一种治疗肝炎的中药制剂及其制备检测方法.pdf

本发明公开了一种新的治疗肝炎的中药制剂及其制备方法，它是以黄芩苷、金银花提取物、栀子提取物、茵陈提取物为原料，以不同的物理或化学方法处理后制备而成的固体剂型。本发明配方独特，临床上用于治疗肝炎效果显著。

1、  一种治疗肝炎的中药固体制剂，其特征在于其是由下述原料制成的：
黄芩甙40-90重量份       金银花提取物(以绿原酸计)6-20重量份
栀子提取物5-15重量份    茵陈提取物12-30重量份。

2、  如权利要求1所述的制剂，其特征在于其有效成分主要由下述原料组成：
黄芩甙66.7重量份        金银花提取物(以绿原酸计)13.3重量份
栀子提取物10.7重量份    茵陈提取物20重量份。

3、  如权利要求1、2所述的制剂，其特征在于其剂型为片剂、颗粒、胶囊、滴丸、丸剂。

4、  如权利要求3所述的制剂，其特征在于其剂型为颗粒剂。

5、  如权利要求3所述的固形物，其特征在于每克颗粒中含有：黄芩甙10-200mg。

6、  如权利要求3所述的固形物，其特征在于每克颗粒中含有：绿原酸4-25mg。

7、  如权利要求3所述的固形物，其特征在于每克颗粒中含有：栀子苷0.5-5mg。

8、  如权利要求4所述的制剂，其特征在于有效成分测定方法为：
(1)黄芩甙的测定方法：
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充材料
以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸为流动相
检测波长280nm
对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的黄芩苷约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.5g精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇35ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微空滤膜(0.45μm)，滤过，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl；
(2)绿原酸的测定方法：
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以比例为10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相
检测波长为327nm
对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.5g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇50ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量。用50％的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液适量加入棕色量瓶即得供试样品溶液；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，
测定，即得；
(3)栀子苷的测定方法：
色谱条件  十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
以比例为10∶90的乙腈-0.05％三氟乙酸水为流动相；
检测波长为239nm
对照品溶液的制备  精密称取于60℃干燥至恒重的栀子苷对照品适量，用流动相制成每1ml含1.0mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约3g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇20ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，蒸干，用流动相溶解，置2ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算，即得。

9、  如权利要求4所述的颗粒剂，其特征在于该颗粒剂的制备方法为：
本发明颗粒的制备方法：将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，加入蔗糖粉与糊精或乳糖适量，混匀，加乙醇适量，制粒，干燥，即得；
金银花提取物的制备方法：取金银花，用30％乙醇回流二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药2g，加乙醇使含含醇量达75％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药4g，加水至8倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，真空干燥，即得；
栀子提取物的制备方法：取栀子，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一、二次1小时，第三次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药1g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，再加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含水量生药5g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，真空干燥，即得；
黄芩苷的制备方法：黄芩碎断，加水煎煮二次，每次1小时，合并滤液，滤液用盐酸(2mol/L)调PH值至1.0-2.0，在80℃保温30min，静置24h，滤过，沉淀加8倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，并加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸(2mol/L)调PH至2.0，60℃保温30min，静置12h，滤过，沉淀用乙醇洗至PH至4.0，加10倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调PH至6.0，加入0.5％活性炭，充分搅拌，50℃保温30min，加入1倍量乙醇搅拌均匀，立即过滤，滤液用盐酸(2mol/L)调PH至2.0，60℃保温30min，静置12h，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后，于60℃以下干燥，即得。

一种治疗肝炎的中药制剂及其制备检测方法
技术领域
本发明涉及一种治疗肝炎的中药制剂，具体地说是以中药材为原料，制备而成的中成药，同时涉及该药物的制备方法。
背景技术
肝炎是一种世界性的常见病，我国属流行“重灾区”，各种类型肝炎严重威胁着国人的健康。西方国家以丙型肝炎为最多，我国主要流行乙型肝炎。据预测我国表面抗原阳性者即感染乙型肝炎者有1亿人以上，而由乙型肝炎引起的肝功能不正常患者约有3000万人。此外，慢性病毒性肝炎还与原发性肝癌的发生有密切关系，绝大部分肝癌病人有慢性肝炎病史。因此慢性肝炎的治疗已成为一个迫切需要解决的重大问题。目前国内外用于慢性肝炎治疗的药物品种甚多，归纳起来，西药大体可分为两类：
(1)抗病毒药
抗病毒药主要有干扰素和几种核苷类似物。干扰素对乙型和丙型肝炎的治疗有效率约为30％～50％，对丙型肝炎的治疗效果比对乙型肝炎稍好。但是在停药后约6个月至1年内大部分病人会复发。而且药费相当昂贵，一个病人用进口干扰素需人民币数万元，用国产干扰素亦在1万元以上。干扰素需要肌肉注射，部分病人用药后有流感样症状的副反应。某些核苷类似物如拉米夫定(lamivudin)、法昔洛韦(famciclovir)对肝炎病毒有一定治疗效果，但亦存在停药后很快反跳即复发现象。药品价格亦较昂贵，部分病人病毒有变异，更难治疗，且有副反应。
(2)免疫调节药
免疫调节药有转移因子、白细胞介素2、胸腺肽、皮质激素等。这类药物治疗慢性肝炎的病例不多，疗效尚待肯定，药费较昂贵，且有副反应。
中药制剂在治疗肝炎中应该起着重要作用，有广阔天地。
发明内容
本发明的目的是是提供一种有效治疗肝炎的中药制剂，本发明的另一个目的提供该中药制剂的制备检测方法。
为达到上述目的，我们采用了以下的技术方案：
本发明制剂由下述原料制成：
黄芩甙40-90重量份     金银花提取物(以绿原酸计)6-20重量份
栀子提取物5-15重量份  茵陈提取物12-30重量份。
制成本发明制剂的原料最佳比例为：
黄芩甙66.7重量份      金银花提取物(以绿原酸计)13.3重量份
栀子提取物10.7重量份  茵陈提取物20重量份。
本发明制剂可加入适当辅料制成临床所能接受的一切固体制剂型如：颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、滴丸等，优选为颗粒剂。
本发明颗粒剂中主要有效成分含量为：
每克颗粒中含有：黄芩甙10-200mg，
每克颗粒中含有：绿原酸4-25mg
每克颗粒中含有：栀子苷0.5-5mg。
上述有效成分在本发明颗粒中的测定方法为：
(1)黄芩甙的测定方法：
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充材料
以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸为流动相
检测波长280nm
对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的黄芩苷约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.5g精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇35ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微空滤膜(0.45μm)，滤过，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl；
(2)绿原酸的测定方法：
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以比例为10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相
检测波长为327nm
对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.5g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇50ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量。用50％的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液适量加入棕色量瓶即得供试样品溶液；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(3)栀子苷的测定方法：
色谱条件  十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
以比例为10∶90的乙腈-0.05％三氟乙酸水为流动相；
检测波长为239nm
对照品溶液的制备  精密称取于60℃干燥至恒重的栀子苷对照品适量，用流动相制成每1ml含1.0mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约3g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇20ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，蒸干，用流动相溶解，置2ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算，即得。
本发明颗粒剂的制备方法为：
本发明颗粒的制备方法：将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，加入蔗糖粉与糊精或乳糖适量，混匀，加乙醇适量，制粒，干燥，即得；
金银花提取物的制备方法：取金银花，用30％乙醇回流二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药2g，加乙醇使含含醇量达75％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药4g，加水至8倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，真空干燥，即得；
栀子提取物的制备方法：取栀子，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一、二次1小时，第三次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药1g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，再加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含水量生药5g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，真空干燥，即得；
黄芩苷的制备方法：黄芩碎断，加水煎煮二次，每次1小时，合并滤液，滤液用盐酸(2mol/L)调PH值至1.0-2.0，在80℃保温30min，静置24h，滤过，沉淀加8倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，并加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸(2mol/L)调PH至2.0，60℃保温30min，静置12h，滤过，沉淀用乙醇洗至PH至4.0，加10倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调PH至6.0，加入0.5％活性炭，充分搅拌，50℃保温30min，加入1倍量乙醇搅拌均匀，立即过滤，滤液用盐酸(2mol/L)调PH至2.0，60℃保温30min，静置12h，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后，于60℃以下干燥，即得。
本发明药物治疗肝炎，具有很好的疗效。为表明本发明药物对肝炎的治疗作用，我们做了大量的实验研究，下面实验例用于进一步说明本发明。
本发明制剂保肝退黄的药效学研究
摘要  给予小鼠本发明制剂1.8g/kg、3.6g/kg ig，对D-氨基半乳糖造成的急性肝损伤具有明显的保护作用；给予大鼠1.5g/kg、3.0g/kgig，对四氯化碳所致急性肝损伤亦表现出明显的降酶保肝作用；另外本品对异硫氰酸-1-奈脂所致的小鼠血清胆红素具有明显的降低作用。
试验材料
1试验药品：
本发明制剂，山东鲁南制药厂提供。系中药复方制剂，实验时由水配成所需浓度。强力宁，江苏启东市制药厂
2试验动物：昆明种小鼠、Wistar大鼠均由山东医科大学医学实验动物中心提供。
3主要试剂：
D-氨基半乳糖(D-GalN)，美国Sigma公司产品，北京化学试剂公司供应。四氯化碳，北京化工总厂产品。
异硫氰酸-1-奈脂，北京通县育才精细化工厂产品。
谷草转氨酶(AST)，谷丙转氨酶(ALT)试剂盒，卫生部上海生物制品研究所提供。
胆红素测定药盒，上海荣盛生物技术有限公司提供。
试验方法与结果
1.对D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝损伤的保护作用(1)
选18-20g小鼠66只，雌雄各半。按性别体重随机分为五组，正常对照组10只，其余每组各14只，分别为正常对照组(正常饲养)、模型对照组(5％淀粉0.2ml/10g)、本发明颗粒小剂量组(9％的水悬液0.2ml/10g，1.8g/kg)、大剂量组(18％的水悬液0.2ml/10g，3.6g/kg)，强力宁组(取6ml加水致15ml，0.15ml/10g，相当于3.6g/kg)。给药方式均为灌胃，连续给药3天，每天1次。除正常对照组外于禁食4h，末次给药后2h，给予8％的D-氨基半乳糖0.1ml/10g.ip，相当于800mg/kg。注射后2h再给予食物。于给予D-氨基半乳糖24h，禁食8h后，摘除各小鼠右眼球取血，3000r/min，离心分离血清，按试剂盒说明书要求赖氏比色法进行各标本AST，ALT测定和标准曲线绘制。由t检验进行组间统计比较。
结果如表1：
       表1  本发明制剂对D-氨基半乳糖小鼠肝损伤的保护作用
组别          ALT            P          AST             P
              (nmol/s.L)                (nmol/s.L)
正常对照组    176.17±14.51             159.93±36.49
模型对照组    432.09±27.54  ＜0.001    408.39          ±＜0.001
                                        175.14
本发明1.8g/kg 367.96±39.37  ＜0.001    239.56          ±＜0.05
                                        130.39
本发明3.6g/kg 336.65±75.91  ＜0.001    224.81          ±＜0.01
                                        146.16
阳性对照组    382.06+42.06   ＜0.01     256.09±129.7   ＜0.05
注：模型组与正常对照组相比较，用药组与模型组比较
实验结果说明本发明制剂对D-氨基半乳糖所引起的小鼠血清AST，ALT的升高有明显的降低作用，其作用较阳性对照一定程度地增强。
小鼠取血后，解剖取小鼠肝脏，用10％的甲醛固定24h后进行病理学检查。大体检查：正常对照组，颜色褐红，质中等硬度；模型对照组，表面颜色暗红，深褐色，质较软。阳性药组和本发明制剂大、小剂量组颜色、质地介于两对照组之间。
镜检：与正常对照组相比，模型对照组的病变主要表现为肝小叶结构模糊，血窦扩张充血，肝细胞呈颗粒变性，嗜酸性变性及坏死。坏死区周围及汇管区有炎细胞浸润，各用药组有类似形态学表现，但病变程度较轻，为便于比较，以变性坏死及炎细胞浸润为主要形态学指标，半定量观察列于下表，并用等级序值法计算各组的等级指数，以模型对照组为参照系(等级指数为0)进行组间差异的显著性检验。
          表2本发明制剂对D-GalN急性小鼠肝损伤的形态学影响
变性坏死 炎细胞浸润
              n    -  +   ++  +++ M        -  +  ++  +++  M
正常组        10   7   3  0   0   10.33^** 6  4  0   0    12.4^**
模型组        14   1   1  8   4            0  4  8   2
口服液        14   2   6  5   1   6.57     2  8  2   2    5.71
本发明大剂量  14   3   5  4   2   5.88     3  7  3   1    6.71
本发明小剂量  14   3   6  5   0   7.50^*   3  6  3   1    5.14
与模型对照组相比  ^*P＜0.05  ^**P＜0.01(因为部分小鼠血清分离不良，未做生化测定，只做病理检查，故动物数多于生化检查数)
附：半定量标准
(1)变性坏死：
“-”  正常
“+”  病变范围＜全小叶的1/5
“++” 病变范围＜全小叶的1/2
“+++”病变范围＞全小叶的1/2
(2)炎细胞浸润：
“-”  正常
“+”  炎细胞散在，少见
“++” 炎细胞在某一局部聚集成群
“+++”炎细胞弥漫分布
病理组织学检查印象：与正常对照组相比模型对照组出现以肝细胞弥漫性变性、坏死、炎细胞浸润为特点的急性肝损伤表现。与模型组相比，各用药组病变相对较轻，其中大剂量组差异有显著意义。
(组织学照片见后，所有照片物镜放大倍数均为20×
2.对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用：
选180-200g大鼠50只，雌雄各半，随机分为正常对照组、模型组(20％淀粉1ml/100gig)、本发明制剂大剂量组(20％的本发明制剂悬液1ml/100g，2g/kgig)、小剂量组(10％的本发明制剂悬液1ml/100g，1g/kgig)、阳性对照组(强力宁)。除正常对照组外，各组大鼠连续给药三天，于禁食5.5h，末次给药2h后分别给予25％CCl4花生油溶液0.2ml/100g ip。给予四氯化碳后大鼠进食。于给予四氯化碳24小时禁食12h后，颈静脉取各大鼠血，3000r/min离心10min分离血清，按ALT，AST测定说明书，进行血清ALT，AST活性测定，结果如表3：
        表3本发明制剂对四氯化碳大鼠急性肝损伤地影响
组别        n   AST(nmol/s.L)     P        ALT(nmol/s.L)  P
正常对照组  10  201.53±31.45              169.8±25.76
模型对照组  10  399.59±42.44     ＜0.001  392.0±84.24   ＜0.001
高剂量      10  342.23±58.68     ＜0.05   316.56±44.36  ＜0.01
低剂量      10  363.43±38.82     ＜0.05   335.6±32.93   ＜0.05
阳性对照    10  352.23±58.68     ＜0.05   331.91±29.49  ＜0.05
注：模型组与正常组比，其他组均与模型组比较
大鼠取血后剖腹，取肝脏用10％的甲醛固定，进行病理学检查。结果：
正常对照组色褐红，边缘锐利，切面较细腻。模型对照组与之相比颜色略灰黄，体积较饱满，边缘钝，有颗粒感，其余各用药组颜色质地介于两者之间。
镜检：与正常对照组对比，模型组肝细胞普遍肿胀，肝窦变窄，中央静脉周围肝细胞病变最重，表现为空泡变性，圆形细胞浸润及肝细胞坏死，用药组有类似病变但程度较轻。为便于比较，以肝细胞变性坏死为主要形态学指标，半定量观察见附表。并用等级序值法计算各组的等级指数(M)，以模型对照组为参照系(M＝0)进行组间差异的显著性比较。见表4。(组织学照片见后，所有照看物镜放大倍数均为20×)
     表4本发明制剂对大鼠四氯化碳肝损伤的形态学影响
   变性坏死程度  
             n    -   +   ++   +++   M    T     P
正常对照     10   8   2   0    0    9.8   4.1   ＜0.05
模型对照     10   0   1   3    6
阳性对照     9    1   1   4    3    3.56  1.34  ＞0.05
本发明大剂量 9    0   3   6    1    5.89  2.22  ＜0.05
本发明小剂量 9    1   1   4    4    2.56 0.96   ＞0.05
附：半定量评价标准
“-”  正常
“+”  病变散在发生，程度较轻
“++” 病变在中央静脉周围聚集，范围＜1/4肝小叶
“+++”病变加重，范围扩大，超过1/4肝小叶
由表4可见，各用药组M值都是下值，说明其形态学指标均好于模型对照组，其中大剂量组作用最为显著。
3.对异硫氰酸-1-奈脂化小鼠血清胆红素含量的影响
24-28g小鼠，雌雄兼用，分组给药同1，连续给药3天，禁食4h，末次给药后1h，给予0.3％异硫氰酸-1-奈脂花生油溶液，0.2ml/10g ig，合60mg/kg。给予异硫氰酸-1-奈脂4h后，小鼠再次给食，24h后再次给药，给予异硫氰酸-1-奈脂第三天，禁食5h，给药后3h各鼠摘右眼球取血3000r/min，离心10分钟，分离血清，按试剂盒说明书要求，进行总胆红素和结合胆红素测定，测定波长为600nm。结果由t检验进行组间显著性差异比较，如表5：
     表5对异硫氰酸化小鼠血清总胆红素，结合胆红素含量的影响
                            总胆红素              结合胆红
组别           剂量    n    (nmol/L)     P        素(nmol/L)  P
正常对照组     --      12   1.88±3.99            2.15±1.53
模型对照组     --      12   40.95±17.92 ＜0.001  9.73±5.37  ＜0.001
本发明小剂量组 1.8g/kg 12   14.55±9.94  ＜0.001  4.19±1.39  ＜0.001
本发明大剂量组  3.6/kg    12  10.41±5.46  ＜0.01   3.47±2.28   ＜0.001
阳性对照组      1.5ml/kg  12  18.73±3.7   ＜0.001  5.47±1.48   ＜0.01
注  模型组与正常对照组相比，其它组与模型对照组相比
小结
由药效学试验可知本发明制剂对D-氨基半乳糖，四氯化碳引起的大小鼠急性肝损伤都有明显的保护作用，不仅明显降低血清ALT和AST，而且对肝组织也有明显的保护作用，减轻肝脏损伤程度，对异硫氰酸而致小鼠血清高胆红素有明显的降低作用，证实本品有明显的降酶退黄保肝作用，这些作用与其主治功效是符合的。
下述实施例为进一步公开本发明，需要说明的是这些实施例仅为本发明的优选方式，并不限制本发明要求保护的范围。
实施例1
黄芩甙66.7重量份        金银花提取物(以绿原酸计)13.3重量份
栀子提取物10.7重量份    茵陈提取物20重量份
将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，加入蔗糖粉与糊精适量，混匀，加乙醇适量，制粒，干燥，即得。
含量测定：
(1)黄芩甙的测定方法：
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充材料
以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸为流动相
检测波长280nm
对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的黄芩苷约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.5g精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇35ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微空滤膜(0.45μm)，滤过，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl；
(2)绿原酸的测定方法：
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以比例为10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相
检测波长为327nm
对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.5g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇50ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量。用50％的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液适量加入棕色量瓶即得供试样品溶液；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(3)栀子苷的测定方法：
色谱条件  十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
以比例为10∶90的乙腈-0.05％三氟乙酸水为流动相；
检测波长为239nm
对照品溶液的制备  精密称取于60℃干燥至恒重的栀子苷对照品适量，用流动相制成每1ml含1.0mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约3g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇20ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，蒸干，用流动相溶解，置2ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算，即得。
结果：每克颗粒中含有：黄芩甙60mg，含有：绿原酸13.3mg，含有：栀子苷1.4mg。
实施例2
黄芩甙40重量份        金银花提取物(以绿原酸计)20重量份
栀子提取物15重量份    茵陈提取物30重量份。
将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，加入蔗糖粉与糊精适量，混匀，加乙醇适量，制粒，干燥，即得；
含量测定：
(1)黄芩甙的测定方法：
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充材料
以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸为流动相
检测波长280nm
对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的黄芩苷约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.5g精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇35ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微空滤膜(0.45μm)，滤过，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl；
(2)绿原酸的测定方法：
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以比例为10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相
检测波长为327nm
对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.5g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇50ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量。用50％的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液适量加入棕色量瓶即得供试样品溶液；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，
测定，即得；
(3)栀子苷的测定方法：
色谱条件  十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
以比例为10∶90的乙腈-0.05％三氟乙酸水为流动相；
检测波长为239nm
对照品溶液的制备  精密称取于60℃干燥至恒重的栀子苷对照品适量，用流动相制成每1ml含1.0mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备  取本品，研细，取约3g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇20ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，蒸干，用流动相溶解，置2ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算，即得
结果：每克颗粒中含有：黄芩甙10mg，含有：绿原酸25mg，含有：栀子苷0.5mg。
实施例3
黄芩甙90重量份        金银花提取物(以绿原酸计)6重量份
栀子提取物15重量份    茵陈提取物30重量份。
将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，加入乳糖、甜味剂适量，混匀，干法制粒，包装，即得；
含量测定方法同上：
测定结果：每克颗粒中含有：黄芩甙200mg，含有：绿原酸4mg，含有：栀子苷5mg。
实施例4
黄芩甙90重量份       金银花提取物(以绿原酸计)20重量份
栀子提取物5重量份    茵陈提取物30重量份。
将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，加入糊精味剂适量，用70％的乙醇制软材，制粒，干燥，压片，即得；
含量测定方法同上：
测定结果：每克颗粒中含有：黄芩甙100mg，含有：绿原酸25mg，含有：栀子苷0.5mg。
实施例5
黄芩甙90重量份        金银花提取物(以绿原酸计)20重量份
栀子提取物15重量份    茵陈提取物12重量份。
将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，加入糊精味剂适量，用70％的乙醇制软材，制粒，干燥，装胶囊，即得；
含量测定：
(1)黄芩甙的测定方法：
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充材料
以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸为流动相
检测波长280nm
对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的黄芩苷约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品内容物，研细，取约0.5g精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇35ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微空滤膜(0.45μm)，滤过，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl；
(2)绿原酸的测定方法：
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以比例为10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相
检测波长为327nm
对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备  取本品内容物，研细，取约0.5g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇50ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量。用50％的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液适量加入棕色量瓶即得供试样品溶液；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，
测定，即得；
(3)栀子苷的测定方法：
色谱条件  十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
以比例为10∶90的乙腈-0.05％三氟乙酸水为流动相；
检测波长为239nm
对照品溶液的制备  精密称取于60℃干燥至恒重的栀子苷对照品适量，用流动相制成每1ml含1.0mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备  取本品内容物，研细，取约3g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇20ml，在热水中加热20分钟，时时振摇，超声处理20分钟，放冷至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，蒸干，用流动相溶解，置2ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算，即得
测定结果：每克颗粒中含有：黄芩甙150mg，含有：绿原酸25mg，含有：栀子苷5mg。
实施例6
黄芩甙66.7重量份        金银花提取物(以绿原酸计)13.3重量份
栀子提取物10.7重量份    茵陈提取物20重量份。
将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，混匀，另取聚乙二醇加热熔融，加入药粉，滴制成丸，包装，即得滴丸剂。
含量测定方法：同实施例1。
测定结果：每克颗粒中含有：黄芩甙20mg，含有：绿原酸4mg，含有：栀子苷0.5mg。
实施例7
黄芩甙66.7重量份       金银花提取物(以绿原酸计)13.3重量份
栀子提取物10.7重量份   茵陈提取物20重量份。
将以金银花提取物、栀子提取物、黄芩苷、茵陈提取物粉碎，混匀，另取糊精适量，加入药粉，混匀，泛制成丸，包装，即得丸剂。
含量测定方法：同实施例1。
测定结果：每克颗粒中含有：黄芩甙40mg，含有：绿原酸8mg，含有：栀子苷2mg。
金银花提取物的制备方法：取金银花，用30％乙醇回流二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药2g，加乙醇使含含醇量达75％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药4g，加水至倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，真空干燥，即得；
栀子提取物的制备方法：取栀子，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一、二次1小时，第三次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药1g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，再加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含水量生药5g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，真空干燥，即得；
黄芩苷的制备方法：黄芩碎断，加水煎煮二次，每次1小时，合并滤液，滤液用盐酸(2mol/L)调PH值至1.0-2.0，在80℃保温30min，静置24h，滤过，沉淀加8倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，并加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸(2mol/L)调PH至2.0，60℃保温30min，静置12h，滤过，沉淀用乙醇洗至PH至4.0，加10倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调PH至6.0，加入0.5％活性炭，充分搅拌，50℃保温30min，加入1倍量乙醇搅拌均匀，立即过滤，滤液用盐酸(2mol/L)调PH至2.0，60℃保温30min，静置12h，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后，于60℃以下干燥，即得。