^***

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、维拉发新(VEN)与VEN-Zn²⁺复方均在实验前24、5和1小时3次给药。^**P＜0.01；^***P＜0.001；与溶剂对照组比较。

    实施例3 FLU与HIS-Zn²⁺不同配比复方对小鼠强迫游泳的影响

    氟西汀(FLU)与HIS-Zn²⁺组成两种不同配比FLU-Zn²⁺(1∶3和1∶1)的复方。

    小鼠皮下注射FLU-Zn²⁺复方(1∶3)3.11-24mg.kg^-1。与溶剂对照组比较，其中14mg/kg可显著降低小鼠强迫游泳不动时间。而单独给予FLU 6mg.kg^-1对小鼠强迫游泳不动时间未见有显著影响(见表8)。

    表8.小鼠皮下注射FLU-Zn²⁺(1∶3)复方对强迫游泳的影响

    Flu-Zn(1∶3)复方配比剂量           动物数

                                                 强迫游泳不动时间

            (mg.kg^-1)

    组别          FLU      HIS-Zn²⁺   (n)       (S，X±SD)

    溶剂对照      -        -           14        101.2±62.7

    FLU           6.00     -           15        83.5±58.8

    3.11          0.78     2.33        12        81.6±51.5

    5.18          1.30     3.89        12        71.3±62.5

    8.64          2.16     6.48        12        69.8±56.9

    14.40         3.60     10.80       12        49.3±46.9^*

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、氟西汀(FLU)与FLU-Zn²⁺复方均在实

    验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05与蒸馏水对照组比较。

    实施例4 VEN与HIS-Zn²⁺不同配比对大鼠强迫游泳的影响

    大鼠皮下注射VEN-Zn²⁺复方(1∶1)1.5-12mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，3-12mg.kg^-1均可显著减少大鼠强迫游泳不动时间。而单独给予VEN 6mg.kg^-1对大鼠强迫游泳不动时间无显著影响(表9)。

    大鼠皮下注射VEN-Zn²⁺(1∶3)复方3.11-24mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，可剂量依赖性地降低大鼠强迫游泳不动时间。单独给予HIS-Zn²⁺18mg.kg^-1对大鼠强迫游泳不动时间无显著影响(表10)。

    表9.大鼠皮下注射VEN-Zn²⁺(1∶1)复方对强迫游泳地影响

    VEN-Zn²⁺(1∶1)复方配比剂量       动物数         强迫游泳不动时

              (mg.kg^-1)                                    间

    组别         VEN      HIS-Zn²⁺   (n)            (S，X±SD)

    溶剂对照     -        -           10             112.3±46.2

    VEN          6.00     -           10             89.6±38.5

    1.5          0.75     0.75        9              89.0±38.2

    3.0          1.50     1.50        10             70.1±45.8^*

    6.0          3.00     3.00        10             80.6±25.5^*

    12.0         6.00     6.00        10             72.2±16.7^**

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、维拉发新(VEN)与VEN-Zn复方均在实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较。

    表10.大鼠皮下注射VEN-Zn²⁺(1∶3)复方对强迫游泳的影响

    VEN-Zn²⁺(1∶3)复方配比剂量      动物数           强迫游泳不动时

          (mg.kg^-1)                                       间

    组别        VEN      HIS-Zn²⁺   (n)              (S，X±SD)

    溶剂对照    -        -           11               81.0±38.5

    HIS-Zn²⁺   -        18.00       11               66.0±35.5

    3.11        0.78     2.33        10               75.7±50.3

    5.18        1.30     3.89        10               71.7±50.9

    8.64        2.16     6.48        10               50.9±33.4^*

    14.4        3.60     10.80       10               45.6±28.5^*

    24.0        6.00     18.00       11               37.6±23.9<sup>**

     *</sup>P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较，n＝9-11。

    2.8 IMI与HIS-Zn²⁺不同配比复方对大鼠强迫游泳的影响

    大鼠皮下注射IMI-Zn²⁺复方(1∶1)1.5-12mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，6-12mg.kg^-1均可显著减少大鼠强迫游泳不动时间，IMI用量显著降低(表11)。

    大鼠皮下注射IMI-Zn²⁺复方(1∶3)3.11-24mg.kg^-1，与溶剂对照组比较，只有24mg.kg^-1组可显著减少大鼠强迫游泳不动时间。

    表11.大鼠皮下注射IMI-Zn²⁺(1∶1)复方对强迫游泳的影响

    IMI-Zn²⁺(1∶1)复方配比剂量(mg.kg^-1)    动物数        强迫游泳不动时

                                                                间

    组别            IMI         HIS-Zn²⁺    (n)           (S，X±SD)

    溶剂对照        -           -            14            113.6±37.8

    IMI             6.00        -            11            81.4±46.1^*

    1.5             0.75        0.75         11            96.7±48.9

    3.0             1.50        1.50         11            91.3±29.2

    6.0             3.00        3.00         11            76.9±42.8^*

    12.0            6.00        6.00         11            87.3±34.3^*

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、丙米嗪(IMI)与IMI-Zn²⁺复方均在实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较。

    表12.大鼠皮下注射IMI-Zn²⁺(1∶3)复方对强迫游泳的影响

    IMI-Zn²⁺(1∶3)复方配比剂量(mg.kg^-1)   动物数      强迫游泳不动时

                                                             间

    组别           IMI          HIS-Zn²⁺   (n)        (S，X±SD)

    溶剂对照       -            -            15         114.1±50.8

    5.18           1.30         3.89         11         88.2±47.2

    8.64           2.16         6.48         11         100.4±63.5

    14.4           3.60         10.80        11         99.0±40.4

    24.0           6.00         18.00        11         74.8±49.8^*

    溶剂对照(组氨酸100μmol)、IMI-Zn²⁺复方均在实验前24、5和1小时3次给药。^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较。