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用于治疗性功能障碍的选择性多巴胺D3受体激动剂
                        发明领域
本发明涉及用于治疗和/或预防性功能障碍，例如雌性性功能障碍(FSD)，特别是雌性性唤起障碍(FSAD)，性快感缺失(不能达到高潮)或性欲障碍例如减退性性欲障碍(HSDD；对性缺乏兴趣)的化合物和药物。优选治疗或预防伴随HSDD的FSAD。
本发明还涉及治疗和/或预防FSD，特别是FSAD、性快感缺失或HSDD的方法。优选治疗或预防伴随HSDD的FSAD。
本发明还涉及用以筛选可用于治疗和/或预防FSD，特别是FSAD、性快感缺失或HSDD的化合物的测定方法。优选治疗或预防伴随HSDD的FSAD。
本发明涉及用于治疗和/或预防雄性性功能障碍，特别是雄性勃起功能障碍(MED)的化合物和药物。在本文中提及的雄性性功能障碍包括射精障碍例如性快感缺失(不能达到高潮)，或性欲障碍例如减退性性欲障碍(HSDD；对性缺乏兴趣)。
本发明还涉及治疗和/或预防雄性性功能障碍，特别是MED的方法。
本发明还涉及用以筛选可用于治疗和/或预防雄性性功能障碍，特别是MED的化合物的测定方法。
在一个广泛的方面，本发明提供了包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物在制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用，其中当使用相同功能分析方法测定时，所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性比对多巴胺D2受体的功能选择性强至少约15倍。
                       发明背景
多巴胺激动剂
非选择性地激活脑中的多巴胺受体是在临床上得到证实的治疗雄性勃起功能障碍(MED)的机理。阿朴吗啡是一种这样的非选择性多巴胺激动剂，其作用于中枢神经系统内的多巴胺受体，并且可有效地治疗MED。
在本发明之前，通常知道阿朴吗啡和其它非选择性多巴胺受体激动剂诱导的致勃起作用和雌性性欲促动作用是通过D2(还称为D₂)多巴胺能受体激活来介导的(参见Andersson(2001)Am.Soc.OfPharmacology and Exp.Therapeutics，Vol 53，No.3，p417-450和Giuliano and Allard(2001)Int.J.Impotence Research，13，Suppl.3，S18-S28)。
特别是，Chen等人(J.of Urology，July 1999，Vol.162，237-242)提出：“阿朴吗啡所带来的ICP[海绵体内压]增加主要是由于PVN[室旁核中的D2受体亚型被激活所致”(见摘要)。
此外，在本发明之前的另一个确认是，据信刺激性行为是D2受体介导的，参见Meglasson M.D.等人.(2001)Abstr.Soc.Neurosci.，，其中描述：
“......脑中的多巴胺受体参与性行为。早期的发现表明，D1受体拮抗刺激D2受体的促性欲作用(Life Sci 51：1705)。这意味着选择性D2激动剂可能比混和型D1/D2激动剂例如阿朴吗啡更有效(APO；Ki：D1，56nM vs.D2，26nM)。我们使用了PNU-142774-一种选择性D2受体激动剂试验了该假设(Ki：D2，7nM vs.D1＞7uM)。在切除卵巢的、部分激素补充的雌性大鼠中，在施用50ug/kgPNU-142774E P.O.、50或250g/kg APO I.P.或安慰剂之后15-30分钟(时间间隔与药物+/-血浆Cmax匹配)，通过脊柱前凸/骑上比例(L/M)测定了性感受性。PNU-142774E将L/M从22+/-8％提高到65+/-10％(P＜0.01)。在所试验的剂量APO不增加L/M(在0、50和250ug/kg分别是％：10+/-5、11+/-5、0+/-0)。这些数据表明，选择性D2激动剂比APO-一种具有混和型D1/D2受体激动作用的药物更有效。为了证实选择性D2受体激动作用与性行为的相关性，在或不在性接受雌性猴子存在的情况下，在雄性恒河猴中试验了PNU-142774E。施用0、20、50或125ug/kg P.O.后4小时评价非接触性行为。20和50ug/kg的PNU-142774E增强了性行为(勃起、手淫)，当容许在视觉上与雌性猴子接触时，性行为得到进一步加强。在125ug/kg，性行为与安慰剂类似，这意味着存在双相剂量-反应关系。这些发现证实了多巴胺能药物的性行为刺激反映D2受体激活......”。
非选择性多巴胺激动剂例如阿朴吗啡、7-羟基-DPAT(7-OH-DPAT)和普拉克索都引起副作用，包括恶心、呕吐、晕厥、低血压和心搏徐缓，某些副作用引起严重担心。特别是，出于安全性方面的担心，目前美国食品和药品监督管理局(FDA)正在审查Uprima_(a.i.阿朴吗啡)，这是因为其引起严重副作用，包括晕厥、低血压和心搏徐缓。
已经克隆出了5种多巴胺受体。D1-样受体(D1和D5；还称为D₁和D₅)与D2-样受体(D2、D3和D4；还称为D₂、D₃和D₄)。“非选择性”是指在D2样受体家族的不同成员之间，特别是在D2与D3受体之间不表现出或仅表现出有限程度功能选择性。在WO 00/23056中提出，普拉克索(Pramipexole)是选择性D3受体激动剂。然而，随后的研究评估表明，相对于D2受体，普拉克索对D3受体的选择性仅为约9倍。这与Perachon等人.(1999)，European Joumal of Pharmacology，366，293-300中给出的数据一致。然而，另外的研究评估表明，相对于D2受体，普拉克索对D3受体的选择性仅小至为约5倍。这与其它(更早的)研究(参见Mierau等人.(1995)，European Journal ofPharmacology，290，29-36)一致。因此，显然这样的化合物仍然在D2受体上有活性，尽管在D3受体上活性稍强。当在本发明中提及时，这样的弱选择性D3受体激动剂不在本文所用术语“选择性D3受体激动剂”的范围内，本发明多巴胺D3激动剂对多巴胺D3受体有选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的选择性的至少3倍。
此外，据表明，对于多巴胺D3和D2受体，结合数据或结合选择性数据并不总是与功能数据或功能选择性数据有关或者反映功能数据或功能选择性数据。例如，当分析结合测定时，化合物PNU-95666((R)-5，6-二氢-N，N-二甲基-4H-咪唑4，5，1-ij)喹啉-5-胺)是D2选择性化合物(U95666A是高内在活性激动剂，对D2多巴胺受体有选择性.Lajiness M.E.等人.Abstr Soc Neurosci 1996，22：1(217)；(R)-5，6-二氢-N，N-二甲基-4H-咪唑4，5，1-ij)喹啉-5-胺及其代谢物的合成和生物活性，Heier，R.F.等人，(1997)，J.Med.Chem.40(5)639-646.)，但是在功能上，该化合物在D2和D3受体上有相同效力。因此，在现有技术中公开的称为选择性D3激动剂的化合物经常仅在结合方面是选择性D3激动剂，但是在功能上不是选择性D3受体激动剂。涉及本发明的本文所用术语“选择性”是指“功能选择性”。
性功能障碍
性功能障碍(SD)是既可以影响雄性，也可以影响雌性的严重临床问题。SD的原因可能是器质性的以及心理性的。SD的器质方面通常是由于血管疾病，例如与高血压或糖尿病有关的血管疾病，处方药物/精神病例如抑郁症引起的。心理因素包括恐惧、行为焦虑和人与人之间冲突。SD损害性质量，降低自尊心和使私人关系破裂，由此带来个人痛苦。在临床上，SD障碍被分为雌性性功能障碍(FSD)和雄性性功能障碍(MSD)病症(Melman等人1999)。FSD最好定义为妇女在性表达中难以或不能获得满足。雄性性功能障碍(MSD)通常与勃起功能障碍有关，还称为雄性勃起功能障碍(MED)(Benet等人1994-雄性勃起功能障碍评价和治疗选择.Comp.Ther.20：669-673)。
药物引起的性功能障碍可由于使用例如选择性血清素再摄取抑制剂(SSRi)和其它抗抑郁治疗剂(三环类和主要镇静剂)、抗高血压治疗剂和拟交感神经药物引起。这样的药物引起的性功能障碍的一个实例是性快感缺失(不能达到高潮)，这是既可以在雄性中发生也可以在雌性中发生的一种性欲高潮障碍。
本发明化合物可特别有利地用于预防和/或治疗雄性性功能障碍(例如雄性勃起功能障碍-MED)和雌性性功能障碍(FSD)例如雌性性唤起障碍(FSAD)、性快感缺失或性欲障碍例如减退性性欲障碍(HSDD；对性缺乏兴趣)。优选治疗或预防伴随HSDD的FSAD。
雌性性功能障碍(FSD)
依据本发明，FSD可定义为妇女在性表达中难以或不能获得满足。FSD是几种不同的雌性性功能障碍的统称(Leiblum，S.R.(1998)-雌性性功能障碍的定义和分类.Int J.Impotence Res.，10，S104-S106；Berman，J.R.，Berman，L.& Goldstein，I.(1999)-雌性性功能障碍：发生率、病生理、评价和治疗选择.Urology，54，385-391)。妇女可能有性欲缺乏、性唤起或性高潮困难、性交疼痛等问题或这些问题的组合。一些类型的疾病、药物治疗、损伤或心理上地问题都可引起FSD。正在开发中的治疗方法是针对治疗特定亚型的FSD，主要是性欲障碍和性唤起障碍。
FSD的类型最好通过将它们与正常雌性性反应阶段：性欲、性唤起和性高潮相对照来定义(Leiblum，S.R.(1998)-雌性性功能障碍的定义和分类.Int.J.Impotence Res.，10，S104-S106)。性欲或性冲动是性表达的驱动力。其表现通常包括当在感兴趣伙伴的交往中或者当暴露在其他色情刺激中时存在性想法。而性唤起是血管对性刺激的反应，其重要的组成部分是生殖器充血并包括阴道增加润滑和阴道伸长，以及生殖器感受性/敏感性提高。性高潮是性唤起达到高潮时性紧张的松驰。
因此，一般来说，当妇女在任一这些阶段，通常包括性欲、性唤起或性高潮中有不足或不满意的反应时便发生FSD。FSD类型包括退减性性欲障碍、性唤起障碍、性高潮障碍和性疼痛病症。虽然本发明化合物可提高生殖器对性刺激的反应(例如在雌性性唤起障碍中)，但是其同时还可以改善性交所带来的疼痛、痛苦或不适，因此可治疗其它雌性性功能障碍。
因此，依据本发明优选的方面，提供了本发明化合物在制备用于治疗或预防退减性性欲障碍、性唤起障碍、性高潮障碍和性疼痛病症，更优选用于治疗或预防性唤起障碍、性高潮障碍和性疼痛病症，最优选用于治疗或预防性唤起障碍的药物中的应用。
如果一个妇女没有或很少有性欲，并且没有或很少有性想法或性幻想，那么，她可能存在退减性性欲障碍(HSDD)。这种FSD可由低睾丸素水平引起，这是由自然绝经或外科手术造成的绝经引起的。其他原因包括疾病、药物、疲劳、抑郁和焦虑。对于性欲不足或缺乏性欲的判断可由临床医师考虑影响因素例如年龄和个人生活情况来作出。
雌性性高潮障碍(FOD)是在正常的性兴奋期之后持续或周期性发生的性高潮延迟或缺乏性高潮。雌性在引发性高潮的刺激类型和强度方面表现出广泛的可变性。FOD的诊断应当基于医师的判断，即判断雌性的性高潮能力低于对于其年龄、性经验和所接受的充分性刺激来说是适当的性高潮能力。FOD，尤其是缺乏性高潮，还称为“性快感缺失”。
性交疼痛病症(包括交媾困难和阴道痉挛)的特点是插入引起疼痛，并且可由减少润滑的药物、子宫内膜异位、骨盆炎性疾病、炎性肠道疾病或尿道问题引起。交媾困难是与性交有关的经常发生或持续的生殖器疼痛。阴道痉挛是阴道外面第三层肌肉组织的经常发生或持续的痉挛，这种痉挛影响了性交。
雌性性唤起障碍(FSAD)的特点是生殖器对性刺激不充足的反应。生殖器不经历正常性唤起特征的充血过程。阴道壁的润滑性差，所以出现性交疼痛。性高潮可能受到阻止。性唤起障碍可由绝经期、生育孩子后和哺乳期的雌激素减少引起，也可以由与血管组分有关的疾病如糖尿病和动脉粥样硬化引起。其他原因是由于用利尿药、抗组胺药、抗抑郁药，例如SSRI或抗高血压药治疗。
FSD的流行情况难以确定，这是因为该术语包括数种类型的问题，某些问题难以测定也因为最近才对FSD的治疗产生兴趣。许多妇女的性问题或者与雌性年龄增长直接相关或者与慢性疾病如糖尿病和高血压有关。
因为FSD由表示性反应周期各个阶段症状的几种亚型组成，所以没有单一的治疗方法。目前FSD的治疗主要地集中在心理问题或相关问题上。当更多的临床和基础科学研究致力于该医学问题的研究时，FSD的治疗逐渐地展开。从病理生理学方面来看，雌性的性抱怨并非都是心理性的或疾病生理性的，特别是对于那些可能患有造成所有雌性性抱怨原因的血管生成功能障碍(例如FSAD)的个体。现在还没有特许用于治疗FSD的药物。经验性药物治疗包括给予雌激素(局部给药或作为激素替代治疗)、雄性激素或调节情绪的药物如丁螺环酮或曲唑酮。由于低功效或无法接受的副作用，这些治疗选择通常不令人满意。
自从最近关注药物治疗FSD以来，治疗包括：心理指导、不用处方即可购买的性润滑剂和试验中的新药，包括批准用于治疗其他疾病的药物。这些药物包括激素类药物如睾丸素或雌激素与睾丸素的组合和近期证明对雄性勃起功能障碍(MED)有效的血管药物。
如上所述，本发明化合物可特别用于预防和/或治疗FSD，特别是FSAD、性快感缺失或HSDD。
退减性性欲障碍(HSDD)
如果一个妇女没有或很少有性欲，并且没有或很少有性想法或性幻想，那么，她可能存在HSDD。这种FSD可由低睾丸素水平引起，这是由自然绝经或外科手术造成的绝经引起的。在绝经前妇女(即处于绝经前并且没有进行过子宫切除术的妇女)和绝经后妇女中的其他原因包括疾病、药物、疲劳、抑郁和/或焦虑。具有可能的(有意识或下意识)心理影响的因素例如关系困难或宗教因素可能与雌性中HSDD的存在/发展有关。
雌性性唤起障碍(FSAD)
美国精神病学协会的诊断和统计手册(DSM)IV中将雌性性唤起障碍(FSAD)定义为：
“......一种持续的或经常发生的无力获得或保持足够的性刺激润滑-膨胀反应直到性活动完成。所述障碍必须引起显著的苦恼或与他人交往的问题......”。
性唤起反应包括骨盆血管充血、阴道润滑以及外生殖器扩张和膨胀。性唤起障碍引起显著的苦恼和/或与他人交往的问题。
FSAD是非常普遍的影响绝经前、绝经期和绝经后(±激素替代治疗(HRT))妇女的性机能障碍。与之有联系的伴发疾病是例如抑郁、心血管疾病、糖尿病和泌尿生殖器(UG)疾病。
FSAD的第一个后果是缺少充血/膨胀，缺少润滑和缺少愉快的生殖器感觉。FSAD的第二个结果是性欲降低、性交疼痛或获得性高潮困难。
最近有人假设，至少部分具有FSAD症状的病人是由于心血管方面的原因(Goldstein等人.，Int.J.Impot.Res.，10，S84-S90，1998)，并且动物数据支持该观点(Park等人，Int.J.Impot.Res.，9，27-37，1997)。
正处于疗效研究中的治疗FSAD的新药主要是促进雄性生殖器血液循环的勃起功能障碍治疗剂。它们包括两种类型的制剂，口服或舌下给药的药物(阿朴吗啡、酚妥拉明、5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂例如西地那非)和经雄性尿道注射或给予的以及经雌性生殖器局部给予的前列腺素(PGE₁)。
本发明化合物是有益的，因为其提供了恢复正常性唤起反应-即增加生殖器血流导致阴道、阴蒂和阴唇充血的方法。这将导致通过血浆渗出物使阴道的润滑作用增加、阴道的顺应性增加和生殖器的敏感性增加。因此，本发明提供了恢复或加强正常性唤起反应的方法。
本发明化合物之所以是有益的还因为，其提供了恢复(i)正常性欲和/或(ii)性兴趣，由此预防或治疗性欲降低障碍例如HSDD的方法。
在本文中，雌性生殖器是指“生殖器由内生殖器和外生殖器组成。内生殖器位于骨盆内并且由卵巢、尿管、子宫和阴道组成。外生殖器在泌尿生殖器隔膜表面并且在骨盆弓的下面。它们包括耻骨、大阴唇和小阴唇、阴蒂、前庭、前庭球和较大的前庭腺。”(Gray′s Anatomy，C.D.Clemente，13^th American Edition)。
R.J.Levin教导，“因为......雄性和雌性生殖器在胚胎中是由共同组织源发育的，所以有人提出雄性和雌性生殖器结构是彼此的同源物。因此阴蒂是阴茎的相应同源物，阴唇是阴囊的相应同源物......”(Levin，R.J.(1991)，Exp.Clin.Endocrinol.，98，61-69)。
雄性性功能障碍(MSD)
雄性性功能障碍(MSD)在本文中包括射精障碍例如性快感缺失(不能达到高潮)，或性欲障碍例如减退性性欲障碍(对性缺乏兴趣)。MSD还包括雄性勃起功能障碍(MED)。
雄性勃起功能障碍(MED)
还称为雄性勃起病症的雄性勃起功能障碍(MED)定义为：
“不能获得和/或保持阴茎勃起以实现满意性行为”(NIHConsensus Development Panel on Impotence，1993
据估计，在40到70岁之间的雄性中，所有程度(轻型、中型和完全阳痿)的勃起功能障碍(ED)的发病率为52％，并且在70岁以上的雄性中，发病率更高(Melman等人1999，J.Urology，161，p5-11)。该病症对个体及其配偶的生活质量有很大负面影响，经常导致焦虑和紧张，从而导致抑郁和降低自尊心。在20年前，MED主要被认为是心理障碍(Benet等人1994 Comp.Ther.，20：669-673)，现在已知，对于大部分个体有器质性原因。结果在确定正常阴茎勃起机制和MED病生理学方面有了很多进展。
阴茎勃起是血液动力学事件，其取决于阴茎海绵体平滑肌和阴茎血管的收缩与松弛之间的平衡(Lerner等人1993，J.Urology，149，1256-1255)。阴茎海绵体平滑肌在本文中还称为体平滑肌或多感觉阴茎海绵体。阴茎海绵体平滑肌的松弛导致流向阴茎海绵体的小梁空间内的血液增加，引起它们朝着周围的膜膨胀和压缩排放静脉。这使得血压巨大增加，从而导致勃起(Naylor，1998，J.Urology，81，424-431)。
在勃起过程中发生的改变很复杂，并且需要涉及周围和中枢神经系统以及内分泌系统的高度协调控制(Naylor，1998，J.Urology，81，424-431)。体平滑肌收缩是通过交感神经去甲肾上腺素能神经支配经由突触后α₁-肾上腺素受体的激活来调节的，MED可能与阴茎海绵体的内源性平滑肌紧张增加有关。然而，阴茎海绵体平滑肌的松弛过程是部分通过非肾上腺素能、非胆碱能(NANC)神经传递介导的。在阴茎中发现了除NO以外的多种其它NANC神经递质例如降钙素基因相关肽(CGRP)和血管活性肠肽(VIP)。调节该松弛作用的主要促尿钠排泄因子是一氧化氮(NO)，它是通过一氧化氮合酶(NOS)由L-精氨酸合成的(Taub等人1993 Urology，42，698-704)。据信，降低阴茎海绵体平滑肌紧张可有助于NO诱导阴茎海绵体松弛。在雄性的性唤起期间，NO从神经元和内皮中释放出来，并结合和激活位于平滑肌细胞和内皮内的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)，导致细胞内环鸟苷3’，5’-一磷酸(cGMP)水平增加。这种cGMP增加导致阴茎海绵体松弛，这是因为细胞内钙浓度([Ca²⁺]_i)降低所致，这种降低是经由据信涉及蛋白激酶G激活(可能由于Ca²⁺泵和Ca²⁺-激活的K⁺通道被激活所致)的未知机制。
最近，Pfizer开发了柠檬酸西地那非(还称为Viagra^TM)，这是第一个治疗MED的口服药物。西地那非通过抑制阴茎海绵体中cGMP分解来起作用，这是通过选择性地抑制磷酸二酯酶5(PDE5)，由此限制了cGMP水解成5’GMP(Boolel等人，1996，J.Urology，78，257-261；Jeremy等人，1997，Br.J.Urology，79，958-963)并由此增加细胞内cGMP浓度以及辅助阴茎海绵体平滑肌松弛来实现的。
目前，所有其它市售的MED治疗剂，例如用基于前列腺素的化合物，即可尿道内给药(作为Muse^TM得自Vivus Inc.)或经由小针头注射(作为Caverject^TM得自Pharmacia & Upjohn)的前列地尔进行治疗都不方便和/或有侵入性。其它治疗包括真空收缩装置、血管活性药物注射或阴茎假体植入(Montague等人，1996，J.Urology，156，2007-2011)。虽然血管活性药物表现出高效力，但是通常会出现副作用例如阴茎疼痛、纤维变性和阴茎异常勃起，注射治疗不如口服治疗方便。因此，目前在市场上西地那非是最优选的治疗药物。
因此，希望找到治疗雄性性功能障碍，特别是MED的新方法。
                         发明概述
本发明的生殖方面的发现是，多巴胺D2受体是造成施用非选择性多巴胺受体激动剂例如阿朴吗啡、普拉克索和7-羟基-DPAT后所观察到的副作用的原因。还令人惊奇地发现，通过选择性地激活多巴胺D3受体，可实现性功能障碍，特别是雄性勃起功能障碍(MED)和雌性性功能障碍，特别是雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD)的治疗，同时减轻和/或基本上消除施用非选择性激动剂后所观察到的副作用例如恶心、呕吐、晕厥、低血压和心搏徐缓中的一种或多种。我们发现，为了获得性功能障碍的满意治疗，同时有效地减轻和/或消除副作用，多巴胺D3激动剂必须对多巴胺D3受体有选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的选择性的至少3倍。本申请人已惊奇地发现，通过使用本发明选择性多巴胺D3激动剂，减轻或基本上消除施用非选择性多巴胺激动剂后所观察到的副作用例如恶心、呕吐和不利的心血管事件中的一种或多种。
因此，本发明化合物具有意料不到的优点，该优点是，与已知的多巴胺激动剂相比，不利副作用被减轻。
                         发明详述
在一个方面，本发明涉及包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物或药物组合物在生产或制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用，所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少3倍。
换句话说，所述选择性多巴胺D3受体激动剂对D3受体有功能选择性—相对于D2受体，所述选择性达到这样的程度，当使用相同功能测定，即用相同或基本上相同的参数测定本发明化合物与对照化合物普拉克索时，本发明化合物对D3受体的功能选择性是普拉克索所达到的对D3受体的功能选择性的至少3倍。
在另一个方面，本发明涉及包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物或药物组合物在生产或制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用，其中所述多巴胺D3激动剂不与一种或多种下列活性剂联合使用：NEP抑制剂、神经肽Y(NPY)抑制剂、铃蟾肽受体拮抗剂或能够调节个体性生殖器内中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道活性的活性剂。
在另一个方面，本发明涉及基本上由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物在制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用。
在另一个方面，本发明涉及由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物在制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用。
在另一个方面，本发明涉及包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物或药物组合物，其中所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少3倍；其中所述激动剂任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
在另一个方面，本发明涉及包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物或药物组合物，其中所述多巴胺D3激动剂不与一种或多种下列活性剂联合使用：NEP抑制剂、NPY抑制剂、铃蟾肽受体拮抗剂或能够调节个体性生殖器内中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道活性的活性剂，其中所述选择性多巴胺D3受体激动剂任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
在另一个方面，本发明涉及基本上由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物或药物组合物；其中所述组合物任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
在另一个方面，本发明涉及由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物或药物组合物；其中所述组合物任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
在另一个方面，本发明涉及治疗和/或预防人或动物中性功能障碍的方法，所述方法包括给个体施用有效量的包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物，其中所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少3倍，其中所述选择性多巴胺D3受体激动剂任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
在另一个方面，本发明涉及治疗和/或预防人或动物中性功能障碍的方法，所述方法包括给个体施用有效量的包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物，其中所述多巴胺D3激动剂不与一种或多种下列活性剂联合使用：NEP抑制剂、NPY抑制剂、铃蟾肽受体拮抗剂或能够调节个体性生殖器内中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道活性的活性剂，其中所述选择性多巴胺D3受体激动剂任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
在另一个方面，本发明涉及治疗或预防人或动物中性功能障碍的方法，所述方法包括给个体施用有效量的基本上由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物，其中所述组合物任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
在另一个方面，本发明涉及治疗或预防人或动物中性功能障碍的方法，所述方法包括给个体施用有效量的由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物，其中所述组合物任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。
本发明还提供了包括一个或多个隔室的药包，其中至少一个隔室包含一种或多种选择性多巴胺D3受体激动剂。
在另一个方面，本发明涉及包括一个或多个隔室的药包，其中至少一个隔室包含一种或多种组合物，所述组合物包含选择性多巴胺D3受体激动剂，其中所述多巴胺D3激动剂不与一种或多种下列活性剂联合使用：NEP抑制剂、NPY抑制剂、铃蟾肽受体拮抗剂或能够调节个体性生殖器内中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道活性的活性剂。
在另一个方面，本发明提供了包括一个或多个隔室的药包，其中至少一个隔室包含一种或多种基本上由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物。
在另一个方面，本发明提供了包括一个或多个隔室的药包，其中至少一个隔室包含一种或多种由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物。
本发明还提供了制备本发明药物组合物的方法，所述方法包括将一种或多种选择性多巴胺D3激动剂与可药用稀释剂、赋形剂或载体混和。
在另一个方面，本发明提供了制备本发明药物组合物的方法，所述方法包括将一种或多种选择性多巴胺D3激动剂与可药用稀释剂、赋形剂或载体混和，其中所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少3倍。
本发明还提供了制备本发明药物组合物的方法，所述方法包括将一种或多种基本上由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物与可药用稀释剂、赋形剂或载体混和。
本发明还提供了制备本发明药物组合物的方法，所述方法包括将一种或多种由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物与可药用稀释剂、赋形剂或载体混和。
在另一个方面，本发明涉及鉴定可用于治疗和/或预防雌性性功能障碍，特别是FSAD和/或HSDD，或雄性性功能障碍，特别是MED的活性剂(在下文中称为选择性多巴胺D3激动剂)的测定方法，所述测定方法包括：确定受试剂是否能够直接增强内源性生殖器充血过程或勃起过程；其中所述增强作用定义为在如本文所定义的受试剂存在下生殖器血流或海绵体内(i.c.)压(和/或海绵体血流)的增强；受试剂的这种增强作用是受试剂可用于治疗和/或预防雌性性功能障碍，特别是FSAD和/或HSDD，或雄性性功能障碍，特别是MED的指征，并且其中所述受试剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。优选地，活性剂在施用所述活性剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
在另一个方面，本发明涉及用于鉴定能够治疗或预防雌性性功能障碍，特别是FSAD和/或HSDD，或雄性性功能障碍，特别是MED的活性剂的动物模型，所述模型包括麻醉的雌性或雄性动物，并包括测定所述动物骨盆神经受刺激后，其阴道和/或阴蒂血流、海绵体内压和/或海绵体血流改变的方法；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。
动物模型还可以包括测定所述动物中或所述动物的下列参数的方法：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
在另一个方面，本发明涉及用于鉴定可直接增强内源性生殖器性唤起过程或勃起过程以治疗FSAD或MED的活性剂的测定方法，所述测定方法包括：给本发明动物模型施用活性剂；和测定内源性生殖器性唤起过程或勃起过程的改变；其中所述改变定义为在如本文所定义的受试剂存在下动物模型中阴道和/或阴蒂血流、海绵体内压(ICP)(和/或海绵体血流)的增加；并且其中所述受试剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。
在另一个方面，本发明涉及诊断方法，所述方法包括从雌性或雄性动物体内分离出样品；测定所述样品是否包含以引起雌性性功能障碍，优选FSAD和/或HSDD，或雄性性功能障碍，优选MED的量存在的实体物质；其中所述实体物质对所述雌性动物内源性生殖器性唤起过程或雄性动物阴茎海绵体中的勃起过程中具有直接影响；并且其中所述实体物质可通过使用活性剂进行调节以便获得有益的影响；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。
在另一个方面，本发明涉及诊断组合物或试剂盒，它包括用于检测分离的雌性或雄性动物样品中实体物质的方法；其中所述方法可用于测定所述样品是否包含所述实体物质并且以引起雌性性功能障碍，优选FSAD和/或HSDD，或雄性性功能障碍，优选MED的量存在，或者测定所述样品的量是否引起性功能障碍，优选FSAD和/或HSDD，或MED；其中所述实体物质对内源性生殖器性唤起过程或勃起过程具有直接影响，并且其中所述实体物质可通过使用活性剂进行调节以便获得有益的影响；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。
在另一个方面，本发明涉及诊断方法，所述方法包括从雌性或雄性动物体内分离出样品；测定所述样品是否包含以引起性功能障碍的量存在的实体物质；并且其中所述实体物质可通过使用活性剂进行调节而获得有益的影响；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。
在另一个方面，本发明涉及诊断组合物或试剂盒，它包括用于检测分离的雌性或雄性动物样品中实体物质的方法；其中所述方法可用于测定所述样品是否包含所述实体物质并且以引起性功能障碍的量存在；并且其中所述实体物质可通过使用活性剂进行调节而获得有益的影响；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。
为了易于参考，在适宜的章节标题下讨论本发明这些方面和其他方面。然而，每章节内容不必限制于各特定章节。
本文所用术语“包含”是指选择性多巴胺D3受体激动剂无需作为组合物中的单独活性组分，可以存在其它活性或非活性组分。
本文所用术语“活性组分”是指在性功能障碍(即雄性性功能障碍，优选MED，或雌性性功能障碍，优选FSAD和/或HSDD)的治疗中有活性的组分或成分。
本文所用术语“基本上......由组成”是指选择性多巴胺D3受体激动剂是组合物中的唯一活性组分。然而，可以存在其它非活性组分。
本文所用术语“由组成”是指，除了和限于按照需要包含可药用载体、稀释剂或赋形剂以外，选择性多巴胺D3受体激动剂是组合物中的唯一组分。
每一术语“选择性多巴胺D3受体激动剂”或“选择性多巴胺D3激动剂”或“选择性D3激动剂”或“选择性D3多巴胺受体激动剂”或“选择性D3多巴胺激动剂”或“D3选择性激动剂”在本文中是交替使用，并且是指对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比—的多巴胺D3受体激动剂，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少3倍。
涉及多巴胺D3受体激动剂的本文所用术语“功能选择性”是指与D2受体相比，能选择性地提高D3受体的作用或激活D3受体。类似地，涉及多巴胺D3受体激动剂的本文所用术语“功能选择性”是指与D1、D4或D5受体相比，能选择性地提高D3受体的作用或激活D3受体。
涉及本发明化合物的本文所用术语“选择性的”或“选择性”是指“功能选择性的”或“功能选择性”。
在本发明上下文中(即在“制备”或“生产”药物的上下文等中)，术语“制备’’和“生产”是同义词。
优选方面
本发明用于治疗或预防性功能障碍的活性剂优选是功能选择性多巴胺D3激动剂。
在一个实施方案中，依据本发明使用的活性剂优选用于口服给药。
在一个实施方案中，依据本发明使用的活性剂可用于局部给药或鼻内给药。
本发明活性剂优选用于治疗或预防雄性勃起功能障碍(MED)。
本发明活性剂优选用于治疗或预防雌性性功能障碍(FSD)。
本发明活性剂优选用于治疗或预防雌性性唤起障碍(FSAD)。
本发明活性剂优选用于治疗或预防减退性性欲障碍(HSDD)。
本发明活性剂优选用于治疗或预防雌性性唤起障碍(FSAD)和减退性性欲障碍(HSDD)(即治疗或预防伴随HSDD的FSAD)。
所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少5倍。
所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少10倍。
所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少20倍。
所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少25倍。
所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是对照的弱D3-优选性(非选择性)化合物普拉克索所达到的功能选择性的至少30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、110倍或120倍。
所述选择性D3受体激动剂在D3受体上表现出的功能效力以EC50表示小于1000nm，更优选小于100nm，还更优选小于50nm，最优选小于10nm。
本发明还包括在性唤起/刺激之前和/或期间施用本发明活性剂。
因此，对于本发明的某些方面，非常需要性唤起/刺激步骤。
在本文中，“性唤起/刺激”可以是一种或多种视觉性唤起/刺激、身体性唤起/刺激、听觉性唤起/刺激或思维性唤起/刺激。
因此，优选地在性唤起/刺激之前或期间施用本发明活性剂，特别是当那些活性剂用于口服给予时。
其它优选方面
如上所述，已经确定了普拉克索对D3受体的功能选择性—相对D2受体—仅高约5倍-约9倍。因此，如果本发明选择性多巴胺D3受体激动剂被描述为“......对多巴胺D3受体有功能选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种功能选择性是普拉克索所达到的功能选择性的至少3倍......”，则这可以另外表示为，本发明多巴胺D3受体激动剂“当使用相同功能分析测定时，对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—多至少约15倍-约27倍”(即当使用相同功能分析测定时，对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—为至少3×约5倍(＝至少约15倍)至3×约9倍(＝至少约27倍))。
类似地，当陈述本发明D3受体激动剂的功能选择性是普拉克索所达到的功能选择性的至少5倍时，这相当于，当使用相同功能分析测定时，D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—多至少约25倍-约45倍。
类似地，当陈述本发明D3受体激动剂的功能选择性是普拉克索所达到的功能选择性的至少10倍时，这相当于，当使用相同功能分析测定时，D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—多至少约50倍-约90倍。
类似地，当陈述本发明D3受体激动剂的功能选择性是普拉克索所达到的功能选择性的至少20倍时，这相当于，当使用相同功能分析测定时，D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—多至少约100倍-约180倍。
类似地，当陈述本发明D3受体激动剂的功能选择性是普拉克索所达到的功能选择性的至少25倍时，这相当于，当使用相同功能分析测定时，D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—多至少约125倍-约225倍。
在这方面，本发明提供了下列其它(编号的)方面：
1.包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物在制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用，其中当使用相同功能分析测定时，所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—为至少约15倍，优选至少约27倍，更优选至少约30倍，最优选至少约100倍。所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选在施用所述选择性多巴胺D3受体激动剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
2.方面1的应用，其中所述应用是基本上由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物在制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用。
3.方面1或方面2的应用，其中所述应用是由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物在制备用于治疗和/或预防性功能障碍的药物中的应用。
4.前述方面任一项的应用，其中所述应用是在制备用于治疗和/或预防雄性勃起功能障碍(MED)的药物中的应用。
5.方面1-3任一项的应用，其中所述应用是在制备用于治疗和/或预防雌性性功能障碍(FSD)的药物中的应用。
6.方面5的应用，其中所述应用是在制备用于治疗和/或预防雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD)的药物中的应用。
7.前述方面任一项的应用，其中所述药物经口或鼻内给药。
8.前述方面任一项的应用，其中所述选择性多巴胺D3受体激动剂是在性唤起之前和/或期间给药。
9.包含选择性多巴胺D3受体激动剂的药物组合物，其中当使用相同功能分析测定时，所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—为至少约15倍，优选至少约27倍，更优选至少约30倍，最优选至少约100倍；并且其中所述激动剂任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选在施用所述选择性多巴胺D3受体激动剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
10.治疗或预防人或动物中性功能障碍的方法，所述方法包括给个体施用有效量的包含选择性多巴胺D3受体激动剂的组合物，其中当使用相同功能分析测定时，所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—为至少约15倍，优选至少约27倍，更优选至少约30倍，最优选至少约100倍；并且其中所述选择性多巴胺D3受体激动剂任选与可药用载体、稀释剂或赋形剂混和。所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选在施用所述选择性多巴胺D3受体激动剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
11.方面10的治疗或预防人或动物中性功能障碍的方法，所述方法包括给个体施用有效量的基本上由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物。
12.方面10或方面11的治疗或预防人或动物中性功能障碍的方法，所述方法包括给个体施用有效量的由选择性多巴胺D3受体激动剂组成的组合物。
13.方面10-12任一项的方法，其中所述性功能障碍是雄性勃起功能障碍(MED)。
14.方面10-12任一项的方法，其中所述性功能障碍是雌性性功能障碍(FSD)。
15.方面14的方法，其中所述雌性性功能障碍(FSD)是雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD)。
16.鉴定可用于治疗和/或预防性功能障碍的活性剂(在下文中称为选择性多巴胺D3激动剂)的测定方法，所述测定方法包括：确定受试剂是否能够直接增强内源性生殖器充血过程或勃起过程；其中所述增强作用定义为在如本文所定义的受试剂存在下生殖器血流或海绵体内压和/或海绵体血流的增加；受试剂的这种增强作用是受试剂可用于治疗和/或预防性功能障碍的指征，并且其中所述受试剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。优选地，活性剂在施用所述活性剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
17.通过方面16的测定方法鉴定的活性剂。
18.用于口服或鼻内给药以治疗性功能障碍的方法，其中所述药物包含方面17的活性剂。
19.诊断方法，所述方法包括从雌性或雄性动物体内分离出样品；测定所述样品是否包含以引起雌性性功能障碍或雄性性功能障碍的量存在的实体物质；其中所述实体物质对所述雌性动物内源性生殖器性唤起过程或雄性动物阴茎海绵体中的勃起过程中具有直接影响；并且其中所述实体物质可通过使用活性剂进行调节而获得有益的影响；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选在施用所述选择性多巴胺D3受体激动剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
20.诊断组合物或试剂盒，它包括用于检测分离的雌性或雄性动物样品中实体物质的方法；其中所述方法可用于测定所述样品是否包含所述实体物质并且以引起雌性性功能障碍或雄性性功能障碍的量存在，或者测定所述物质的量是否引起性功能障碍；其中所述实体物质对内源性生殖器性唤起过程或勃起过程具有直接影响，并且其中所述实体物质可通过使用活性剂进行调节而获得有益的影响；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选在施用所述选择性多巴胺D3受体激动剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
21.用于鉴定能够治疗或预防雌性性功能障碍或雄性性功能障碍的活性剂的动物模型，所述模型包括麻醉的雌性或雄性动物，并包括测定所述动物骨盆神经受刺激后，其阴道和/或阴蒂血流、海绵体内压和/或海绵体血流改变的方法；并且其中所述活性剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。优选地，所述动物模型还可以包括测定所述动物中或所述动物的下列参数的方法：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
22.用于鉴定可直接增强内源性生殖器性唤起过程或勃起过程以治疗FSAD或MED的活性剂的测定方法，所述测定方法包括：给依据方面21的动物模型施用活性剂；和测定内源性生殖器性唤起过程或勃起过程的改变；其中所述改变定义为在如本文所定义的受试剂存在下动物模型中阴道和/或阴蒂血流、海绵体内压(ICP)(和/或海绵体血流)的增加；并且其中所述受试剂是选择性多巴胺D3受体激动剂。所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选在施用所述选择性多巴胺D3受体激动剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
23.由一种或多种选择性多巴胺D3受体激动剂与一种或多种下列辅助剂组成的组合在制备用于治疗或预防性功能障碍的药物中的应用，其中当使用相同功能分析测定时，所述多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—为至少约15倍，优选至少约27倍，更优选至少约30倍，最优选至少约100倍：
(i)天然或合成前列腺素或其酯；
(ii)α-肾上腺素能受体拮抗剂化合物，其还称为α-肾上腺素能受体或α-受体或α-阻断剂；
(iii)NO-供体(NO-激动剂)化合物；
(iv)钾通道打开剂或调节剂；
(v)血管舒张剂；
(vi)血栓烷A2激动剂；
(vii)CNS活性剂；
(viii)麦角生物碱；
(ix)调节促尿钠排泄(naturetic)因子，特别是心房促尿钠排泄因子(还称为心房松弛肽)，B型和C型促尿钠排泄因子作用的化合物，例如中性内肽酶(NEP)抑制剂；
(x)抑制中性内肽酶(NEP)的化合物；
(xi)血管紧张素拮抗剂；
(xii)NO-合酶的底物；
(xiii)钙通道阻断剂；
(xiv)内皮素受体拮抗剂和内皮素转化酶抑制剂；
(xv)降胆固醇剂；
(xvi)抗血小板和抗血栓形成剂；
(xvii)胰岛素增敏剂；
(xviii)L-DOPA或卡比多巴；
(xix)乙酰胆碱酯酶抑制剂；
(xx)甾类或非甾类抗炎剂；
(xxi)雌激素受体调节剂和/或雌激素激动剂和/或雌激素拮抗剂；
(xxii)PDE抑制剂；
(xxiii)血管活性肠肽(VIP)，VIP模拟物，VIP类似物，尤其是由一种或多种VIP受体亚型VPAC1、VPAC或PACAP(垂体腺苷酸环化酶激活肽)介导的那些，一种或多种VIP受体激动剂或VIP类似物(例如Ro-125-1553)或VIP片段，一种或多种α-肾上腺素受体拮抗剂与VIP的组合(例如Invicorp，Aviptadil)；
(xxiv)黑皮质素受体激动剂或调节剂或黑皮质素增强剂；
(xxv)血清素受体激动剂、拮抗剂或调节剂，尤其是5HT1A的激动剂、拮抗剂或调节剂；
(xxvi)睾酮替代剂或睾酮植入剂；
(xxvii)单独或联合使用的雌激素、雌激素和甲羟孕酮或乙酸甲羟孕酮(MPA)，或雌激素和甲睾酮激素替代治疗剂；
(xxviii)去甲肾上腺素、多巴胺和/或血清素转运蛋白调节剂；
(xxix)嘌呤能受体激动剂和/或调节剂；
(xxx)神经激肽(NK)受体拮抗剂；
(xxxi)阿片样物质受体激动剂、拮抗剂或调节剂，优选ORL-1受体激动剂；
(xxxii)催产素/后叶加压素受体的激动剂或调节剂，优选选择性催产素激动剂或调节剂；
(xxxiii)大麻素受体调节剂；
(xxxiv)SEP抑制剂(SEPi)，例如IC₅₀小于100nm，更优选小于50nm的SEPi；
(xxxv)NPY抑制剂；
(xxxvi)铃蟾肽受体拮抗剂；或
(xxxvii)能够调节个体性生殖器内中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道活性的活性剂。
所述一种或多种辅助剂优选选自：
(a)PDE抑制剂(PDEi)，例如PDE5i、PDE2i、PDE3i、PDE7i、PDE8i(其中PDE2i和PDE5i是最优选的)；
(b)抑制中性内肽酶(NEP)的化合物；
(c)α-肾上腺素能受体拮抗剂化合物，其还称为α-肾上腺素能受体或α-受体或α-阻断剂，特别是α1-肾上腺素能受体拮抗剂(例如US2002/0161009 A1中公开的α1B-肾上腺素受体)和α2-肾上腺素受体拮抗剂例如育亨宾；
(d)NPY-Y1拮抗剂；
(e)降胆固醇剂例如他汀类药物(例如阿托伐他汀(Lipitor^TM))；
(f)雌激素受体调节剂和/或雌激素激动剂和/或雌激素拮抗剂，例如拉索昔芬或雷洛昔芬；
(g)雄激素受体调节剂和/或雄激素激动剂和/或雄激素拮抗剂，例如替勃龙；
(h)睾酮替代剂或睾酮植入剂；和
(i)单独或联合使用的雌激素、雌激素和甲羟孕酮或乙酸甲羟孕酮(MPA)，或雌激素和甲睾酮激素替代治疗剂。
所述一种或多种辅助剂更优选选自：
i)一种或多种睾酮、睾酮替代剂(包括脱氢雄(甾)烷二酮)、睾酮(Tostrelle)、二氢睾酮或睾酮植入剂；
ii)一种或多种雌二醇、雌激素、雌激素和甲羟孕酮或甲羟孕酮乙酸盐(MPA)(即作为联合治疗剂)或雌激素和甲睾酮激素替代治疗剂(例如HRT，特别是妊马雌酮、Cenestin、Oestrofeminal、Equin、Estrace、Estrofem、Elleste Solo、Estring、Eastraderm TTS、Eastraderm Matrix、Dermestril、Premphase、Preempro、Prempak、Premique、Estratest、Estratest HS、替勃龙)；
iii)一种或多种另外的PDE抑制剂，尤其是PDE2、4、5、7或8抑制剂，优选PDE2抑制剂，所述抑制剂抗各自的酶的IC50优选小于100nM；
iv)一种或多种NEP抑制剂，优选其中所述NEP是EC 3.4.24.11，更优选其中所述NEP抑制剂是EC 3.4.24.11的选择性抑制剂，更优选选择性NEP抑制剂是EC 3.4.24.11的选择性抑制剂，并且IC₅₀小于100nM(例如ompatrilat，山帕曲拉)，合适的NEP抑制剂化合物描述于EP-A-1097719中；
v)一种或多种NPY(神经肽Y)抑制剂，尤其是NPY1或NPY5抑制剂，优选NPY1抑制剂，所述NPY抑制剂(包括NPY Y1和NPY Y5)的IC₅₀优选小于100nM，更优选小于50nM；和
vi)一种或多种雌激素受体调节剂和/或雌激素激动剂和/或雌激素拮抗剂，优选雷洛昔芬或拉索昔芬，(-)-顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢萘-2-酚及其可药用盐，WO 96/21656中详细描述了其制备。
所述一种或多种辅助剂最优选选自：
●睾酮；
●雌二醇；
●睾酮与雌二醇的组合；
●拉索昔芬；
●拉索昔芬与睾酮的组合；
●拉索昔芬与雌二醇的组合；
●拉索昔芬、睾酮与雌二醇的组合。
在雌性中，通常优选的组合是本发明的选择性D3受体激动剂与生殖器血管活性剂和/或激素替代治疗剂(HRT)、雌激素、雄激素、SERM(选择性雌激素受体调节剂)或SARM(选择性雄激素受体调节剂)的组合。SERM的实例包括拉索昔芬或雷洛昔芬。SARM的一个实例是替勃龙。
所述抑制NEP的化合物(NEP抑制剂；NEPi)优选是描述在例如EP1097719 A1或WO 02/03995 A2中的那些。所述NPY抑制剂优选是描述在例如EP 1097718 A1或WO 02/47670 A1中的那些。所述铃蟾肽受体拮抗剂优选是描述在例如WO 02/40008 A2或US 2002/0058606A1中的那些。所述能够调节个体性生殖器内中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道活性的活性剂优选是描述在例如WO 02/17963 A2中的那些。
所述选择性多巴胺D3受体激动剂优选在施用所述选择性多巴胺D3受体激动剂的个体中不引起或仅引起极小程度的任一下列副作用：恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
24.方面23的应用，其中所述PDE抑制剂是PDE 2、3、4、5、7或8抑制剂。
25.方面24的应用，其中所述PDE5抑制剂是西地那非。
26.方面23-25任一项的应用，其中所述应用是在制备用于治疗雄性勃起功能障碍(MED)的药物中的应用。
27.方面23-25任一项的应用，其中所述应用是在制备用于治疗雌性性功能障碍(FSD)的药物中的应用。
28.方面27的应用，其中所述应用是在制备用于治疗雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD)的药物中的应用。
优选地，其中当使用相同功能分析测定时，所述选择性多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—多至少约20、25、27、30、45、50、90、100、125、135、180、200、225、250、270、300、400、500-或至少约600倍。
优选地，所述本发明选择性多巴胺D3受体激动剂对非多巴胺D3受体例如多巴胺D1、D4或D5受体具有很小或没有功能作用。
优选地，当使用结合亲和力分析以1×10^-5M浓度测定时，所述本发明选择性多巴胺D3受体激动剂对多巴胺D1、D4或D5受体没有作用。
已经在研究中表明，普拉克索对于多巴胺D3受体的EC₅₀(“50％有效浓度”—还写为EC50—本文中定义为“诱导50％最大激动反应所需的激动剂浓度”)是0.62nM，对于多巴胺D4受体的EC₅₀是37.7nM，所述EC₅₀是用将cAMP水平降低50％的有效浓度(nM)测量的。因此，当使用相同功能分析测定时，普拉克索对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D4受体相比—为约60倍(约37.7/0.62)。如上所述，当使用相同功能分析测定时，本发明选择性多巴胺D3激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D2受体相比—为至少3倍，优选至少5、10、20或25倍。因此，由此可见，当使用相同功能分析测定时，本发明选择性多巴胺D3激动剂对多巴胺D3受体的功能选择性—与多巴胺D4受体相比—为至少3×60倍，优选至少约5×60倍、至少约10×60倍、至少约20×60倍或至少约25×60倍(即至少约180倍，优选至少约300倍、至少约600倍、至少约1200倍或至少约1500倍)。
优选地，所述本发明选择性多巴胺D3受体激动剂避免或改善了剂量限制性不利副作用。所述被避免或改善的副作用更优选为呕吐(即呕吐/恶心)和/或低血压效应(例如低血压(优选起立性低血压)、降低的血液、增加的心输出量或增加的心搏率(心搏过速))和/或降低的心搏率(心搏徐缓)。最优选地，所述选择性多巴胺D3受体激动剂在≥10倍，优选≥100倍下述剂量下避免或改善了所述剂量限制性不利副作用：即当使用非本发明化合物(例如非选择性多巴胺受体激动剂或非多巴胺D3受体激动剂(例如选择性D2受体激动剂或D3/D2受体激动剂)例如阿朴吗啡(非选择性多巴胺激动剂)、普拉克索(弱D3-优选性D3/D2受体激动剂)或反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺(选择性D2受体激动剂)(参见附图1))时，不利副作用超过有益(预防/治疗)作用时的剂量。
优选地，所述本发明多巴胺D3受体激动剂将促性作用(例如勃起)与上述剂量限制性副作用之间的治疗窗口增加至非本发明化合物的治疗窗口的≥10倍，优选≥100倍(例如非选择性多巴胺受体激动剂或非多巴胺D3受体激动剂(例如选择性D2受体激动剂或D3/D2受体激动剂)例如阿朴吗啡(非选择性多巴胺激动剂)、普拉克索(弱D3-优选性D3/D2受体激动剂)或反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺(选择性D2受体激动剂)(参见附图1))。
选择性D2受体激动剂，反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺的化学结构如下所示：

优选地，所述功能分析测定用所述选择性多巴胺D3受体激动剂处理的D3受体表达细胞和D2受体表达细胞内的cAMP细胞内水平，由此得到cAMP水平的比例(D3受体表达细胞：D2受体表达细胞)，其中选择性多巴胺D3受体激动剂表现出，与D2受体表达细胞相比，D3受体表达细胞中的cAMP水平高至少约15倍，优选至少约27倍，更优选至少约30倍，最优选至少约100倍。还优选的是，所述选择性多巴胺D3受体激动剂表现出，与D2受体表达细胞相比，D3受体表达细胞中的cAMP水平高至少约45、50、90、100、125、135、180、200、225、250、270、300、400、500倍或至少约600倍。所述功能测定优选是cAMP酶联免疫测定(酶免疫测定(EIA)或酶联免疫吸着测定法(ELISA))，其它功能测定也是本领域技术人员已知的。这样的cAMP酶联免疫测定可称为“D3/D2受体激动剂功能测定”，这样的测定的一个实例可参见下文。基本上，该分析测定表达多巴胺受体的细胞中的细胞内cAMP水平。受体亚型的人D2家族(即D2、D3和D4)经由G-蛋白的Gi亚型起作用以抑制腺苷酸环化酶。该功能测定依赖毛喉素来刺激腺苷酸环化酶以提高细胞中的cAMP形成水平。如果将受试化合物与细胞一起培养并且起激动剂作用，则cAMP水平会降低，因为Gi蛋白被刺激而抑制腺苷酸环化酶并由此抑制cAMP形成。细胞内的cAMP细胞内水平用市售cAMP EIA试剂盒(Amersham Pharmacia Biotech)测定的。涉及优选的本发明功能测定的下列文献引入本文以供参考：
1.O′SULLIVAN，M.J.，CAPPER，S.，WHATELEY，J.HORTON，J.K.，BAXENDALE，P.M.，Immunoassay Applications in Life ScienceResearch.In：Wild，D.，(Ed)The Immunoassay Handbook，NaturePublishing Group，pp.817-845，2001。
2.HORTON，J.K.，SEDDON，L.J.，WILLIAMS A.S.BAXENDALE P.M.A method for measuring intracellular cycl ic AMP levels withimmunoassay technology and novel，cellular lysis reagents.Br.J.Pharmacol.(Suppl)，123，p.31，1998。
3.Conversion of the cAMP direct screening assay to a 384well format.Amersham Biosciences，Proximity Headlines 4，1998。
4.ICHIKAWA等人，Identifi cation and role of adenylylcyclase in auxin signaling in higher plants.Nature，390，pp.698-701，1997。
5.Direct quantitation of intracellular levels ofcAMP-eliminating lengthy extraction processes.NycomedAmersham，Life Science News 23，1997。
6.Direct and in situ measurement of cAMP in cell culturewith scintil lation proximity radioimmunoassay.AmershamInternational，Proximity News 34，1997。
7.High throughput screening for cAMP formation byscintillation proximity radioimmunoassay.AmershamInternational，Proximity News 23，1996。
8.HORTON，J.K.，BAXENDALE，P.M.，Mass measurements ofcyclic AMP formation by radioimmunoassay，enzyme immunoassayand scintillation proximity assay.In：Kendall，D.A.，和Hill，S.J.，(Eds)Meth，in Mol.Biol，41，pp.95-105，1995。
9.HORTON，J.K.，SMITH，L.，ALI，A.，BAXENDALE，P.M.，NEUMANN，K.，KOLB，A.，High throughput screening for cAMPformation by scintillation proximity radioimmunoassay.PackardInstrument Company TopCount Topics 21，pp.1-4，1995。
10.HORTON，J.K.，MARTIN，R.C.，KALINKA，S.，CUSHING，A.KITCHER，J.P.，O′SULLIVAN，M.J.，BAXENDALE，P.M.Enzymeimmunoassays for the estimation of adenosine 3′，5′cyclicmonophoSphate and guanosine 3′，5′cyclic monophosphate inbiological fluids.J.Immunological Methods，155，pp.31-40，1992。
另一种合适的功能测定可参见Perachon等人.(1999)，EuropeanJournal of Pharmacology，366，293-300。
另一种合适的功能测定可参见由本申请人在2002年11月6日提交的未结案专利申请EP 02257707.6，该申请引入本文以供参考。在EP 02257707.6中公开的测定是用于测定G蛋白连接受体例如神经受体的激动剂化合物的激活作用的测定方法，所述方法是基于使用荧光显影平板读数器(FLIPR)，包括：
(a)产生具有至少一种合适的选择因子的细胞系，所述选择因子选自抗药性标记物，所述标记物选自HEK293-Gα15，所述细胞系稳定地表达选自Gα15的滥交G蛋白，然后将编码所选G连接受体的cDNA转染到所述细胞系内让所述G连接受体在所述细胞系中共同表达；
(b)让共同表达的细胞在合适的培养基中生长；
(c)将所述细胞铺平板约1天；
(d)向铺平板的细胞中加入一定量适于所述目的的荧光染料；
(e)将加入染料的细胞在室温-约37℃培养约1小时；
(f)用合适的缓冲液洗涤平板以除去过量染料，用类似体积的新鲜缓冲液替换被除去的缓冲液；
(g)在约30℃-约37℃培养；
(h)在约30℃-约37℃的恒定温度条件下加入激动剂化合物；和
(i)在荧光显影平板读数器中于约30℃-约37℃的恒定温度条件下测定荧光发射，以测定激动剂化合物激活所选受体的水平。
在该测定的一个实施方案中，G-连接受体是多巴胺或组胺受体。在其它实施方案中，G-连接受体选自D2、D3、α1A、α2A、M1、H1、5HT1A和5HT2A受体。在另一个特定的实施方案中，所述G-连接受体是多巴胺D3受体。在该测定的另一个实施方案中，所述选自抗药性标记物选择因子是抗嘌呤霉素标记物。在该测定的另一个实施方案中，所述选自抗药性标记物的选择因子是杀稻瘟菌素(blastocidin)标记物。用于实施EP 02257707.6的测定方法的优选的荧光染料是Fluo-3^TM或Fluo-4^TM。铺平板的细胞的密度优选为约12,000-约30,000个细胞/cm²。在该测定的另一个实施方案中，培养步骤(g)进行约15分钟-约60分钟。所述培养步骤(g)优选进行约30分钟。
令人惊奇且意料不到的发现
本发明证实了下列令人惊奇且意料不到的发现：
(a)激活或刺激多巴胺D2受体是引起不利副作用例如恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓的原因。
(b)使用选择性多巴胺D3受体激动剂选择性地激活或刺激多巴胺D3受体可有效地治疗或预防雄性或雌性中的性功能障碍，特别是MED和FSAD和/或HSDD，同时不引起施用非选择性多巴胺激动剂后所观察到的不利副作用。D3受体激动剂在本质上是性行为诱发剂。
优点
本发明是有利的，因为：
(a)通过使用选择性多巴胺D3受体激动剂选择性地以多巴胺D3受体为靶目标实现治疗或预防性功能障碍(雄性和雌性)，特别是治疗或预防MED和FSAD和/或HSDD，同时有效地减轻或消除了施用非选择性多巴胺激动剂后所观察到的不利副作用例如恶心、呕吐、晕厥、低血压或心搏徐缓。
患者组
雌性
本发明化合物可应用于下列FSD亚群体：进行或未进行激素替代治疗的年轻、老年、绝经前、绝经期间或绝经后妇女。
本发明化合物可应用于由于下列原因引起的FSD患者：
i)血管原性病因，例如心血管或动脉粥样硬化疾病、高胆固醇血症、吸烟、糖尿病、高血压、辐照和会阴创伤或髂下腹阴部血管系统的创伤性损伤；
ii)神经性病因，例如脊柱损伤或中枢神经系统疾病，包括多发性硬化、糖尿病、帕金森综合征、脑血管意外、外周神经病、创伤或根部骨盆手术；
iii)激素/内分泌病因，例如下丘脑/垂体/生殖腺轴机能障碍、卵巢机能障碍、胰腺机能障碍、手术或药物阉割、雄激素不足、高循环水平的催乳激素例如高促性腺激素血症、自然绝经、早熟性卵巢衰竭或甲状腺机能亢进或甲状腺机能减退；
iv)精神性病因，例如抑郁症、强迫观念与行为障碍、焦虑症、产后抑郁症/“Baby Blues”、情绪和相关问题、行为焦虑症、婚姻不和谐、机能障碍体态、性恐惧、宗教禁止或创伤性经历；或
v)由于用选择性血清素再摄取抑制剂(SSRi)和其它抗抑郁治疗剂(三环类和主要镇静剂)、抗高血压治疗剂和拟交感神经药物或长期口服避孕药丸而导致的药物引起的性功能障碍。
雄性
轻度和中度MED患者应当可以受益于使用本发明化合物的治疗，而严重MED患者也可以用本发明化合物治疗。然而，以前的研究提出，使用选择性D3激动剂/PDE5抑制剂(PDE5i)组合，轻度、中度和严重MED患者的响应者比例可能更大。轻度、中度和严重MED是本领域技术人员已知的术语，并且可参见The Journal of Urology，vol.151，54-61(Jan 1994)。
以前的研究提出，下述MED患者组应当可以受益于使用选择性D3激动剂和PDE5i(或其它下文列出的组合)进行的治疗。在ClinicalAndrology vol.23，no.4，p773-782以及该书的第3章，Mosby-Wolfe出版I.Eardley和K.Sethia的“Erectile Dysfunction-CurrentInvestigation and Management”，更详细描述的这些患者组如下：精神性、器质性、血管、内分泌性、神经性动脉原性、药物引起的性功能障碍(催乳激素原性)以及与阴茎海绵体因素，特别是静脉原因的性功能障碍。
多巴胺D3受体
如上所述，活性剂可以是起选择性多巴胺D3受体激动剂作用的任意合适的活性剂。
Victor A.McKusick等人已经在http://www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm.上制作了关于多巴胺D3受体的背景教导。从该来源中摘出涉及D3受体的下列文件：
“Sokoloff等人(1990)[Nature 347：146-151]描述了多巴胺受体的特征，与D1和D2受体在药理和信号系统方面不同，并且代表自身受体和突触后受体。多巴胺受体D3位于脑的边缘区域，与认知、情绪和内分泌功能有关。其似乎介导抗精神病药物与用于治疗帕金森病的药物的某些作用，以前认为这些药物仅与D2受体相互作用。通过使用逆转录和PCR筛选cDNA和基因组文库，Sokoloff等人(1990，出处同上)克隆了DRD3基因。与DRD2基因类似，但是与该超家族的大部分其它成员不同，DRD3基因含有内含子，总共5个。其中的2个内含子的位置相当于DRD2中的内含子的位置。Le Coniat等人(1991)[Hum.Genet.Sep；87(5)：618-20]通过将基因组探针杂交流动分类的染色体而将DRD3基因分配到第3号染色体，并且通过原位杂交使其定位于带3q13.3上。”
Sokoloff等人(1990，出处同上)使用源自D2多巴胺受体序列的探针从大鼠cDNA库中首次克隆出了D3受体。之后很快报道了人D3受体的克隆(Giros等人(1990)CR Acad.Sci.III，311：501-508)，再之后报道了小鼠D3受体(Fishburn等人(1993)J.Biol.Chem.268：5872-5878)。
多巴胺D3受体序列数据
多巴胺D3受体的核苷酸序列和氨基酸序列可从文献中获得(参见Sokoloff等人(1990)；Giros等人(1990)；和Fishburn等人(1993)出处同上)。
下文的序列表中给出了人多巴胺D3受体的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)和氨基酸序列(SEQ ID NO：2)。
选择性D3激动剂
选择性多巴胺D3受体激动剂是这样的化合物，当与多巴胺D3受体联合时，其引起生理反应，并且对多巴胺D3受体有选择性—与多巴胺D2受体相比，其中当使用相同功能分析测定时，这种选择性是化合物普拉克索所达到的选择性的至少3倍。也就是说，本发明选择性多巴胺D3受体激动剂对D3受体的选择性是化合物普拉克索的至少3倍。
下文在题为“D3激动剂测定”的部分中详细描述了用于鉴定和/或研究多巴胺D3受体激动剂的合适的测定系统。
下文在实施例部分(“化学实施例”)中提供了合适的选择性多巴胺D3受体激动剂以及与其有关的中间体的实施例。
D3激动剂测定
如上所述，对于多巴胺D3受体和D2受体，结合数据或结合选择性数据并不总是与功能数据或功能选择性数据有关或者反映功能数据或功能选择性数据。在本发明中，“选择性”是指“功能选择性”。
D3/D2激动剂结合测定
Gonazalez等人(Eur.J.Pharmacology 272(1995)R1-R3)公开了用于测定化合物在D3和/或D2多巴胺受体上的结合能力，以及由此测定这样的化合物的结合选择性的测定方法。该测定在下文中称为结合测定。
D3/D2激动剂功能测定
下文详细描述了用于测定化合物在D3和/或D2多巴胺受体上的功能活性的合适的测定方法。
通过观察分别表达人D2和D3受体的GH4C1和CHO细胞系中的cAMP水平来评价化合物作为多巴胺D2和D3受体的激动剂或拮抗剂的作用。
实验方法
材料
●细胞培养基

HD2LhD₂LGH4C1培养基HD₃CHO培养基Hams F-10(Sigma N6013)DMEM，高葡萄糖(Sigma D5671)2mM L-谷胺酰胺(Sigma G7513)2mM L-谷胺酰胺(Sigma G7513)10％ FBS(Gibco 10106-169)10％透析的FBS(Sigma F0392)700μg/ml Geneticin(Gibco 10131-019)20nM甲氨蝶呤水合物(Sigma M8407)
表达克隆的人多巴胺受体的两种贴壁细胞系是：
hD₂LGH4C1-表达人多巴胺D2长受体的大鼠垂体细胞；和
hD₃CHO-表达人多巴胺D3受体的缺乏二氢叶酸还原酶基因的中国仓鼠卵巢细胞。
其生长所需的培养基如下所述每周用新鲜的培养基补足，并且在使用之前经由0.22μM滤器过滤。培养基在4℃贮藏，并且温热至37℃后加到细胞中。
●细胞解离溶液：
使用(Sigma C-5914)10-15ml从225cm²烧瓶(对于hD2LGH4C1细胞在37℃培养5分钟，对于hD3CHO细胞在37℃培养10分钟)中收获细胞。
●KRH缓冲液：
如下所述制备KRH：
KH₂PO₄  (BDH-1025034B)       1.2mM    163mg/l
NaCI     (Fisher-S/3160/60)    1.45M    8.47g/l
KCI      (Sigma-P-9333)        5mM      373mg/l
MgSO₄    (BDH-101514Y)         1.2mM    296mg/l
CaCl₂    (Sigma-C-5080)        1mM      147mg/l
Hepes     (Sigma-H-7523)         25mM     5.96g/l
葡萄糖    (BDH-101176K)          5mM      0.9g/l
在室温用蒸馏水补足至1升，并将pH调节至pH7.4。在4℃贮藏最长达1周。
●3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)：
将(Sigma 17018)以100mM的浓度溶解在DMSO中。通过在KRH缓冲液中进行1∶100稀释来制备1mM的10×测定贮备液。将20μl加到200μl的测定终体积中，使最后的测定浓度为100μM/孔。
●毛喉素：
将(Calbiochem 344273)以10mM的浓度溶解在水中。(该贮备液在+4℃贮藏)。通过在KRH缓冲液中进行100和50倍稀释来制备100μM和200μM的10×测定贮备液。将20μl加到200μl的测定终体积中，使测定终浓度为10μM-对于D2细胞和20μM-对于D3细胞。
●受试化合物：
以10mM的浓度溶解在100％DMSO中，在KRH缓冲液中进行稀释以获得在1％DMSO/KRH中100μM/孔的顶层浓度(在测定中，在0.1％DMSO/KRH中10μM/孔)。在1％DMSO/KRH中进一步稀释(10×测定浓度)：10μM、1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM和0.001nM。
将20μl加到200μl的测定终体积中，给出下列测定终浓度：1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM和0.001nM。
通常测定1e-5-1e-12的化合物。
在该测定中还包括下列化合物：
阿朴吗啡
1e-5-1e-12的测定
完全激动剂
●cAMP酶免疫测定：
除非另有说明，所有材料均由Amersham Pharmacia Biotech cAMPEIA kit(RPN 225)供给。
●微量滴定板：
包被有驴抗-兔IgG的96孔板。
●测定缓冲液：
0.05M乙酸钠缓冲液，pH5.8，稀释后含有0.02％牛血清白蛋白和0.01％防腐剂。将该瓶的内容物转移到带刻度的量筒中，用3×15ml蒸馏水洗涤。然后将终体积调节至500ml。
●cAMP标准物(用于非乙酰化测定)：
重新配制后cAMP浓度为3200fmol/ml。将标准物溶解在2ml裂解试剂1B(见下文)中以使用。
●抗体：
兔抗-cAMP。将抗体溶解在11ml裂解试剂2B(见下文)中以使用。
●过氧化物酶缀合物：
cAMP-辣根过氧化物酶。将过氧化物酶缀合物溶解在11ml测定缓冲液中以使用。
●洗涤缓冲液：
0.01M磷酸盐缓冲液，pH7.5，稀释后含有0.05％吐温20。将该瓶的内容物转移到带刻度的量筒中，用3×15ml蒸馏水洗涤。然后将终体积调节至500ml。
●TMB底物：
3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)/过氧化氢，在20％(v/v)二甲基甲酰胺中。
●裂解试剂1：
溴化十二烷基三甲基铵(重新配制后为25mg/ml)。将粉末转移到100ml带刻度的量筒中，用3×15ml洗涤缓冲液洗涤。将体积调节至60ml，搅拌直至溶解。然后用测定缓冲液将终体积补足至80ml。
●裂解试剂1B：
用测定缓冲液将5ml裂解试剂1稀释至50ml。
●裂解试剂2：
5g固体不含任何归为危险品的化学药品。将粉末转移到100ml带刻度的量筒中，用3×15ml洗涤缓冲液洗涤。将体积调节至80ml，搅拌直至溶解。然后用测定缓冲液将终体积补足至100ml。
●裂解试剂12B：
用测定缓冲液将10ml裂解试剂2稀释至40ml。
●硫酸(1M)：
由18M贮备液(BDH)制备1M硫酸。将11ml酸加到189ml蒸馏水中。
特定装置
分光平板读数器(Spectra max 190)。
微量滴定板摇动器/培养器(Wesbart)。
方法
冷冻安瓿的重新配制
将安瓿从液氮中取出，平衡2分钟，因为捕集的气体或液体有可能引起安瓿迅速膨胀和爆炸。在融化之前，也可以将它们在-20℃放置。
让安瓿在水浴中于37℃迅速和完全融化。
小心地将内容物转移到15ml管中。缓慢地加入2ml培养基，然后加入另外8ml培养基。
将细胞悬浮液转移到T25烧瓶中，在37C、5％CO₂下培养24小时。注意，hD₃CHO细胞可直接铺在T225烧瓶内，因为它们是迅速生长的细胞；所需培养基的量是50ml。
细胞收获和裂解：
一般将细胞在周一和周三分盘，以在周二和周四进行分析。如果铺得太满而不能保留一个周末的话，也可以将细胞在周五分盘。非常重要的是，不能让hD₃CHO细胞的生长超过80％汇合度，因为一旦生长至超过该点，它们就不能收集。
让细胞在T225烧瓶(Jumbos)中生长。加到细胞中的每种组分都必须在使用前温热至37℃。
细胞收获：
将生长培养基从烧瓶中去除，用温热的PBS(Gibco.14040-091)洗涤2次，并取出。
1.将大约10ml细胞解离缓冲液(Sigma C5914)加到细胞中，在培养器中放置约5分钟(D₃细胞与烧瓶的粘着力强于D₂细胞，因此D₄细胞需要更长的时间来脱壁)。
2.在从培养器中取出时，急速地叩击烧瓶以将任何剩余的细胞从瓶底脱壁下来。
3.将约10ml完全培养基加到细胞中，并用来洗涤烧瓶的侧壁。将细胞以1000rpm离心5分钟以将细胞沉淀。
4.弃去培养基，使用10ml新鲜的培养基将细胞重悬。取出100μl，与100μl台盼蓝(Sigma T8154)合并以计数。
分盘比例：
hD₂LGH4C1在1∶3至1∶6之间分盘。
hD₃CHO在1∶5至1∶10之间分盘(这两个细胞系生长的较快)。
为测定接种：
需要50,000个细胞/200μl/孔等于2.5×10⁵个细胞/ml。将细胞稀释至2.5×10⁵个细胞/ml，将200μl加到组织培养96孔板的孔中。将所有细胞保持在37℃、5％CO₂下。
细胞系的低温保存：
产生自己细胞的细胞库以复苏来进一步使用是很好的办法。
1.以与前面相同的方式收获细胞。
2.计数细胞。
3.冷冻培养基含有完全培养基加10％DMSO，将细胞重悬以获得2-4×10⁶个细胞/ml的密度。将细胞悬浮液分成1ml的等份试样。
4.在-80℃冰箱中，使用‘Mr Frosty’将细胞在1℃到3℃冷冻过夜，然后转移到气相氮贮存容器中。
建议在冷冻后通过将一支安瓿融化来测试细胞存活率。70％以下的存活率可能会由于低的细胞数目和存在碎屑而引起回收问题。
测定细胞中的cAMP细胞内水平：
在前一天，将细胞以50,000个细胞/孔的密度铺在无菌96-孔板内的培养基(见上文)中，终体积为200μl/孔，在37℃、5％CO₂下培养过夜(O/N)。
如上所述补足KRH缓冲液，并温热至37℃。
配制IBMX、毛喉素和受试化合物，并如上所示进行稀释。
将细胞用200μl KRH缓冲液洗涤1次。
将下列物质加到每个孔中：    HD2LhD₂GH4C1细胞    hD₃CHO细胞    120μl KRH缓冲液    120μl KRH缓冲液    20μl IMBX(100μM/孔)    20μl IMBX(100μM/孔)    2 0μl毛喉素(10μM/孔)    20μl毛喉素(20μM/孔)    20μl激动剂    20μl激动剂    20μl拮抗剂或1％DMSO    20μl拮抗剂或1％DMSO
对照：仅毛喉素空白DMSO对照拮抗剂对照160μl KRH缓冲液200μl KRH120μl KRH缓冲液120μl KRH缓冲液20μl IMBX(100μM/孔)20μl IMBX(100μM/孔)20μl IMBX(100μM/孔)20μl毛喉素(10μM/孔)20μl毛喉素(10μM/孔)20μl毛喉素(10μM/孔)40μl 1％DMSO20μl 1％DMSO20μl拮抗剂
将平板在37℃摇动45分钟。
45分钟后，抽吸出测定混合物，向细胞中加入200μl裂解试剂1B。
将细胞摇动20分钟，然后通过反复吸移来进一步裂解(约20次/孔)。
cAMP酶免疫测定：
将贮备试剂平衡至室温，制备工作溶液(如上所述)。在eppendorf管中制备cAMP标准物，并标记为12.5、25、50、100、200、400、800、1600和3200fmol。向每个管中加入0.5ml裂解试剂1B。将0.5ml稀释的标准物加到3200fmol管中。将管涡旋，将0.5ml加到1600fmol管中。继续进行其它稀释。
将20μl(hD₂)和100μl(hD₃)每一细胞裂解液转移到EIA平板内，并且，对于hD2样本，用裂解试剂1B补足至100μl。hD3样本中不在加入任何试剂。将100μl每一标准物和初始标准物以一式两份放置到平板内。设置下列对照：
零标准物：100μl裂解试剂1B
NSB：100μl裂解试剂1B和2B
空白：没有加入
将100μl抗体加到除空白孔和NSB孔之外的所有孔中，然后在4℃培养2小时。
培养后，将50μl过氧化物酶缀合物加到除空白孔之外的所有孔中，在4℃再培养1小时。
通过涂在吸水纸上让平板变空，用400μl洗涤缓冲液洗涤4次。然后向每个空中加入150μl TMB底物。
将平板在室温摇动30分钟，然后将1M硫酸加到所有孔中。
在30分钟内，在Spectramax 190上于450nM读取光密度。
计算
使用Excel和Origin模板的组合来进行计算。
在Excel中通过将对照OD数据百分比(y-轴)对着log cAMP(x-轴)mol/孔作图来产生标准曲线。标准曲线限制在0-100。
使用由标准曲线产生的变量可由标准曲线预测每个孔中的cAMP。
用于由乙状曲线预测给出反应的剂量的公式。
x = c ( y - a d - y ) 1 / b ]]>
其中：a＝下渐近线
      b＝斜率
      c＝IC₅₀
      d＝上渐近线
●cAMP预测针对每个OD读数，并且以DMSO对照的百分比表示。
●将化合物的Log浓度(x-轴)对着对照反应百分比(y-轴)绘图，可产生乙状剂量反应曲线，由该曲线可获得EC₅₀浓度。
组合
更详细来说，本发明还包括用于治疗如本文所述的性功能障碍(尤其是雄性性功能障碍，特别是MED，或雌性性功能障碍，特别是FSAD和/或HSDD)的本发明化合物与一种或多种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)的组合。所述组合给雄性和雌性性功能障碍，特别是器质性、血管性、神经性、药物引起的和/或精神性勃起功能障碍提供治疗。
本发明还包括基本上由本发明选择性多巴胺D3受体激动剂与两种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的组合在生产或制备用于治疗或预防如本文所述的雄性性功能障碍(尤其是雄性勃起功能障碍(MED)或雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD))的药物中的应用。所述组合给器质性、血管性、神经性、药物引起的和/或精神性性功能障碍提供了治疗。
本发明还包括由本发明选择性多巴胺D3受体激动剂与两种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的组合在生产或制备用于治疗或预防如本文所述的性功能障碍(尤其是雄性勃起功能障碍(MED)或雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD))的药物中的应用。所述组合给器质性、血管性、神经性、药物引起的和/或精神性勃起功能障碍提供了治疗。
本发明还包括基本上由本发明选择性多巴胺D3受体激动剂与一种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的组合在生产或制备用于治疗或预防如本文所述的雄性性功能障碍(尤其是雄性勃起功能障碍(MED)或雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD))的药物中的应用。所述组合给器质性、血管性、神经性、药物引起的和/或精神性性功能障碍提供了治疗。
本发明还包括由本发明选择性多巴胺D3受体激动剂与一种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的组合在生产或制备用于治疗或预防如本文所述的雄性性功能障碍(尤其是雄性勃起功能障碍(MED)或雌性性唤起障碍(FSAD)和/或减退性性欲障碍(HSDD))的药物中的应用。所述组合给器质性、血管性、神经性、药物引起的和/或精神性勃起功能障碍提供了治疗。
在雄性中，以及在某些情况下在雌性中，选择性多巴胺D3受体激动剂与一种或多种辅助剂的组合优选不包括一种或多种下列活性剂：NEP抑制剂、NPY抑制剂、铃蟾肽受体拮抗剂或能够调节个体性生殖器内中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道活性的活性剂。
仅在雌性中，在某些情况下，本发明选择性多巴胺D3受体激动剂可以与NEP抑制剂或NPY抑制剂之一或者两者联合使用。因此，本发明包括这样的组合在治疗雌性性功能障碍(例如FSAD和/或HSDD)中的应用(仅对于雌性)。本发明还提供了包含或仅含选择性多巴胺D3受体激动剂和NEP抑制剂和/或NPY抑制剂中的一种或两种的药物组合物在治疗雌性性功能障碍(例如FSAD和/或HSDD)中的应用。这样的药物组合物还可以适当地包含一种或多种辅助剂(参见下文中适当实例的讨论)。
因此，本发明另一个组合方面提供了包含本发明化合物与一种或多种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)的药物组合(用于同时、分隔或顺序给药)。
本发明另一个组合方面提供了基本上由选择性多巴胺D3激动剂与两种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的药物组合物(用于同时、分隔或顺序给药)。
本发明另一个组合方面提供了由选择性多巴胺D3激动剂与两种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的药物组合物(用于同时、分隔或顺序给药)。
本发明另一个组合方面提供了基本上由选择性多巴胺D3激动剂与一种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的药物组合物(用于同时、分隔或顺序给药)。
本发明另一个组合方面提供了由选择性多巴胺D3激动剂与一种辅助活性剂(参见下文中适当实例的讨论)组成的药物组合物(用于同时、分隔或顺序给药)。
辅助活性剂
适用于本发明组合的辅助活性剂包括：
1)天然或合成的前列腺素或其酯。适用于本发明的前列腺素包括化合物例如前列地尔、前列腺素E₁、前列腺素E₀、13，14-二氢前列腺素E₁、前列腺素E₂、eprostinol，天然合成和半合成前列腺素及其衍生物，包括在WO-00033825和/或于2000年3月14日公布的US6,037,346中描述的那些(这两篇专利引入本文以供参考)，PGE₀、PGE₁、PGA₁、PGB₁、PGF₁α、19-羟基-PGA₁、19-羟基-PGB₁、PGE₂、PGB₂、19-羟基-PGA₂、19-羟基-PGB₂、PGE₃α、卡前列氨丁三醇、氨丁三醇、地诺前列酮、lipoprost、吉美前列素、甲烯前列素、硫前列酮、噻前列素和moxisylate；
2)α-肾上腺素能受体拮抗剂化合物，其还称为α-肾上腺素能受体或α-受体或α-阻断剂。适用于本发明的化合物包括：于1998年6月14日公布的PCT申请WO99/30697中描述的α-肾上腺素能受体阻断剂，其涉及α-肾上腺素能受体阻断剂的公开内容引入本文以供参考，并包括选择性α₁-肾上腺素受体或α₂-肾上腺素受体阻断剂和非选择性肾上腺素受体阻断剂，合适的α₁-肾上腺素受体阻断剂包括：酚妥拉明、甲磺酸酚妥拉明、曲唑酮、阿夫唑嗪、吲哚拉明、萘哌地尔、坦洛新、达哌唑、苯氧苄胺、咪唑克生、efaraxan、育亨宾、蛇根木生物碱、Recordati 15/2739、SNAP 1069、SNAP 5089、RS 17053、SL 89.0591、多沙唑嗪、特拉唑嗪、阿巴诺喹和哌唑嗪；α₂-阻断剂：US 6,037,346[2000年3月14日]中描述的α₂-阻断剂、地苯那明、妥拉唑林、曲马唑嗪和双苄胺；下列美国专利中描述的α-肾上腺素能受体：4,188,390；4,026,894；3,511,836；4,315,007；3,527,761；3,997,666；2,503,059；4,703,063；3,381,009；4,252,721和2,599,000，每一专利均引入本文以供参考；α₂-肾上腺素受体阻断剂包括：可乐定、罂粟碱、罂粟碱盐酸盐，任选存在cariotonic剂例如pirxamine；
3)NO-供体(NO-激动剂)化合物。适用于本发明的NO-供体化合物包括有机硝酸盐，例如一硝酸盐、二硝酸盐或三硝酸盐，或有机硝酸酯包括甘油三硝酸酯(还称为硝酸甘油)，5-单硝酸异山梨酯、二硝酸异山梨酯、季戊四醇四硝酸酯、赤藓醇四硝酸酯、硝普化钠(SNP)、3-morphoLInosydnonimine吗多明、S-亚硝基-N-乙酰基青霉胺(SNAP)、S-亚硝基-N-谷胱甘肽(SNO-GLU)、N-羟基-L-精氨酸、硝酸戊酯、林西多明、林西多明氯水合物(chlorohydrate)、(SIN-1)S-亚硝基-N-半胱氨酸、diazenium diolates、(NONOates)、1，5-戊二硝酸盐、L-精氨酸、人参、枣果实(zizphi fructus)、吗多明、Re-2047、如在PCT申请WO 0012075中描述的亚硝基化maxisylyte衍生物例如NMI-678-11和NMI-937；
4)钾通道打开剂或调节剂。适用于本发明的钾通道打开剂/调节剂包括尼可地尔、色满卡林、左色满卡林、来马卡林、吡那地尔、cliazoxide、米诺地尔、charybdotoxin、格列本脲、4-氨基吡啶、BaCl₂；
5)血管舒张剂。适用于本发明的血管舒张剂包括尼莫地平、吡那地尔、环扁桃酯、异克舒令、chloroprumazine、氟哌啶醇、Rec 15/2739，曲唑酮；
6)血栓烷A2激动剂；
7)CNS活性剂；
8)麦角生物碱。合适的麦角生物碱描述在于2000年3月14日公布的US专利6,037,346中，并包括醋麦角胺、溴麦角林、溴麦角脲、氰麦角林、delorgotrile、地舒勒近、马来酸麦角新碱、酒石酸麦角胺、乙舒麦角、麦角腈、lysergide、mesulergine、甲麦角林、甲麦角胺、尼麦角林、培高利特、普罗麦角、丙麦角脲和特麦角脲；
9)调节松弛(naturetic)因子，特别是心房促尿钠排泄因子(还称为心房松弛肽)，B型和C型促尿钠排泄因子作用的化合物，例如中性内肽酶(NEP)抑制剂；
10)抑制中性内肽酶(NEP)的化合物；
11)血管紧张素受体拮抗剂例如氯沙坦；
12)NO-合酶的底物，例如L-精氨酸；
13)钙通道阻断剂例如氨氯地平；
14)内皮素受体拮抗剂和内皮素转化酶抑制剂；
15)降胆固醇剂例如他汀类药物(例如阿托伐他汀/Lipitor^TM)和贝特类药物(fibrate)；
16)抗血小板和抗血栓形成剂，例如tPA、uPA、华法林、水蛭素和其它凝血酶抑制剂、肝素、促凝血酶原激酶活化因子抑制剂；
17)胰岛素增敏剂例如曲格列酮和降血糖剂例如格列吡嗪。
18)L-DOPA或卡比多巴；
19)乙酰胆碱酯酶抑制剂例如多奈哌齐(donezipil)；
20)甾类或非甾类抗炎剂；
21)雌激素受体调节剂和/或雌激素激动剂和/或雌激素拮抗剂，优选雷洛昔芬或拉索昔芬、(-)-顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢萘-2-酚及其可药用盐，其制备描述在WO 96/21656中；
23)PDE抑制剂，尤其是PDE 2、3、4、5、7或8抑制剂，优选PDE2或PDE5抑制剂，最优选PDE5抑制剂(见下文)，所述抑制剂抗各自酶的IC50优选小于100nM(条件是PDE3和4抑制剂仅局部给药或通过注射给阴茎来给药)；
22)血管活性肠肽(VIP)，VIP模拟物，VIP类似物，尤其是由一种或多种VIP受体亚型VPAC1、VPAC或PACAP(垂体腺苷酸环化酶激活肽)介导的那些，一种或多种VIP受体激动剂或VIP类似物(例如Ro-125-1553)或VIP片段，一种或多种α-肾上腺素受体拮抗剂与VIP的组合(例如Invicorp，Aviptadil)；
23)黑皮质素受体激动剂或调节剂或黑皮质素增强剂，例如melanotan II、PT-14、PT-141或在下列专利中要求保护的化合物：WO-09964002、WO-00074679、WO-09955679、WO-00105401、WO-00058361、WO-00114879、WO-00113112、WO-09954358；
24)血清素受体激动剂、拮抗剂或调节剂，尤其是5HT1A(包括VML670)、5HT2A、5HT2C、5HT3和/或5HT6受体的激动剂、拮抗剂或调节剂，包括在WO-09902159、WO-00002550和/或WO-00028993中描述的那些；
25)睾酮替代剂(包括脱氢雄(甾)烷二酮)、睾酮(Tostrelle)、二氢睾酮或睾酮植入剂；
26)雌激素、雌激素和甲羟孕酮或甲羟孕酮乙酸盐(MPA)(即作为联合治疗剂)或雌激素和甲睾酮激素替代治疗剂(例如HRT，特别是妊马雌酮、Cenestin、Oestrofeminal、Equin、Estrace、Estrofem、Elleste Solo、Estring、Eastraderm TTS、Eastraderm Matrix、Dermestril、Premphase、Preempro、Prempak、Premique、Estratest、Estratest HS、替勃龙)；
27)去甲肾上腺素、多巴胺和/或血清素的转运蛋白调节剂调节剂，例如丁氨苯丙酮、GW-320659；
28)嘌呤能受体激动剂和/或调节剂；
29)神经激肽(NK)受体拮抗剂，包括在WO-09964008中描述的那些；
30)阿片样物质受体激动剂、拮抗剂或调节剂，优选ORL-1受体激动剂；
31)催产素/后叶加压素受体的激动剂或调节剂，优选选择性催产素激动剂或调节剂；
32)大麻素受体调节剂；
33)SEP抑制剂(SEPi)，例如IC₅₀小于100nm，更优选小于50nm的SEPi。
优选地，本发明SEP抑制剂对SEP的选择性—相对于中性内肽酶NEP EC 3.4.24.11和血管紧张素转化酶(ACE)—大于30倍，更优选大于50倍。SEPi的选择性—相对于内皮素转化酶(ECE)—大于100倍。
在本文中交叉引用可依据本发明使用的包含在专利和专利申请中的化合物时，我们意指如在权利要求书和具体实施例中定义的治疗活性化合物(所有这些都引入本文以供参考)。
如果施用活性剂的组合，它们可同时、分隔或顺序给药。
辅助剂-PDE5抑制剂
任何特定cGMP PDE5抑制剂的适用性可通过使用文献方法评价其效力和选择性，然后依据标准药物操作评价其毒性、吸收性、代谢、药代动学性质等来容易地确定。
cGMP PDE5抑制剂的IC50值可使用PDE5测定(见下文)来确定。
用于本发明药物组合中的cGMP PDE5抑制剂优选对PDE5酶有选择性。优选地(当口服使用时)，它们相对于PDE3具有PDE5选择性，更优选相对于PDE3和PDE4具有PDE5选择性。优选地(当口服使用时)，相对于PDE3，更优选相对于PDE3和PDE4，本发明cGMP PDE5抑制剂具有大于100，更优选大于300的选择性比例。
选择性比例可由本领域技术人员容易地确定。对于PDE3和PDE4酶的IC50值可使用已确立的文献方法测定，参见S A Ballard等人，Journal of Urology，1998，vol.159，p.2164-2171，及本文在下面对详细描述的方法。
适于依据本发明使用的cGMP PDE5抑制剂包括：
公开在EP-A-0463756中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开在EP-A-0526004中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 93/06104中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 93/07149中的异构吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 93/12095中的喹唑啉-4-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 94/05661中的吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 94/00453中的嘌呤-6-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 98/49166中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 99/54333中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开在EP-A-0995751中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-4-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 00/24745中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开在EP-A-0995750中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-4-酮化合物；出版的国际专利申请WO 95/19978中公开的化合物；出版的国际专利申请WO 99/24433中公开的化合物和出版的国际专利申请WO 93/07124中公开的化合物。公开在出版的国际专利申请WO 01/27112中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开在出版的国际专利申请WO 01/27113中的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；EP-A-1092718中公开的化合物和EP-A-1092719中公开的化合物。
适于依据本发明使用的其它PDE5抑制剂包括：
5-[2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(西地那非)，还称为1-[[3-(6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺酰基]-4-甲基哌嗪(参见EP-A-0463756)；5-(2-乙氧基-5-吗啉代乙酰基苯基)-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见EP-A-0526004)；3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-正丙氧基苯基]-2-(吡啶-2-基)甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO 98/49166)；3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基]-2-(吡啶-2-基)甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO 99/54333)；(+)-3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-(2-甲氧基-1(R)-甲基乙氧基)吡啶-3-基]-2-甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，还称为3-乙基-5-{5-[4-乙基哌嗪-1-基磺酰基]-2-([(1R)-2-甲氧基-1-甲基乙基]氧基)吡啶-3-基}-2-甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO 99/54333)；5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-[2-甲氧基乙基]-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，还称为1-{6-乙氧基-5-[3-乙基-6，7-二氢-2-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-2H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基]-3-吡啶基磺酰基}-4-乙基哌嗪(参见WO 01/27113，实施例8)；5-[2-异丁氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-(1-甲基哌啶-4-基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO 01/27113，实施例15)；5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-苯基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO 01/27113，实施例66)；5-(5-乙酰基-2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-异丙基-3-氮杂环丁烷基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO 01/27112，实施例124)；5-(5-乙酰基-2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-氮杂环丁烷基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d嘧啶-7-酮(参见WO 01/27112，实施例132)；(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-甲基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮(IC-351)，即在出版的国际专利申请WO95/19978的实施例78和95的化合物以及实施例1、3、7和8的化合物；2-[2-乙氧基-5-(4-乙基-哌嗪-1-基-1-磺酰基)-苯基]-5-甲基-7-丙基-3H-咪唑并[5，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮(伐地那非)，还称为1-[[3-(3，4-二氢-5-甲基-4-氧代-7-丙基咪唑并[5，1-f]-as-三嗪-2-基)-4-乙氧基苯基]磺酰基]-4-乙基哌嗪，即出版的国际专利申请WO 99/24433的实施例20、19、337和336的化合物；以及出版的国际专利申请WO 93/07124(EISAI)的实施例11的化合物；和Rotella D P，J.Med.Chem.，2000，43，1257中描述的化合物3和14。
其它合适的PDE5抑制剂包括：
4-溴-5-(吡啶基甲基氨基)-6-[3-(4-氯苯基)-丙氧基]-3(2H)哒嗪酮；1-[4-[(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基甲基)氨基]-6-氯-2-喹唑啉基]-4-哌啶-甲酸，一钠盐；(+)-顺式-5，6a，7，9，9，9a-六氢-2-[4-(三氟甲基)-苯基甲基-5-甲基-环戊-4，5]咪唑并[2，1-b]嘌呤-4(3H)酮；furazlocillin；顺式-2-己基-5-甲基-3，4，5，6a，7，8，9，9a-八氢环戊烯并[4，5]-咪唑并[2，1-b]嘌呤-4-酮；3-乙酰基-1-(2-氯苄基)-2-丙基吲哚-6-甲酸盐；3-乙酰基-1-(2-氯苄基)-2-丙基吲哚-6-甲酸盐；4-溴-5-(3-吡啶基甲基氨基)-6-(3-(4-氯苯基)丙氧基)-3-(2H)哒嗪酮；1-甲基-5(5-吗啉代乙酰基-2-正丙氧基苯基)-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并(4，3-d)嘧啶-7-酮；1-[4-[(1，3-苯并二氧杂环戊烯5-基甲基)氨基]-6-氯-2-喹唑啉基]-4-哌啶甲酸，一钠盐；Pharmaprojects No.4516(GlaxoWellcome)；Pharmaprojects No.5051(Bayer)；Pharmaprojects No.5064(Kyowa Hakko；参见WO 96/26940)；Pharmaprojects No.5069(Schering Plough)；GF-196960(Glaxo Welcome)；E-8010和E-4010(Eisai)：Bay-38-3045 & 38-9456(Bayer)和Sch-51866。
针对环鸟苷酸-3’，5’-单磷酸(cGMP)和环腺苷酸-3’，5’-单磷酸(cAMP)磷酸二酯酶的体外PDE抑制活性是通过测定其IC₅₀值(达到酶活性50％抑制所需的化合物浓度)来确定的。
基本上按照W.J.Thompson和M.M.Appleman的方法(Biochem.，1971，10，311)，从多种来源，包括人海绵体、人和兔血小板、人心室、人骨骼肌以及人与犬视网膜中分离出所需的PDE酶。特别是，cGMP-特异性PDE(PDE5)和cGMP-抑制的cAMP PDE(PDE3)得自人海绵体或人血小板；cGMP-刺激的PDE(PDE2)得自人海绵体或人血小板；钙/钙调蛋白(Ca/CAM)-依赖性PDE(PDE1)得自人心室；cAMP-特异性PDE(PDE4)得自人骨骼肌和在SF9细胞中表达的人重组体；光感受器PDE(PDE6)得自人或犬视网膜。磷酸二酯酶7-11是由转染到SF9细胞内的全长人重组克隆产生的。
测定可使用W.J.Thompson等人(Biothem.，1979，18，5228)的“分批”方法的改进形式或者使用直接检测AMP/GMP的闪烁接近(proximity)测定来进行，其中所述闪烁接近测定是用Amersham plc在乘积码TRKQ7090/7100下描述的方法的改进形式进行的。简言之，通过以下方法评估PDE抑制剂的作用：在不同抑制剂浓度和低底物(cGMP或cAMP，未标记与[³H]-标记的比例为3∶1，浓度为～1/3K_m)存在下分析固定量的酶，这样 IC 50 ≅ K i . ]]>用测定缓冲液[20mM Tris-HClpH7.4，5mM MgCl₂，1mg/ml牛血清白蛋白]将测定终体积补足至100μl。用酶开始反应，在30℃培养30-60分钟以给出＜30％底物转化率，用50ul硅酸钇SPA珠(含有3mM PDE9和11的各自未标记的环核苷酸)终止反应。将平板再次密封，摇动20分钟，然后让珠子在黑暗条件下沉降30分钟，在TopCount平板读数器(Packard，Meriden，CT)上计数。将放射性单位转化成未抑制对照的活性％(100％)，对着抑制剂浓度和抑制剂的IC₅₀值绘图，后者使用‘Fit Curve’Microsoft Excel扩展(或内部等量)获得。这些试验的结果表明，本发明化合物是cGMP-特异性PDE5的抑制剂。
功能活性可通过以下方法在体外评估：使用基于S.A.Ballard等人(Brit.J.Pharmacol.，1996，118(suppl.)，abstract 153P)或S.A.Ballard等人(J.Urology，1998，159，2164-2171)所述内容的方法，测定本发明化合物提高预先收缩的兔海绵体组织条的硝普化钠或电场刺激的松弛作用的能力。
可使用基于Trigo-Rocha等人(Neurourol.and Urodyn.，1994，13，71)所述内容的方法，在试验动物例如麻醉的兔中体内筛选化合物，以在静脉内给药后，测定化合物提高由于海绵体内注射硝普化钠而引起的海绵体压力增高的作用。
高度优选的是，在本发明药物组合物中，与选择性多巴胺D3受体激动剂联合给药的是强效选择性PDE5抑制剂。
在本发明中尤其优选的是，一种或多种强效选择性cGMP PDE5抑制剂与一种或多种选择性D3多巴胺受体激动剂的组合。
辅助剂-SEP抑制剂(SEPi)
SEPi是抑制或选择性地抑制具有SEP活性的多肽的化合物。
SEP是可溶性分泌的内肽酶。内肽酶，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金属内肽酶，在肽内序列上进行裂解。
称为锌金属蛋白酶的一组重要的内肽酶的特征在于，在其催化位点需要结合锌离子。锌金属蛋白酶可再分为几类(关于综述参见FEBSLetters 354(1994)pp.1-6)，其中一类是neprilysin(NEP)-样锌金属蛋白酶(FASEB Journal，Vol 11，1997 pp.355-384)。NEP类包括至少7种在结构上彼此相关的酶(参见下文)。它们通常结合在细胞膜上，具有大的羧基末端细胞外域、短的跨膜域和在氨基末端的短的细胞内域。该家族的已知成员是neprilysin(还称为NEP、CD10、CALLA、脑啡肽酶或EC 3.4.24.11)、内皮素转化酶(ECE-1和ECE-2)、PEX、KELL、X-转化酶/损害诱导的中性内肽酶(XCE/DINE)和在啮齿动物中鉴定的称为可溶性分泌型内肽酶/neprilysin II的酶(SEP/NEPII；Ghaddar，G等人，Biochem Journal，Vol 347，2000，pp.419-429；Ikeda，K等人，Journal Biological Chemistry，Vol 274，1999，pp.32469-32477；Tanja，O等人，Biochem Biophys ResearchCommunication，Vol 271，2000，pp.565-570；国际专利申请WO99/53077)。据信，该类成员的功能与肽能信号有关。这是在包括人在内的大部分生物体中的过程，其中肽分子起“信使”的作用以引起生理反应。这个过程通常涉及特定细胞生成和释放肽信使，肽信使有时是没有活性的前体，这种前体被蛋白酶裂解后而变得有活性。活性形式的肽与另一细胞表面上的特定受体结合，从而在该表面上引起反应。该肽通过被另一种蛋白酶降解而失活。
NEPII可能是SEP-一种小鼠酶的大鼠同等物，因为它们具有91％的氨基酸一致性。它们是该类中在其氨基酸序列方面与NEP最接近的成员，与人NEP有54％的一致性。二者的mRNA在睾丸中大量存在，并且在大量其它组织中可以低水平被检测到。对于大鼠NEPII，已发现mRNA以相差不大高水平存在于脑和垂体中。当在哺乳动物细胞中重组生成时，在生长培养基中可发现小鼠SEP和大鼠NEPII。这表明它们可以是分泌型蛋白酶，能够循环并因此在体内其它位点将肽裂解。象该类的某些其它成员例如ECE-1一样，小鼠SEP和大鼠NEPII表现出剪接变体。对于小鼠SEP和大鼠NEPII，该剪接变体带来其中涉及膜定位和分泌的序列改变的同种型。这种变体的生理意义尚不清楚，但是有可能是这些酶的膜结合、循环和细胞内形式。据表明，小鼠SEP能够裂解多种重要的生物肽，包括脑啡肽、内皮素、大内皮素、缓激肽和P物质。因此，象NEP一样，其具有较宽的底物特异性，并且可能在不同组织中具有几种生理功能。
据表明，象其它金属蛋白酶一样，在该NEP类中的酶可以被小药物样分子(例如thiorphan和phosphoramidon)抑制。这与在肽能信号的调节中NEP样酶的某些成员的生理功能的形成性质一起使得它们成为药物干预的有吸引力靶点。
WO 99/53077、EP1069188、WO 02/06492和WO 00/47750以及本申请的SEQ ID NOS：3-5中给出了SEP的序列。
本文所提及的例如关于测定的SEP序列包括在WO 99/53077、EP1069188、WO 02/06492或WO 00/47750中的序列或者作为SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5或其变体、片段、同源物、类似物或衍生物给出的序列。
SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4分别公开了编码人SEP的核苷酸序列(cDNA)。SEQ ID NO：4包括5′和3′部分载体序列。SEQ ID NO：5显示了人SEP蛋白。
任何特定SEPi的适用性可通过使用例如下述测定方法评价其效力和选择性，然后依据标准药物操作评价其毒性、吸收性、代谢、药代动学性质等来确定。
可用于检测候选的SEP抑制剂的一种SEP测定方法是荧光共振能量传递(FRET)测定。所述标记的底物肽最优选为若丹明绿-Gly-Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys(QSY^TM-7)-βAla-NH₂。
SEP FRET测定
SEP FRET测定基于Carvalho等人开发的使用NEP的测定方法(Carvalho等人，Annal.Biochem.237，pp.167-173(1996))。SEPFRET测定使用类似的分子内淬灭的荧光肽底物，但是具有荧光供体/受体染料的新组合，具体来说是若丹明绿(Molecular Probes，Inc.，Eugene，OR，USA)和QSY^TM-7(在下文中缩写为“QSY-7”或“QSY7”；Molecular Probes，Inc.)。
SEP的内肽酶活性是通过监测其酶解合成的肽底物若丹明绿-Gly-Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys(QSY7)-βAla-NH₂的能力的测定的。
该测定所选择的两种荧光团(荧光染料)具有重叠的发射和吸收光谱，因此适于能量传递。若丹明绿起供体的作用，并且当在485nm激发时，在535nm发出射线(荧光)，该射线又激发QSY7(发生FRET)。QSY7是荧光静息的，因此在535nm以上不发出射线，所以观察不到任何信号(若丹明绿发射被淬灭)。
在肽底物的Arg-Val肽键上被SEP裂解(选择性水解)后，若丹明绿和QSY7部分分离，这样在485nm激发时，可不再发生能量传递。结果在535nm观察到的若丹明绿的荧光增强。
制备合成肽底物若丹明绿-Gly-Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys(QSY7)-βAla-NH₂
使用生产商(Applied Biosystems，Foster City，CA，USA)提供的改进的方法，经由基于9-芴基甲氧基羰基(FMOC)的合成循环，通过固相肽合成方法在0.25mmol FMOC-PAL-PEG-PS树脂上完成肽的装配。我们改进的循环是通过用20％哌啶/N-甲基吡咯烷酮(NMP)处理2×5分钟将氨基末端脱保护；其效率可通过让小等份试样的脱保护溶液流经UV吸收度检测器以测定在301nm的UV吸收度来监测。在单独的柱中，将新制备氨基酸用0.9当量的各种溶解在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中的2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)/1-羟基苯并三唑(HOBt)活化。加入2当量二异丙基乙基胺(DIEA)。并行地，然后将树脂用NMP洗涤以除去脱保护副产物。将洗涤溶液从树脂中排放出来，把活化的氨基酸酯转移到树脂中，搅拌以与氨基末端偶联20分钟。排放出残余的偶联溶液，将树脂再次用NMP洗涤。为了保证肽的同质性，将0.4M乙酸酐/0.04M HOBt在NMP中的溶液和12mmol DIEA加到树脂中，以将任何可能未反应的位点乙酰化。最后，将树脂用NMP洗涤，排放，然后用1∶1二氯甲烷/2，2，2-三氟乙醇洗涤，并排放。这是一个肽合成循环的典型。将完成合成的树脂裂解，使用试剂K脱保护(King，D.S.等人，(1990)，Int.J.Pep.Prot.Res.，36，pp.255-66)，获得了251mg(100％)肽粗产物CP1，电子喷雾质谱(ESMS)(m/z计算(calc.)＝977.21(MH+平均值)，obs.＝977.47)。
将QSY-7连接在半胱氨酸上：
将50mg(51μmol)CP1粗产物溶解在含有45mg(52.4μmol)QSY-7马来酰亚胺的10％DIEA/DMF中。10分钟后，经由HPLC-MS分析判断反应没有完全，再加入30mg(30.7μmol)肽粗产物。30分钟后，经由HPLC-MS判断反应完全，并且所有原料都已消耗完全。通过C18制备型HPLC色谱分离产物，将表现出通过基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)确定的所需产物分子量的级份合并，冷冻干燥，获得了73.7mg(50％)紫色粉末，CP2 ESMS(m/z计算值＝1797.86(MH+单同位素)，实测值＝1797.86)。
将二(三氟乙酰基)若丹明绿连接到氨基末端上：
将73.7mg(41μmol)CP2溶解在含有35mg(52.8μmol)若丹明绿羧酸，三氟乙酰胺，琥珀酰亚氨基酯(5(6)-CR 110 TFA，SE)*混和异构体*的2％DIEA/DMF溶液中。2小时后，通过HPLC-MS分析判断反应完全。通过C4制备型HPLC色谱分离产物，将表现出所需产物分子量(MALDI-MS)的级份合并，冷冻干燥，获得了71.4mg(74％)紫色粉末，CP3 ESMS(m/z计算值＝2345.92(MH+单同位素)，实测值＝2345.47)。
将三氟乙酰基保护基从若丹明绿上除去：
将71.4mg(30.4μmol)CP3溶解在10ml 4∶1 CH₃CN/H₂O中。向其中加入200mg(1886μmol)Na₂CO₃。16小时后，涡旋，将上清液从不溶性材料中倾析出。将反应容器用1ml DMSO洗涤；将洗涤液与上清液合并，通过C4制备型HPLC色谱分离产物。将表现出所需产物分子量(MALDI-MS)的级份合并，冷冻干燥，获得了64mg(98％)紫色粉末，CP4 ESMS(m/z计算值＝2155.54(MH+平均值)，实测值＝2155.27)。CP4是所需合成肽底物若丹明绿-Gly-Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys(QSY7)-βAla-NH₂。
材料：
所有试剂均以最高商业可得纯度购得，并且无需进一步纯化即可使用。用于肽合成的所有试剂均购自Applied Biosystems，FosterCity，CA，USA，但是以下试剂除外：QSY-7马来酰亚胺(商品目录号Q-10257)和若丹明绿羧酸，三氟乙酰胺，琥珀酰亚氨基酯(5(6)-CR110 TFA，SE)*混和异构体*(商品目录号R-6112)购自MolecularProbes，Inc.，OR，USA；FMOC-PAL-PEG-PS购自PerseptiveBiosystems，MA，USA(商品目录号GEN913384)；FMOC-B-丙氨酸和FMOC-d-苯丙氨酸购自Novabiochem，CA，USA；FMOC-Arg(Pbf)-OH购自AnaSpec，Inc.，CA，USA；2，2，2-三氟乙醇购自Aldrich，WI，USA。碳酸钠购自Fisher，PA，USA。
制备型HPLC色谱是在Vydac(CA，USA)C18(商品目录号218TP1022)或C4(商品目录号214TP1022)柱上以10ml/分钟的流速进行的，在30分钟内用0％-80％(A＝5％CH₃CN/0.1％TFA/94.9％H₂O，B＝100％CH₃CN)的线性梯度进行洗脱，收集30秒的级份。分析HPLC-MS是用Micromass(Manchester，UK)LCT质谱仪(基于外部校准的标准物的质量)进行的，该质谱仪与Waters(MA，USA)2690 HPLC进口和Waters 996光电二极管阵列检测器偶联，在Vydac C4(商品目录号214TP5415)柱上进行色谱层析，在30分钟内以1ml/分钟的流速用0％-80％(A＝5％CH₃CN/0.1％TFA/94.9％H₂O，B＝100％CH₃CN)的线性梯度进行洗脱。去卷积分子量是用Micromass转化软件由所观测的多个带电荷离子计算的。MALDI-MS是在Perseptive Biosystems Voyager-DE线性质谱仪上使用α氰基4-羟基肉桂酸基质(Hewlett Packard，CA，USA)和基于外部校准的报道质量获得的。
方法(包括化学结构)：
CP4(＝合成肽底物若丹明绿-Gly-Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys(QSY^TM-7)-βAla-NH₂)是通过在固相肽合成方案中引入关键中间体CP3来合成的。
合成方案1：

简言之，使用在产率和时间效率方面优化的固相肽合成方案加工FMOC-PAL-PEG树脂。这些循环(全部细节见上文)包括2次FMOC脱保护、洗涤，1次HBTU活化的氨基酸偶联、洗涤、加帽，和最后首先用NMP洗涤，然后用1∶1三氟乙醇/二氯甲烷洗涤。这些洗涤有助于松弛树脂二级结构，使得脱保护进行得很充分，并且在下一循环期间高效地偶联下一个新生成的氨基酸。
依据合成方案2合成CP2(全部细节见上文)：

引入QSY-7标记物以后，依据合成方案3，将第二个荧光团若丹明绿作为二-三氟乙酰基保护的染料加上去：

最后，通过用Na₂CO₃处理除去三氟乙酰基，获得所需底物CP4：

测定
首先如下所述制备用于该测定的试剂：
通过以下方法制备底物溶液：将底物若丹明绿-Gly-Gly-dPhe-Leu-Arg-Arg-Val-Cys(QSY7)-βAla-NH₂以2μM的浓度重悬在50mM HEPES缓冲液pH7.4(Sigma，UK)中，然后每25ml加入1不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物片(Roche Diagnostics，UK)。
将等份试样的上述SEP酶融化，然后根据每批酶所特有的预定因素在50mM HEPES，pH7.4中稀释，这样50μl含有在测定期间足以将约30％的底物转化成产物的酶。
制备由4ml DMSO和96ml 50mM HEPES pH7.4组成的4％DMSO溶液。
通过以下方法制备产物溶液：将500μl底物溶液加到250μl酶溶液与250μl 4％DMSO溶液中，在37℃培养16小时。
如下所述设定测定：
在黑色96孔微量滴定板中，将100μl底物溶液加到50μl 4％DMSO溶液中。还设定类似的非特异性背景空白，其中50μl 4％DMSO溶液还含有40μM膦酰二肽。将50μl酶溶液加到测定和空白中，将96孔板放置在BMG galaxy荧光读数器中，该读数器用Biolise软件包(BMG Lab technologies，Offenberg，Germany)操作。
将板在荧光读数器中于37℃培养1小时，每隔3分钟测定一次荧光(激发(Ex)485nm/发射(Em)535nm)。SEP的蛋白酶解活性相当于样本荧光增加率-非特异性背景空白的荧光单位增加率。对于该计算，使用软件对4个连续读数计算的最大速度值(MaxV)。
使用从相同微量滴定板的孔中的200μl产物读取的荧光值。如果需要的话，将该值与从SEP测定的60分钟时间点测定的荧光单位一起使用，以计算在1小时培养期间被蛋白酶解的底物的百分比(％)，或者将测定的荧光增加率转化成其它有用单位例如ng蛋白酶解的底物/分钟/ml酶。
该测定用于依据Athel Cornish Bowden的，1979，Butterworths出版的Fundamentals of Enzyme Kinetics描述的标准原理计算酶动力学参数例如Vmax和Km。
使用SEP测定来确定SEP抑制剂的抑制参数
为了测定SEP抑制剂(例如膦酰二肽)的IC₅₀，如上所述用包含在50μl DMSO溶液中的一定范围测试浓度的抑制剂(通过用4％DMSO/50mM HEPES pH7.4将10mM抑制剂的100％DMSO贮备液进行适当稀释而制得的)进行多次SEP测定。使用合适的标准图形拟合计算机程续，将乙状剂量反应曲线拟合成log抑制剂浓度对MaxV(或％抑制或％活性)的曲线。IC₅₀计算为引起50％最大抑制的抑制剂浓度。一般对于给定的IC₅₀测定，使用相差半个log单位增量的至少10个抑制剂浓度。
依据在例如Athel Cornish Bowden，1979，Butterworths出版的Fundamentals of Enzyme Kinetics中描述的标准酶学原理，使用SEP测定来确定Ki和抑制方式(即抑制是竞争型、混和型还是非竞争型等等)。
NPY抑制剂和/或NPY Y1抑制剂
下文在题为NPY测定的章节中给出了适于鉴定和/或研究NPYi(或NPY Y1i)的测定系统的详细描述，并且这些测定系统是基于在WO-A-98/52890中描述的测定方法(参见该专利的96页第2-28行)。
NPY抑制剂或NPY Y1抑制剂的其它实例描述在下列综述文章中：
Dunlop J，Rosenzweig-Lipson S：肥胖的治疗方法，Exp OpinTher Pat 1999 8 12 1683-1694
Wang S，Ferguson KC，Burris TP，Dhurandhar NV：第8届肥胖和非胰岛素依赖性糖尿病国际年会：新药开发，Exp Opin InvestDrugs 1999 8 7 1117-1125
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Hong Y，Gregor V，Ling AL，Tompkins EV，Porter J，Chou TSPaderes G，Peng Z，Hagaman C.Anderes K，Luthin D，May J：作为有效NPY Y2受体拮抗剂的新的脒基脲化合物的合成和生物学评价，Acs 1999 217 Anaheim MEDI 108
NPYi和/或NPY Y1 I的其它实例公开在下列文件中：
WO-98/07420
WO-94/00486
WO-96/22305
WO-97/20821
WO-97/20822
WO-96/14307
JP-07267988
WO-96/12489
US-5552422
WO-98/35957
WO-96/14307
WO-94/17035
EP-0614911
WO-98/40356
EP-0448765
EP-0747356
WO-98/35941
WO-97/46250
EP-0747357
EP-0896822
EP-1033366
WO-00/66578
NPY抑制剂和/或NPY Y1抑制剂的其它实例选自下列结构：




NPY测定
按照WO 98/52890(96页第2-28行)中的教导，使用基本上如M.W.Walker等人Journal of Neurosciences 8：2438-2446(1988)中描述的方法评估化合物与NPY结合的能力。
在该测定中，采用细胞系SK-N-MC。该细胞系得自Sloane-Kettering Memorial Hospital，New York。
使用补充5％胎牛血清的Dulbecco′s极限必需培养基(DMEM)将这些细胞在T-150烧瓶中培养。用手工操作通过刮擦将细胞从烧瓶中取出，沉淀，在-70℃贮藏。
使用玻璃匀化器将细胞沉淀物重悬在含有2.5mM氯化钙、1mM氯化镁和2g/L杆菌肽的25mM HEPES(pH7.4)缓冲液中。在含有0.1nM¹²⁵I-肽YY(2200 Ci/mmol)和0.2-0.4mg蛋白的200μl终体积中于室温培养约2小时。
非特异性结合定义为：在1μM神经肽Y存在下培养后，保留的与组织结合的放射活性的量。在某些实验中，在培养混合物中包括化合物的多种不同浓度。
使用96-孔收获器，通过经由已在0.3％聚乙烯亚胺中预浸泡过的玻璃纤维滤器快速过滤将培养终止。将滤器用5ml 50mM Tris(pH7.4)于4℃洗涤，在60℃快速干燥。然后用熔化铺制的闪烁片处理滤器，计数保留在滤器上的放射性。使用各种软件包分析结果。使用标准考马斯(coumassie)蛋白分析试剂，用牛血清白蛋白作为标准物测定蛋白浓度。
NEP抑制剂(I:NEP＝NEPi)
也称为脑啡肽酶或neprilysin的NEP EC 3.4.24.11(FEBS Lett.229(1)，206-210(1988))是锌依赖性中性内肽酶。该酶参与几种生物活性寡肽的分解，裂解疏水性氨基酸残基的氨基侧的肽键。通过NEP代谢的关键的神经元释放的生物活性物质或神经肽包括促尿钠排泄肽例如心房促尿钠排泄肽(ANP)以及脑促尿钠排泄肽和C-型促尿钠排泄肽，铃蟾肽、缓激肽、降钙素基因相关肽、内皮素、脑啡肽、神经降压素、P物质和血管活性肠肽。这些肽当中的一些具有强效血管扩张和神经激素功能、利尿和促尿钠排泄活性或介导行为作用。Victor A.McKusick等人在http://www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上提供了关于NEP的背景教导。
任何特定I:NEP的适用性可通过使用文献方法评价其效力和选择性，然后依据标准药物操作评价其毒性、吸收性、代谢、药动学性质等来确定。
I:NEP优选具有相对于ACE大于300的选择性。
IC₅₀值和对ACE的选择性比例可通过EP1097719A1中描述的方法测定。
NEP抑制剂的实例公开在下列综述文章中：Pathol.Biol.，46(3)，1998，191；Current Pharm.Design，2(5)，1996，443；Biochem.Soc.Trans.，21(3)，1993，678；Handbook Exp.Pharmacol.，104/1，1993，547；TiPS，11，1990，245；Pharmacol.Rev.，45(1)，1993，87；Curr.Opin.Inves.Drugs，2(11)，1993，1175；Antihypertens.Drugs，(1997)，113；Chemtracts，(1997)，10(11)，804；ZincMetalloproteases Health Dis.(1996)，105；Cardiovasc.Drug Rev.，(1996)，14(2)，166；Gen.Pharmacol.，(1996)，27(4)，581；Cardiovasc.Drug Rev.，(1994)，12(4)，271；Clin.Exp.Pharmacol.Physio.，(1995)，22(1)，63；Cardiovasc.Drug Rev.，(1991)，9(3)，285；Exp.Opin.Ther.Patents(1996)，6(11)，1147。
NEP抑制剂的其它实例公开在下列文件中：EP-509442A；US-192435；US-4929641；EP-599444B；US-884664；EP-544620A；US-798684；J.Med.Chem.1993，3821；Circulation 1993，88(4)，1；EP-136883；JP-85136554；US-4722810；Curr.Pharm.Design，1996，2，443；EP-640594；J.Med.Chem.1993，36(1)，87；EP-738711-A；JP-270957；CAS # 115406-23-0；DE-19510566；DE-19638020；EP-830863；JP-98101565；EP-733642；WO 9614293；JP-08245609；JP-96245609；WO 9415908；JP 05092948；WO-9309101；WO-9109840；EP-519738；EP-690070；J.Med.Chem.(1993)，36，2420；JP-95157459；Bioorg.Med.Chem.Letts.，1996，6(1)，65；EP-A-0274234；JP-88165353；Biochem.Biophys.Res.Comm.，1989，164，58；EP-629627-A；US-77978；Perspect.Med.Chem.(1993)，45；EP-358398-B。
NEP抑制剂的其它实例公开在EP1097719-A1中，特别是其中的化合物FXII-FXIII。
优选的NEP抑制剂是EP1097719-A1中的化合物FV-FXI和F57-F65。
铃蟾肽受体拮抗剂
已经使用据信是可靠和预测性的，特别是具有对雌性进行预测能力的动物模型中试验了是铃蟾肽受体拮抗剂的化合物。在啮齿动物中，性感受(proceptive)行为是在激素控制下，孕酮对于与雌激素一起诱导性感受行为是必不可少的(Johnson M和Everitt B.，EssentialReproduction(3^rd edn)，Blackwell，Oxford，1988)。在灵长目动物中，有关性感受行为的激素控制的证据是相矛盾的，但是大体上雌激素和/或雄激素似乎提高性感受行为(Baum M.J.，J.Biosci.，1983；33：578-582)。大鼠中性感受行为的行为表现包括“跳跃和疾行”动作，并伴有快速的耳朵颤动。据报道，用于评估寻求性接触的热心(性促动)的试验是测定性感受性的最合适的途径(Meyerson B.J，LindstromL.H.，Acta Physio.Scand.，1973；389(Suppl.)：1-80)。在大鼠中，当雌性动物呈现出脊柱前凸姿势时，即表现出性感受性。当雄性动物骑上并用其前爪给接受的雌性动物的侧腹施加压力时，会出现这种情况。该行为的神经元控制的主要位点是腹内侧核(VMN)和中脑中枢灰色区域(MCG)(关于综述参见Wilson C.A.，In：SexualPharmacology，Riley A.J.等人，(Eds)，Clarendon Press，Oxford，1993：1-58)。
铃蟾肽是14-氨基酸肽，最初是从欧洲蛙Bombina bombina的皮肤中分离出来的(Anastasi A.等人，Experientia，1971；27：166)。其属于在它们的C-末端十肽区域具有结构同源性的一类肽(DuttaA.S.，Small Peptides；Chemistry，Biology，和Clinical Studies，Chapter 2，pp 66-82)。目前已经鉴定了两种哺乳动物铃蟾肽样肽—十肽神经调节肽B(NMB)和23-残基氨基酸胃泌素释放肽(GRP)。
铃蟾肽经由在异源受体群体上的作用引起中枢作用。BB₁受体与神经调节肽B(NMB)结合的亲和力高于胃泌素相关肽(GRP)和神经调节肽C(NMC)，BB₂受体与GRP和NMC结合的亲和力大于NMB。最近有证据表明又鉴定出了两种称为BB₃和BB₄的受体亚型，但是由于有限的药理学，目前对其功能了解得很少。BB₁和BB₂受体在中枢神经系统内具有不均匀的分布，这表明这些受体的内源性配体可差别调节神经传递。在其它区域当中，BB₁受体存在于腹内下丘脑中(Ladenheim E.E等人，Brain Res.，1990；537：233-240)。
已经在哺乳动物脑中检测到了铃蟾肽样免疫活性和mRNA(BraunM.，等人.，Life.Sci.，1978；23：2721)(Battey J.，等人.，TINS，1991；14：524)。据信NMB和GRP介导多种生物作用(关于综述参见WO 98/07718)。
下列专利申请公开了能够在铃蟾肽受体上拮抗NMB和/或GRP作用的化合物：CA 2030212，EP 0309297，EP 0315367，EP 0339193，EP0345990，EP 0402852，EP 0428700，EP 0438519，EP 0468497，EP0559756，EP 0737691，EP 0835662，JP 07258081，UK 2231051，US4943561，US 5019647，US 5028692，US 5047502，US 5068222，US5084555，US 5162497，US 5244883，US 5439884，US 5620955，US5620959，US 5650395，US 5723578，US 5750646，US 5767236，US 5877277，US 5985834，WO 88/07551，WO 89/02897，WO 89/09232，WO 90/01037，WO 90/03980，WO 91/02746，WO 91/04040，WO 91/06563，WO 92/02545，WO 92/07830，WO 92/09626，WO 92/20363，WO 92/20707，WO 93/16105，WO 94/02018，WO 94/02163，WO 94/21674，WO 95/00542，WO 96/17617，WO 96/28214，WO 97/09347，WO 98/07718，WO 98/07718，WO 00/09115，WO 00/09116。我们相信，在这些申请中公开的化合物可用于治疗或预防性功能障碍，在上述申请或者实际上在任何以前涉及铃蟾肽受体的科学出版物中都没有公开或提出这些化合物可用于该适应症。
在WO 98/07718中公开的一类优选的铃蟾肽受体拮抗剂包括式(I)化合物

及其可药用盐，其中：
j是0或1；
k是0或1；
l是0、1、2或3；
m是0或1；
n是0、1或2；
Ar是苯基、吡啶基或嘧啶基，所述基团分别未取代或者被1-3个选自下列的取代基取代：烷基、卤素、烷氧基、乙酰基、硝基、氨基、-CH₂NR¹⁰R¹¹、氰基、-CF₃、-NHCONH₂和-CO₂R¹²；
R¹是氢或具有1-7个碳原子的直链、支链或环状烷基；
R⁸是氢或者与R¹形成具有3-7个碳原子的环；
R²是氢或具有1-8个碳原子的直链、支链或环状烷基，所述烷基还可以含有1-2个氧或氮原子；
R⁹是氢或者与R²形成具有3-7个碳原子的环，所述环还可以含有氧或氮原子；或者R²和R⁹可一起是羰基；
Ar¹可独立地选自Ar，并且还可以包括吡啶基-N-氧化物、吲哚基、咪唑基和吡啶基；
R⁴、R⁵、R⁶和R⁷分别独立地选自氢和低级烷基；R⁴还可以与R⁵形成具有2-3个原子并且可以包括氧或氮原子的共价连接基团；
R³可独立地选自Ar，或者是氢、羟基、-NMe₂、N-甲基-吡咯基、咪唑基、N-甲基-咪唑基、四唑基、N-甲基-四唑基、噻唑基、-CONR¹³R¹⁴、烷氧基、

，或
其中p是0、1或2，且Ar²是苯基或吡啶基；
R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹⁴分别独立地选自氢或具有1-7个碳原子的直链、支链或环状烷基。
在上述化合物当中，特别优选的化合物是(S)-3-(1H-吲哚-3-基)-N-[1-(5-甲氧基-吡啶-2-基)-环己基甲基]-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺及其可药用盐。
BB₁和BB₂结合测定
在下列实验中，如下所述测定BB₁和BB₂结合。将稳定表达克隆的人NMB(对于(BB₁测定)和GRP受体(对于BB₂测定)的CHO-K1细胞在补充10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺的Ham′s F12培养基中以常规方式生长。对于结合实验，通过用胰蛋白酶处理来收获细胞，在含有5％DMSO的Ham′s F12培养基中于-70℃贮藏直至需要时。在使用的当天，将细胞迅速融化，用过量培养基稀释，以2000g离心5分钟。将细胞重悬在50mM Tris-HCl测定缓冲液(pH7.4，21℃，含有0.02％BSA，40μg/mL杆菌肽，2μg/mL胰凝乳蛋白酶抑制剂，4μg/mL亮抑蛋白酶肽和2μM膦酰二肽)中，计数，polytronned(放置5、10秒)，然后以28,000g离心10分钟。将最终的细胞沉淀物重悬在测定缓冲液中至细胞的终浓度为1.5×10⁵/mL。对于结合测定，将200μL等份试样的膜与[¹²⁵I][Tyr⁴]铃蟾肽(＜0.1nM)在和不在受试化合物存在下(测定终体积为250μL)分别培养60分钟(对于NMB)和90分钟(对于GRP)。通过1μM铃蟾肽确定非特异性结合。通过快速真空过滤到预先在0.2％PEI中浸泡2小时以上的Whatman GF/C滤器上来终止测定，用50mM Tris-HCl(pH6.9，21℃；6×1mL)洗涤。使用γ计数器测定结合的放射性。
在Prism^_(GraphPad Software Inc.，San Diego，USA)中使用迭代曲线-绘图操作，通过非线性回归分析所有竞争数据。使用Cheng-Prusoff方程(Cheng Y.，Prusoff W.H.，Biochem.Pharmacol.22：3099-3108，1973)将IC₅₀值校正为K_i值。
中间电导钙激活的钾(IK_ca)通道调节剂
术语“钙激活的钾通道”包括大电导钙激活的(BK_ca)通道(还称为Maxi K+通道)、小电导钙激活的(SK_ca)通道和中间电导钙激活的(IK_ca)通道，中间电导钙激活的(IK_ca)通道有时称为hSK₄通道或IK通道或hIK₁通道。
目前有3种钙激活的钾通道亚型。它们是大电导钙激活的(BK_ca)通道、中间电导钙激活的(IK_ca)通道和小电导钙激活的(SK_ca)通道。这些通道的特征是在一次打开期间经过通道孔的离子电导度(Fan等人1995)。区别是：大电导(BK)通道通过内部钙离子和膜电位的协同作用开启，并具有100-220 picoSiemen(pS)的单位电导率；而中间电导(IK)和小电导(SK)通道仅通过内部钙离子开启。另一区别是，IK_Ca和SK_Ca通道分别具有20-85pS和2-20pS的单位电导率，并且对钙的敏感性比BK通道强。每一类型的通道表现出不同的药理性质(Ishii等人1997)。
本文所用术语“中间电导钙激活的(IK_ca)通道”是指钙激活钾通道的一个亚型，其特征是在一次打开期间经过通道孔的离子电导度(Fan等人1995)。与通过内部钙离子和膜电位的协同作用开启，并具有100-220 picoSiemen(pS)的单位电导率的大电导(BK)通道不同，中间电导(IK)通道仅通过内部钙离子开启，具有20-85pS的单位电导率，并且对钙的敏感性比BK通道强。
本文所用术语“调节IK_ca通道活性”是指一种或多种下列作用：改善、提高、增强、激动、去极化或上调IK_ca通道活性，或者IK_ca通道的Ca²⁺敏感性被提高，也就是说，降低了引发IK_ca通道活性/打开所需的钙浓度。IK_ca通道的Ca²⁺敏感性增加可以通过直接或间接打开IK_ca通道来提高/增强。IK_ca通道的Ca²⁺敏感性增加可使得IK_ca通道特征发生改变，这样IK_ca通道打开以下述方式被影响：IK_ca通道更容易打开和/或在更低的细胞内钙浓度下被打开和/或打开更长时间和/或具有增加的打开时间概率。
术语“调节IK_ca通道活性”还包括上调海绵体平滑肌组织中的IK_ca通道表达，例如通过下述途径上调：由增加IK_ca通道表达的活性剂和/或活性剂作用于会削弱和/或拮抗IK_ca通道活性调节和/或IK_ca通道的表达的物质。
调节剂的实例可具有式(I)结构：

其中：
R1是氢或合适的取代基，例如可任选被取代的烷基；
R2是H或合适的取代基，优选为H；
R3代表一个或多个合适的任选取代基。
或者，调节剂可具有式(I)结构：

其中：
X选自NR、O或S，
其中R是H或烷基(优选低级烷基，更优选C1-6烷基)
R1是烷基(优选低级烷基，更优选C1-6烷基)
R2选自H、卤素、烷基(优选低级烷基，更优选C1-6烷基)、烷氧基(优选低级烷氧基，更优选C1-6烷氧基)
R3选自H、卤素、烷基(优选低级烷基，更优选C1-6烷基)、烷氧基(优选低级烷氧基，更优选C1-6烷氧基)
R4选自H、卤素、烷基(优选低级烷基，更优选C1-6烷基)、烷氧基(优选低级烷氧基、更优选C1-6烷氧基)
R5选自H、卤素、烷基(优选低级烷基，更优选C1-6烷基)、烷氧基(优选低级烷氧基，更优选C1-6烷氧基)。
式(1)化合物—其中X＝O(式(1a))或其中X＝S(式(1b))—可通过在碱性条件下将相应的母核杂环(2a)或(2b)N-烷基化来制得，而母核杂环(2a)或(2b)可通过用光气或其它合适的羰基化剂处理相应的氨基苯酚(3a)或氨基硫苯酚(3b)来制得。氨基苯酚和氨基硫苯酚通常是通过还原由相应的硝基苯酚(4a)或硝基硫苯酚(4b)制得。许多取代的硝基苯酚(4a)或硝基硫苯酚(4b)可商购获得。

其中X＝NH的式1化合物(式(1c))可通过将上述反应方案作些调整来制得。在这方面，将相应的硝基苯胺(5c)烷基化，然后把硝基还原，获得了苯二胺(3c，X＝NH)，通过如上所述的羰基化将该苯二胺环合。

调节剂优选为EBIO(1-乙基-2-苯并咪唑烷酮)或其模拟物或任何其可药用盐。EBIO的结构是：

对于某些应用，活性剂的IC₅₀值优选小于300nM、250nM、200nM、150nM，优选小于约100nM，优选小于约75nM，优选小于约50nM，优选小于约25nM，优选小于约20nM，优选小于约15nM，优选小于约10nM，优选小于约5nM。
对于某些应用，活性剂优选对于所需目标具有至少约25、50、75、100倍的选择性，优选对于所需目标具有至少约150倍的选择性，优选对于所需目标具有至少约200倍的选择性，优选对于所需目标具有至少约250倍的选择性，优选对于所需目标具有至少约300倍的选择性，优选对于所需目标具有至少约350倍的选择性。
雌性生殖器
根据Gray氏解剖学，C.D.Clemente，第13美国版中提供的定义使用术语“雌性生殖器”，即：
“生殖器由内生殖器和外生殖器组成。内生殖器位于骨盆中，由卵巢、输卵管、子宫和阴道组成。外生殖器位于泌尿生殖器的表面和盆膈之下。它们包括阴阜、阴唇和小阴唇、阴蒂、阴道前庭、阴道前庭球和前庭腺”。
海绵体
本文所用术语“海绵体”特别是指阴茎中的组织实体。在这方面，阴茎体由3个圆柱形组织体构成，每个组织体围绕着称为白膜的纤维性组织。成对的背外测体称为阴茎海绵体(体＝主体；阴茎海绵体＝空的)；较小的中间体阴茎海绵体含有海绵状尿道，其功能是在射精期间保持海绵状尿道打开。所有这三个组织体都被筋膜和皮肤围绕，并且由散步着血液窦的勃起组织构成。本文所用术语“海绵体”还包括阴蒂中的等同平滑肌细胞和/或组织。
勃起功能障碍(ED)
本文所用术语“勃起功能障碍(ED)”包括阴茎勃起功能障碍，其特征是成年雄性持续不能射精或者不能达到或保持时间长至足以进行性交的勃起，和雌性阴蒂功能障碍，在阴茎和阴蒂勃起组织之间有实质性的等同。
阴茎勃起
本文所用术语“阴茎勃起”是指这样的状态，在刺激时—刺激可以是视觉刺激、身体刺激、听觉刺激或思维刺激，给阴茎供血的动脉扩张，有大量血液进入血液窦中。这些空间的膨胀压缩从阴茎排放血液的静脉，于是血液流出就被减慢了。由于副交感神经反射所致的这些血管改变导致勃起。当动脉收缩并且静脉压力被解除时，阴茎恢复其软弱状态。本文所用术语“阴茎”和“阴茎勃起”可理解为同样适用于阴蒂，因为在阴茎和阴蒂勃起组织之间有实质性的等同。
阴蒂
本文所用术语“阴蒂”是指与雄性阴茎有同源性的雌性勃起组织实体。象雄性组织一样，在身体刺激时，阴蒂能够增大，并且在雌性性兴奋中起作用。在一些类型的雌性性功能障碍(FSD)例如雌性性唤起障碍(FSAD)中，雌性性唤起障碍可能与生殖器血流不足和阴蒂海绵体松弛有关。
性生殖器
本文所用术语“性生殖器”是指雄性和雌性生殖器例如阴茎和阴蒂。
平滑肌
本文所用术语“平滑肌”是指用于收缩的专门组织，其由平滑肌纤维(细胞)组成，平滑肌纤维位于空的内部器官壁中，并且受自主运动神经元的支配。术语“平滑肌”是指没有横纹，从而呈现平滑外观的肌肉。其还称为不随意肌。象在横纹肌中一样，在平滑肌胞质溶胶中Ca²⁺浓度增加引起收缩。然而，肌浆网状组织(横纹肌中的Ca²⁺储库)缺乏平滑肌。钙离子从细胞外流和肌浆网状组织流到平滑肌胞质溶胶内，但是由于在平滑肌纤维之间没有横向小管，Ca²⁺到达纤维中央丝和引起收缩过程需要较长时间。这是慢开始和延长的平滑肌收缩的部分原因。
收缩和松弛
有几种机制调节平滑肌细胞的收缩和松弛。在一个机制中，称为钙调蛋白的调节蛋白与胞质溶胶中的Ca²⁺结合。钙离子不仅进入平滑肌纤维的速度缓慢，而且在兴奋减退时，它们离开平滑肌纤维的速度也缓慢，从而延迟了松弛。Ca²⁺在胞质溶胶中延长的存在带来了平滑肌紧张，这是持续的部分收缩状态。平滑肌位于空的内部器官例如血管、肺导气管、肺、肠胆囊、膀胱、阴茎和阴蒂的海绵体的壁中。
治疗
应当理解，在本文中提及的所有治疗包括一种或多种治愈性、减轻性和预防性治疗。
性刺激
本发明还包括经由在性刺激之前和/或期间施用选择性D3多巴胺受体激动剂(和PDEi，优选PDE5i，或其它适用的辅助剂)来实现的如上所定义的应用。在本文中，术语“性刺激”可以与术语“性唤起”同义。本发明的这方面是有利的，引起其提供了全身(生理)选择性。天然级联仅在生殖器上发生，而不在其它位置例如在心脏等中发生。因此，可以经由本发明性功能障碍(特别是MED或FSAD和/或HSDD)治疗来实现对生殖器的选择性作用。
因此，依据本发明，在某些阶段给予性刺激步骤是高度可取的。我们已经发现，该步骤可提供全身选择性。在本文中，“性刺激”可以是一种或多种视觉性刺激、身体性刺激、听觉性刺激或思维性刺激。
活性剂
本发明用于治疗雄性性功能障碍，特别是MED，或雌性性功能障碍，特别是FSAD和/或HSDD的活性剂可以是能够起选择性多巴胺D3受体激动剂作用的任意合适的活性剂，适当时，可以是选择性多巴胺D3受体激动剂与辅助剂例如PDEi，优选PDE5i的组合。本文所用术语“活性剂”包括能够选择性地激活或诱发多巴胺D3受体的任何物质。
所述活性剂(即如上所定义的活性剂)可以为氨基酸序列或其化学衍生物。该活性剂甚至可为有机化合物或其他化学活性剂。该活性剂甚至可为核苷酸序列-它可为有义序列或反义序列。该活性剂甚至可为抗体。
因此，术语“活性剂”包括但不限于可从任何适宜的来源，天然或非天然来源获得或从其制备的化合物。
该活性剂可从可能包含肽以及其他化合物，如小分子有机分子，如先导化合物的化合物库中设计或获得。
作为例证，该活性剂可为天然活性剂、生物大分子或从生物活性物质，如细菌、真菌或动物(尤其是哺乳动物)细胞或组织制备的提取物、有机或无机分子、合成活性剂、半合成活性剂、结构或功能模拟物、肽、肽模拟物、衍生物、从完整蛋白裂解的肽或合成肽(例如使用肽合成仪或通过重组技术或它们的结合)、重组活性剂、抗体、天然或非天然活性剂、融合蛋白或其等同物及其突变体、衍生物或它们组合。
本文所用术语“活性剂”可为单一物质或活性剂的组合。
如果所述活性剂为有机化合物，则对于一些应用—例如如果活性剂为特异性多巴胺D3受体激动剂—则有机化合物可通常包含两个或多个连接的烃基基团。对于一些应用，优选所述活性剂包含至少两个环状基团—任选其中一个环状基团可为稠合环结构。对于一些应用，至少一个环状基团为杂环基团。对于一些应用，优选杂环基团在环中至少包含一个N。这些化合物的实例提供在本文的实施例部分。
如果所述活性剂为有机化合物，则对于一些应用—例如如果活性剂为PDE5i—则有机化合物可通常包含两个或多个连接的烃基基团。对于一些应用，优选所述活性剂包含至少两个环状基团—任选其中一个环状基团可为稠合环结构。对于一些应用，优选至少一个环状基团为杂环基团。对于一些应用，优选杂环基团在环中至少包含一个N。这些化合物的实例提供在本文的PDE5部分中。
所述活性剂可包含卤素基团。在本文中，“卤素”指氟、氯、溴或碘。
所述活性剂可包含一个或多个可为直链或支链的烷基、烷氧基、链烯基、亚烷基和亚链烯基基团。
取代的
为了避免疑问，除非另有说明，否则术语取代的是指被一个或多个所定义的基团取代。当基团可选自多个基团时，所选基团可相同或不同。为了避免疑问，术语独立地是表示，当一个以上的取代基选自多个可能的取代基时，这些取代基可相同或不同。
可药用盐
所述活性剂可为可药用盐的形式例如酸加成盐或碱盐或其溶剂化物，包括它的水合物，或者可以这样的形式给药。对于适宜盐的综述参见Berge等人，J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。
通常，可药用盐可通过按照需要使用合适的酸或碱容易地制得。盐可从溶液中沉淀出来，并通过过滤收集或通过蒸发溶剂来收集。
适宜的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成，实例为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、琥珀酸盐、蔗糖盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸(pamoate)盐等。
适宜的碱盐由形成无毒盐的碱形成，实例为钠盐、钾盐、铝盐、钙盐、镁盐、锌盐、二醇胺盐(diolamine)、乙醇胺盐、氨丁三醇盐、胆碱盐、葡甲胺盐和二乙醇胺盐。关于合适的可药用盐的综述参见Berge等人J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)；Gould P.L.，International J.of Pharmaceutics，33(1986)，201-217；和Bighley等人，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，MarcelDekker Inc.，New York(1996)，Vol.13，p.453-497优选的盐是钠盐。
本发明化合物的可药用溶剂化物包括其水合物。
在下文中，在本发明的任何方面定义的化合物、其可药用盐、其溶剂化物和多晶型物(除了化学方法中的中间体)称为“本发明化合物”。
多晶型物/不对称碳
活性剂可以以多晶型物形式存在。
活性剂可包含一个或多个不对称碳原子，因此存在两个或多个立体异构体形式。当活性剂包含一个链烯基或亚链烯基基团时，还可出现顺(E)和反(Z)异构现象。本发明包括活性剂各个立体异构体以及，适宜时，其各种互变异构形式和其混合物。
非对映异构体或顺和反式异构体的分离可通过常规方法实现，例如通过活性剂或适宜盐或其衍生物的立体异构体混合物的分级结晶、色谱或H.P.L.C.。活性剂的各种对映体也可从相应的光学纯中间体制备或通过拆分，如适当地通过使用适宜的手性载体对相应的外消旋体进行H.P.L.C.或通过对通过将相应的外消旋体与适宜的光学活性酸或碱反应形成的非对映异构体盐进行分级结晶。
同位素变体
本发明还包括活性剂或其可药用盐的所有适宜的同位素变体。本发明活性剂或药物可接受的盐的同位素变体被定义为其中至少一个原子被具有相同原子数但具有与自然界通常发现的原子量不同的原子量的原子替代。可掺入至活性剂和其药物可接受的盐中的同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。本发明活性剂或其药物可接受的盐的一些同位素变体，例如其中搀入了放射性同位素，如³H和¹⁴C的那些可用于药物和/或底物组织分布的研究。由于其制备的简易和可检测性，氚化的，即³H和碳-14，即¹⁴C的同位素尤其是优选的。而且，用同位素，如氘，即²H的取代可提供一些来自更大的代谢稳定性，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求的治疗的有利性并因此在一些情况下是优选的。本发明活性剂和其可药用盐的同位素变体通常可通过常规方法，使用适宜试剂的适宜同位素变体来制备。
前药
本领域技术人员应理解，所述活性剂可来自前药。前药的实例包括具有一些保护基团并可能不具有药物学活性，但可能在一些情况下施用(如口服或胃肠外)，而后在身体中代谢以形成具有药理活性的活性剂的物质。
本发明所有保护的衍生物和前药都包括在本发明范围内。
前部分
还应理解，已知为“前部分”的一些部分，例如H.Bundgaard，Elsevier，1985(其公开被本文引作参考)的“药物前体设计”中描述的，可被放置在活性剂的适宜官能团上。这样的前药也包括在本发明的范围内。
抑制剂/拮抗剂
本文所用术语抑制剂，例如描述PDEi或PDE5i化合物时所用的抑制剂与术语拮抗剂可交换使用。
本文所用术语“拮抗剂”是指能降低另一种物质或靶点作用的任何物质。拮抗作用可由被拮抗的物质组合产生(化学拮抗)，或通过经由不同靶点产生相反作用而产生(功能拮抗或生理拮抗)，或者是竞争将靶点激活与所观察到的作用联系起来的中间结合位点的结果(间接拮抗)。
此外，提高内源性勃起过程的用语与上调内源性勃起过程的用语可以交换使用。
激动剂
本文所用术语“激动剂”是指能提高另一种物质或靶点的作用或激活另一种物质或靶点的任何物质。术语激动剂包括与受体结合，从而改变，一般是提高它们活性形式比例，以产生生物反应的配体。
药物组合物
本发明还提供包含治疗有效量的本发明的活性剂和药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂(包括其组合)的药物组合物。
药物组合物可用在用于人或动物用途的人用药和兽药，通常包含任何一种或多种药物可接受的稀释剂、载体或赋形剂。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂为药物领域所熟知，描述在例如Remington药物科学，Mack Publishing公司(A.R.Gennaro编1985)。可根据预期的给药途径和标准的药物实践选择药物载体、赋形剂或稀释剂。药物组合物除载体、赋形剂或稀释剂外，还可包含任何适宜的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂和助溶剂。
防腐剂、稳定剂、染料和甚至香味剂可提供在药物组合物中。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯。还可使用抗氧化剂和悬浮剂。
取决于不同的送递系统，可有不同的组成/制剂要求。作为例证，本发明的药物组合物可被配制成使用微型泵或通过粘膜途径，例如以鼻喷雾或用于吸入的气雾剂或可消化的溶液剂送递或经胃肠外送递，其中组合物配制成可注射形式，例如通过静脉内、肌肉内或皮下途径送递。另外，制剂可被设计为通过两种途径送递。
在所述活性剂通过胃肠粘膜经粘膜送递时，在转运通过胃肠道期间应能保持稳定；例如应抗蛋白降解，在酸性pH下稳定和抗胆汁的去污作用。
适宜时，药物组合物可通过吸入，以栓剂或阴道栓剂的形式，通常为洗剂、溶液剂、霜剂、软膏或粉剂的形式通过使用皮贴给药，或为包含赋形剂，如淀粉或乳糖的片剂形式，或为单独或与赋形剂混合的胶囊剂或珠状剂，或为包含香味剂或着色剂的酏剂、溶液剂或悬浮剂形式口服给药，或它们可经胃肠外注射，例如静脉、肌肉内或皮下注射。对于胃肠外给药，组合物最好可以可包含其他活性剂，例如足够的盐或单糖以使得溶液与血液等渗的无菌溶液剂的形式使用。对于颊或舌下给药，组合物可以通过常规方法配制的片剂或锭剂的形式施用。
对于一些具体实施方案，所述活性剂还可与环糊精结合使用。已知环糊精与药物分子形成包含体和非包含体复合物。药物-环糊精复合物的形成可改变药物分子的溶解性、溶解速率、生物利用率和/或稳定性。药物环糊精复合物通常可用于大多数剂型和给药途径。作为与药物直接结合的另一种方式，环糊精可被用作辅助添加剂，例如载体、稀释剂或增溶剂。α-、β-、γ-环糊精为最常用的并且适宜的实例描述在WO-A-91/11172、WO-A-94/02518和WO-A-98/55148。
在一个优选实施方案中，本发明的活性剂全身性送递(如口服、颊、舌下)，较优选口服。
因此，优选的所述活性剂为适宜于口服送递的形式。
给药
术语“给药”包括通过病毒或非病毒方法的送递。病毒送递原理包括，但不局限于腺病毒载体、腺病毒相关(AAV)载体、疱疹病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体和杆状病毒载体。非病毒送递机理包括脂介导转染、脂质体、免疫脂质体、脂转染、阳离子表面亲水脂分子(CFAs)和其组合。
本发明的活性剂可单独施用，但通常以药物组合物的形式给药-例如当所述活性剂与根据预期的给药途径和标准药物实践选择的适宜的药物赋形剂、稀释剂或载体混合时。
例如，所述活性剂可以可包含芳香剂或着色剂的片剂、胶囊剂、珠状剂、酏剂、溶液剂或悬浮剂的形式施用以用于立即、延迟、改变、维持、脉冲或控制释放应用。
片剂可包含赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸，崩裂剂，如淀粉(优选玉米、土豆或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和一些硅酸盐复合物和成粒剂，如聚乙烯吡咯烷酮、羟基丙基甲基纤维素(HPMC)、羟基丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，可包括润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石。
类似类型的固体组合物还可用作明胶胶囊剂中的填料。这方面优选的赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖或高分子量聚乙二醇。对于含水悬浮剂和/或酏剂，可将所述活性剂与各种甜味剂或芳香剂、着色剂或染料混合，与乳化剂/或悬浮剂和稀释剂，如水、乙醇、丙二醇和甘油以及它们的混合物混合。
给药(送递)途径包括，但不局限于下面的一种或多种：口服(例如片剂、胶囊剂或可摄入溶液剂)、局部、粘膜(例如为鼻喷雾剂或吸入气雾剂)、鼻、胃肠外(例如通过可注射形式)、胃肠道、脊柱内、腹膜内、肌肉内、静脉内、子宫内、眼眶内、真皮内、颅内、气管内、阴道内、脑室内、脑内、皮下、眼(包括晶体内或眼室内)、透皮、直肠、粘膜、阴茎、阴道、硬膜外或舌下。
应理解并非所有的所述活性剂需要通过相同的途径施用。同样，如果组合物包含多于一种的活性成分，那么那些成分可通过不同的途径施用。
如果本发明的活性剂经胃肠外施用，那么这些施用的实例包括下面的一种或多种：静脉内、动脉内、腹膜内、膜内、脑室内、尿道内、胸内、颅内、肌肉内或皮下施用该活性剂；和/或通过输注技术。
对于胃肠外给药，所述活性剂最好以可包含其他物质，例如足够的盐或葡萄糖以使得溶液与血液等渗的无菌溶液的形式施用。如果需要，水溶液应被适宜地缓冲(优选pH3-9)。无菌条件下适宜胃肠外制剂的配制可容易地通过本领域技术人员熟知的标准制药方法完成。
如上所述，本发明的活性剂可经鼻内或通过吸入给药并方便地以干粉吸入器或来自使用适宜推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃，如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134^TM)或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EA^TM)、二氧化碳或其他适宜气体的加压容器、泵、喷洒或喷雾器的气雾剂喷雾形式送递。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供送递计量量的阀来确定。加压容器、泵、喷洒或喷雾器可包含活性化合物的溶液或悬浮液，例如使用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂，它可另外包含润滑剂，例如山梨酸三油酸酯。用于吸入或吹入剂的胶囊剂和筒剂(例如由明胶制成)可制备成包含活性剂和适宜粉基质，如乳糖或淀粉的粉末混合物。
另外，所述活性剂可以栓剂或阴道栓剂的形式施用，或它可以凝胶、水凝胶、洗剂、溶液剂、霜剂、软膏或细粉末的形式局部施用。所述活性剂还可经真皮或透皮施用，例如通过使用皮肤贴剂。它们还可通过肺或直肠途径施用。它们还可经眼施用。对于经眼的使用，所述化合物可制备成等渗、调节了pH、无菌盐的降低体积的悬浮液，或优选为等渗、调节了pH、无菌盐溶液，任选与防腐剂如苯扎氯氨混合。另外，它们可被配制成软膏，如凡士林软膏。
对于经皮肤的局部施用，所述活性剂可被配制成包含悬浮或溶解在例如与下面一种或多种的混合物中的活性化合物的适宜的软膏：矿物油、煤油、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另一方面，它可被配制为适宜的洗剂或霜剂、悬浮或溶解在例如下面一种或多种的混合物中：矿物油、山梨酸单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、多乙氧基醚60、十六烷基酯蜡、鲸腊硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄基醇和水。
本发明的组合物可通过直接注射施用。
对于一些应用，优选所述活性剂经口服给药。
对于一些应用，优选所述活性剂经局部给药。
剂量水平
通常，医生决定最适宜于各个病人的实际剂量。用于任何具体病人的具体的剂量水平和剂量频率可能是不同的，取决于各种因素，包括采用的具体化合物的活性，化合物作用的代谢稳定性和长短，年龄，体重，一般的健康状况，性别，饮食，给药的方式和时间，排泄速率，药物组合，具体疾病的严重性和个体进行的治疗。本发明的活性剂和/或药物组合物可以每天1至10次的方式施用，如每天1至2次。
对于对病人的口服和胃肠外给药，所述活性剂的每天剂量水平可为单剂量或多次剂量。
根据需要，所述活性剂可以0.01-30mg/kg体重的剂量给药，例如0.1-10mg/kg体重，较优选0.1-1mg/kg体重。自然，本文提到的剂量为平均状况下的一个实例。当然，存在需要更高或更低剂量范围的各种情况。
优选地，根据需要，活性剂可以以0.01-10mg/剂，例如0.1-5mg/剂，更优选1-3mg/剂的剂量给药。自然，本文提到的剂量为平均状况下的一个实例。当然，存在需要更高或更低剂量范围的各种情况。作为指导，普拉克索以约0.125-0.25mg/剂的剂量给药，阿朴吗啡以约2-3mg/剂的剂量给药。
日口服剂量可以为例如20-1000mg，优选例如50-300mg。
合适的剂量包括在雄性性功能障碍，特别是MED，或雌性性功能障碍，特别是FSAD和/或HSDD的治疗与引起呕吐和其它副作用之间带来满意治疗比例的剂量。
制剂
所述活性剂可被配制成药物组合物，如使用本领域熟知的方法，通过与一种或多种适宜载体、稀释剂或赋形剂混合。
下面提供了一些非限制性的制剂的实例。
制剂1：使用下面的成分制备片剂：
                    重量/mg
活性剂                250
纤维素，微晶          400
火成二氧化硅          10
硬脂酸                5
总共                  665
将各成分混合并压成每片重量为665mg的片剂。
制剂2：可如下制备静脉内制剂：
活性剂                100mg
等渗盐水              1,000ml
个体
本文所用术语“个体”是指脊椎动物，特别是哺乳动物。该术语包括但不限于驯养动物、体育比赛用动物、灵长目动物和人。
生物利用度
本发明化合物(以及组合)优选可口服生物利用。口服生物利用度是指到达全身循环的口服药物的比例。决定药物口服生物利用度的因素是溶解、膜透过性和代谢稳定性。一般依次使用体外和体内筛选技术来确定口服生物利用度。
溶解—胃肠道(GIT)的水内容物溶解药物的能力可由在模拟GIT的适当pH下进行的体外溶解实验来预测。本发明化合物的最小溶解度优选为50mcg/ml。溶解度可通过本领域已知的标准方法，例如在Adv.Drug Deliv.Rev.23，3-25，1997中描述的方法测定。
膜透过性是指化合物通过GIT细胞的能力。亲脂性是预测膜透过性的关键性质，并使用有机溶剂和缓冲液通过体外Log D_7.4测定来确定。本发明化合物的Log D_7.4优选为-2至+4，更优选为-1至+2。log D可通过本领域已知的标准方法例如在J.Pharm.Pharmacol.1990，42：144中描述的方法测定。
细胞单层测定例如加入CaCO₂来在流出转运蛋白例如p-糖蛋白存在下预测有利的膜透过性，即所谓的caco-2通量。本发明化合物的caco-2通量优选大于2×10^-6cms^-1，更优选大于5×10^-6cms^-1。caco通量值可通过本领域已知的标准方法例如在J.Pharm.Sci，1990，79，595-600中描述的方法测定。
代谢稳定性是指在吸收过程中GIT或肝脏代谢化合物的能力：首过效应。测定系统例如微粒体、肝细胞是代谢可能性的预测方法。实施例中的化合物在与肝提取相称的测定系统中优选表现出小于0.5的代谢稳定性。测定系统和数据处理的实例描述在Curr.Opin.DrugDisc.Devel.，201，4，36-44，Drug Met.Disp.，2000，28，1518-1523中。
因为上述方法的相互作用，可通过在动物中进行的体内实验来进一步支持药物在人中是可口服生物利用的。通过将化合物单独或者在混合物中经由口服途径给药，来在这些实验中测定绝对生物利用度。对于绝对测定(％吸收)，也可以使用静脉内途径。在动物中测定口服生物利用度的实例可参见Drug Met.Disp.，2001，29，82-87；J.MedChem，1997，40，827-829，Drug Met.Disp.，1999，27，221-226。
化学合成方法
适于依据本发明使用的选择性D3多巴胺受体激动剂(和/或适当时辅助剂例如PDEi/PDE5i)可通过化学合成技术制得。
所述活性剂或其靶或变体、同系物、衍生物、片段或模拟物可使用化学方法合成整个活性剂或活性剂的一部分来制备。例如，可通过固相技术合成肽，从树脂上裂解下来，通过制备高效液相色谱纯化(例如Creighton(1983)Proteins Structures And MolecularPrinciples，WH Freeman和Co，New York NY)。合成肽的组成可通过氨基酸分析或测序来证实(例如Edman降解法；Creighton，见上文)。
所述活性剂或其靶或变体、同系物、衍生物、片段或模拟物可使用各种固相技术进行(Roberge JY等(1995)科学269：202-204)，可实现自动合成，例如根据制造商提供的说明使用AB1 43 1A肽合成仪(Perkin Elmer)。此外，在直接合成期间，可改变包含所述活性剂或其任何一部分的氨基酸序列和/或使用化学方法与来自其他亚基的序列或其任一部分联合以产生变异的活性剂或靶，例如选择性多巴胺D3受体激动剂。
在本发明另一个具体实施方案中，所述活性剂靶或变体、同系物、衍生物、片段或模拟物的编码序列可使用本领域熟知的化学方法全部或部分合成(参见Caruthers MH等人(1980)Nuc Acids Res Symp Ser215-23，Horn T等人(1980)Nuc Acids Res Symp Ser 225-232)。
模拟物
本文所用术语“模拟物”指包括但不限于肽、多肽、抗体或具有相同性质的活性或对靶起参考活性剂作用的其他有机化合物的任何化学活性剂。也就是说，模拟物在功能上可与已知活性剂相同。
化学衍生物
本文所用术语“衍生物”或“衍生化”包括活性剂的化学修饰。这些化学修饰的实例是氢被卤素、烷基、酰基或氨基置换。
化学修饰
在本发明的一个具体实施方案中，所述活性剂可为化学修饰的活性剂。
活性剂的化学修饰可增强或降低活性剂与靶之间的氢键的相互作用、电荷的相互作用、疏水相互作用、范德华力相互作用或偶极相互作用。
在一个方面，确定的活性剂可起开发其他化合物的模型(例如模板)的作用。
靶
在本发明的一个方面，D3多巴胺受体可在用于鉴定能够激活D3多巴胺受体的活性剂的筛选中用作靶。在这方面，靶可包含由SEQ IDNO：1所示核苷酸序列编码的氨基酸序列或其变体、同源物、衍生物或片段，或者可包含由SEQ ID NO：2所示核苷酸序列编码的氨基酸序列或其变体、同源物、衍生物或片段，其优选通过重组和/或合成方法或包含它们的表达实体制得。
或者，D3多巴胺受体可用作靶以鉴定能够经由多巴胺D3受体激活来介导海绵体内压力增加和/或雌性生殖器血流增加，导致阴道、阴蒂和阴唇充血的活性剂。D3多巴胺受体还可用作靶以鉴定能够经由多巴胺D3受体激活来恢复性欲的活性剂。在这两方面，靶可以是合适的组织提取物。
靶甚至可以是这样的组织和/或重组靶的组合。
重组方法
本发明活性剂一般可通过重组DNA技术制得。
在一个实施方案中，活性剂优选为多巴胺D3受体激动剂。多巴胺D3受体激动剂可通过重组DNA技术制得。
氨基酸序列
本文所用术语“氨基酸序列”是术语“多肽”和/或术语“蛋白质”的同义词。在某些例子中，术语“氨基酸序列”是术语“肽”的同义词。在某些例子中，术语“氨基酸”序列与术语“蛋白质”同义。
氨基酸序列可由合适的原料制备分离，或者可合成制备或通过使用重组DNA技术来制备。
在一个方面，本发明提供了能够在测定中起靶作用的氨基酸序列，所述测定用于鉴定一种或多种活性剂和/或其衍生物。
靶优选为多巴胺D3受体。
多巴胺D3受体优选为分离的多巴胺D3受体和/或纯化的和/或是非天然的。
本发明多巴胺D3受体可以呈基本上分离的形式。应当理解，可将多巴胺D3受体与不影响预期受体目的，并且仍然可视为基本上分离的载体或稀释剂混合。本发明多巴胺D3受体还可以呈基本上纯的形式，在这种情况下，其在制备物中包含多巴胺D3受体，其中制备物中90％以上例如95％、98％或99％的多巴胺D3受体是可通过表达SEQ ID NO：1而获得的肽或其变体、同源物、衍生物或片段，或包含SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽或其变体、同源物、衍生物或片段。
核苷酸序列
本文使用的术语“核苷酸序列”与术语“多核苷酸”同义。
核苷酸序列可以是来源于基因组的或合成的或重组的DNA或RNA。核苷酸序列可以是代表有义或反义股的双链的或单链的或其组合的。
在某些应用中，优选地，核苷酸是DNA。
在某些应用中，优选地，核苷酸序列使用重组DNA技术来制备(如，重组DNA)。
在某些应用中，优选地，核苷酸序列是cDNA。
在某些应用中，优选地，核苷酸序列在这方面可与天然产生的形式相同。
在一个方面，本发明提供了编码能够在测定中起靶作用物质的核苷酸序列，所述测定用于鉴定一种或多种活性剂和/或其衍生物。
在本发明的一个方面，核苷酸序列编码多巴胺D3受体。
技术人员会理解多种不同的核苷酸序列可因遗传密码的简并而编码靶。另外，会理解技术人员可使用常规技术制备基本上不影响由本发明核苷酸序列编码的活性的核苷酸取代物，以反映表达靶的任意特定宿主生物密码子使用偏好。因此，与在附录序列表中所述的核苷酸序列相关的术语“变体”、“同源物”或“衍生物”包括任何从序列取代的、改变的、修饰的、置换的、缺失的或插入到序列的一种(多种)核酸，条件是所得核苷酸序列编码了本发明的功能性靶(或者是本发明的活性剂，只要所述活性剂包含核苷酸序列或氨基酸序列)。
如上所述，就序列的同源性而言，与本文序列表所述的D3受体序列相比，优选地至少有75％，更优选至少85％，更优选至少90％的同源性。更优选地有至少95％，更优选至少98％的同源性。可按照上文所述方法来进行核苷酸同源性的比较。优选地序列比较程序是上文所述的GCG Wisconsin Bestfit程序。缺失评分标准有各个相同核苷酸的10分匹配值和各个错配的-9分值。默认缺口产生罚分是-50并且默认缺口延伸罚分是每个核苷酸-3。
本发明也包括能够与本文所述序列选择性杂交的核苷酸序列，或其任何变体、片段或衍生物，或它们的补体。核苷酸序列长度优选至少15个核苷酸，更优选长度至少为20、30、40或50个核苷酸。这些序列可用作探针，如在诊断试剂盒中。
变体/同源物/衍生物
除了本文所述的具体氨基酸序列和核苷酸序列外，本发明也包括使用其变体、同源物和衍生物。这里，术语“同源性”可等同于“一致性”。
本文中，同源序列被认为包括至少75、85或90％相同的氨基酸序列，优选至少95或98％相同。具体来说，同源性通常应当考虑已知对活性来说必不可少的序列的区域。尽管同源性也可被认为是类似性(即，具有相似化学特性/功能的氨基酸残基)，但本文优选以序列一致性表示同源性。
同源性比较可通过眼来进行，或者常常借助便于使用的序列比较程序来进行。这些可商购的计算机程序可计算两个或多个序列之间的同源性百分数。
对相近的序列可计算出同源性百分数，即，一个序列同其他序列一起对比并且将一个序列中的每个氨基酸与其他序列中的相应氨基酸比较，每次一个残基。这被称为“无缺口”对比。一般来说，该无缺口对比仅仅在较少数目的残基中进行。
尽管这是一种非常简单和一致的方法，但没有考虑使用，例如，在不相同的一对序列中，插入或缺失将使随后的氨基酸残基不能对比，因此，在进行完整对比时可能导致同源性百分数的大大降低。因此，大多数序列比较方法被设计为进行最适对比，其中考虑了可能的插入和缺失而不过多地罚扣总体同源性的得分。这通过在序列对比中插入“缺口”以尽可能使局部的同源性最高化。
然而，这些较复杂的方法将“缺口罚分”分配到对比中所存在的每个缺口中，这样，对于有相同数目的相同氨基酸来说，有尽可能少缺口-反映两个比较序列间的较高相关性-的序列的对比会比有许多缺口的序列获得较高的分数。“亲族缺口耗费”通常用来为缺口的存在支付较高的费用并且为缺口中每个随后的残基支付较少的罚分。这是最常用的缺口评分系统。当然，高缺口罚分会产生有较少缺口的最适对比。大多数对比程序可改进缺口罚分。然而，使用这种序列比较软件时，优选使用缺失值。例如，使用GCG Wisconsin Bestifit包(见下文)时，氨基酸序列的缺失口罚分对缺口是-12分而对每个延伸是-4分。
所以，最大同源性百分数的计算首先要求进行最适对比，考虑缺口罚分。进行这种对比的合适的计算机程序是GCG WisconsinBestifit包(University of Wisconsin，U.S.A.；Devereux等人，1984，Nucleic Acids Research 12：387)。其他可进行序列比较的软件的例子包括但不限于BLAST包(见Ausubel等人，1999ibid-Chapter 18)、FASTA(Atschul等人，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和GENEWORKS成套比较工具。BLAST和FASTA在不联机和在线检索时均可使用(见Ausubel等人，1999 ibid，7-58到7-60页)。然而，优选使用GCG Bestifit程序。一种新的工具，称作BLAST2序列也可用来比较蛋白质和核苷酸序列(见FEMS Microbiol Lett 1999174(2)：247-50；FEMS Microbiol Lett 1999 177(1)：187-8和tatiana@ncbi.nlm.nih.gov)。
尽管最终同源性百分数可按一致性来测定，但对比方法本身通常不基于全部配对或全不配对的比较。而是通常使用按类似性评分的标准根据化学类似性或进化的距离来将分数分配给每对比较。这种常用的评分标准的例子是BLOSUM62模型-BLAST成套程序的默认模型。如果提供的话，GCG Wisconsin程序通常使用公共默认值或惯用符号比较表(见进一步详细描述的使用者手册)。GCG包优选使用公共默认值，或在其他软件的情况下使用如BLOSUM62的默认模型。
一旦软件产生最适对比，计算同源性百分数，优选序列一致性百分数成为可能。软件通常分段进行序列比较并产生数值结果。
序列也可以有缺失、插入或取代的氨基酸残基，这些残基产生沉默改变并产生功能性等同物。考虑氨基酸取代可根据极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性的和/或残基的两亲性的类似性来进行，只要能保持物质的二级结合活性。例如，带负电荷的氨基酸包括天门冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；并且不带电的极性的具有类似亲水性端基的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。
可制备保守取代物，例如，按下表所示方法。在第二栏相同区域的氨基酸并且优选在第三栏同一行的氨基酸可相互取代：
    脂肪族  非-极性的    GAP    ILV  极性-不带电荷的    CSTM    NQ  极性-带电荷的    DE    KR    芳香族    HFWY
本发明也包括可发生的同源取代(本文所使用的取代和置换均指存在的氨基酸残基与选择性残基的交换)，即，等同取代如用碱性的取代碱性的、用酸性的取代酸性的、用极性的取代极性的氨基酸残基等。也可以发生非同源取代，即，从一类残基取代为另一类或另外包括的非天然氨基酸如鸟氨酸(下文称作Z)、二氨基丁酸鸟氨酸(下文称作B)、正亮氨酸鸟氨酸(下文称作O)、吡啶丙氨酸、噻吩基丙氨酸、萘基丙氨酸和苯基甘氨酸。
置换也可通过非天然氨基酸来进行，这些非天然氨基酸包括：α*和α-二取代的*氨基酸，N-烷基氨基酸*、乳酸*、天然氨基酸的卤代衍生物如三氟酪氨酸*、对氯苯丙氨酸*、对溴苯丙氨酸*、对碘苯丙氨酸*、L-烯丙基甘氨酸*、β-丙氨酸*、L-α-氨基丁酸*、L-γ-氨基丁酸*、L-α-氨基异丁酸*、L-ε-氨基己酸^#、7-氨基庚酸*、L-蛋氨酸砜^#*、L-正亮氨酸*、L-正缬氨酸*、对硝基-L-苯丙氨酸、L-羟基脯氨酸^#、L-硫代脯氨酸*、苯丙氨酸(Phe)的甲基衍生物如4-甲基-Phe*、五甲基-Phe*、L-Phe(4-氨基)^#、L-Tyr(甲基)*、L-Phe(4-异丙基)*、L-Tic(1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸)*、L-二氨基丙酸^#和L-Phe(4-苯甲基)*。在上文的讨论中(涉及同源或非同源取代)，标志*被用来表示衍生物的疏水特性而^#用来表示衍生物的亲水特性，#*表示两亲特性。
改变的氨基酸序列可包括合适的间隔基团，所述基团可插入序列中的任何两个氨基酸残基之间，除氨基酸间隔基团如甘氨酸或β-丙氨酸残基外，包括烷基如甲基、乙基或丙基基团。变体的其它形式包括存在一个或多个类肽形式的氨基酸残基，本领域技术人员会很好地理解。为了避免有疑问，所使用的“类肽形式”指改变的氨基酸残基，其中α-碳取代基在残基的氮原子上而不是α-碳上。制备类肽形式的肽的方法在本领域中是已知的，例如Simon RJ等人，PNAS(1992)89(20)，9367-9371和Horwell DC，Trends Biotechnol.(1995)13(4)，132-134。
杂交
本文所使用的术语“杂交”应包括“一核苷酸链通过碱基配对与互补链结合的过程”以及在聚合酶链反应(PCR)技术中进行的扩增过程。
能与本文所述核苷酸序列或其补体选择性杂交的本发明核苷酸序列通常与本文所述的相应互补核苷酸序列在至少20个，优选至少25或30，例如至少40、60或100或更多邻近的核苷酸区域有至少75％、优选至少85或90％并且更优选至少95％或98％的同源性。
术语“能选择性杂交的”意指核苷酸序列用作探针时，发现明显高于本底水平下靶核苷酸序列与探针杂交。能发生本底杂交，这是因为例如在被筛选的cDNA或基因组DNA文库中存在其他核苷酸序列。这样，本底暗示由探针和非特异DNA文库成员之间的相互作用所产生信号水平的强度比用靶向DNA所观察的特异性相互作用低10倍，优选低100倍。例如，通过用³²P放射标记探针可测量相互作用的强度。
按Berger和Kimmel(1987，Guide to Molecular CloningTechniques，Methods in Enzymology，Vol 152，Academic Press，SanDiego CA)的教导，杂交条件基于核苷酸结合复合物的熔化温度(Tm)，并得到如下文所描述定义的“严紧性”。
最大的严紧性通常在约Tm-5℃(低于探针Tm5℃)发生；最高的严紧性在低于Tm约5℃到10℃；中等严紧性在低于Tm约10℃到20℃；并且低严紧性在低于Tm约20℃到25℃。本领域技术人员会理解，最大严紧性杂交可用来确定或检测相同的核苷酸序列而中等(或低)严紧性杂交可用来确定或检测类似的或相关的多核苷酸序列。
在优选方面，本发明包括可在严紧性条件下可与本发明核苷酸序列杂交的核苷酸序列(如，65℃和0.1×SSC{1×SSC＝0.15M NaCl，0.015M Na₃柠檬酸pH7.0})。本发明核苷酸序列是双链时，分开或组合的双螺旋的双链均包含在本发明中。核苷酸序列是单链时，可以理解该核苷酸序列的互补序列也包含在本发明的范围之内。
可通过各种方法来获得与本发明序列非100％同源性的但落入本发明范围的核苷酸序列。可获得本文所述序列的其他变体，例如通过探查由一定范围的原料制备的DNA文库。另外，可以获得其他病毒/细菌，或同系细胞特别是在哺乳动物细胞(如大鼠、小鼠、牛和灵长目动物细胞)中发现的同系细胞并且这些同系细胞及其片段通常能够与本文序列表中所示的序列进行选择性地杂交。这些序列可通过探查由其他动物种制备的cDNA文库或基因组DNA文库，并且用包含全部或部分本文所述核苷酸序列的探针在中等到高严紧性条件下探查这些文库来获得。采用类似的方法获得本发明的同源物种和氨基酸和/或核苷酸序列的等位变体。
使用简并PCR也可获得变体和同源菌株/种，其中使用设计的引物，它靶向于编码本发明序列之中的保守氨基酸序列的变体和同源体范围之内的序列。可以预测保守序列，例如通过对比来自数种变体/同源体的氨基酸序列。序列对比可使用本领域已知的计算机软件来进行。例如广泛使用的GCG Wisconsin PileUp程序。在简并PCR中使用的引物将包含一个或多个简并部位并且将在低于用针对已知序列的单个序列引物来克隆序列所使用的严紧性条件下使用。
另外，这些核苷酸序列可通过特征序列如本发明序列表SEQ ID NO：1中列出的核苷酸序列定点诱变来获得。例如，序列要求沉默密码子改变而使密码子适于特定的表达核苷酸序列的宿主细胞时，这是有用的。其它序列改变可能是需要的，以便引入限制酶识别部位，或者改变核苷酸序列编码的蛋白质的活性。
可使用本发明的核苷酸序列来产生引物如PCR引物、选择性扩增反应的引物，探针如用揭示标记通过常规方法使用放射性或非放射性标记物标记的，或者可以将核苷酸序列克隆到载体中。这些引物、探针和其他片段的长度将至少有15个，优选至少20个，例如至少25、30或40个核苷酸，并且也包括在本文所使用的本发明术语核苷酸序列中。
可通过重组、合成方法或通过本领域技术人员可用的任何方法来制备本发明的核苷酸序列如DNA多核苷酸和探针。它们也可通过常规技术来克隆。
总而言之，引物将通过合成方法来制备，包括分步制备所需核酸序列，一次一个核苷酸。使用自动技术完成制备在本领域是容易的。
较长的核苷酸序列通常使用重组方法来制备，例如使用PCR(聚合酶链反应)克隆技术。这包括制备位于需要克隆的靶向序列的侧翼区的一对引物(如约15-30个核苷酸的)，使引物与从动物或人细胞获得的mRNA或cDNA接触，在使所需区域扩增的条件下进行聚合酶链反应(PCR)，分离扩增的片段(如，通过在琼脂糖凝胶上纯化反应混合物)并且回收扩增的DNA。可以设计包含合适的限制酶识别位点的引物，以便将扩增的DNA克隆到合适的克隆载体中。
由于遗传密码的固有简并性，编码基本上相同或功能等同的氨基酸序列的其它DNA序列可用于克隆和表达靶序列。本领域普通技术人员应该理解，对于某些表达系统，产生具有非天然存在的密码子的靶序列是有益的。特定原核生物或真核生物的宿主首选的密码子(MurrayE et al(1989)Nuc Acids Res 17：477-508)可供选择，例如提高靶表达率或者产生具有所需特性的(如具有较长半衰期的重组RNA转录物)、而不是产生由天然存在的序列产生的转录物的密码子。
载体
在本发明的一个实施方案中，可将活性剂(即多巴胺D3受体激动剂)直接对个体给药。
在另一个本发明实施方案中，将包含编码本发明活性剂的载体施用给个体。
优选使用基因载体制备重组活性剂和/或将重组活性剂递送到靶位点上。
如本领域众所周知的，载体是容许或帮助将实体从一个环境转移到另一个环境中的工具。依据本发明，例如，用于重组DNA技术的某些载体容许实体例如DNA片段(例如异源DNA片段，例如异源cDNA片段)转移到宿主和/或靶细胞内，以复制包含本发明核苷酸序列和/或表达由本发明核苷酸序列编码的本发明蛋白的载体。用于重组DNA技术的载体的实例包括但不限于质粒、染色体、人工染色体或病毒。
术语“载体”包括表达载体和/或转化载体。
术语“表达载体”是指能够在体内或体外/离体表达的构建物。
术语“转化载体”是指能够将一个物种转化成另一个物质的构建物。
裸DNA
包含编码本发明可用于治疗雄性性功能障碍例如MED或雌性性功能障碍例如FSAD的活性剂的核苷酸的载体可作为“裸核酸构建物”直接给药，优选还包含与宿主细胞基因组同源的翼侧序列。
本文所用术语“裸DNA”是指包含编码本发明活性剂的核苷酸序列和控制其生成的短启动子区域的质粒。其之所以称为“裸”DNA是因为质粒不在任何递送载体中转运。当这样的DNA质粒进入宿主细胞例如真核细胞中时，其所编码的蛋白(例如本发明活性剂)在细胞内转录和翻译。
非病毒递送
或者，可使用本领域已知的多种非病毒技术例如转染、转化、电穿孔和生物弹射(biolistic)转化将包含本发明核苷酸序列或本发明活性剂(即选择性多巴胺D3受体激动剂)或本发明靶(即选择性多巴胺D3受体激动剂)的载体引入到合适的宿主细胞中。
本文所用术语“转染”是指使用非病毒载体将基因递送到靶哺乳动物细胞内的方法。
典型的转染方法包括电穿孔、DNA生物弹射、脂质介导的转染、压缩DNA介导的转染、脂质体、免疫脂质体、lipofectin、阳离子物质介导的、阳离子表面两亲物质(CFAs)(Nature Biotechnology 199614；556)、多价阳离子物质例如精胺、阳离子脂质或多熔素、1，2-二(油酰氧基)-3-(三甲基铵基)丙烷(DOTAP)-胆固醇复合物(Wolff andTrubetskoy 1998 Nature Biotechnology 16：421)及其组合。
通过几种已知的转染技术，例如包括使用转染剂的技术来促进哺乳动物细胞摄取裸核酸构建物。这些转染剂的实例包括阳离子物质(例如磷酸钙和DEAE-葡聚糖)和脂质转染试剂(例如lipofectam^TM和transfectam^TM)。通常将核酸构建物与转染剂混和以产生组合物。
病毒载体
或者，可使用多种本领域已知的病毒技术，例如用重组病毒载体例如逆转录病毒、单纯疱疹病毒和腺病毒感染，将包含本发明活性剂或靶或本发明核苷酸序列的载体引入到合适的宿主细胞内。
载体优选是重组病毒载体。合适的重组病毒载体包括但不限于腺病毒载体、腺相关病毒(AAV)载体、疱疹病毒载体、慢病毒载体、杆状病毒载体、痘病毒载体或细小病毒载体(参见Kestler等人1999 HumanGene Ther 10(10)：1619-32)。对于病毒载体，通过靶细胞的病毒感染来介导编码本发明活性剂的核苷酸序列的递送。
靶向载体
术语“靶向载体”是指其感染/转染/转化细胞或在宿主和/或靶细胞中表达的能力局限在宿主生物体内的一些细胞类型上，通常是具有相同或类似表型的细胞。
复制载体
可将编码本发明活性剂(即选择性多巴胺D3受体激动剂和/或辅助剂例如PDEi或PDE5i)或靶(例如多巴胺D3受体)的核苷酸引入到重组复制载体中。这样的载体可用于在相容的宿主细胞中复制核苷酸序列。因此，在本发明的一个实施方案中，本发明提供了制备本发明靶的方法，包括将本发明核苷酸序列引入到复制载体内，将载体引入到相容的宿主细胞内，让宿主细胞在使得载体复制的条件下生长。可从宿主细胞中回收载体。
表达载体
优选将插入到载体内的本发明活性剂或本发明核苷酸序列或本发明靶与控制序列可操作地连接，控制序列能够通过宿主细胞让编码序列例如本发明D3多巴胺受体的编码序列表达，即载体是表达载体。由宿主重组细胞产生的本发明活性剂或靶可分泌或者可包含在细胞内，这取决于所用的序列和/或载体。本领域技术人员知道，含有本发明活性剂或靶编码序列的表达载体可用信号序列来设计，所述信号序列经由特定的原核生物或真核生物细胞膜直接分泌本发明活性剂或靶编码序列。
体外表达
可如下所述将本发明载体转化或转染到合适的宿主细胞和/或靶细胞内，以提供本发明活性剂或靶的表达。该方法可包括将用表达载体转化的宿主细胞和/或靶细胞在一定条件下培养，以提供编码本发明活性剂或靶的编码序列的载体的表达，并任选收集表达的本发明活性剂或靶。载体可以是例如提供的有复制源、任选表达所述多核苷酸的启动子和任选启动子的调节子的质粒或病毒载体。载体可含有一种或多种可选择的标记物基因，例如抗氨苄青霉素基因—对于细菌质粒或抗新霉素基因—对于哺乳动物载体。本发明活性剂或本发明靶的表达可以是组成型的，这样它们连续生成，或者是需要刺激以启动表达的诱导型。对于诱导型表达，在需要时，可通过例如将诱导物质例如地塞米松IPTG加到培养基中来启动本发明活性剂或靶的生成。
融合蛋白
本发明多巴胺D3受体或活性剂(即选择性多巴胺D3受体激动剂)可作为融合蛋白表达以帮助提取和纯化和/或递送本发明活性剂或多巴胺D3受体靶到个体中和/或帮助开发活性剂的筛选。融合蛋白伴侣的实例包括谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA结合和/或转录活化结构域)和β-半乳糖苷酶。在融合蛋白伴侣和所需的蛋白序列之间包括蛋白分解位点以除去融合蛋白序列也是很方便的。优选融合蛋白不影响靶的活性。
融合蛋白可包含与本发明的物质融合的抗原或抗原决定簇。在本发明的实施方案中，融合蛋白可以是包含用作佐剂的物质的非天然存在的融合蛋白，所述佐剂可对免疫系统产生一般性刺激作用。抗原或抗原决定簇可连接到所述物质的氨基或羧基末端。
在本发明的另一个实施方案中，氨基酸序列可连接到异源序列上以编码融合蛋白。例如，为筛选肽文库中能够影响所述物质活性的活性剂，编码表达可被市售抗体识别的异源表位的嵌合物质是有用的。
宿主细胞
可采用多种宿主细胞来表达编码活性剂例如本发明活性剂或本发明多巴胺D3受体靶的核苷酸序列。这些细胞可以是原核生物和真核生物宿主细胞。合适的宿主细胞包括细菌例如大肠杆菌(E.coli)、酵母、丝状真菌、昆虫细胞，哺乳动物细胞，通常是固定的哺乳动物细胞，例如小鼠、CHO、人和猴子细胞系及其衍生物。
本发明范围内适宜的表达宿主的实例是真菌，例如曲霉属真菌(如EP-A-0184438和EP-A-0284603中描述的那些)和木霉属的种类；细菌，例如芽孢杆菌属的种类(如EP-A-0134048和EP-A-0253455中描述的那些)、链霉菌属和假单胞菌属的种类；以及酵母，例如克鲁维氏酵母(如EP-A-0096430和EP-A-0301670中描述的那些)和酵母属的种类。例如，典型的表达宿主可选自黑曲霉(Aspergillus niger)、黑曲霉变种(Aspergillus niger var.tubigenis)、黑曲霉变种(Aspergillusniger var.awamori)、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、米曲霉(Aspergillus orvzae)、Trichoderma reesei、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、乳克鲁维氏酵母(Kluyveromyces lactis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
可使用适合的宿主细胞—例如酵母、真菌和植物宿主细胞进行翻译后修饰(如肉豆蔻酰化、糖基化、平截、laptidation以及酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸磷酰化)，按需赋予本发明的重组表达产物以最佳生物活性。
优选的宿主细胞能够加工表达产物以生成合适的成熟多肽。加工的实例包括但不限于糖基化、泛在蛋白素化(ubiquitination)、二硫键形成和一般的翻译后修饰。
抗体
在本发明的一个实施方案中，本发明活性剂可以是抗体。此外，或者，靶可以是抗体。
抗体可通过标准技术，例如用本发明的物质免疫接种或用噬菌体展示文库进行生产。
为实现本发明的目的，除非另有说明，术语“抗体”包括但不限于多克隆的、单克隆的、嵌合的、单链的、Fab片断、由Fab表达文库产生的片断以及其模拟物。这类片断包括保持其与靶物质结合活性的整个抗体的片断、Fv、F(ab’)和F(ab’)₂片断以及单链抗体(scFv)、包含抗体的抗原结合位点的融合蛋白和其它合成蛋白。再者，抗体及其片断可以是人源化抗体。中和抗体，即抑制所述物质多肽生物活性的那些抗体尤其优选用于诊断和治疗。
如果需要多克隆抗体，将所选择的哺乳动物(如小鼠、兔、山羊、马等)用带有表位的免疫原性多肽免疫，所述表位可由本发明确定的活性剂和/或物质获得。根据宿主的种类，可使用各种佐剂增强免疫反应。这类佐剂包括，但不限于弗氏佐剂；矿物凝胶，如氢氧化铝；和表面活性物质，如溶血卵磷脂、多聚醇类、聚阴离子、肽、油性乳液、匙孔血蓝蛋白和二硝基苯酚。BCG(卡介菌)和小棒杆菌(Corynebacterium parvum)可能是有用的人佐剂，为了激发防御系统，如果将纯化的多肽物质施用于期望免疫的个体，就可以使用这类人用佐剂。
收集被免疫动物的血清并按照已知方法处理。如果包含针对由本发明确定的活性剂和/或物质获得的表位的多克隆抗体的血清还含有针对其它抗原的抗体，可通过免疫亲和色谱纯化多克隆抗体。生产和加工多克隆抗血清的技术是本领域已知的。为制备这类抗体，本发明还提供用作人或动物的免疫原的本发明的多肽或其半抗原化为另一种多肽的片断。
针对可由本发明确定的活性剂和/或物质获得的表位的单克隆抗体也可由本领域普通技术人员方便地生产。通过杂交瘤制备单克隆的通用方法是熟知的。产生抗体的无限增殖细胞系可通过细胞融合产生；也可通过其它技术，例如用致癌DNA直接转化B淋巴细胞或者用EB(Epstein-Barr)病毒转染来产生。可筛选各种性质，即同型和表位亲和性的针对外围表位的单克隆抗体。
针对本发明物质和/或确定活性剂的单克隆抗体可用任何通过培养的传代细胞系生产抗体分子的技术来制备。这些技术包括，但不限于最初由Koehler和Milstein描述的杂交瘤技术(1975 Nature 256：495-497)、人B细胞杂交瘤技术(Kosbor et al(1983)Immunol Today4：72；Cote et al(1983)Proc Natl Acad Sci 80：2026-2030)和EBV-杂交瘤技术(Cole et al(1985)Monoclonal Antibodies andCancer Therapy，Alan R Liss Inc，pp 77-96)。此外，也可使用为生产“嵌合抗体”开发的技术，将小鼠抗体基因剪接到人抗体基因上以获得具有适合抗原特异性和生物活性的分子(Morrison et al(1984)Proc Natl Acad Sci 81：6851-6855)；Neuberger et al(1984)Nature312：604-608；Takeda et al(1985)Nature 314：452-454)。或者，用于生产单链抗体的技术(US Patent No.4946779)也适用于生产特定的单链抗体物质。
抗体，无论是单克隆抗体还是多克隆抗体，它们都针对可由本发明确定的活性剂和/或物质获得的表位，并且中和抗体在被动免疫治疗中具有作用。单克隆抗体尤其可用于增加抗独特型抗体。抗独特型抗体是带有需要针对其加以保护的所述物质和/或活性剂的“内影像”的免疫球蛋白。增加抗独特型抗体的技术是本领域公知的。这些抗独特型抗体在治疗中也有用。
也可通过在体内在淋巴细胞群中诱导产生抗体或者通过筛选重组的免疫球蛋白文库或分布板中的高度特异结合的试剂来产生抗体(如Orlandi等人于1989年在Proc Natl Acad Sci 86：3833-3837以及Winter G和Milstein C于1991年在Nature 349：293-299中公开的)。
也可生产含有用于与物质结合的特异结合位点的抗体片断。例如，这类片断包括，但不限于可通过胃蛋白酶消化抗体分子产生的F(ab’)₂和可通过还原F(ab’)₂片断的二硫键生成的Fab片断。或者，可构建Fab表达文库以快速和容易地识别具有所需特异性的单克隆Fab片断(Huse WD等人(1989)Science 256：1275-1281)。
报道分子
种类众多的报道分子可用于本发明的分析方法(以及筛选)中，优选的报道分子提供可方便地检测的信号(如通过光谱学检测)。例如，报道分子可编码催化改变光吸收性的反应的酶。
报道分子的实例包括但不限于β-半乳糖苷酶、转化酶、绿荧光蛋白、萤光素酶、氯霉素、乙酰转移酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、外切葡聚糖酶和葡糖淀粉酶。或者，可将放射性标记的或荧光标记的核苷酸掺入刚生成的转录物中，之后当所述转录物与寡核苷酸探针结合时被识别。
在一个优选的实施方案中，通过报道分子产物，例如β-半乳糖苷酶的酶活性测定报道分子的产生。
检测和测定靶表达的各种方法，例如通过使用对蛋白具有特异性的多克隆或单克隆抗体是本领域已知的。实例包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和荧光激活细胞分选术(FACS)。优选的是使用与多肽的两个非干扰性表位反应的单克隆抗体的双位点的基于单克隆的免疫测定法，但也可使用竞争性结合测定法。记载这些及其它测定方法的文献有Hampton R等人，(1990)Serological Methods，A Laboratory Manual，APS Press，St Paul MN和Maddox DE etal(1983)，J Exp Med 15 8：121 1)。
各种标记物和结合技术是本领域普通技术人员已知的，它们可用于各种核酸和氨基酸测定中。产生用于检测多核苷酸序列靶的标记杂交物或PCR探针的方法包括微量标记、切口平移、末端标记或使用标记核苷酸的PCR扩增。或者，可将编码序列或其任何部分克隆到用于产生mRNA探针的载体中。这类载体是本领域已知的并有市售，它们可通过加入适合的RNA聚合酶，例如T7、T3或SP6和标记的核苷酸用于体外合成RNA探针。
有许多公司，例如Pharmacia Biotech(Piscataway，NJ)，Promega(Madison，WI)和US Biochemical Corp(Cleveland，OH)提供用于这些方法的商品试剂盒和方案。适合的报道分子或标记物包括放射性核素、酶、荧光剂、化学发光剂或生色剂以及底物、辅因子、抑制剂和磁粉等。教导了这些标记物使用的专利包括US-A-3817837；US-A-3850752；US-A-3939350；US-A-3996345；US-A-4277437；US-A-4275149和US-A-4366241。也可生产如US-A-4816567中所示的重组免疫球蛋白。
定量测定特定分子表达的其它方法包括放射性标记(Melby PC等人1993 J Immunol Methods 159：235-44)或生物素酰化(Duplaa C等人1993 Anal Biochem 229-36)核苷酸、共扩增对照核苷酸和将实验结果内插到标准曲线上。通过以ELISA格式运行分析可加速多种样品的定量，其中目标低聚物存在于不同稀释液中并通过分光光度分析和测热反应进行快速定量。
无论是否存在标记基因的表达都认为所需的基因总是存在的，其存在性和表达应被证实。例如，如果将核苷酸序列插入到标记基因序列中，含有该核苷酸序列的重组细胞可通过标记基因功能的缺乏来识别。或者，在单一启动子的控制下，可用靶编码序列与标记基因成串排列。应答诱导或选择的标记基因的表达一般也表示目标物的表达。
或者，包含编码靶的序列和表达靶编码区域的宿主细胞可通过本领域普通技术人员已知的各种方法来识别。这些方法包括，但不限于DNA-DNA或DNA-RNA杂交和蛋白生物测定或免疫测定技术，所示技术包括基于膜、基于溶液或基于芯片的核酸或蛋白测定和/或定量分析技术。
筛选
在任何一种药物筛选技术中，任何一种或多种适合的靶—例如编码多巴胺D3受体和/或多巴胺D2受体的氨基酸和/或核苷酸序列都可用于鉴定活性剂例如选择性多巴胺D3受体激动剂。用于该试验的靶可以游离于溶液中、固定在固体载体上、固定于细胞表面或定位于细胞内。该靶甚至可以存在于动物模型中，其中所述靶可以是外源性靶或引入的靶。动物模型是非人动物模型。可以测量靶活性的消失或者靶与受试活性物质之间的结合复合物的形成。
可采用基于1984年9月13日出版的Geysen的欧洲专利申请84/03564中描述的药物筛选方法。概括地说，在一种固体底物，例如塑料大头针或一些其它表面上合成大量不同的小分子肽试验化合物。将肽试验化合物与适合的靶或其片断反应并洗涤。然后检测结合物—例如通过适当采用本领域熟知的方法。也可将纯化的靶也可直接包被到培养板上用于药物筛选技术。或者，可使用非中和抗体捕获肽并使其固定到固体支持物上。
本发明还涉及使用竞争性药物筛选分析，其中能特异性地与靶结合的中和抗体与试验化合物竞争结合靶。
另一种高通量筛选(HTS)具有适宜的对所述物质的结合亲和性的活性剂的筛选技术是WO 84/03564中具体描述的方法。
预期本发明的分析方法适于小规模和大规模筛选试验化合物以及定量分析。
在一个优选的方面，本发明的筛选至少包括下列步骤(这些步骤的顺序不一定与此相同)：(a)进行体外筛选以确定候选活性剂是否具有相关活性(例如调节多巴胺D3受体活性)；(b)进行一种或多种选择性筛选以确定所述候选活性剂的选择性(例如，看所述活性剂是否也是多巴胺D2受体激动剂-如使用本文描述的功能测定方法)；和(c)对所述候选活性剂进行体内筛选(例如，使用功能性动物模型)。一般来说，如果所述候选活性剂通过了(a)筛选和(b)筛选，才进行(c)筛选。
诊断
本发明还提供了检测患有性功能障碍，特别是MED或FSAD和/或HSDD的倾向性的诊断组合物或试剂盒。在这方面，组合物或试剂盒应当包含这样的实体物质，该实体物质能够指示出试验样品中一氧化氮(NO)和/或一种或多种血管活性肠蛋白(VIP)的存在或甚至是不存在。试验样品优选得自阴茎或雌性生殖器。试验样品优选在性唤起期间获得。
为了提供诊断疾病的基础，应当由不患有性功能障碍，特别是不患MED或FSAD和/或HSDD的个体建立正常或标准值。例如，这可以如下完成：通过在本领域熟知的适于复合物形成的条件下，将取自正常个体(动物或人)的体液或细胞提取物与VIP的抗体合并。通过将形成的标准复合物与系列稀释的阳性对照进行比较来确定其量，在阳性对照中是将已知量的抗体与已知浓度的纯化VIP合并。然后，可将由正常样品获得的标准值与由取自可能患有雄性性功能障碍例如MED，或雌性性功能障碍例如FSAD和/或HSDD的个体的样品获得的值进行比较。标准值与诊断值之间的偏差确定了病症的存在。
可调整诊断以评价特定治疗方案(即施用选择性多巴胺D3激动剂)的效力，并且可用于动物试验、临床试验或监测治疗的个体。如果建立了MED或FSAD和/或HSDD，可施用治疗剂例如本发明选择性多巴胺D3激动剂，并且可产生治疗效果或值。最后，可在有规律基础上重复进行诊断测定，以评估数值是否朝向或返回正常或标准模式发展。成功的治疗效果可用于表明进行了几天或几个月的治疗的效力。
诊断试剂盒
本发明还提供了用于以下目的的诊断组合物或诊断方法或试剂盒：(i)检测和测定生物液体和组织中的多巴胺D3受体活性；和/或(ii)检测患有雄性性功能障碍例如MED，或雌性性功能障碍例如FSAD和/或HSDD的倾向性。在这方面，组合物或试剂盒应当包含这样的实体物质，该实体物质能够指示出试验样品中NO和/或一种或多种VIP的存在或不存在。试验样品优选得自雄性或雌性生殖器或其分泌物。试验样品优选在个体的性唤起期间获得
诊断试验
为了提供诊断疾病的基础，应当由不患有性功能障碍，特别是MED或FSAD和/或HSDD的个体建立正常或标准值。例如，这可以如下完成：通过在本领域熟知的适于复合物形成的条件下，将取自正常个体(动物或人)的体液或细胞提取物与VIP的抗体合并。通过将形成的标准复合物与系列稀释的阳性对照进行比较来确定其量，在阳性对照中是将已知量的抗体与已知浓度的纯化VIP合并。然后，可将由正常样品获得的标准值与由取自可能患有雄性性功能障碍例如MED，或雌性性功能障碍例如FSAD和/或HSDD的个体的样品获得的值进行比较。标准值与诊断值之间的偏差确定了病症的存在。
包含这些实体物质的诊断组合物和/或试剂盒可用于迅速、可靠、灵敏和特异性地测定勃起组织提取物中的NO和/或一种或多种VIP或确定它们的位置。在一些情况下，试剂盒指示性功能障碍例如MED或FSAD和/或HSDD的存在。
分析方法
诊断组合物和/或方法和/或试剂盒可用于下列技术，包括但不限于：竞争性和非竞争性分析、放射免疫测定、生物发光和化学发光测定、荧光分析、夹心法分析、免疫放射分析、斑点印迹、包括ELISA的酶联测定、微量滴定板、用于快速检测尿或血液的抗体包被的条带或检测尺、免疫组织化学和免疫细胞化学。
探针
本发明的另一方面是提供核酸杂交或PCR探针，它们可测定(尤其是能够选择性选择的那些)多核苷酸序列，包括基因组序列、编码靶编码区域例如多巴胺D3受体或密切相关的分子，例如等位基因。探针的特异性，即它是否由高度保守的、保守的或非保守的区域或结构域衍生，以及杂交或扩增的严紧性(高度、中等或低度)将决定探针是否仅识别天然存在的靶编码序列或相关的序列。用于测定相关核酸序列的探针选自目标物家族成员的保守的或高度保守的核苷酸区域，这类探针可用于简并探针库中。为测定相同的核酸序列，或者当需要最高特异性时，核酸探针应选自靶多核苷酸的非保守性核苷酸区域或独特区域。本文采用的术语“非保守性核苷酸区域”是指对本文公开的靶编码序列独特的核苷酸区域，而不存在于相关家族的成员中。
如US-A-4683195、US-A-4800195和US-A-4965188中所述的PCR提供了基于靶序列的寡核苷酸的其它用途。这些低聚物通常是化学合成的，但它们也可通过酶促生成或由重组的原料制备。在识别特定基因或病症的最佳条件下使用的低聚物一般包含两个核苷酸序列，一个是有义取向的(5’→3’)，另一个是反义取向的(3’←5’)。相同的两种低聚物、嵌套低聚物的集合或甚至简并低聚物库可在不太严格的条件下用于测定和/或定量密切相关的DNA或RNA序列。
活性剂或靶的核酸序列也可用于产生先前所述的杂交探针，用于测绘内源性基因组序列图。可采用公知的技术将所述序列定位到特定的染色体或染色体的特定区域中。这些包括原位杂交到染色体扩展图上(Verma et al(1988)Human Chromosomes：A Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York City)、流式分选的染色体制品、或人工构建的染色体，例如YAC、人工细菌染色体(BAC)、细菌PI构成物或单染色体cDNA文库。
原位杂交的染色体制品和物理定位技术，例如使用建立染色体标记物的连锁分析在扩展基因图中有价值无法衡量。基因图的实例可参见科学(Science)(1995；270：410f和1994；265；1981f)。将一个基因放置到另一种哺乳动物的染色体中通常可揭示相关标记物，即使特定人染色体的号码或臂是未知的。可通过物理定位将新的序列定位到染色体臂或其局部上。这给用定位克隆或其它基因发现技术研究疾病基因的观察者提供了有价值的信息。一旦通过遗传连锁到特定的基因组区域上粗略地确定了疾病或综合症，定位到所述区域的任何序列可代表供进一步研究的相关或调节基因。本发明的核苷酸序列还可用于测定正常者、携带者或感染者之间的因易位、翻转等的染色体定位差异。
生物
与本发明有关的术语“生物”包括可包含由其获得靶和/或产物的任何生物。生物的实例可包括真菌、酵母或植物。
与本发明有关的术语“转基因生物”包括包含所得靶和/或产物的任何生物。
宿主细胞/宿主生物的转化
如前面所示，宿主生物可以是原核生物或真核生物。适宜的原核生物宿主的例子包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。有关原核生物宿主转化的教导在本领域文献中有许多记载，例如参见Sambrook等人(分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，第2版，1989年，Cold Spring Harbor Laboratory Press)和Ausubel等人(分子生物学现行方法(Current Protocols in MolecularBiology)，1995，John Wiley & Sons，Inc.)。
如果使用原核生物宿主，转化前需要对核苷酸序列加以适当修饰，例如除去内含子。
在另一个实施方案中，转基因生物可以是酵母。这种情况下，酵母也被广泛地用作异源基因表达的载体。酿酒酵母具有悠久的工业应用历史，包括其用于异源基因表达。有关酿酒酵母中的异源基因的表达参见Goodey等人的综述(1987，Yeast Biotechnology，D R Berryet al，eds，pp401-429，Auen和Unmin，London)和King等人的综述(1989，Molecular and Cell Biology of Yeasts，E F Walton和G T Yarronton，eds，pp107-133，Blackie，Glasgow)。
酿酒酵母十分适于异源基因表达的原因有数种。首先，它对人是非病原性的，它不会产生某些内毒素。第二，经过几个世纪的各种目的的商业探索，它具有使用安全的悠久历史。这使大众广为接受。第三，广泛的商业应用和致力于该微生物的研究使人们掌握了大量关于酿酒酵母的遗传学和生理学以及大规模发酵特性的知识。
E Hinchcliffe E Kenny撰写了酿酒酵母中异源基因表达原理的综述(1993，“作为表达异源基因载体的酵母”，Yeasts，Vol 5，Anthony H Rose and J Stuart Harrison，eds，2nd edition，AcademicPress Ltd.)。
可利用几种类型的酵母载体，包括整合载体和自主复制质粒载体，所述整合载体需要与宿主基因组重组来保持。
为制备转基因酵母，通过将本发明的核苷酸序列插入酵母中指定用于表达的构建物中制备表达构建物。已开发了数种类型的用于异源蛋白表达的构建物。构建物含有与本发明核苷酸序列融合的在酵母中有活性的启动子，通常使用酵母来源的启动子，例如GAL1启动子。通常使用酵母来源的信号序列，例如编码SUC2信号肽的序列。酵母中的有活性的终止子终止表达系统。
为转化酵母，已开发了数种转化方案。例如本发明的转基因酵母可通过下列教导制备：Hinnen等人(1978，Proceedings of theNational Academy of Sciences of the USA 75，1929)；Beggs，JD(1978，Nature，London，275，104)；和Ito，H等人(1983，JBacteriology 153，163-168)。
用各种选择性标记物选择转化的酵母细胞。在用于转化的标记物中有许多自养标记物，例如LEU2、HIS4和TRP1，以及主要的抗生素抗性的标记物，例如氨基糖甙类抗生素标记物，如G418。
另一种宿主生物是植物。构建遗传修饰的植物的基本原理是将遗传信息插入植物基因组中以使插入后的遗传物质保持稳定。已有数种用于插入遗传信息的技术，两种主要的原理是直接引入遗传信息和通过使用载体系统引入遗传信息。通用技术的综述参见Potrykus的文章(Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol[1991]42：205-225)和Christou的文章(Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April 199417-27)。有关植物转化的其它技术可参见EP-A-0449375。
因此，本发明还提供一种用核苷酸序列转化宿主细胞的方法，所述核苷酸序列本身是靶或用于表达靶。可在适于表达和适于从细胞培养物中回收所述编码的蛋白质的条件下培养用核苷酸序列转化的宿主细胞。取决于所用的序列和/或载体，通过重组细胞产生的蛋白质可被分泌出来或被包含在细胞内。本领域普通技术人员应该理解，可用信号序列设计包含编码序列的表达载体，其可通过原核生物或真核生物的细胞膜直接分泌编码序列。其它重组构建物可将编码序列连接到编码多肽结构域的核苷酸序列上，这样有助于可溶性蛋白的纯化(KrollDJ等人(1993)DNA Cell Biol 12：441-53)。
PDE5抑制剂-试验方法
在本文中提及的PDE作用效力值是通过下列测定方法测定的：
磷酸二酯酶(PDE)抑制活性
适于依据本发明使用的优选的PDE化合物是强效选择性cGMPPDE5抑制剂。抗环鸟苷-3’，5’-单磷酸(cGMP)和环腺苷-3’，5’-单磷酸(cAMP)磷酸二酯酶的体外PDE抑制活性是通过测定其IC₅₀值(酶活性50％抑制所需的化合物浓度)来确定的。
基本上按照W.J.Thompson和M.M.Appleman的方法(Biochem.，1971，10，311)，从多种来源，包括人海绵体、人和兔血小板、人心室、人骨骼肌以及人与犬视网膜中分离出所需的PDE酶。特别是，cGMP-特异性PDE(PDE5)和cGMP-抑制的cAMP PDE(PDE3)得自人海绵体组织、人血小板或兔血小板；cGMP-刺激的PDE(PDE2)得自人海绵体；钙/钙调蛋白(Ca/CAM)-依赖性PDE(PDE1)得自人心室；cAMP-特异性PDR(PDE4)得自人骨骼肌；光感受器PDE(PDE6)得自犬视网膜。磷酸二酯酶7-11是由转染到SF9细胞内的全长人重组克隆产生的。
测定可使用W.J.Thompson等人(Biochem.，1979，18，5228)的“分批”方法的改进形式或者使用直接检测AMP/GMP的闪烁接近测定来进行，其中所述闪烁接近测定是用Amersham plc在乘积码TRKQ7090/7100下描述的方法的改进形式进行的。简言之，通过以下方法评估PDE抑制剂的作用：在不同抑制剂浓度和低底物(cGMP或cAMP，未标记与[³H]-标记的比例为3∶1，浓度为～1/3K_m)存在下分析固定量的酶，这样 IC 50 ≅ K i . ]]>用测定缓冲液[20mM Tris-HCl pH7.4，5mM MgCl₂，1mg/ml牛血清白蛋白]将测定终体积补足至100μl。用酶开始反应，在30℃培养30-60分钟以给出＜30％底物转化率，用50ul硅酸钇SPA珠(含有3mM PDE9和11的各自未标记的环核苷酸)终止反应。将平板再次密封，摇动20分钟，然后让珠子在黑暗条件下沉降30分钟，在TopCount平板读数器(Packard，Meriden，CT)上计数。将放射性单位转化成％未抑制对照的活性(100％)，对着抑制剂浓度绘图，使用‘Fit Curve’Microsoft Excel扩展获得抑制剂的IC₅₀值。
功能活性
功能活性可通过以下方法在体外评估：按照S.A.Ballard等人(Brit.J.Pharmacol.，1996，118(suppl.)，摘要153P)描述的方法，测定本发明化合物提高预先收缩的兔海绵体组织条的硝普化钠诱导的松弛作用的能力。
通过下列实施例进一步描述本发明，在这些实施例中提及了以下附图和序列表：
附图
附图1表示的是对D3受体的选择性—相对于D2受体—为至少30倍的化合物对于勃起的影响以及对于一种或多种副作用例如恶心、呕吐、低血压或晕厥的影响的比较。
附图2表示的是，与D3-优先D2/D3激动剂不同，选择性D3激动剂对于麻醉中的狗血液动力学参数没有显著影响。
序列表
SEQID NO：1表示的是人多巴胺D3受体的核苷酸序列；
SEQID NO：2表示的是人多巴胺D3受体的氨基酸序列；
SEQID NOS：3和4表示的是编码人可溶性分泌型内肽酶(SEP)的核苷酸序列(cDNA)。SEQ ID NO：4包括5’和3’部分载体序列(突出显示)；和
SEQID NO：5表示的是人SEP蛋白的氨基酸序列。
实施例
化学实施例
通过下列非限制性实施例举例说明本发明，在这些实施例中使用下列缩写和定义：
α_D             在587nm的旋光度
Arbacel_        过滤剂
B                宽峰
Boc              叔丁氧基羰基
CDCl₃           氯仿-d1
CD3OD            甲醇-d4
δ                                化学位移
D                双峰
Dd               双双峰
DCM              二氯甲烷
DMF              N，N-二甲基甲酰胺
DMSO             二甲亚砜
H                小时
HCl              氯化氢
LRMS             低分辨率质谱
M                多重峰
m/z                  质谱峰
Min                  分钟
Mpt                  熔点
NaOH                 氢氧化钠
NMR                  核磁共振
Q                    四重峰
S                    单峰
T                    三重峰
Tf                   三氟甲磺酰基
TFA                  三氟乙酸
THF                  四氢呋喃
TLC                  薄层色谱
熔点是用Perkin Elmer DSC7以20℃/分钟的速度测定的。
X-射线衍射数据是用Bruker AXS SMART-APEX CCD平面检测器衍射仪(Mo Kα辐照)于室温记录的。由几个系列照射整合强度。每次照射覆盖0.3°(ω)，照射时间为60秒，总数据集在一个球体以上。
实施例1
2-氨基-1-(3-甲氧基苯基)乙醇

在室温，将在THF(150ml)中的3-甲氧基苯甲醛(27.2g，0.2mol)加到3N HCl(盐酸)(150ml，0.3mol)和亚硫酸钠(37.8g，0.3mol)的搅拌着的溶液中。10分钟后，分批加入氰化钾(19.53g，0.3mol)，然后将该反应混合物搅拌30分钟。加入乙醚(800ml)和水(300ml)，让各层分配。用乙醚(500ml)萃取水层，将有机层合并，用无水硫酸镁干燥，过滤，然后真空浓缩，获得了氰醇中间体，为无色油状物(35.57g，0.22mol，＞100％)。然后将硼烷-四氢呋喃络合物(1M的THF溶液)(400ml，0.4mol)小心地加到在THF(100ml)内的氰醇中，继续在氮气氛下回流搅拌1.5小时。将该反应混合物冷却，然后用甲醇(40ml)淬灭，真空浓缩，获得了无色油状物。加入6M HCl(盐酸)(200ml)，将该反应在回流状态下搅拌2小时，然后真空浓缩，获得了白色固体。将其预吸附到二氧化硅上，然后通过柱色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶氨(90∶10∶1)洗脱，获得了本标题化合物，为无色油状物(31.3g，0.19mol，94％)    ¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.60(bs，2H)，2.80(dd，1H)，3.02(dd，1H)，3.46(s，1H)，3.81(s，3H)，4.60(dd，1H)，6.81(d，1H)，6.91(d，1H)，6.93(s，1H)，7.22(t，1H).LRMS：m/z 168(M-H⁺).Analysis found C，56.66；H，8.28；N，6.91％.C₉H₁₃NO₂·1.33H₂O requires C，56.33；H，8.27；N，7.30％.
实施例2
N-[2-羟基-2-(3-甲氧基苯基)乙基]丙酰胺

将三乙胺(52ml，0.37mol)加到在二氯甲烷(400ml)内的实施例1的胺(31.3g，0.19mol)中，将该反应混合物在氮气氛下于0℃搅拌10分钟。加入丙酰氯(16.3ml，0.19mol)搅拌30分钟，然后将反应温度升至室温并保持5小时。用1N HCl(盐酸)(100ml)淬灭该反应混合物，然后用二氯甲烷(2×50ml)萃取。将有机级份合并，用无水硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，获得了本标题化合物，为无色油状物，该油状物在静置时结晶成白色晶体(28g，0.13mol，67％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.18(t，3H)，2.22(q，2H)，2.51(bs，1H)，3.31(m，1H)，3.71(dd，1H)，3.80(s，3H)，4.81(m，1H)，5.95(bs，1H)，6.80(d，1H)，6.90(d，1H)，6.91(s，1H)，7.22(t，1H).LRMS：m/z 224.Mpt：77-78℃.Analysis found C，63.86；H，7.82；N，6.28％.C₁₂H₁₇NO₃·0.1H₂O requires C，64.04；H，7.70；N，6.22％.
实施例3
1-(3-甲氧基苯基)-2-丙基氨基乙醇

将硼烷-四氢呋喃络合物(1M的THF溶液)(376ml，0.4mol)加到在无水THF(100ml)内的实施例2的酰胺(28g，0.13mol)中，在氮气氛下搅拌回流2.5小时。将该反应混合物冷却，用甲醇(40ml)淬灭，然后真空浓缩，获得了不透明的白色油状物。加入6N HCl(盐酸)(200ml)，将该反应在回流状态下搅拌2小时。将该反应混合物冷却，然后加入二氯甲烷(200ml)，分离各层。通过加入碳酸钾将水层碱化，然后用二氯甲烷(2×200ml)再萃取。将有机层合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为无色油状物，该油状物在静置时结晶成无色晶体(15.3g，0.07mol，59％)。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.93(t，3H)，1.62(q，2H)，2.71(q，2H)，2.81(t，2H)，3.00(d，1H)，3.80(s，3H)，4.30(bs，1H)，4.89(d，1H)，6.81(d，1H)，6.91(d，1H)，6.93(s，1H)，7.22(t，1H).LRMS：m/z 210.Mpt：50-51℃.Analysis foundC，67.47；H，9.02；N，6.45％.C₁₂H₁₉NO₂·0.2H₂O requires C，67.70；H，9.19；N，6.58％.
实施例4
2-氯-N-[2-羟基-2-(3-甲氧基苯基)乙基]-N-丙基乙酰胺

将在水(180ml)中的氢氧化钠(15.1g，0.38mol)加到在二氯甲烷(500ml)内的实施例3的胺(15.8g，0.08mol)中，将该溶液在室温剧烈搅拌。然后加入氯乙酰氯(7.22ml，0.09mol)，将该反应混合物搅拌30分钟。分离各层，用二氯甲烷(200ml)再萃取水层。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为无色油状物(17.8g，0.06mol，83％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.62(q，2H)，3.21(q，2H)，3.57-3.71(m，2H)，3.82(s，3H)，4.01-4.21(bq，1H)，4.16(s，2H)，5.00(m，1H)，6.82(m，1H)，6.91-6.99(m，2H)，7.22(m，1H).LRMS：m/z 286.Analysis found C，57.38；H，6.95；N，4.67％.C₁₄H₂₀NO₃Cl·0.33H₂O requires C，57.64；H，7.14；N，4.80％.
实施例5
6-(3-甲氧基苯基)-4-丙基吗啉-3-酮

将氢氧化钾(4.2g，0.07mol)、异丙醇(500ml)和实施例4的酰胺(17.8g，0.06mol)作为与水(15ml)的不透明溶液一起搅拌2小时。将该反应混合物真空浓缩，将黄色残余物溶解在乙酸乙酯(200ml)中。将其依次用水(200ml)和盐水(200ml)分配。将有机级份用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为黄色油状物(15.8g，0.06mol，100％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.62(m，2H)，3.36(m，2H)，3.51(q，2H)，3.81(s，3H)，4.30-4.62(bq，2H)，4.79(d，1H)，6.85(d，1H)，6.91(d，1H)，6.95(s，1H)，7.29(t，1H).LRMS：m/z 272.Analysis found C，66.80；H，7.78；N，5.52％.C₁₄H₁₉NO₃·0.1H₂O requires C，66.96；H，7.71；N，5.58％.
实施例6
2-(3-甲氧基苯基)-4-丙基吗啉

在氮气氛下，用30分钟将硼烷-四氢呋喃络合物(1M的THF溶液)(200mol，0.19mol)滴加到在无水THF(100ml)内的实施例5的吗啉-3-酮(15.8g，0.06mol)中。将该反应混合物回流3小时，然后冷却，通过加入甲醇(30ml)来淬灭。然后将该反应混合物真空浓缩，将无色残余物小心地悬浮在4N HCl(盐酸)(400ml)中，然后回流2.5小时。将该反应混合物冷却，加入二氯甲烷(200ml)。分离各层，通过加入碳酸钾来碱化水层，然后用二氯甲烷(3×100ml)再萃取。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为无色油状物(12.51g，0.05mol，84％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.59(q，2H)，2.05(t，1H)，2.23(t，1H)，2.40(t，2H)，2.81(d，1H)，2.98(d，1H)，3.80(s，3H)，3.85(t，1H)，4.05(d，1H)，4.60(d，1H)，6.81(d，1H)，6.91(d，1H)，7.21(t，1H)，7.23(s，1H).LRMS：m/z 236.Analysis found C，68.94；H，8.80；N，5.79％.C₁₄H₂₁NO₂·0.5H₂O requires C，68.82；H，9.08；N，5.73％.
实施例7a
R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚
实施例7b
S-(+)-3-(4-丙基吗啉-2-基)-苯酚

将氢溴酸(250ml)和实施例6的苯甲醚(8.62g，0.03mol)一起加热回流1小时。冷却后，将该反应混合物用水(100ml)稀释，然后通过加入NH₄OH(20ml)来中和。然后用二氯甲烷(2×100ml)萃取该黄色不透明的溶液。将有机萃取液合并，然后用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物的外消旋混合物，为黄色油状物(7.78g，0.03mol，96％)。通过手性色谱法(Chiralpak AD 250*20mm柱)纯化对映体，用己烷∶异丙醇∶二乙基胺(70∶30∶0.05)洗脱，获得了对映体1(ee＞99.5％)和对映体2(ee＞99％)。通过二氧化硅柱色谱法纯化每种对映体，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)洗脱，获得了对映体1(7a)(3.02g，0.014mol，39％)和对映体2(7b)(3.15g，0.014mol，40％)，为无色油状物。
对映体1(7a)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.60(q，2H)，2.13(t，1H)，2.31(t，1H)，2.41(t，2H)，2.85(d，1H)，3.02(d，1H)，3.90(t，1H)，4.02(dd，1H)，4.60(d，1H)，6.78(d，1H)，6.80(s，1H)，6.91(d，1H)，7.20(t，1H).LRMS：m/z 222(M-H⁺).
对映体2(7b)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.60(q，2H)，2.13(t，1H)，2.31(t，1H)，2.41(t，2H)，2.85(d，1H)，3.02(d，1H)，3.90(t，1H)，4.02(dd，1H)，4.60(d，1H)，6.78(d，1H)，6.80(s，1H)，6.91(d，1H)，7.20(t，1H).LRMS：m/z 222(M-H⁺).
实施例8
R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐

将实施例7的对映体1(7a)(3.00g，0.014mol)溶解在乙醚(180ml)中，加入氯化氢(2.0M在乙醚中的溶液)(10ml)。将该反应混合物在室温搅拌30分钟，然后将溶剂倾析出，并真空干燥，获得了本标题化合物，为白色固体(3.115g，0.012mol，90％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.06(t，3H)，1.81(m，2H)，3.02(t，1H)，3.16(t，2H)，3.20(t，1H)，3.60(t，2H)，4.01(t，1H)，4.26(d，1H)，4.71(d，1H)，6.78(d，1H)，6.82(s，1H)，6.83(d，1H)，7.21(t，1H).LRMS：m/z 222(M-H⁺).Analysis found c，59.74；H，7.98；N，5.25％.C₁₃H₁₉NO₂·0.18H₂O requires C，59.82；H，7.86；N，5.37％.α_D＝-5.66°(Methanol 10.6mg/10ml).
使用甲醇∶乙醚混合物通过蒸气扩散法将本标题化合物的样品重结晶，并获得X-射线晶体结构。通过Flack的方法(H.D.Flack，ActaCryst.1983，439，876-881)，由衍射数据确定本标题化合物的绝对立体化学，结果表明其具有‘R’构型。
实施例9
2-氨基-1-(3，5-二甲氧基苯基)乙醇

按照与实施例1所述相同的方法，使用3，5-二甲氧基苯甲醛(5.00g，0.03mol)作为原料进行制备。在6M HCl(盐酸)中回流后，将该反应混合物冷却，用乙醚(2×80ml)萃取。弃去有机层，通过加入碳酸钾将水层碱化。然后用乙酸乙酯(3×70ml)萃取水残余物。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为浅黄色油状物(3.47g，0.018mol，59％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：2.77-2.86(m，2H)，3.78(s，6H)，4.60(m，1H)，6.38(s，1H)，6.52(s，2H).LRMS：m/z 198(M-H⁺).
实施例10
N-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-羟基乙基]丙酰胺

按照与实施例2所述相同的方法，使用实施例9的胺(3.41g，0.017mol)作为原料进行制备。通过二氧化硅柱色谱法纯化该反应混合物，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)洗脱，获得了本标题化合物，为亮黄色油状物(3.08g，0.012mol，70％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.18(m，3H)，2.24(m，2H)，3.34(m，1H)，3.68(m，1H)，3.81(s，6H)，4.80(dd，1H)，5.95(bs，1H)，6.39(s，1H)，6.51(s，2H).LRMS：m/z 252(M-H^-).
实施例11
1-(3，5-二甲氧基苯基)-2-丙基氨基乙醇

按照与实施例3所述相同的方法，使用实施例10的酰胺(3.06g，0.012mol)进行制备，获得了本标题化合物，为橙色油状物(2.72g，0.011mol，94％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.56(m，2H)，2.61(m，2H)，2.77(d，2H)，3.78(s，6H)，4.70(t，1H)，6.38(s，1H)，6.51(s，2H).LRMS：m/z 240(M-H⁺).
实施例12
2-氯-N-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-羟基乙基]-N-丙基乙酰胺

按照与实施例4所述相同的方法，使用实施例11的胺(2.70g，0.011mol)进行制备，获得了本标题化合物，为黄色油状物(3.56g，0.011mol，100％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.92(t，3H)，1.61(m，2H)，3.20(m，2H)，3.51-3.64(m，2H)，3.80(d，6H)，4.13(s，2H)，4.95(m，1H)，6.40(m，1H)，6.55(s，2H).LRMS：m/z 316(M-H⁺).
实施例13
6-(3，5-二甲氧基苯基)-4-丙基吗啉-3-酮

按照与实施例5所述相同的方法，使用实施例12的酰胺(3.54g，0.011mol)进行制备，获得了本标题化合物，为黄色油状物(2.44g，0.009mol，78％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.94(t，3H)，1.61(m，2H)，3.30(m，2H)，3.49(m，2H)，3.80(s，6H)，4.30(d，1H)，4.42(d，1H)，4.73(dd，1H)，6.42(s，1H)，6.53(s，2H).LRMS：m/z 280(M-H⁺).
实施例14
2-(3，5-二甲氧基苯基)-4-丙基吗啉

按照与实施例6所述相同的方法，使用实施例13的酰胺(2.42g，0.009mol)进行制备。在6M HCl(盐酸)中回流后，将该反应混合物冷却，用乙醚(2×80ml)萃取。弃去有机层，通过加入碳酸钾将水层碱化。然后用乙酸乙酯(3×80ml)萃取水残余物。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为浅橙色油状物(2.14g，0.008mol，93％)。
¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.58(m，2H)，2.01(m，1H)，2.22(dt，1H)，2.38(t，2H)，2.83(d，1H)，2.93(d，1H)，3.78(m，7H)，4.01(dd，1H)，4.45(dd，1H)，6.39(s，1H)，6.49(s，2H).LRMS：m/z266(M-H⁺).
实施例15a
R-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯-1，3-二酚
实施例15b
S-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯-1，3-二酚

按照与实施例7所述相同的方法，使用实施例14中的3，5-二甲氧基苯基化合物(1.00g，0.004mol)进行制备，获得了外消旋的本标题化合物，为棕色油状物(145mg，0.61mmol，16％)。通过手性色谱法(Chiralpak AD 250*20mm柱)分离对映体，用己烷∶异丙醇(80∶20)洗脱，获得了对映体1(15a)(5.2mg)(ee＞98.94％)和对映体2(15b)(5.1mg)(ee＞96.46％)，为棕色油状物。
对映体1(15a)：¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.58(m，2H)，2.01(t，1H)，2.20(dt，1H)，2.37(t，2H)，2.81-2.92(m，2H)，3.89(dt，1H)，3.99(dd，1H)，4.38(dd，1H)，6.18(t，1H)，6.26(s，2H).LRMS：m/z 238(M-H⁺).
对映体2(15b)：¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.58(m，2H)，2.01(t，1H)，2.20(dt，1H)，2.38(t， 2H)，2.80-2.92(q，2H)，3.78(dt，1H)，3.98(dd，1H)，4.38(dd，1H)，6.18(s，1H)，6.25(s，2H).LRMS：m/z 238(M-H⁺).
实施例16
4-氟-3-甲氧基苯甲醛

在氮气氛下，将(4-氟-3-甲氧基苯基)甲醇(5.00g，0.03mol)和二氧化锰(33.4g，0.38mol)在二氯甲烷(100ml)中于轻微回流下搅拌16小时。然后将该冷却的反应混合物经由arbacel过滤，真空浓缩，获得了本标题化合物，为白色固体(4.18g，0.027mol，85％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：3.96(s，3H)，7.23(d，1H)，7.43(m，1H)，7.50(d，1H)9.91(s，1H).Mpt：61-63℃.Analysis found C，62.18；H，4.54％.C₈H₇FO₂ requires C，62.34；H，4.58％.
实施例17
2-氨基-1-(4-氟-3-甲氧基苯基)乙醇

按照与实施例1所述相同的方法，使用4-氟-3-甲氧基苯甲醛(4.17g，0.03mol)进行制备。在6M HCl(盐酸)中回流后，将该反应混合物冷却，用乙醚(2×60ml)萃取。弃去有机层，通过加入碳酸钾将水层碱化。然后用乙酸乙酯(3×80ml)萃取水残余物。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为橙色油状物(2.36g，0.013mol，47％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：2.80-2.91(m，2H)，3.86(s，3H)，4.64(m，1 H)，6.89(m，1H)，7.03(t，1H)，7.11(dd，1H).LRMS：m/z 186(M-H⁺).
实施例18
N-[2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-2-羟基乙基]丙酰胺

按照与实施例2所述相同的方法，使用实施例17的胺(1.32g，0.007mol)进行制备。通过二氧化硅柱色谱法纯化该反应混合物，用乙酸乙酯∶戊烷(2∶1)洗脱，获得了本标题化合物，为黄色油状物，该油状物在静置下结晶(0.59g，0.002mol，35％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.18(t，3H)，2.24(q，2H)，2.58(bs，1H)，3.34(m，1H)，3.63(m，1 H)，3.88(s，3H)，4.82(dd，1H)，5.98(bs，1H)，6.82(m，1H)，7.01(m，2H).LRMS：m/z 242(M-H⁺).
实施例19
1-(4-氟-3-甲氧基苯基)-2-丙基氨基乙醇

按照与实施例3所述相同的方法，使用实施例18的酰胺(585mg，2.42mmol)进行制备。在6M HCl(盐酸)中回流后，将该反应混合物冷却，用乙醚(2×50ml)萃取。弃去有机层，通过加入碳酸钾将水层碱化。然后用乙酸乙酯(3×50ml)萃取水残余物。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为浅黄色油状物(448mg，1.97mmol，81％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.58(m，2H)，2.63(m，2H)，2.79(d，2H)，3.96(s，3H)，4.77(t，1H)，6.90(m，1H)，7.03(t，1H)，7.11(d，1H).LRMS：m/z228(M-H⁺).
实施例20
2-氯-N-[2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-2-羟基乙基]-N-丙基乙酰胺

按照与实施例4所述相同的方法，使用实施例19的胺(0.84g，4.00mmol)进行制备，获得了本标题化合物，为黄色油状物(0.97g，3.00mmol，87％)。LRMS：m/z 304(M-H⁺)。将其作为粗产物使用。
实施例21
6-(4-氟-3-甲氧基苯基)-4-丙基吗啉-3-酮

按照与实施例5所述相同的方法，使用实施例20的酰胺(0.96g，3.00mmol)进行制备，获得了本标题化合物，为黄色油状物(0.64g，2.40mmol，75％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.94(t，3H)，1.62(m，2H)，3.33(m，2H)，3.48(m，2H)，3.91(s，3H)，4.34(d，1H)，4.43(d，1H)，4.76(dd，1H)，6.85(m，1H)，7.01-7.08(m，2H).LRMS：m/z 268(M-H⁺).
实施例22
2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-4-丙基吗啉

按照与实施例6所述相同的方法，使用实施例21的吗啉-3-酮(633mg，2.37mmol)进行制备。在6M HCl(盐酸)中回流后，将该反应混合物冷却，用乙醚(2×20ml)萃取。弃去有机层，通过加入碳酸钾将水层碱化。然后用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水残余物。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为黄色油状物(552mg，2.18mmol，92％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.58(m，2H)，2.02(t，1H)，2.22(dt，1H)，2.38(t，2H)，2.85(d，1H)，2.93(d，1H)，3.80(m，1H)，3.84(s，3H)，4.01(dd，1H)，4.50(dd，1H)，6.88(m，1H)，7.02(t，1H)，7.09(d，1H).LRMS：m/z 254(M-H⁺).
实施例23a
R-(+)-2-氟-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚
实施例23b
S-(-)-2-氟-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚

按照与实施例7所述相同的方法，使用实施例22的苯甲醚(200mg，0.789mm)进行制备。通过二氧化硅柱色谱法纯化该反应混合物，用二氯甲烷∶甲醇(90∶10)洗脱，获得了外消旋的本标题化合物，为深黄色粘稠的油状物(149mg，0.62mmol，79％)。通过手性色谱法(ChiralpakAD 250*20mm柱)分离对映体，用己烷∶异丙醇(90∶10)洗脱，获得了对映体1(23a)，为不透明的油状物(15mg)(ee＞99.5％)和对映体2(23b)，为固体结晶(16mg)(ee＞99％)。
对映体1(23a)：¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.58(m，2H)，2.01(t，1H)，2.21(dt，1H)，2.37(t，2H)，2.82-2.97(bq，2H)，3.78(dt，1H)，3.99(dd，1H)，4.43(d，1H)，6.78(m，1H)，6.89-7.01(m，2H).LRMS：m/z 240(M-H⁺).α_D＝+0.91(Ethanol 1.10mg/ml).
对映体2(23b)：¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.58(m，2H)，2.01(t，1H)，2.22(dt，1H)，2.38(t，2H)，2.78(dd，2H)，3.78(dt，1H)，4.00(dd，1H)，4.43(dd，1H)，6.78(m，1H)，6.91(d，1H)，6.98(t，1H).LRMS：m/z 240(M-H⁺).α_D＝-0.40(Ethanol 1.00mg/ml).
实施例24
2-氨基-1-(4-苄氧基苯基)乙醇

将氰化钾(20.15g，0.31mol)和氯化铵(16.4g，0.31mol)溶解在水(60ml)中，向其中加入4-苄氧基苯甲醛(32.9g，0.155mol)，然后加入乙醚(100ml)。将该反应混合物在室温剧烈搅拌48小时，然后用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。将合并的有机层用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了氰醇中间体，为黄色固体(34.2g，0.14mol，90％)。将该氰醇溶解在无水THF(300ml)中，加入硼烷-二甲硫醚络合物(26.6ml，0.28mol)。将该反应混合物回流2小时，然后用甲醇(50ml)淬灭。加入水(50ml)，之后加入浓盐酸(40ml)，将该反应混合物搅拌2小时直至放热平息。然后将该反应混合物真空浓缩，用水(100ml)稀释残余物。通过加入NH₄OH(30ml)将该水溶液碱化，用乙酸乙酯(3×150ml)萃取。将有机萃取液用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为白色固体(24.8g，0.10mol，73％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.62(bs，3H)，2.81(dd，1H)，2.99(d，1H)，4.61(q，1H)，5.07(s，2H)，6.95(d，2H)，7.22-7.45(m，7H).LRMS：m/z 244(M-H⁺).
实施例25
N-[2-(4-苄氧基苯基)-2-羟基乙基]丙酰胺

将实施例24的胺(24.8g，0.10mol)溶解在二氯甲烷(700ml)中，向其中加入三乙胺(20.86ml，0.15mol)。将该反应混合物搅拌，冷却至0℃，然后滴加丙酰氯(7.12ml，0.082mol)。然后将该反应混合物温热至室温，保持16小时，然后用3M HCl(盐酸)(20ml)和水(100ml)淬灭。然后将该反应混合物用二氯甲烷(3×200mol)萃取，将合并的有机层用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为干净的粘性树胶状物(27.5g，0.092mol，90％)。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.10(t，3H)，2.19(q，2H)，3.32-3.43(m，4H)，4.81(s，2H)，5.11(m，1H)，6.99(d，2H)，7.25-7.42(m，7H).LRMS：m/z 298(M-H^-).
实施例26
1-(4-苄氧基苯基)-2-丙基氨基乙醇

向在无水THF(100ml)内的实施例25的酰胺(27.5g，0.092mol)中加入硼烷-甲硫醚络合物(17.5ml，0.18mol)，将该反应混合物搅拌回流2小时。将该反应混合物冷却，然后用甲醇(30ml)淬灭。加入水(50ml)和浓盐酸(35ml)，将该反应混合物搅拌直至不再冒气泡，然后真空浓缩。向残余物中加入水(250ml)，通过加入NH₄OH(30ml)将其碱化。用乙酸乙酯(3×200ml)萃取水层，将合并的有机萃取液用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为白色固体(26.1g，0.09mol，99％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.58(q，2H)，2.62(m，2H)，2.81(m，2H)，4.72(dd，1H)，5.05(s，2H)，6.95(d，2H)，7.24(m，3H)，7.35(t，2H)，7.41(d，2H).LRMS：m/z 286(M-H⁺).
实施例27
6-(4-苄氧基苯基)-4-丙基吗啉-3-酮

将在水(100ml)中的氢氧化钠(22.5g，0.56mol)加到在二氯甲烷(400ml)内的实施例26的胺(26.0g，0.09mol)中，将该溶液在室温剧烈搅拌。然后加入氯乙酰氯(8.6ml，0.11mol)，将该反应混合物再搅拌60分钟。分离各层，用二氯甲烷(200ml)再萃取水层。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了无色油状物。将氢氧化钾(15.0g，0.27mol)，异丙醇(400ml)和无色油状残余物与水(30ml)一起的不透明溶液搅拌2小时。将该反应混合物真空浓缩，把黄色残余物溶解在乙酸乙酯(200ml)中。将其依次用水(200ml)和盐水(200ml)分配。将有机级份用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为白色固体(19.9g，0.06mol，67％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.62(m，2H)，3.34(m，2H)，3.51(m，2H)，4.32(d，1H)，4.41(d，1H)，4.72(dd，1H)，5.04(s，2H)，6.98(d，2H)，7.31-7.43(m，7H).LRMS：m/z 326(M-H⁺).
实施例28
2-(4-苄氧基苯基)-4-丙基吗啉

按照与实施例26所述相同的方法，使用实施例27的吗啉-3-酮(19.9g，0.061mol)进行制备，获得了本标题化合物，为无色油状物(17g，0.055mol，90％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.55(q，2H)，2.06(t，1H)，2.21(dt，1H)，2.35(dd，2H)，2.80(d，1H)，2.91(d，1H)，3.82(dt，1H)，4.02(dd，1H)，4.52(dd，1H)，5.05(s，2H)，6.98(t，2H)，7.24-7.42(m，7H).LRMS：m/z 312(M-H⁺).
实施例29
4-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚

将实施例28的苄基醚(3.0g，9.64mmol)溶解在甲醇(150mol)中，加入10％披钯炭(800mg)。将该反应混合物搅拌几分钟，然后分批加入甲酸铵(6.17g，96.4mmol)。将该反应混合物小心地在80℃加热直至气体释放停止。冷却后，将该反应混合物经由arbacel过滤，用甲醇(50ml)洗涤，真空浓缩，获得了本标题化合物，为白色固体结晶(1.51g，6.83mmol，71％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.91(t，3H)，1.58(q，2H)，2.10(t，1H)，2.22(t，1H)，2.40(dd，2H)，2.81(d，1H)，2.93(d，1H)，3.85(t，1H)，4.02(dd，1H)，4.57(d，1H)，6.79(d，2H)，7.21(d，2H).LRMS：m/z 222(M-H⁺).
实施例30
2-溴-4-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚

向在二氯甲烷(5ml)内的实施例29的苯酚(200mg，0.9mmol)中加入N-溴琥珀酰亚胺(161mg，0.9mmol)。将该反应混合物在室温搅拌55小时，然后真空浓缩。通过二氧化硅柱色谱法纯化粗产物，用二氯甲烷∶甲醇(9 5∶5)洗脱，获得了本标题化合物，为白色泡沫状物(117.5mg，0.39mmol，44％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.96(t，3H)，1.59(q，2H)，2.03(t，1H)，2.23(t，1H)，2.40(t，2H)，2.81(d，1H)，2.98(d，1H)，3.82(t，1H)，4.01(d，1H)，4.56(d，1H)，6.96(d，1H)，7.20(d，1H)，7.49(s，1H).LRMS：m/z 302(M-H⁺，Brisotope).
实施例31
2-(4-苄氧基-3-溴苯基)-4-丙基吗啉

在氮气氛下，向在无水DMF(10ml)内的实施例30的苯酚(117.5mg，0.39mmol)中加入碳酸钾(75mg，0.54mmol)和苄基溴(0.07ml，0.5 4mmol)。将该反应混合物在150℃加热48小时。冷却后，将该反应混合物真空浓缩，把残余物在乙酸乙酯(50ml)与水(50ml)之间分配。用乙酸乙酯(2×20ml)再萃取水层。然后将合并的萃取液用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了粗产物，为棕色油状物。通过二氧化硅柱色谱法纯化该油状物，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)洗脱，获得了本标题化合物，为无色油状物(153mg，0.39mmol，100％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.93(t，3H)，1.56(q，2H)，2.05(t，1H)，2.25(t，1H)，2.37(t，2H)，2.82(d，1H)，2.92(d， 1H)，3.85(t，1H)，4.02(d，1H)，4.52(d，1H)，5.15(s，2H)，6.87(d，1H)，7.20(d，1H)，7.30(d，1H)，7.37(t，2H)，7.45(d，2H)，7.58(s，1H).LRMS：m/z 392(M-H⁺).
实施例32
2-苄氧基-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯甲酸甲酯

向在无水DMF(4ml)内的实施例31的溴化物(153mg，0.39mmol)中加入三乙胺(2.1ml，0.78mmol)和甲醇(2ml)，将该反应混合物搅拌5分钟。加入[1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(16mg，0.02mmol)，然后向该反应混合物中通入一氧化碳(气体)(3个充气的气球)。然后将该反应混合物加热到100℃于一氧化碳气氛下加热16小时。冷却后，将该反应混合物真空浓缩，把残余物在乙酸乙酯(25ml)与水之间分配(20ml)。分离出有机层，用盐水(20ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了黑色固体。通过二氧化硅柱色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶氨(90∶10∶1)洗脱，获得了本标题化合物，为无色油状物(105mg，0.28mmol，73％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.94(t，3H)，1.60(m，2H)，2.18(s，4H)，2.43(m，2H)，3.00(m，2H)，3.90(s，3H)，4.04d，1H)，5.18(s，2H)，5.97(d，1H)，7.26-7.47(m，6H)，7.82(s，1H).LRMS：m/z370(M-H⁺).
实施例33
2-苄氧基-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯甲酸

向在甲醇(5ml)内的实施例32的甲酯(105mg，0.28mmol)中加入10％氢氧化钠(水溶液)(15ml)，将该乳白色悬浮液回流2小时。将这时呈无色的该反应混合物冷却，然后通过加入2M HCl(盐酸)(几滴)来中和。将该反应混合物真空浓缩，获得了本标题化合物，为灰白色固体(99mg，0.28mmol，100％)。LRMS：m/z 355(M-H⁺)。该固体作为粗产物用于实施例34。
实施例34
2-苄氧基-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯甲酰胺

向实施例33的苯甲酸粗产物(99mg，0.28mmol)中加入亚硫酰氯(5ml)，将该反应混合物在50℃加热2小时。将该反应混合物冷却，真空除去过滤亚硫酰氯。然后将残余物溶解在二氯甲烷(10ml)中，向该反应混合物通10分钟的氨(气体)。将所得悬浮液在室温搅拌1小时，然后真空浓缩。通过二氧化硅柱色谱法纯化该粗产物，用二氯甲烷∶甲醇∶氨(95∶5∶0.5)洗脱，获得了本标题化合物，为灰白色固体(88mg，0.25mmol，90％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.94(t，3H)，1.59(m，2H)，2.15-2.42(m，4H)，2.87(m，1H)，3.03(m，1H)，3.96(m，1H)，4.02(d，1H)，4.67(m，1H)，5.19(s，2H)，5.72(m，1H)，7.04(d，1H)，7.41(m，5H)，7.50(d，1H)，7.70(m，1H)，8.21(s，1H).LRMS：m/z 355(M-H⁺).
实施例35
2-羟基-5-(4-丙基吗啉-2-基)苯甲酰胺

按照与实施例29所述相同的方法，使用实施例34的苄基酯(80mg，0.22mmol)进行制备，获得了本标题化合物，为灰白色固体(56mg，0.21mmol，96％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：0.95(t，3H)，1.55(m，2H)，2.13(t，1H)，2.29(t，1H)，2.42(m，2H)，2.88(d，1H)，2.97(d，1H)，3.81(t，1H)，4.00(d，1H)，4.49(d，1H)，6.87(d，1H)，7.42(d，1H)，7.78(s，1H).LRMS：m/z 265(M-H⁺).
实施例36
2-硝基-4-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚

将实施例29的苯酚(100mg，0.45mmol)溶解在硝酸∶水(1∶3)(2ml)中，在室温搅拌10分钟。然后将该反应混合物用水(5ml)稀释，用NH₄OH(1ml)碱化，然后萃取到乙酸乙酯(3×10ml)内。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为黄色固体(95mg，0.35mmol，79％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.97(t，3H)，1.33(t，2H)，1.43-1.79(bm，4H)，2.02(d，3H)，4.06(m，2H)，7.17(d，1H)，7.60(d，1H)，8.16(s，1H)，10.55(bs，1H).LRMS：m/z 267(M-H⁺).
实施例37
2-氨基-4-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚

向在乙醇(10ml)内的实施例36的硝基化合物(95mg，0.35mmol)中加入10％披钯炭(50mg)和甲酸铵(100mg，XS)。将该反应混合物轻微地加热至70℃，在该温度下保持1小时，然后让其冷却至室温。将该反应混合物经由arbacel过滤，用乙醇(20ml)洗涤，然后用二氯甲烷(20ml)洗涤。将有机洗涤液合并，真空浓缩，获得了本标题化合物，为黄色固体(65mg，0.28mmol，78％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.91(t，3H)，1.55(m，2H)，2.12(t，1H)，2.25(dt，1H)，2.40(t，2H)，2.81-2.92(dd，2H)，3.82(t，1H)，4.00(d，1H)，4.42(d，1H)，6.60(m，2H)，6.71(s，1H).LRMS：m/z 237(M-H⁺).
实施例38
5-溴-2-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶

将5-溴吡啶-2-基-胺(13.8g，0.08mol)、丙酮基丙酮(14.1ml，0.12mol)和对甲苯磺酸(100mg)溶解在甲苯(180ml)中，在迪安斯榻克分水器条件下回流14小时。冷却后，将该棕色溶液倒入水(200ml)内，用甲苯(2×200ml)萃取。将有机萃取液合并，用盐水(50ml)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了粗产物。通过二氧化硅柱色谱法纯化该粗产物，用乙酸乙酯∶戊烷(1∶3)洗脱，获得了本标题化合物，为棕色油状物(18.4g，0.073mol，92％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：2.18(s，6H)，5.90(s，2H)，7.11(d，1H)，7.92(d，1H)，8.62(s，1H).LRMS：m/z 253(M-H⁺，Brisotope).
实施例39
2-氯-1-[6-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶-3-基]乙酮

在-78℃，用20分钟向实施例38的溴吡啶(2g，8.0mmol)在无水THF(30ml)内的溶液中滴加丁基锂(2.5M己烷溶液)(3.5ml 8.8mmol)。将该反应混合物搅拌30分钟，然后滴加在无水THF(20ml)中的2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1.2g，8.8mmol)，同时将温度保持在-78℃。继续在该温度下搅拌30分钟，然后加入1M HCl(盐酸)(50ml)，让该反应混合物温热至室温。分离出有机层，用乙酸乙酯(50ml)洗涤水层。将有机层合并，然后用3M NaOH(水溶液)(10ml)和盐水(10ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物的粗产物，为棕色油状物(1.34g，5.4mmol，67％)。
¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：2.20(s，6H)，4.68(s，2H)，5.92(s，2H)，7.32(d，1H)，8.38(d，1H)，9.16(s，1H).LRMS：m/z 249(M-H⁺).
实施例40
2-(2，5-二甲基吡咯-1-基)-5-氧杂环丙烷基吡啶(oxiranylpyridine)

向溶解在无水THF(20ml)中且冷却至0℃的实施例39的酮(1.34g，5.4mmol)中分批加入硼氢化钠(308mg，8.1mmol)。将该反应混合物搅拌2小时，然后加入3M NaOH(水溶液)(10ml)，继续搅拌16小时。将该反应混合物用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，将合并的有机萃取液用盐水(5ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过二氧化硅柱色谱法纯化该残余物，用乙酸乙酯∶戊烷(1∶5)洗脱，获得了本标题化合物，为无色油状物(900mg，4.2mmol，78％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：2.13(s，6H)，2.91(dd，1H)，3.25(t，1H)，3.98(t，1H)，5.90(s，2H)，7.20(d，1H)，7.62(dd，1H)，8.58(s，1H).LRMS：m/z 215(M-H⁺).
实施例41
1-[6-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶-3-基]-2-丙基氨基乙醇

向在DMSO(5ml)内的实施例40的环氧化物(900mg，4.2mmol)中加入丙基胺(4ml，4.8mmol)，将该反应混合物在40℃加热4天。然后将该反应混合物冷却，加入3M HCl(盐酸)(10ml)和水(10ml)，然后用乙醚(2×10ml)洗涤。弃去有机层。用NH₄OH(5ml)将水层碱化，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。将有机萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题化合物，为油状物(1.15g，4.2mmol，100％)。¹H NMR
(CDCl₃，400MHz)δ：0.93(t，3H)，1.62(m，2H)，2.11(s，6H)，2.69-2.82(m，3H)，3.06(dd，1H)，3.60(bs，2H)，4.92(dd，1H)，5.84(s，2H)，7.20(d，1H)，7.88(d，1H)，8.61(s，1H).LRMS：m/z 274(M-H⁺).
实施例42
6-[6-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶-3-基]-4-丙基吗啉-3-酮

按照与实施例27所述相同的方法，使用实施例41的胺(1.15g，4.2mmol)进行制备。通过二氧化硅柱色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)洗脱，获得了本标题化合物，为棕色薄膜状物(191mg，0.61mmol，14％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.97(t，3H)，1.65(m，2H)，2.13(s，6H)，3.38(m，1H)，3.42-3.56(m，2H)，6.61(t，1H)，4.35(d，1H)，4.45(d，1H)，4.91(dd，1H)，6.91(s，2H)，7.22(d，1H)，7.89(d，1H)，8.61(s，1H).LRMS：m/z 314(M-H⁺).
实施例43
6-[6-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶-3-基]-4-丙基吗啉

向在无水THF(5ml)内的实施例42的吗啉-3-酮(191mg，0.61mmol)中加入氢化锂铝(1M的乙醚溶液)(1.25ml，0.61mmol)，将该反应混合物加热回流2.5小时。将该反应混合物冷却至室温，然后加入1MNaOH(1.25ml)，析出了白色沉淀。将该反应混合物过滤，并真空浓缩。弃去该白色固体。通过二氧化硅柱色谱法纯化浓缩的滤液，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)洗脱，获得了本标题化合物，为白色薄膜状物(108mg，0.36mmol，59％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：0.92(t，3H)，1.61(q，2H)，2.10(s，6H)，2.15(m，1H)，2.29(dt，1H)，2.40(t，2H)，2.82(d，1H)，3.02(d，1H)，3.90(t，1H)，4.08(d，1H)，4.71(d，1H)，5.89(s，2H)，7.20(d，1H)，7.81(d，1H)，8.60(s，1H).LRMS：m/z 300(M-H⁺).
实施例44
BP-897

BP-897是一种多巴胺D3受体激动剂，它正由Bioprojet开发，有可能治疗药物成瘾和由与药物有关的环境刺激引起的易复发性。在2000年11月，BP-897进入了关于药物依赖性的II期评估；这些试验是在2001年11月进行的。
据表明，在表达D3受体的NG 108-15细胞中，BP-897抑制毛喉素诱导的cAMP积聚。该反应被氟哌啶醇完全抑制。在这些细胞中，BP-897还表现出增强有丝分裂发生—一种D3介导的受体反应，该作用被那法道曲拮抗。
据表明BP-897是高亲和性高效D3受体激动剂(Ki＝0.9nM)，但是是弱D2受体拮抗剂(Ki＝61nM)。
生物实施例
1.0方法
1.1.动物试验方法
1.1.1雄性和雌性麻醉的兔方法
用肌内注射0.5ml/kg的美托咪定(Do mifor_)和肌内注射0.25ml/kg的氯胺酮(Vetalar_)的组合预先处理雌性新西兰兔(～2.5kg)，同时通过面罩保持给氧。切开兔的气管，使用连接通风器的Portex^TM无封套的气管内插管3ID，并且保持每分钟30-40次呼吸的通气速度，大约潮涌体积量是18-20ml，最大气道压力10cm H₂O。然后给予异氟烷麻醉并且继续以2升/分钟用氧气通气。使用23G或24G导管插入右侧边缘耳静脉，以0.5ml/分钟的速度输入LactatedRinger溶液。在伤害手术期间兔保持3％异氟烷，降至2％保持麻醉状态。暴露出颈静脉，分离，然后插入PVC导管(17G)用于输入药物和化合物。
去毛并切开兔子左侧腹谷沟区并且沿着大腿垂直切开大约5cm深。暴露出股静脉和股动脉，分离，然后插入PVC导管(17G)用于输入药物和化合物。对于股动脉重复插入导管，插入导管的深度是10cm以保证导管达到腹主动脉。该动脉导管连接Gould系统来记录血压。通过该动脉导管也取到用于血气分析的样品。测定收缩压和舒张压，使用公式(舒张压×2+收缩压)÷3计算平均动脉血压。通过脉冲血氧计和Po-ne-mah数据接收软件系统(Ponemah PhysiologyPlatform，Gould Instrument Systems Inc)测定心率。
对腹腔进行腹中线切开。在耻骨上端大约5cm处切开。用钝器剔除脂肪和肌肉暴露出顺着体腔下行的下腹神经。为了避免损伤位于耻骨之上的股静脉和股动脉，基本上保持紧贴着耻骨的外侧曲线。坐骨神经和骨盆神经位于较深处，在进一步解剖之后位于兔的背侧。一但鉴定了坐骨神经，也就容易定位骨盆神经。术语骨盆神经的使用不很确切；解剖学教科书对于该术语没有充分详细地定义该神经。但是，该对神经刺激引起雌性阴道和阴蒂血流量增加和雄性海绵体血流增加和骨盆区神经支配。从周围组织分开该骨盆神经并且在该神经周围放置Harvard双极刺激电极。将该神经稍稍拉紧，这样该电极位置固定。在神经和电极周围放置大约1ml轻石蜡油。其对神经起保护性润滑作用并且防止血液污染电极。电极连接Grass S88刺激器。使用下面的参数刺激骨盆神经：-5V，脉冲宽度0.5ms，刺激持续20秒，频率16Hz。当每15-20分钟刺激该神经时获得可重复的反应。使用上述参数进行几次刺激以建立平均对照反应。使用Harvard22输入泵通过颈静脉输入要试验的化合物，使进行一次连续的15分钟刺激周期。
在雄性动物中，除去阴茎周围的皮肤和结缔组织以暴露出阴茎。经由白膜将导管(Insyte-W，Becton-Dickinson 20 Gauge 1.1×48mm)插到左海绵体空间内，取出针头，留下柔顺的导管。将该导管经由压力转换器(Ohmeda 5299-04)与Gould系统连接以记录海绵体内压力。一旦确立了海绵体内压力，即使用Vetbond(组织粘合剂，3M)将导管在适当位置密封。通过脉冲血氧计和Po-ne-mah数据接收软件系统(Ponemah Physiology Platform，Gould Instrument Systems Inc)测定心率。
使用Po-ne-mah数据接收软件(Ponemah PhysiologyPlatform，Gould Instrument Systems Inc)从流量计直接读取数字记录海绵体内血流，或者从Gould自动记录图表扫描间接记录。实验开始时进行校正(0-125ml/min/100g组织)。
在雌性动物中，在耻骨的尾侧端做腹中线切开以暴露出耻骨区。去除结缔组织暴露出阴蒂的被膜，保证其壁没有小的血管。通过去除所有的结缔组织也暴露外阴道壁。将一个激光Doppler流量探针插入阴道3厘米处，使得该探针轴的一半仍然可见。放置第二个探头使得其刚好位于外阴蒂壁之上。然后调节这些探头的位置直到获得信号。第二个探头刚好置于外阴道壁上血管的表面之上。将两个探针都夹在适当的位置。
使用Po-ne-mah数据接收软件(Ponemah PhysiologyPlatform，Gould Instrument Systems Inc)从流量计直接读取数字记录阴道和阴蒂血流量或者从Gould自动记录图表扫描间接记录阴道和阴蒂血流量。实验开始时进行校正(0-125ml/min/100g组织)。
选择性多巴胺D3激动剂在盐水+10％ 1M NaOH中配制。5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂在盐水+5％ 1M HCl中配制。将激动剂(和如果适当的话抑制剂)和载体对照以0.1ml/秒的速度输注。在骨盆神经刺激之前将选择性多巴胺D3激动剂和如果适当的话PDE_cAMP抑制剂放置15分钟。
所有的数据以平均值±s.e.m.表示。使用Student’s t-检验鉴定显著变化。
2.0结果和讨论
下文中的实施例证实了仅激活或提高D3多巴胺受体活性，即不激活或提高D2多巴胺受体活性，或者不显著激活或提高D2多巴胺受体活性，导致阴茎勃起和/或增加雌性生殖器血流。
此外，下文中的结果证实了D2多巴胺受体活性是在施用非选择性多巴胺激动剂之后观察到的不利副作用的主要原因。结果证实了D3受体不是所述副作用的原因或者不是其主要原因。
下文中的结果证实了激动剂在D3受体与D2受体之间的选择性程度是很重要的。只有对D3受体的功能选择性—相对于D2受体—是普拉克索所达到选择性的至少约3倍的选择性D3受体激动剂才能足以选择性地导致所希望的阴茎勃起/雌性生殖器血流增加，同时避免施用选择性多巴胺激动剂所观察到的副作用。
3.0在下列实施例中使用的化合物
3.17-OH-DPAT是市售D3/D2非选择性激动剂。
3.2普拉克索(SND 919；2-氨基-4，5，6，7-四氢-6-丙基氨基-苯并噻唑-二盐酸盐)市售D3-优先D3/D2激动剂，对D3的优选性—相对于D2受体—是约5倍-约9倍。
3.3罗匹尼罗是市售平衡D3/D2激动剂，对D3的优选性—相对于D2受体—是约2倍。
3.4反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺(PD-163，404)是选择性D2激动剂-参见Wustrow等人J.Med.Chem.41，760-771(1998)-实施例23b。
3.5 L-741，626是市售D2拮抗剂(16倍选择性)-参见Kulagowski等人.J.Med.Chem.1996，May 10，39(10)：1941-2和Bowery等人Br.J.Pharmacol.1996，Dec：119(7)：1491-7。
3.6 SB-277，011是D3拮抗剂(126倍选择性)-参见Stemp等人J.Med.Chem.(2000)45，1878-1885。
3.7 R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐(参见上文“化学实施例”部分的实施例8)是本发明选择性D3受体激动剂。
3.8 S32504是对多巴胺D3受体优先或选择的激动剂—与多巴胺D2受体相比。据述S32504具有抗帕金森病和抗抑郁性质。当使用GTPγS测定方法分析时，S32504对D3的选择性—相对于D2受体—是251倍。S32504的化学结构如下：

化合物S32504公开在American Chemical Society，222^nd ACSNational Meeting，Chicago，IL，26-30 August 2001(参见Peglion等人.[abstract 208 of the proceedings])中。该化合物的合成描述在EP 0899267以及Millan M.J.等人Soc.Neurosci.Abst.(1999)26.Pt.2.Abs 588.2中。
3.9 PNU-95666(aka U-95666，U-95666A，PNU-95666E，sumanirole)[(R)-5，6-二氢-N，N-二甲基-4H-咪唑并(4，5，1-ij)喹啉-5-胺(R)-3]据述是选择性D2激动剂(通过结合亲和力评估)，在功能上是非选择性D2/D3多巴胺激动剂。PNU-95666的化学结构如下所示：

实施例45：涉及阴茎勃起和雌性生殖器血流的诱导/维持的D3和D2受体
通过使用手术植入的遥测装置测定海绵体内压力和/或阴蒂/阴道血流来记录勃起反应。手术操作、数据获得和分析的具体细节可详细参见Bernabe J，Rampin O，Sachs BD，Giuliano F.Intracavernouspressure during erection in rats：an integrative approach basedon telemetric recording.Am.J.Physio.1999 Feb；276(2 Pt 2)：R441-9。
D2和D3受体都涉及阴茎勃起的诱导和维持。
在雄性勃起模型中，阿朴吗啡、7-OH-DPAT和普拉克索都诱导/增强前勃起效应。
作用机制研究表明，7-OH-DPAT(D2/D3非选择性激动剂)和普拉克索(D3-优先D2/D3激动剂)可通过激活D3或D2受体来增强勃起机制。
普拉克索(0.1μg/kg皮下给药[s.c.])在遥测的大鼠中诱导前勃起效应。
在选择性D2受体拮抗剂(L-741，626 2mg/kg s.c.)存在下观测到了普拉克索的致勃起作用(0.1μg/kg s.c.)，即普拉克索的勃起作用是通过激活D3受体介导的。
在选择性D3受体拮抗剂(SB-277，011 3mg/kg s.c.)存在下观测到了普拉克索的致勃起作用(0.1μg/kg s.c.)，即普拉克索的勃起作用是通过激活D2受体介导的。
并行施用L-741，626和SB-277，011(分别以2mg/kg s.c.和3mg/kg s.c.，)消除了所有普拉克索诱导的勃起活动，普拉克索诱导的勃起是通过激活D2或D3受体介导的。
                                                   勃起发生次数/15分钟  普拉克索(0.1  μg/kg s.c.)  普拉克索+  L-741626 D2拮抗  剂(2mg/kg sc)  普拉克索+  SB-277011 D3拮  抗剂(3mg/kg sc)  普拉克索+  L-741626/  SB-277011 并存  D2/D3拮抗剂  2.8±0.2 n＝5  2.8±0.6 n＝10  2.3±0.4 n＝10  0.4±0.4 n＝5
在选择性D2受体拮抗剂(L-741，626 2mg/kg s.c.)或选择性D3受体拮抗剂(SB-277，011 3mg/kg s.c.)存在下，7-OH-DPAT(10μg/kgs.c.)在遥测的大鼠中诱导前勃起效应。
并行施用L-741，626和SB-277，011(分别以2mg/kg s.c.和3mg/kg s.c.，)消除了所有7-OH-DPAT诱导的勃起活动，7-OH-DPAT诱导的勃起是通过激活D2或D3受体介导的。
反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺—一种选择性D2激动剂在大鼠中产生勃起。选择性D2拮抗剂(L-741，626；2mg/kg s.c.)消除了反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺诱导的勃起。在评价D3在普拉克索和7-OH-DPAT诱导的勃起中的作用的研究中。D2介导的途径被抑制。
R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐(10μg/kg s.c.)—一种选择性D3激动剂在遥测的大鼠中产生2.25±0.25次勃起/10分钟。
该数据有力地表明，D2和D3受体都涉及阴茎勃起的诱导和维持。相对于D2受体的选择性D3激动剂将提供提高在治疗效力与副作用之间的治疗比例(治疗窗口；治疗指数；治疗效果)的机会。
实施例46：在麻醉的狗中选择性激活多巴胺D2受体引起呕吐
使用11-17kg的雄性长耳短腿小猎犬。禁食过夜后，用氯醛糖(80mg kg^-1 i.v.)将动物麻醉，已经首先给动物注射了麻醉剂量的短效巴比妥类药物硫喷妥钠(15mg kg^-1 i.v.)。给气管插入导管，导管能保证即使在呕吐反应的逼出期期间气道也能开放，然后给左股静脉和动脉插导管以分别用于进一步施用麻醉剂和记录血液动力学参数。当手术完成时，给手术伤口浸渗长效局麻剂(布比卡因)，让动物稳定120分钟，然后施用受试化合物。在稳定期间，监测呼吸率以保证呼吸中枢没有被深度抑制，因为呕吐反射的CNS输出组分基本上经由呼吸运动神经元传送。一旦动物已经稳定并且呼吸率正常，即通过在颈的背侧表面皮下(s.c.)注射来进行受试化合物的第一次给药。在给药后30分钟密切观测动物，注意并记录运动(例如吞咽、眨眼、四肢运动、呼吸率和深度改变、干呕和呕吐)和血液动力学改变。在上次给药后60-90分钟时间内施用逐渐增加剂量的阿朴吗啡、普拉克索、反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺和R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐(3、10、30、100、300、1000和3000μgkg^-1)，直至观测到显著的呕吐反应。每次施用受试化合物15分钟后取血样(在干呕的动物中，从第一次注射受试化合物到出现第一次干呕的时间通常为7-13分钟；见表1)，将血浆样本冷冻以进行以后的分析。在实验结束时，用过度剂量的戊巴比妥将动物处死。
使用对个体动物所作的观测来确定当注射特定剂量水平的受试化合物时发生干呕的动物的百分比。然后使用动物干呕百分比来建立剂量反应曲线，由合适的曲线确定ED₅₀值。
阿朴吗啡-在氯醛糖麻醉的狗中引起显著的呕吐反应。呕吐反应与剂量有关，在8.5、26和85μgkg^-1 s.c.(n＝4)的剂量分别引起0、25和100％的动物发生干呕。干呕的组平均(±s.e.)次数也与剂量有关，在8.5、26和85μg kg^-1 s.c.的剂量分别发生0.0、2.5(±2.5)和28.0(±7.5)次干呕。根据动物干呕百分比，对于在麻醉狗中引起呕吐反射，阿朴吗啡的ED₅₀为33μg kg^-1 s.c.。
反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺-在实验期间，在100μg/kg观察到呕吐，相应样本的平均游离浓度为3.6nM。反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺的EC₅₀为3.8nM＝D2和D3＝＞100nM。样本表现出在D2 EC₅₀之上且远在D3 EC₅₀之下的游离浓度，因此所观测到的呕吐可能是由于D2介导的作用所致。
普拉克索-在实验期间，在30μg/kg观察到呕吐，相应样本的平均游离浓度为3.0nM。普拉克索的EC₅₀为2.75nM＝D2和0.56nM＝D3。由于适当样本中的游离浓度与D2和D3 EC₅₀非常接近，所以对于该化合物，不能判断所观测到的呕吐是由D2作用引起的还是由D3作用引起的。
R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐-在实验期间，在最高达3000μg/kg的剂量下未观测到呕吐。相应样本的游离血浆浓度为2700nM，比R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐的D3 EC50高约270倍。
假定所测定的浓度代表C_max，并且药代动学特性符合呕吐的药效血特性，则数据表明，基于反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺数据，所观测到的呕吐是由于D2介导的作用。阿朴吗啡和普拉克索在证实所观测到的D2介导的呕吐方面都不确定。
数据有力地表明，D2受体涉及引起呕吐。相对于D2受体的选择性D3激动剂将提供提高在治疗效力与副作用之间的治疗比例(治疗窗口；治疗指数；治疗效果)的机会。
实施例47：D2多巴胺受体介导7-OH-DPAT的前呕吐作用
多巴胺D2/D3受体激动剂R(+)-7-OH-DPAT在白鼬中引起的呕吐可被D2/D3受体拮抗剂(S)-依替必利阻断(Yoshikawa等人，(1996)Eur.J.Pharmacol.301 143-149)。为了更好地理解该作用的机制，我们比较(S)-依替必利与报道的D3-选择性拮抗剂GR218231(Murray等人，(1996)Bioorg.& Med.Chem.Letts.6 403-408)和D2受体-优先拮抗剂L-741，626(Bowery等人.，(1996)Br.J.Pharmacol.1191491-1497)在白鼬中抗7-OH-DPAT引起的呕吐的活性。
使用标准技术，从抑制[³H]-螺哌隆与人重组D2短(hD2s)受体和[³H]-R(+)-7-OH-DPAT与人重组D3(hD3)受体结合来确定拮抗剂亲和力估计值(表1)。
表1.在hD2s和hD3受体的亲和力估计值(pKi±s.e.m.)(n＝3-11)：(S)-依替必利 L-741，626 GR218231 hD2s 9.3±0.20 8.1±0.50 6.8±0.44 hD3 9.5±0.24 6.6±0.24 8.7±0.13
GR218231对hD3的选择性—相对于hD2s受体—为约80倍，而L-741，626对hD2s的选择性—相对于hD3受体—为约30倍。依替必利没有选择性。
在呕吐实验中，给任一性别的白鼬(白化体和鸡貂)(0.6-1.5kg)皮下施用(s.c.)拮抗剂或载体，15-45分钟后施以7-OH-DPAT(0.1mg/kg s.c.)。观测它们6小时，用干呕和呕吐总次数定量评价呕吐。施用7-OH-DPAT的所有对照动物表现出呕吐反应(平均值±s.e.m.；78.0±9.0)。以所有受试动物中呕吐被完全抑制所需的最小剂量表示抗呕吐效力(ED₁₀₀；表2)。以ED₁₀₀剂量s.c.给药后，在麻醉的(乌拉坦50％w/v；3ml/kg，i.p.)，测定每种拮抗剂的未结合血浆和全脑浓度。
表2.拮抗剂效力(ED₁₀₀)对7-OH-DPAT-引起的呕吐(n＝3)、每种结合剂的未结合血浆浓度(Plu，nM)与结合亲和力的比例(Plu/Ki)(n＝1)：   ED₁₀₀  (mg/kg)    Plu/Ki  脑浓度ⁿ  (ng/g)    hD3                    hD2s (S)-依替必利    0.03    6.8    4.4    377 L-741，626    3    0.13    4.1    250 GR218231    ＞10    95    1.3    1670
即使在10mg/kg的最高剂量下，GR218231的抗呕吐作用也是次最大作用，虽然游离药物的血浆浓度是在hD3受体的Ki的约100倍，并且达到的脑浓度是最高的。呕吐仅在2/3动物中被阻断。依替必利和L-741，626阻断所有动物中的呕吐，游离血浆浓度比在hD2s的Ki低几倍(～4×)。我们的数据表明，7-OH-DPAT的致勃起活性与D3受体激活无关，更有可能与在D2受体的激动剂活性相关。
该数据有力地表明，D2受体涉及引起呕吐。相对于D2受体的选择性D3激动剂将提供提高在治疗效力与副作用之间的治疗比例(治疗窗口；治疗指数；治疗效果)的机会。
实施例48：在麻醉的狗中选择性激活多巴胺D2受体引起低血压和其它心血管作用
用哌腈米特预治疗后，用氯醛糖与乌拉坦的混合物将雄性长耳短腿小猎犬麻醉。用仪器测定动脉血压、心输出量、E.C.G.、阴部动脉血流量(PAF)和海绵体内压力(ICP)。从主要信号中获得其它参数例如心搏率和血管阻力。平衡一段时间后，进行一系列对照读数，测定在4和8Hz的骨盆神经刺激对ICP和PAF的影响。在背部颈区域通过植入的导管以0.3-3000μg(碱)/kg的剂量皮下施用化合物。对于每次给药，以30分钟的固定间隔测定参数。每次给药15分钟后反复进行骨盆神经刺激。
从每只狗的最终对照值分析以改变百分比表示的结果，使用三只狗的平均值。
三种化合物(阿朴吗啡、普拉克索和反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺)产生全血管阻力(TVR；还称为完全周围阻力；TPR)降低，但是似乎只有普拉克索和反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺对平均血压产生明显影响。对TPR的影响发生得很快，在约10-15分钟达到峰值，在1-10μg/kg s.c.的剂量水平下很明显。通过计算ED₃₀值来定量评价对TPR的影响。对每只狗，用剂量和峰值下降(限定在100至40)绘制乙状曲线(约60％的TPR下降接近最大)。几何平均值如表3所示。
表3：化合物    几何平均ED₃₀(μg/kg s.c.)阿朴吗啡    11.7普拉克索    8.9反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺    44.6R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐    没有作用
R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐-在实验期间，在最高达3000μg/kg的剂量下没有观测到对血压或TPR的显著影响。相应样本的游离血浆浓度为2700nM，比R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐的D3 EC50高约270倍。
阿朴吗啡、普拉克索和反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺-使心输出量和心搏率产生宽范围的类似增加。D3选择性激动剂R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐对心输出量和心搏率没有任何显著影响。
D2激动剂(反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺)、D3-优先激动剂(普拉克索)和非选择性多巴胺激动剂(阿朴吗啡)在麻醉的狗中产生了显著的血液动力学改变，在最高剂量水平下心输出量约增加了1倍。在血液和心搏率影响方面有些定性不同，这种不同的重要意义尚不清楚。评估血液动力学改变的最重要参数TPR在所有情况下都减小了。对化合物计算ED₃₀值。该水平呈现了TPR的显著下降，并且可能引起起立性低血压和晕厥。普拉克索与阿朴吗啡似乎具有相同效力，这反映了普拉克索在D2受体上的减小的效力。D3选择性激动剂(R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐)在麻醉的狗中没有任何显著的血液动力学影响。
数据表明，基于反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺数据，所观测到的心血管影响是由于D2介导的作用。在证实可能的D2介导的心血管作用方面，阿朴吗啡和普拉克索都不确定，这是因为它们相对于D2受体缺乏对D3的选择性。
数据有力地表明，D2受体涉及与多巴胺激动剂有关的心血管作用。相对于D2受体的选择性D3激动剂将提供提高在治疗效力与副作用之间的治疗比例(治疗窗口；治疗指数；治疗效果)的机会。
实施例49：选择性D3激动剂提高阴茎勃起和雌性生殖器血流量的应用
制备R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐，并在所述雄性和雌性麻醉的兔中测试(上述详细描述的方法)来评价其分别对阴茎海绵体内压力和海绵体血流量以及阴道和阴蒂血流量的影响。
评估发现，当在雄性和雌性麻醉的兔中测试(上面详细描述的方法)时，功能选择性D3激动剂R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐有益地提高了雄性兔中的阴茎海绵体内压力和海绵体血流量以及雌性兔中的阴道和阴蒂血流量，提高程度至少与非选择性多巴胺激动剂例如阿朴吗啡和普拉克索相同。
实施例50：R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐的功能选择性
使用上文描述的“功能D3/D2激动剂测定”分析R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐对多巴胺D3受体的功能选择性—相对于多巴胺D2受体。
与下列非选择性多巴胺激动剂比较：普拉克索、罗匹尼罗、7-OH-DPAT、喹洛雷、反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺和阿朴吗啡。
当使用相同功能分析时，R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐对D3有功能选择性—相对于D2受体，该选择性是普拉克索表现出的选择性的3倍以上(普拉克索对D3受体的选择性仅为约5倍-约9倍，这与平衡激动剂在有效性(功能)上相当)。相反，阿朴吗啡、7-OH-DPAT和喹洛雷是平衡激动剂，其对D2和D 3受体表现出或多或少的相同活性，而反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺是D2-优先激动剂(参见表4)。
表4：化合物(激动剂)功能效力EC50*(nM) 相对于D2的 D3选择性多巴胺受体优选性D2L CHO(人) D3LGH4 C1(人)R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐 4973 7.3 681D3选择性普拉克索** 2.75 0.56 4.9弱D3优先-或多或少平衡罗匹尼罗 16.1 8.0 2.0平衡喹洛雷 6.1 4.8 1.3平衡阿朴吗啡 7.2nM 3.9nM 1.8平衡7-OH-DPAT 1.1 3.0 0.4平衡PNU-95666 121 172 0.7平衡反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺 3.8 没有作用D2选择性
*EC50＝“50％有效浓度”-还写为EC₅₀-，在本文中定义为“产生50％(或一半)对激动剂的可能最大反应的该激动剂摩尔浓度”。
**出版的关于普拉克索的数据与该数据一致-参见“克隆和表达的多巴胺D2、D3和D4受体的普拉克索结合与激活”，Mierau J，等人Eur.J.Pharmacol.1995；290(1)：29-36，其中摘要中描述“......这些结果表明普拉克索对D3受体的选择性是约5倍，而喹吡罗和溴隐亭是非选择性的或者是更D2/D4受体选择性的......”。
WO 93/23035公开了罗匹尼罗，并且提出其是选择性D3激动剂，基于1380nM∶69nM(20倍)的D2∶D3结合指出其选择性。然而，这样的结合不是“功能选择性”的精确反应，而表4中的数据则清楚地表明了罗匹尼罗对于D3没有功能选择性。
实施例51：比较对D3激动剂具有至少30倍选择性的化合物对一种或多种副作用例如恶心、呕吐、低血压或晕厥的影响
与当施用非选择性多巴胺激动剂例如阿朴吗啡和普拉克索时所观测到的副作用相比，功能选择性D3激动剂R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐有益地减轻一种或多种副作用例如恶心、呕吐、低血压或晕厥。
R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐(10μg/kg s.c.)一种选择性D3激动剂在遥测的大鼠中产生了2.25±0.25次勃起/10分钟。
在实验期间，在最高达3000μg/kg的剂量下，没有观测到R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐对血压或TPR的显著影响。相应样本的游离血浆浓度为2700nM，比R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐的D3 EC50高约270倍。
实施例52：比较对D3受体具有至少30倍的选择性—相对于D2受体—的化合物对勃起以及一种或多种副作用例如恶心、呕吐、低血压或晕厥的影响
在遥测勃起模型以及恶心/呕吐和低血压狗模型中测定阿朴吗啡(非-选择性多巴胺激动剂)、普拉克索(D3-优选性D2/D3激动剂)、选择性D3激动剂[R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐]和选择性D2激动剂[反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺](参见附图1)。
只有选择性D3激动剂表现出显著的在有益的促性作用与低血压和恶心/呕吐等可能不利副作用之间的治疗指数(治疗比例；治疗窗口；治疗效果)。在约1nM游离血浆浓度下观测到了促性作用，甚至在最高测试剂量下(约1000nM游离药物浓度)也不存在恶心/呕吐和低血压。相反，阿朴吗啡、普拉克索和选择性D2激动剂都以类似于引起恶心/呕吐和低血压的浓度诱导促性作用。
这些实验中获得的数据表明，D2和D3受体介导多巴胺激动剂的促性作用。并且D2受体介导与非选择性多巴胺激动剂有关的呕吐和低血压不利作用。选择性地靶向促性D3多巴胺受体，同时获得相对于D2受体的选择性可改善治疗效果(治疗比例；治疗窗口；治疗指数)，这是通过减轻了由其它多巴胺受体亚型例如D2介导的限制剂量的副作用来实现的。
实施例53：与D3-优选性D2/D3激动剂不同，选择性D3激动剂在麻醉的狗中对血液动力学参数没有显著影响
在麻醉的狗血液动力学模型中测定普拉克索(D3-优先D2/D3激动剂)和选择性D3激动剂[R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐](参见附图2)。
普拉克索产生低血压—全血管阻力(TPR)降低和对平均血压的显著影响。对TPR的影响发生得很快，在约10-15分钟达到峰值，在10μg/kg s.c.的剂量水平下很明显。普拉克索还使心输出量和心搏率增加。
选择性D2激动剂(反式-[4-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]环己基]-嘧啶-2-基胺)产生类似于普拉克索的血液动力学影响(数据在附图2中没有显示，参见实施例48)。与普拉克索和D2选择性激动剂不同，选择性D3激动剂和盐水对照对于TPR、平均血压、心输出量和心搏率没有任何显著影响。
这些实验中获得的数据表明，D2受体介导与非选择性多巴胺激动剂有关的低血压的不利血液动力学影响。选择性地靶向促性D3多巴胺受体，同时获得相对于D2受体的选择性可改善治疗效果(治疗比例；治疗窗口；治疗指数)，这是通过减轻了由其它多巴胺受体亚型例如D2介导的限制剂量的副作用例如D2介导的低血压作用来实现的。
实施例54：交配行为意识清醒大鼠模型-雄性和雌性性欲和性唤起的测定
所有性行为实验必须用成年大鼠(～12周龄/200g体重)。在从关灯后2小时开始的光照/黑暗循环的黑暗期的红灯下进行性行为测试，录相以进一步分析(观察者出现会不利地改变性行为)。
雄性性行为
将雄性动物(N＝8-10)放置在干净的培养缸(或饲养笼子)中，让它们熟悉环境至少15分钟。将动情期雌性动物放在交配台上。在45分钟的实验期间记录下列信息：开始骑上行为的潜伏时间，第一次插入的潜伏时间，第一次射精的潜伏时间(从第一次插入开始计算)，到射精时的插入次数，骑上直至射精的次数，和测试期间射精的次数。在一次45分钟的试验期间观察雄性动物和动情期WT雌性动物。
以4天的时间间隔，即每三天(在呈送之间有2天的净日数)给大鼠呈送性感受的雌性动物，直至完成至少6天的基线测定。到这时应当可预期出现活跃行为。表现出交配行为迟钝的大鼠用作HSDD模型。
对于所有性行为测试将雄性动物放在观察台(对于大鼠，直径是50-60cm)上。将雄性动物放在观察台上3-4分钟后，把性感受的雌性动物(切除卵巢的，携带7mm苯甲酸雌二醇硅橡胶植入体，给出最佳结果而没有并发症)放在观察台上，记录下列参数：
骑上潜伏时间：从放入雌性动物到第一次骑上之间的时间(秒)。容许的最长时间是15分钟(900秒)，如果在该时间内不能记录到任何骑上，则终止测试。骑上潜伏时间与性渴望/性欲有关。
插入潜伏时间：从放入雌性动物到第一次插入之间的时间(秒)。容许的最长时间是15分钟(900秒)，如果在该时间内不能记录到任何插入，则终止测试。插入潜伏时间与性渴望/性欲有关。
骑上次数：到射精时。当不能达到射精时，则不分析骑上次数。
插入次数：到射精时。当不能达到射精时，则不分析插入次数。
交配效率：插入次数/(骑上次数+插入次数)。这是勃起功能的测定手段。
射精潜伏时间：从第一次插入到射精的时间(秒)。给定的最长时间是30分钟(1800秒)，如果在该时间内不能达到射精，则终止测试。
不应期：从射精到下一系列性活动的首次骑上之间的时间(秒)。在达到射精的动物中，测试在不应期结束时终止，这由下一性周期的首次骑上来指示。
对于单次射精，调节这些参数。如果需要测试几次射精，则需要包括射精的最长时间或次数。
骑上定义为雄性动物呈现交配姿势，但是没能实现插入。插入定义为雄性动物的阴茎进入阴道并伴有抽插行为。插入在行为上定义为雄性动物骑上雌性动物，并伴有缓慢的有节奏的抽插行为。在大鼠中，骑上可以与插入区别开，因为伴有骑上(没有插入)的抽插行为在性质上与伴有插入的抽插行为不同。射精在行为上定义为有力的抽插行为达到高潮，雄性动物脊柱弯曲，并将其前爪提起离开雌性动物，然后退回。通过存在的精液塞检验射精，之后是在下一次骑上之前长5分钟以上的不应期。
使用标准方案准备动情期雌性动物，例如在测试的前一天，给受刺激的雌性动物s.c.注射雌二醇-17(0.05mg悬浮在0.05cc芝麻油中)，测试6小时前，给雌性动物s.c.注射0.1mg孕酮(悬浮在0.05cc芝麻油中)以诱导行为动情期。
另一雄性动物性行为范例是分析未接触勃起以作为性唤起的测定手段。对于此，使用划分的观察台，其中将动情期雌性动物放在观察台上，这样可记录对嗅觉刺激的雄性勃起反应。该测试可用相同组的大鼠进行。
雌性动物性行为
(1)性感受(性渴望/性欲)
在大鼠中，该测试在直径为90cm的圆形台上进行，该圆形台环绕着30cm高的壁(对于小鼠需要调节这些尺寸)。将前面具有金属网的两个小笼子(15×15cm)固定在壁上，这样笼子的前面与壁“齐平”，并且这两个笼子彼此相对。它们盛放着两只刺激动物，有性检验的雄性动物和性感受雌性动物。性感受雌性动物可以是卵巢切除的，在测试48小时前给予5mg苯甲酸雌二醇，在测试4小时前给予0.5mg孕酮，或者是完整的动情期雌性动物；还可以使用携带苯甲酸雌二醇硅橡胶植入体(在大鼠中长7mm)的切除卵巢的雌性动物。在测试开始前的连续两天内，让动物适应装置(没有刺激动物存在的情况下)10分钟。在10分钟的测试期间，记录评估每只刺激动物所消耗的时间。从评估刺激动物所消耗的总时间当中，计算评估雄性动物所消耗的时间减去评估雌性动物所消耗的时间而得到的差值。在动物之间的观察台绝对干净。雄性/雌性动物刺激盒子的位置在动物之间随机分配，以防止位置优先。在该测试中使用没有过性经历的动物。可先进行该测试，然后进行性感受。雌性大鼠可完整地使用，并且在如通过阴道涂片所确定的后动情前期进行测试。
预计结果：在大鼠中，当雌性动物处于间情期或者切除卵巢并且没有补充激素或补充了低剂量激素时，评估雄性动物和雌性动物所消耗的时间大约类似。有0-15％的差异。
处于后动情前期的或切除卵巢并补充雌激素+孕酮的雌性动物消耗的时间是这样的：约70-80％的时间是评估雄性动物所消耗的时间，约20％的时间是评估雄性动物所消耗的时间，因此差值是50-60％。补充雌激素的切除卵巢的大鼠是减退性性欲障碍的良好模型，其中评估相反性别所消耗的时间与性渴望/性欲直接相关。
(2)性感受
将雌性大鼠(N＝8-10)与一只或一系列有活力的雄性大鼠放在一起，进行10次骑上。当结果不清楚时，建议让它们进行20次骑上。雄性动物可以是输精管切除的或者不容许射精(通过限制每只雄性动物所提供的骑上次数)。记录动物的脊柱前凸反应，以骑上百分比(即脊柱前凸商数LQ)表示。
切除卵巢的雌性动物或处于间情期的雌性动物通常不对伴有脊柱前凸的骑上起反应(LQ＝0-20％)。表现出高LQ＝80-100％的动物视为有性感受。
如下所述给雌性动物对雄性骑上或插入的反应：(a)完全没有性感受，伴有踢、高耸或逃跑(0分)，(b)有性感受/伴有腿不伸长的平静姿势(0.1分)，(c)有性感受/伴有腿伸长的平静姿势(0.5分)或(d)感受性脊柱前凸姿势，伴有脊柱的背屈(根据背屈的程度，1-3分，以0.5分为间隔)。对于脊柱前凸商数(脊柱前凸次数/骑上和插入次数)的计算，将1分或更高分的雌性动物视为脊柱前凸反应。在骑上和插入总次数当中，分别计算每只雌性大鼠的有性感受/平静姿势(0.1和0.5分)所占的百分比。
制备R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐，在所述雄性和雌性意识清醒大鼠中测试(上文详细描述的方法)，以评价其对雄性和雌性交配行为的影响。
试验表明，R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐有益地提高了在雌性大鼠中的感受和性感受行为，恢复了切除卵巢的补充雌激素的动物的性欲(HSDD模型)。在雄性大鼠中，R-(-)-3-(4-丙基吗啉-2-基)苯酚盐酸盐有益地提高了交配行为和交配效率(插入次数/(骑上次数+插入次数))，并缩短了迟钝雄性大鼠(HSDD模型)中的骑上潜伏时间和插入潜伏时间。
实施例55：功能选择性数据
使用上文描述的cAMP酶免疫测定，测试实施例的化合物(参见上文“化学实施例”部分)对于D3受体的选择性—与D2受体相比。当使用相同功能测定时，所有非中间体化合物都具有多至少约15倍的对多巴胺D3受体的选择性—与多巴胺D2受体相比。表5中给出了一部分所选的功能选择性数据。
表5：  实施例的化    合物在D3受体上的功能效力(EC50(nM))在D2受体上的功能效力(EC50(nM))功能选择性(D3/D2)    8    7.3    4973  681倍    15a    77    1750  22.7倍    15a+15b    (外消旋)    89    ＞10000  ＞112倍    23a    65    ＞5000  ＞76.9倍    23a+23b    (外消旋)    ～65    ＞5000  ＞76.9倍    35    501    ～10500  ＞21.0倍    37    895    ＞100000  ＞111.7倍
EC50＝“50％有效浓度”-还写为EC₅₀-，在本文中定义为“产生50％(或一半)对激动剂的可能最大反应的该激动剂摩尔浓度”。
实施例56：S32504提高阴茎勃起和雌性生殖器血流的应用
制备S32504，在所述雄性和雌性麻醉兔中测试(上文详细描述的方法)，以评价其对海绵体内压力和海绵体血流以及阴道和阴蒂血流的影响。
以前的研究提出S32504能有益地提高雄性兔中的海绵体内压力和海绵体血流以及雌性兔中阴道和阴蒂血流。
在上面的说明书中所提及的所有出版物均引入本文作为参考。那些不背离本发明范围和精神的对本发明所述方法和系统进行的各种修饰和改变对于本领域专业人员来说是显而易见的。尽管已经结合具体的优选实施方式对本发明进行了描述，但是应该理解，本发明的权利要求不能不适当地限于这些具体实施方式。事实上，那些对生物化学和生物技术领域的专业人员显而易见的、对所述实施本发明的方法进行的各种修饰将包括在下列权利要求的范围内。
在本文中交叉引用可依据本发明使用的包含在专利和专利申请中的化合物时，我们意指如在权利要求书和具体实施例中定义的治疗活性化合物(所有这些都引入本文以供参考)。
序列表(属于说明书的一部分)
SEQ ID NO：1
atggcatctctgagtcagctgagtagccacctgaactacacctgtggggcagagaact
ccacaggtgccagccaggcccgcccacatgcctactatgccctctcctactgcgcgct
catcctggccatcgtcttcggcaatggcctggtgtgcatggctgtgctgaaggagcgg
gccctgcagactaccaccaactacttagtagtgagcctggctgtggcagacttgctgg
tggccaccttggtgatgccctgggtggtatacctggaggtgacaggtggagtctggaa
tttcagccgcatttgctgtgatgtttttgtcaccctggatgtcatgatgtgtacagcc
agcatccttaatctctgtgccatcagcatagacaggtacactgcagtggtcatgcccg
ttcactaccagcatggcacgggacagagctcctgtcggcgcgtggccctcatgatcac
ggccgtctgggtactggcctttgctgtgtcctgccctcttctgtttggctttaatacc
acaggggaccccactgtctgctccatctccaaccctgattttgtcatctactcttcag
tggtgtccttctacctgccctttggagtgactgtccttgtctatgccagaatctatgt
ggtgctgaaacaaaggagacggaaaaggatcctcactcgacagaacagtcagtgcaac
agtgtcaggcctggcttcccccaacaaaccctctctcctgacccggcacatctggagc
tgaagcgttactacagcatctgccaggacactgccttgggtggaccaggcttccaaga
aagaggaggagagttgaaaagagaggagaagactcggaattccctgagtcccaccata
gcgcccaagctcagcttagaagttcgaaaactcagcaatggcagattatcgacatctt
tgaagctggggcccctgcaacctcggggagtgccacttcgggagaagaaggcaaccca
aatggtggccattgtgcttggggccttcattgtctgctggctgcccttcttcttgacc
catgttctcaatacccactgccagacatgccacgtgtccccagagctttacagtgcca
cgacatggctgggctacgtgaatagcgccctcaaccctgtgatctataccaccttcaa
tatcgagttccggaaagccttcctcaagatcctgtcttgctga
SEQ ID NO：2
MASLSQLSSHLNYTCGAENSTGASQARPHAYYALSYCALILAIVFGNGLVCMAVLKER
ALQTTTNYLVVSLAVADLLVATLVMPWVVYLEVTGGVWNFSRICCDVFVTLDVMMCTA
SILNLCAISIDRYTAVVMPVHYQHGTGQSSCRRVALMITAVWVLAFAVSCPLLFGFNT
TGDPTVCSISNPDFVIYSSVVSFYLPFGVTVLVYARIYVVLKQRRRKRILTRQNSQCN
SVRPGFPQQTLSPDPAHLELKRYYSICQDTALGGPGFQERGGELKREEKTRNSLSPTI
APKLSLEVRKLSNGRLSTSLKLGPLQPRGVPLREKKATQMVAIVLGAFIVCWLPFFLT
HVLNTHCQTCHVSPELYSATTWLGYVNSALNPVIYTTFNIEFRKAFLKILSC
SEQ ID NO：3
GGCACCAGCTCAGCCCCAAGCCACTGCTCTCCCATCCCAGTCCCTGGAAATCCACCCAC
TTGGCCCAGCTCACCCCAACTCCAACCCACTGGGACCCAGTCTCCAGGGGCCTGACTGT
GGGCGGCAGCCACTCCTGAGTGAGCAAAGGTTCCTCCGCGGTGCTCTCCCGTCCAGAG
CCCTGCTGATGGGGAAGTCCGAAGGCCCCGTGGGGATGGTGGAGAGCGCTGGCCGTGC
AGGGCAGAAGCGCCCGGGGTTCCTGGAGGGGGGGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGT
GACCGCTGCCCTGGTGGCCTTGGGTGTCCTCTACGCCGACCGCAGAGGGAAGCAGCTG
CCACGCCTTGCTAGCCGGCTGTGCTTCTTACAGGAGGAGAGGACCTTTGTAAAACGAAAA
CCCCGAGGGATCCCAGAGGCCCAAGAGGTGAGCGAGGTCTGCACCACCCCTGGCTGCG
TGATAGCAGCTGCCAGGATCCTCCAGAACATGGACCCGACCACGGAACCGTGTGACGAC
TTCTACCAGTTTGCATGCGGAGGCTGGCTGCGGCGCCACGTGATCCCTGAGACCAACTC
AAGATACAGCATCTTTGACGTCCTCCGCGACGAGCTGGAGGTCATCCTCAAAGCGGTGC
TGGAGAATTCGACTGCCAAGGACCGGCCGGCTGTGGAGAAGGCCAGGACGCTGTACCG
CTCCTGCATGAACCAGAGTGTGATAGAGAAGCGAGGCTCTCAGCCCCTGCTGGACATCT
TGGAGGTGGTGGGAGGCTGGCCGGTGGCGATGGACAGGTGGAACGAGACCGTAGGACT
CGAGTGGGAGCTGGAGCGGCAGCTGGCGCTGATGAACTCACAGTTCAACAGGCGCGTC
CTCATCGACCTCTTCATCTGGAACGACGACCAGAACTCCAGCCGGCACATCATCTACATA
GACCAGCCCACCTTGGGCATGCCCTCCCGAGAGTACTACTTCAACGGCGGCAGCAACCG
GAAGGTGCGGGAAGCCTACCTGCAGTTCATGGTGTCAGTGGCCACGTTGCTGCGGGAG
GATGCAAACCTGCCCAGGGACAGCTGCCTGGTGCAGGAGGACATGGTGCAGGTGCTGG
AGCTGGAGACACAGCTGGCCAAGGCCACGGTACCCCAGGAGGAGAGACACGACGTCAT
CGCCTTGTACCACCGGATGGGACTGGAGGAGCTGCAAAGCCAGTTTGGCCTGAAGGGAT
TTAACTGGACTCTGTTCATACAAACTGTGCTATCCTCTGTCAAAATCAAGCTGCTGCCAGA
TGAGGAAGTGGTGGTCTATGGCATCCCCTACCTGCAGAACCTTGAAAACATCATCGACAC
CTACTCAGCCAGGACCATACAGAACTACCTGGTCTGGCGCCTGGTGCTGGACCGCATTG
GTAGCCTAAGCCAGAGATTCAAGGACACACGAGTGAACTACCGCAAGGCGCTGTTTGGC
ACAATGGTGGAGGAGGTGCGCTGGCGTGAATGTGTGGGCTACGTCAACAGCAACATGGA
GAACGCCGTGGGCTCCCTCTACGTCAGGGAGGCGTTCCCTGGAGACAGCAAGAGCATG
GTCAGAGAACTCATTGACAAGGTGCGGACAGTGTTTGTGGAGACGCTGGACGAGCTGGG
CTGGATGGACGAGGAGTCCAAGAAGAAGGCGCAGGAGAAGGCCATGAGCATCCGGGAG
CAGATCGGGCACCCTGACTACATCCTGGAGGAGATGAACAGGCGCCTGGACGAGGAGT
ACTCCAATCTGAACTTCTCAGAGGACCTGTACTTTGAGAACAGTCTGCAGAACCTCAAGG
TGGGCGCCCAGCGGAGCCTCAGGAAGCTTCGGGAAAAGGTGGACCCAAATCTCTGGAT
CATCGGGGCGGCGGTGGTCAATGCGTTCTACTCCCCAAACCGAAACCAGATTGTATTCC
CTGCCGGGATCCTCCAGCCCCCCTTCTTCAGCAAGGAGCAGCCACAGGCCTTGAACTTT
GGAGGCATTGGGATGGTGATCGGGCACGAGATCACGCACGGCTTTGACGACAATGGCC
GGAACTTCGACAAGAATGGCAACATGATGGATTGGTGGAGTAACTTCTCCACCCAGCACT
TCCGGGAGCAGTCAGAGTGCATGATCTACCAGTACGGCAACTACTCCTGGGACCTGGCA
GACGAACAGAACGTGAACGGATTCAACACCCTTGGGGAAAACATTGCTGACAACGGAGG
GGTGCGGCAAGCCTATAAGGCCTACCTCAAGTGGATGGCAGAGGGTGGCAAGGACCAG
CAGCTGCCCGGCCTGGATCTCACCCATGAGCAGCTCTTCTTCATCAACTATGCCCAGGTG
TGGTGCGGGTCCTACCGGCCCGAGTTCGCCATCCAATCCATCAAGACAGACGTCCACAG
TCCCCTGAAGTACAGGGTACTGGGGTCGCTGCAGAACCTGGCCGCCTTCGCAGACACGT
TCCACTGTGCCCGGGGCACCCCCATGCACCCCAAGGAGCGATGCCGCGTGTGGTAGCC
AAGGCCCTGCCGCGCTGTGCGGCCCACGCCCACCTGCTGCTCGGAGGCATCTGTGCGA
AGGTGCAGCTAGCGGCGACCCAGTGTACGTCCCGCCCCGGCCAACCATGCCAAGCCTG
CCTGCCAGGCCTCTGCGCCTGGCCTAGGGTGCAGCCACCTGCCTGACACCCAGGGATG
AGCAGTGTCCAGTGCAGTACCTGGACCGGAGCCCCCTCCACAGACACCCGCGGGGCTC
AGTGCCCCCGTCACAGCTCTGTAGAGACAATCAACTGTGTCCTGCCCACCCTCCAAGGT
GCATTGTCTTCCAGTATCTACAGCTTCAGACTTGAGCTAAGTAAATGCTTCAAAGAAAAAA
AAAAAAAAAAAAAAA
SEQ ID NO：4

CCCACTTGGCCCAGCTCACCCCAACTCCAACCCACTGGGACCCAGTCTCCAGGGGCCTG
ACTGTGGGCGGCAGCCACTCCTGAGTGAGCAAAGGTTCCTCCGCGGTGCTCTCCCGTCC
AGAGCCCTGCTGATGGGGAAGTCCGAAGGCCCCGTGGGGATGGTGGAGAGCGCTGGCC
GTGCAGGGCAGAAGCGCCCGGGGTTCCTGGAGGGGGGGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCT
GGTGACCGCTGCCCTGGTGGCCTTGGGTGTCCTCTACGCCGACCGCAGAGGGAAGCAG
CTGCCACGCCTTGCTAGCCGGCTGTGCTTCTTACAGGAGGAGAGGACCTTTGTAAAACG
AAAACCCCGAGGGATCCCAGAGGCCCAAGAGGTGAGCGAGGTCTGCACCACCCCTGGC
TGCGTGATAGCAGCTGCCAGGATCCTCCAGAACATGGACCCGACCACGGAACCGTGTGA
CGACTTCTACCAGTTTGCATGCGGAGGCTGGCTGCGGCGCCACGTGATCCCTGAGACCA
ACTCAAGATACAGCATCTTTGACGTCCTCCGCGACGAGCTGGAGGTCATCCTCAAAGCG
GTGCTGGAGAATTCGACTGCCAAGGACCGGCCGGCTGTGGAGAAGGCCAGGACGCTGT
ACCGCTCCTGCATGAACCAGAGTGTGATAGAGAAGCGAGGCTCTCAGCCCCTGCTGGAC
ATCTTGGAGGTGGTGGGAGGCTGGCCGGTGGCGATGGACAGGTGGAACGAGACCGTAG
GACTCGAGTGGGAGCTGGAGCGGCAGCTGGCGCTGATGAACTCACAGTTCAACAGGCG
CGTCCTCATCGACCTCTTCATCTGGAACGACGACCAGAACTCCAGCCGGCACATCATCTA
CATAGACCAGCCCACCTTGGGCATGCCCTCCCGAGAGTACTACTTCAACGGCGGCAGCA
ACCGGAAGGTGCGGGAAGCCTACCTGCAGTTCATGGTGTCAGTGGCCACGTTGCTGCG
GGAGGATGCAAACCTGCCCAGGGACAGCTGCCTGGTGCAGGAGGACATGGTGCAGGTG
CTGGAGCTGGAGACACAGCTGGCCAAGGCCACGGTACCCCAGGAGGAGAGACACGACG
TCATCGCCTTGTACCACCGGATGGGACTGGAGGAGCTGCAAAGCCAGTTTGGCCTGAAG
GGATTTAACTGGACTCTGTTCATACAAACTGTGCTATCCTCTGTCAAAATCAAGCTGCTGC
CAGATGAGGAAGTGGTGGTCTATGGCATCCCCTACCTGCAGAACCTTGAAAACATCATCG
ACACCTACTCAGCCAGGACCATACAGAACTACCTGGTCTGGCGCCTGGTGCTGGACCGC
ATTGGTAGCCTAAGCCAGAGATTCAAGGACACACGAGTGAACTACCGCAAGGCGCTGTTT
GGCACAATGGTGGAGGAGGTGCGCTGGCGTGAATGTGTGGGCTACGTCAACAGCAACAT
GGAGAACGCCGTGGGCTCCCTCTACGTCAGGGAGGCGTTCCCTGGAGACAGCAAGAGC
ATGGTCAGAGAACTCATTGACAAGGTGCGGACAGTGTTTGTGGAGACGCTGGACGAGCT
GGGCTGGATGGACGAGGAGTCCAAGAAGAAGGCGCAGGAGAAGGCCATGAGCATCCGG
GAGCAGATCGGGCACCCTGACTACATCCTGGAGGAGATGAACAGGCGCCTGGACGAGG
AGTACTCCAATCTGAACTTCTCAGAGGACCTGTACTTTGAGAACAGTCTGCAGAACCTCA
AGGTGGGCGCCCAGCGGAGCCTCAGGAAGCTTCGGGAAAAGGTGGACCCAAATCTCTG
GATCATCGGGGCGGCGGTGGTCAATGCGTTCTACTCCCCAAACCGAAACCAGATTGTATT
CCCTGCCGGGATCCTCCAGCCCCCCTTCTTCAGCAAGGAGCAGCCACAGGCCTTGAACT
TTGGAGGCATTGGGATGGTGATCGGGCACGAGATCACGCACGGCTTTGACGACAATGGC
CGGAACTTCGACAAGAATGGCAACATGATGGATTGGTGGAGTAACTTCTCCACCCAGCAC
TTCCGGGAGCAGTCAGAGTGCATGATCTACCAGTACGGCAACTACTCCTGGGACCTGGC
AGACGAACAGAACGTGAACGGATTCAACACCCTTGGGGAAAACATTGCTGACAACGGAG
GGGTGCGGCAAGCCTATAAGGCCTACCTCAAGTGGATGGCAGAGGGTGGCAAGGACCA
GCAGCTGCCCGGCCTGGATCTCACCCATGAGCAGCTCTTCTTCATCAACTATGCCCAGGT
GTGGTGCGGGTCCTACCGGCCCGAGTTCGCCATCCAATCCATCAAGACAGACGTCCACA
GTCCCCTGAAGTACAGGGTACTGGGGTCGCTGCAGAACCTGGCCGCCTTCGCAGACAC
GTTCCACTGTGCCCGGGGCACCCCCATGCACCCCAAGGAGCGATGCCGCGTGTGGTAG
CCAAGGCCCTGCCGCGCTGTGCGGCCCACGCCCACCTGCTGCTCGGAGGCATCTGTGC
GAAGGTGCAGCTAGCGGCGACCCAGTGTACGTCCCGCCCCGGCCAACCATGCCAAGCC
TGCCTGCCAGGCCTCTGCGCCTGGCCTAGGGTGCAGCCACCTGCCTGACACCCAGGGA
TGAGCAGTGTCCAGTGCAGTACCTGGACCGGAGCCCCCTCCACAGACACCCGCGGGGC
TCAGTGCCCCCGTCACAGCTCTGTAGAGACAATCAACTGTGTCCTGCCCACCCTCCAAG
GTGCATTGTCTTCCAGTATCTACAGCTTCAGACTTGAGCTAAGTAAATGCTTCAAAGAAA

SEQ ID NO：5
MGKSEGPVGMVESAGRAGQKRPGFLEGGLLLLLLLVTAALVALGVLYADRRGKQLPRLAS
RLCFLQEERTFVKRKPRGIPEAQEVSEVCTTPGCVIAAARILQNMDPTTEPCDDFYQFAC
GGWLRRHVIPETNSRYSIFDVLRDELEVILKAVLENSTAKDRPAVEKARTLYRSCMNQSV
IEKRGSQPLLDILEVVGGWPVAMDRWNETVGLEWELERQLALMNSQFNRRVLIDLFIWND
DQNSSRHIIYIDQPTLGMPSREYYFNGGSNRKVREAYLQFMVSVATLLREDANLPRDSCL
VQEDMVQVLELETQLAKATVPQEERHDVIALYHRMGLEELQSQFGLKGFNWTLFIQTVLS
SVKIKLLPDEEVVVYGIPYLQNLENIIDTYSARTIQNYLVWRLVLDRIGSLSQRFKDTRV
NYRKALFGTMVEEVRWRECVGYVNSNMENAVGSLYVREAFPGDSKSMVRELIDKVRTVFV
ETLDELGWMDEESKKKAQEKAMSIREQIGHPDYILEEMNRRLDEEYSNLNFSEDLYFENS
LQNLKVGAQRSLRKLREKVDPNLWIIGAAVVNAFYSPNRNQIVFPAGILQPPFFSKEQPQ
ALNFGGIGMVIGHEITHGFDDNGRNFDKNGNMMDWWSNFSTQHFREQSECMIYQYGNYSW
DLADEQNVNGFNTLGENIADNGGVRQAYKAYLKWMAEGGKDQQLPGLDLTHEQLFFINYA
QVWCGSYRPEFAIQSIKTDVHSPLKYRVLGSLQNLAAFADTFHCARGTPMHPKERCRVW
                      序列表
<110>Pfizer Limited and Pfizer，Inc.
<120>用于治疗性功能障碍的选择性多巴胺D3受体激动剂
<130>PC22046A
<150>GB 0130219.9
<151>2001-12-18
<160>5
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>1203
<212>DNA
<213>人(Homo Sapiens)
<400>1
atggcatctc tgagtcagct gagtagccac ctgaactaca cctgtggggc agagaactcc    60
acaggtgcca gccaggcccg cccacatgcc tactatgccc tctcctactg cgcgctcatc    120
ctggccatcg tcttcggcaa tggcctggtg tgcatggctg tgctgaagga gcgggccctg    180
cagactacca ccaactactt agtagtgagc ctggctgtgg cagacttgct ggtggccacc    240
ttggtgatgc cctgggtggt atacctggag gtgacaggtg gagtctggaa tttcagccgc    300
atttgctgtg atgtttttgt caccctggat gtcatgatgt gtacagccag catccttaat    360
ctctgtgcca tcagcataga caggtacact gcagtggtca tgcccgttca ctaccagcat    420
ggcacgggac agagctcctg tcggcgcgtg gccctcatga tcacggccgt ctgggtactg    480
gcctttgctg tgtcctgccc tcttctgttt ggctttaata ccacagggga ccccactgtc    540
tgctccatct ccaaccctga ttttgtcatc tactcttcag tggtgtcctt ctacctgccc    600
tttggagtga ctgtccttgt ctatgccaga atctatgtgg tgctgaaaca aaggagacgg    660
aaaaggatcc tcactcgaca gaacagtcag tgcaacagtg tcaggcctgg cttcccccaa    720
caaaccctct ctcctgaccc ggcacatctg gagctgaagc gttactacag catctgccag    780
gacactgcct tgggtggacc aggcttccaa gaaagaggag gagagttgaa aagagaggag    840
aagactcgga attccctgag tcccaccata gcgcccaagc tcagcttaga agttcgaaaa    900
ctcagcaatg gcagattatc gacatctttg aagctggggc ccctgcaacc tcggggagtg    960
ccacttcggg agaagaaggc aacccaaatg gtggccattg tgcttggggc cttcattgtc    1020
tgctggctgc ccttcttctt gacccatgtt ctcaataccc actgccagac atgccacgtg    1080
tccccagagc tttacagtgc cacgacatgg ctgggctacg tgaatagcgc cctcaaccct    1140
gtgatctata ccaccttcaa tatcgagttc cggaaagcct tcctcaagat cctgtcttgc    1200
tga                                                                  1203
<210>2
<211>400
<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Ala Ser Leu Ser Gln Leu Ser Ser His Leu Asn Tyr Thr Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Glu Asn Ser Thr Gly Ala Ser Gln Ala Arg Pro His Ala Tyr Tyr
            20                  25                  30
Ala Leu Ser Tyr Cys Ala Leu Ile Leu Ala Ile Val Phe Gly Asn Gly
        35                  40                  45
Leu Val Cys Met Ala Val Leu Lys Glu Arg Ala Leu Gln Thr Thr Thr
    50                  55                  60
Asn Tyr Leu Val Val Ser Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu Val Ala Thr
65                  70                  75                  80
Leu Val Met Pro Trp Val Val Tyr Leu Glu Val Thr Gly Gly Val Trp
                85                  90                  95
Asn Phe Ser Arg Ile Cys Cys Asp Val Phe Val Thr Leu Asp Val Met
            100                 105                 110
Met Cys Thr Ala Ser Ile Leu Asn Leu Cys Ala Ile Ser Ile Asp Arg
        115                 120                 125
Tyr Thr Ala Val Val Met Pro Val His Tyr Gln His Gly Thr Gly Gln
    130                 135                 140
Ser Ser Cys Arg Arg Val Ala Leu Met Ile Thr Ala Val Trp Val Leu
145                 150                 155                 160
Ala Phe Ala Val Ser Cys Pro Leu Leu Phe Gly Phe Asn Thr Thr Gly
                165                 170                 175
Asp Pro Thr Val Cys Ser Ile Ser Asn Pro Asp Phe Val Ile Tyr Ser
            180                 185                 190
Ser Val Val Ser Phe Tyr Leu Pro Phe Gly Val Thr Val Leu Val Tyr
        195                 200                 205
Ala Arg Ile Tyr Val Val Leu Lys Gln Arg Arg Arg Lys Arg Ile Leu
    210                 215                 220
Thr Arg Gln Asn Ser Gln Cys Asn Ser Val Arg Pro Gly Phe Pro Gln
225                 230                 235                 240
Gln Thr Leu Ser Pro Asp Pro Ala His Leu Glu Leu Lys Arg Tyr Tyr
                245                 250                 255
Ser Ile Cys Gln Asp Thr Ala Leu Gly Gly Pro Gly Phe Gln Glu Arg
            260                 265                 270
Gly Gly Glu Leu Lys Arg Glu Glu Lys Thr Arg Asn Ser Leu Ser Pro
        275                 280                 285
Thr Ile Ala Pro Lys Leu Ser Leu Glu Val Arg Lys Leu Ser Asn Gly
    290                 295                 300
Arg Leu Ser Thr Ser Leu Lys Leu Gly Pro Leu Gln Pro Arg Gly Val
305                 310                 315                 320
Pro Leu Arg Glu Lys Lys Ala Thr Gln Met Val Ala Ile Val Leu Gly
                325                 330                 335
Ala Phe Ile Val Cys Trp Leu Pro Phe Phe Leu Thr His Val Leu Asn
            340                 345                 350
Thr His Cys Gln Thr Cys His Val Ser Pro Glu Leu Tyr Ser Ala Thr
        355                 360                 365
Thr Trp Leu Gly Tyr Val Asn Ser Ala Leu Asn Pro Val Ile Tyr Thr
    370                 375                 380
Thr Phe Asn Ile Glu Phe Arg Lys Ala Phe Leu Lys Ile Leu Ser Cys
385                 390                 395                 400
<210>3
<211>2893
<212>DNA
<213>人
<400>3
ggcaccagct cagccccaag ccactgctct cccatcccag tccctggaaa tccacccact    60
tggcccagct caccccaact ccaacccact gggacccagt ctccaggggc ctgactgtgg    120
gcggcagcca ctcctgagtg agcaaaggtt cctccgcggt gctctcccgt ccagagccct    180
gctgatgggg aagtccgaag gccccgtggg gatggtggag agcgctggcc gtgcagggca    240
gaagcgcccg gggttcctgg agggggggct gctgctgctg ctgctgctgg tgaccgctgc    300
cctggtggcc ttgggtgtcc tctacgccga ccgcagaggg aagcagctgc cacgccttgc    360
tagccggctg tgcttcttac aggaggagag gacctttgta aaacgaaaac cccgagggat    420
cccagaggcc caagaggtga gcgaggtctg caccacccct ggctgcgtga tagcagctgc    480
caggatcctc cagaacatgg acccgaccac ggaaccgtgt gacgacttct accagtttgc    540
atgcggaggc tggctgcggc gccacgtgat ccctgagacc aactcaagat acagcatctt    600
tgacgtcctc cgcgacgagc tggaggtcat cctcaaagcg gtgctggaga attcgactgc    660
caaggaccgg ccggctgtgg agaaggccag gacgctgtac cgctcctgca tgaaccagag    720
tgtgatagag aagcgaggct ctcagcccct gctggacatc ttggaggtgg tgggaggctg    780
gccggtggcg atggacaggt ggaacgagac cgtaggactc gagtgggagc tggagcggca    840
gctggcgctg atgaactcac agttcaacag gcgcgtcctc atcgacctct tcatctggaa    900
cgacgaccag aactccagcc ggcacatcat ctacatagac cagcccacct tgggcatgcc    960
ctcccgagag tactacttca acggcggcag caaccggaag gtgcgggaag cctacctgca    1020
gttcatggtg tcagtggcca cgttgctgcg ggaggatgca aacctgccca gggacagctg    1080
cctggtgcag gaggacatgg tgcaggtgct ggagctggag acacagctgg ccaaggccac    1140
ggtaccccag gaggagagac acgacgtcat cgccttgtac caccggatgg gactggagga    1200
gctgcaaagc cagtttggcc tgaagggatt taactggact ctgttcatac aaactgtgct    1260
atcctctgtc aaaatcaagc tgctgccaga tgaggaagtg gtggtctatg gcatccccta    1320
cctgcagaac cttgaaaaca tcatcgacac ctactcagcc aggaccatac agaactacct    1380
ggtctggcgc ctggtgctgg accgcattgg tagcctaagc cagagattca aggacacacg    1440
agtgaactac cgcaaggcgc tgtttggcac aatggtggag gaggtgcgct ggcgtgaatg    1500
tgtgggctac gtcaacagca acatggagaa cgccgtgggc tccctctacg tcagggaggc    1560
gttccctgga gacagcaaga gcatggtcag agaactcatt gacaaggtgc ggacagtgtt    1620
tgtggagacg ctggacgagc tgggctggat ggacgaggag tccaagaaga aggcgcagga    1680
gaaggccatg agcatccggg agcagatcgg gcaccctgac tacatcctgg aggagatgaa    1740
caggcgcctg gacgaggagt actccaatct gaacttctca gaggacctgt actttgagaa    1800
cagtctgcag aacctcaagg tgggcgccca gcggagcctc aggaagcttc gggaaaaggt    1860
ggacccaaat ctctggatca tcggggcggc ggtggtcaat gcgttctact ccccaaaccg    1920
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acaggccttg aactttggag gcattgggat ggtgatcggg cacgagatca cgcacggctt    2040
tgacgacaat ggccggaact tcgacaagaa tggcaacatg atggattggt ggagtaactt    2100
ctccacccag cacttccggg agcagtcaga gtgcatgatc taccagtacg gcaactactc    2160
ctgggacctg gcagacgaac agaacgtgaa cggattcaac acccttgggg aaaacattgc    2220
tgacaacgga ggggtgcggc aagcctataa ggcctacctc aagtggatgg cagagggtgg    2280
caaggaccag cagctgcccg gcctggatct cacccatgag cagctcttct tcatcaacta    2340
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ttgtcttcca gtatctacag cttcagactt gagctaagta aatgcttcaa agaaaaaaaa    2880
aaaaaaaaaa aaa                                                       2893
<210>4
<211>2975
<212>DNA
<213>人
<400>4
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gccctgctga tggggaagtc cgaaggcccc gtggggatgg tggagagcgc tggccgtgca    300
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ggctggccgg tggcgatgga caggtggaac gagaccgtag gactcgagtg ggagctggag    900
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<210>5
<211>779
<212>PRT
<213>人
<400>5
Met Gly Lys Ser Glu Gly Pro Val Gly Met Val Glu Ser Ala Gly Arg
 1               5                  10                  15
Ala Gly Gln Lys Arg Pro Gly Phe Leu Glu Gly Gly Leu Leu Leu Leu
            20                  25                  30
Leu Leu Leu Val Thr Ala Ala Leu Val Ala Leu Gly Val Leu Tyr Ala
        35                  40                  45
Asp Arg Arg Gly Lys Gln Leu Pro Arg Leu Ala Ser Arg Leu Cys Phe
    50                  55                  60
Leu Gln Glu Glu Arg Thr Phe Val Lys Arg Lys Pro Arg Gly Ile Pro
65                  70                  75                  80
Glu Ala Gln Glu Val Ser Glu Val Cys Thr Thr Pro Gly Cys Val Ile
                85                  90                  95
Ala Ala Ala Arg Ile Leu Gln Asn Met Asp Pro Thr Thr Glu Pro Cys
            100                 105                 110
Asp Asp Phe Tyr Gln Phe Ala Cys Gly Gly Trp Leu Arg Arg His Val
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    130                 135                 140
Glu Leu Glu Val Ile Leu Lys Ala Val Leu Glu Asn Ser Thr Ala Lys
145                 150                 155                 160
Asp Arg Pro Ala Val Glu Lys Ala Arg Thr Leu Tyr Arg Ser Cys Met
                165                 170                 175
Asn Gln Ser Val Ile Glu Lys Arg Gly Ser Gln Pro Leu Leu Asp Ile
            180                 185                 190
Leu Glu Val Val Gly Gly Trp Pro Val Ala Met Asp Arg Trp Asn Glu
        195                 200                 205
Thr Val Gly Leu Glu Trp Glu Leu Glu Arg Gln Leu Ala Leu Met Asn
    210                 215                 220
Ser Gln Phe Asn Arg Arg Val Leu Ile Asp Leu Phe Ile Trp Asn Asp
225                 230                 235                 240
Asp Gln Asn Ser Ser Arg His Ile Ile Tyr Ile Asp Gln Pro Thr Leu
                245                 250                 255
Gly Met Pro Ser Arg Glu Tyr Tyr Phe Asn Gly Gly Ser Asn Arg Lys
            260                 265                 270
Val Arg Glu Ala Tyr Leu Gln Phe Met Val Ser Val Ala Thr Leu Leu
        275                 280                 285
Arg Glu Asp Ala Asn Leu Pro Arg Asp Ser Cys Leu Val Gln Glu Asp
    290                 295                 300
Met Val Gln Val Leu Glu Leu Glu Thr Gln Leu Ala Lys Ala Thr Val
305                 310                 315                 320
Pro Gln Glu Glu Arg His Asp Val Ile Ala Leu Tyr His Arg Met Gly
                325                 330                 335
Leu Glu Glu Leu Gln Ser Gln Phe Gly Leu Lys Gly Phe Asn Trp Thr
            340                 345                 350
Leu Phe Ile Gln Thr Val Leu Ser Ser Val Lys Ile Lys Leu Leu Pro
        355                 360                 365
Asp Glu Glu Val Val Val Tyr Gly Ile Pro Tyr Leu Gln Asn Leu Glu
    370                 375                 380
Asn Ile Ile Asp Thr Tyr Ser Ala Arg Thr Ile Gln Asn Tyr Leu Val
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Trp Arg Leu Val Leu Asp Arg Ile Gly Ser Leu Ser Gln Arg Phe Lys
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Asp Thr Arg Val Asn Tyr Arg Lys Ala Leu Phe Gly Thr Met Val Glu
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Iys Ser Met Val Arg Glu Leu Ile Asp Lys Val Arg Thr Val Phe Val
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Glu Thr Leu Asp Glu Leu Gly Trp Met Asp Glu Glu Ser Lys Lys Lys
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Ala Gln Glu Lys Ala Met Ser Ile Arg Glu Gln Ile Gly His Pro Asp
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Tyr Ile Leu Glu Glu Met Asn Arg Arg Leu Asp Glu Glu Tyr Ser Asn
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    530                 535                 540
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Phe Phe Ser Lys Glu Gln Pro Gln Ala Leu Asn Phe Gly Gly Ile Gly
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    610                 615                 620
Asn Phe Asp Lys Asn Gly Asn Met Met Asp Trp Trp Ser Asn Phe Ser
625                 630                 635                 640
Thr Gln His Phe Arg Glu Gln Ser Glu Cys Met Ile Tyr Gln Tyr Gly
                645                 650                 655
Asn Tyr Ser Trp Asp Leu Ala Asp Glu Gln Asn Val Asn Gly Phe Asn
            660                 665                 670
Thr Leu Gly Glu Asn Ile Ala Asp Asn Gly Gly Val Arg Gln Ala Tyr
        675                 680                 685
Lys Ala Tyr Leu Lys Trp Met Ala Glu Gly Gly Lys Asp Gln Gln Leu
    690                 695                 700
Pro Gly Leu Asp Leu Thr His Glu Gln Leu Phe Phe Ile Asn Tyr Ala
705                 710                 715                 720
Gln Val Trp Cys Gly Ser Tyr Arg Pro Glu Phe Ala Ile Gln Ser Ile
                725                 730                 735
Lys Thr Asp Val His Ser Pro Leu Lys Tyr Arg Val Leu Gly Ser Leu
            740                 745                 750
Gln Asn Leu Ala Ala Phe Ala Asp Thr Phe His Cys Ala Arg Gly Thr
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Pro Met His Pro Lys Glu Arg Cys Arg Val Trp
    770                 775