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1、(10)申请公布号 CN 103459032 A(43)申请公布日 2013.12.18CN103459032A*CN103459032A*(21)申请号 201180070166.5(22)申请日 2011.12.0111154707.1 2011.02.16 EPB01J 39/04(2006.01)B01J 39/16(2006.01)B01D 11/04(2006.01)C07C 227/40(2006.01)C13B 20/14(2006.01)C02F 1/42(2006.01)(71)申请人赢创德固赛有限公司地址德国埃森(72)发明人 F.埃尔哈特 T.哈斯 M.鲁斯D.德米科利。
2、 M.皮特 A.舒贝尔特J.C.普费弗 T.塔克 H.黑格A.普芬尼希M-D.普日比尔斯基-弗罗伊恩德(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公司 72001代理人石克虎 林森(54) 发明名称液体阳离子交换剂(57) 摘要本申请涉及从水溶液中除去具有一个或多个正电荷的有机化合物的方法,包括步骤a)提供包含有机化合物的水溶液和包含液体阳离子交换剂的疏水性有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂是疏水性的,且其中所述液体阳离子交换剂具有一个或多个负电荷和负的总电荷,b)使所述水溶液和所述有机溶液接触,和c)从所述水溶液中分离出所述有机溶液。(30)优先权数据(85)PCT申请进入国家阶段日2013。
3、.10.16(86)PCT申请的申请数据PCT/EP2011/071494 2011.12.01(87)PCT申请的公布数据WO2012/110126 DE 2012.08.23(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书16页 附图8页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书16页 附图8页(10)申请公布号 CN 103459032 ACN 103459032 A1/1页21.从水溶液中除去具有一个或多个正电荷的有机化合物的方法,包括步骤a) 提供含有所述有机化合物的水溶液和包含液体阳离子交换剂的疏水性有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂是疏水性的,b)。
4、 使所述水溶液和所述有机溶液接触,和c) 从所述水溶液中分离出所述有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂是脂肪酸,且其中所述有机化合物具有至少两个氨基并且没有带负电的官能团。2.根据权利要求1的方法,其中步骤b)中的温度为28至70,优选30至37。3.根据权利要求1至2之一的方法,其中步骤b)中的pH-值为6至8,优选6.2至7.2。4.根据权利要求1至3之一的方法,其中所述有机化合物是式H2N-(CH2)x-NH2的化合物,且x为1至20,优选6至10。5.根据权利要求1至4之一的方法,其中所述有机二胺是具有至少两个氨基的环状糖,优选是二氨基异艾杜糖醇和二氨基异山梨醇。6.根据权利要求1至5之。
5、一的方法,其中液体阳离子交换剂与有机化合物的物质的量的比为至少1。7.根据权利要求1至6之一的方法,其中有机溶液与水溶液的体积比为1:10至10:1。8.根据权利要求1至7之一的方法,其中所述液体阳离子交换剂是具有多于12个,优选具有14至22个,还更优选16至18个碳原子的脂肪酸。9.根据权利要求1至8之一的方法,其中所述液体阳离子交换剂是不饱和脂肪酸,优选油酸或芥酸。10.根据权利要求1至9之一的方法,其中所述水溶液此外包含具有催化活性的生物制剂。11.根据权利要求10的方法,其中所述生物制剂是细胞,优选细菌细胞。12.根据权利要求10至11之一的方法,其中所述有机化合物是对所述细胞有毒的。
6、有机化合物。13.根据权利要求1至12之一的方法,其中所述有机溶液此外包含至少一种有机溶剂,优选脂肪酸和/或脂肪酸酯。14.包含水溶液和疏水性有机溶液的反应混合物,其中所述疏水性有机溶液包含脂肪酸,更优选包含具有多于12个或14至22个或16至18个碳原子的脂肪酸,还更优选包含不饱和脂肪酸作为液体阳离子交换剂,且其中所述水溶液包含具有至少两个氨基并且没有带负电的官能团的有机化合物。15.根据权利要求14的反应混合物,其中所述水溶液此外包含具有至少一种催化活性的完整细胞,优选细菌细胞,更优选是大肠杆菌。16.根据权利要求14至15之一的反应混合物,其中所述有机化合物是式H2N-(CH2)x-NH。
7、2的化合物,且x为1至20,优选6至10。17.根据权利要求14至15之一的反应混合物,其中所述有机二胺是具有至少两个氨基的环状糖,优选是二氨基异艾杜糖醇和二氨基异山梨醇。权 利 要 求 书CN 103459032 A1/16页3液体阳离子交换剂0001 本申请涉及从水溶液中除去具有一个或多个正电荷的有机化合物的方法,其包含步骤a) 提供含有有机化合物的水溶液和包含液体阳离子交换剂的疏水性有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂是疏水性的且其中所述液体阳离子交换剂具有一个或多个负电荷和负的总电荷,b) 使所述水溶液与所述有机溶液接触,和c) 从所述水溶液中分离出所述有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂。
8、是脂肪酸,且其中所述有机化合物具有至少两个氨基并且没有带负电的官能团,以及涉及相应的反应混合物。0002 由再生原料出发以生物技术生产精细化学品(其传统上由化石燃料合成)时的根本问题在于将最初获得的通常为存在于大体积水相中的产物转移到有机相中。进行这种转移一方面由此以浓缩制成的中间体或最终产物和任选以使得在随后的反应步骤中的合成加工能够在有机溶液中进行,另一方面以通过去除所需产物改进水相中的反应收率或使该反应能够完全在工业上有意义的范围内进行。从大体积的水溶液中直接热浓缩通常以低浓度存在的产物通常是不合适的。0003 化合物在包含不混溶的亲水性水相和疏水性有机相的两相体系中的分配决定性地取决于。
9、各化合物的物理化学性质。具有高比例的未取代烃或仅由未取代烃构成的化合物主要富集在疏水相中,而具有高比例极性基团,如含杂原子的官能团的化合物,且非常特别是带电荷的化合物主要或几乎仅存在于水相中,这使得转移到有机相中变得困难。0004 通常借助分配系数,例如根据能斯特方程 = c 相1/c相2,描述在达到平衡后化合物在所述两相体系中的分配。一种具体的分配系数是Kow,也称作P-值,其表征化合物在辛醇相与水相之间的分配平衡:Kow= P = c辛醇/C水。0005 工业上非常需要的带正电荷的有机化合物的一个实例是12-氨基月桂酸(ALS)及其衍生物,特别是甲酯(ALSME)。ALS是聚合物生产中的重。
10、要原材料,例如用于生产管道系统和尼龙。传统上,ALS由化石原材料开始以具有低收率的工艺经由十二内酰胺来制备,其通过三聚化丁二烯、随后氢化形成环十二烷、随后氧化成环十二酮、与羟基月桂酸甘油酯(Hydroxylaurin)反应并随后进行贝克曼重排来合成。在DE10200710060705中描述了ALS或ALSME的一种有前途的生物技术生产途径。0006 现有技术教导了通过使包含生物制剂的水性反应混合物与包含有机溶剂的有机相接触获得带正电荷的有机化合物。因此,例如,DE10200710060705描述了通过用乙酸乙酯摇振从水性反应混合物中获得产物ALSME。Asano等人(2008)公开了用甲苯从包。
11、含ALS合成酶的水性反应溶液中萃取ALS。0007 本发明的目的因此是开发从水性反应混合物中除去具有至少一个正电荷的带正电的有机化合物的方法,其中期望的是尽可能有利的反应混合物和用作萃取剂的疏水性有机相之间分配平衡的位置,即该分配平衡应尽可能远地位于疏水性有机相侧。0008 本发明的另一目的是开发使用疏水性有机相作为萃取剂从包含生物制剂的水溶液中除去具有至少一个正电荷的有机化合物的方法,其中分配平衡尽可能远地位于疏水性说 明 书CN 103459032 A2/16页4有机相侧。0009 本发明的另一目的是开发使用疏水性有机溶液作为萃取剂从水溶液中除去具有至少一个正电荷的有机化合物的方法,其尽可。
12、能少地不利影响和/或减慢生物技术相关的微生物,特别是大肠杆菌的生长和/或因此尽可能少地减少可分化和/或可存活的和/或呼吸活性细胞的数量。0010 最后,本发明的目的是找到使用疏水性有机相作为萃取剂从包含生物制剂的水溶液中除去具有至少一个正电荷的有机化合物的方法,其中考虑到总收率或更快的进程或在连续工艺的情况下,尽可能长的生物制剂可用性,整体优化对于基于生物技术的合成方法的收率、总转化率和快速可完成性而言决定性的性质,特别是有机相对生物制剂的毒性和该化合物在有机萃取剂中的吸收,特别是对于所述具有至少一个正电荷的有机化合物是在生物制剂的催化活性参与下合成的该合成方法的产物或中间体的情况而言。001。
13、1 通过本申请的主题,和特别是也通过所附独立权利要求的主题实现这些和其它目的,其中由从属权利要求得到实施方案。0012 第一方面通过从水溶液中除去具有一个或多个正电荷的有机化合物的方法解决作为本发明的基础的问题,所述方法包括下列步骤a) 提供含有有机化合物的水溶液和包含液体阳离子交换剂的疏水性有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂是疏水性的,b) 使所述水溶液和所述有机溶液接触,和c) 从所述水溶液中分离出所述有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂是脂肪酸,且其中所述有机化合物具有至少两个氨基并且没有带负电的官能团。0013 在本发明的第一方面的第一实施方案中,步骤b)中的温度为28至70,优选30至。
14、37。0014 在本发明的第一方面的第二实施方案(其也是本发明的第一实施方案的一个实施方案)中,步骤b)中的pH-值为6至8,优选6.2至7.2。0015 在本发明的第一方面的第三实施方案(其也是本发明的第一至第二实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述有机化合物是式H2N-(CH2)x-NH2且x是1至20,优选6至10的化合物的方法解决该问题。0016 在本发明的第一方面的第四实施方案(其也是本发明的第一至第三实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述有机二胺是具有至少两个氨基的环状糖,优选是二氨基异艾杜糖醇(isoiditol)和二氨基异山梨醇的方法解决该问题。0017 在本发明的第一方面。
15、的第五实施方案(其也是本发明的第一至第四实施方案的一个实施方案)中,通过其中液体阳离子交换剂与有机化合物的物质的量的比为至少1的方法解决该问题。0018 在本发明的第一方面的第六实施方案(其也是本发明的第一至第五实施方案的一个实施方案)中,通过其中有机溶液与水溶液的体积比为1:10至10:1的方法解决该问题。0019 在本发明的第一方面的第七实施方案(其也是本发明的第一至第六实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述液体阳离子交换剂是具有多于12个,优选具有14至22个,还更优选16至18个碳原子的脂肪酸的方法解决该问题。说 明 书CN 103459032 A3/16页50020 在本发明的第一。
16、方面的第八实施方案(其也是本发明的第一至第七实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述液体阳离子交换剂是不饱和脂肪酸,优选油酸或芥酸的方法解决该问题。0021 在本发明的第一方面的第九实施方案(其也是本发明的第一至第七实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述水溶液此外包含具有催化活性的生物制剂的方法解决该问题。0022 在本发明的第一方面的第十实施方案(其也是本发明的第一至第九实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述生物制剂是细胞,优选是细菌细胞的方法解决该问题。0023 在本发明的第一方面的第十一实施方案(其也是本发明的第一至第十实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述有机化合物是对细胞有毒的。
17、有机化合物的方法解决该问题。0024 在本发明的第一方面的第十二实施方案(其也是本发明的第一至第十一实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述有机溶液此外包含至少一种有机溶剂,优选脂肪酸和/或脂肪酸酯的方法解决该问题。0025 在第二方面中通过包含水溶液和疏水性有机溶液的反应混合物实现作为本发明基础的目的,其中所述疏水性有机溶液包含脂肪酸,更优选具有多于12个或14至22个或16至18个碳原子的脂肪酸,还更优选不饱和脂肪酸作为液体阳离子交换剂,且其中所述水溶液包含具有至少两个氨基并且没有带负电的官能团的有机化合物。0026 在本发明的第二方面的第一实施方案中,通过其中所述水溶液此外包含具有催化活。
18、性的完整细胞,优选细菌细胞,更优选大肠杆菌的反应混合物解决该问题。0027 在本发明的第二方面的第二实施方案(其也是本发明的第一实施方案的一个实施方案)中,通过根据权利要求14至15之一的反应混合物解决该问题,其中所述有机化合物是式H2N-(CH2)x-NH2的化合物且x为1至20,优选6至10。0028 在本发明的第二方面的第三实施方案(其也是本发明的第一至第二实施方案的一个实施方案)中,通过其中所述有机二胺是具有至少两个氨基的环状糖,优选是二氨基异艾杜糖醇和二氨基异山梨醇的反应混合物解决该问题。0029 在第三方面中通过从水溶液中除去具有一个或多个正电荷的有机化合物的方法实现作为本发明的基。
19、础的目的,其包含步骤:a) 提供含有有机化合物的水溶液和包含液体阳离子交换剂的疏水性有机溶液,其中所述液体阳离子交换剂是疏水性的,且其中所述液体阳离子交换剂具有一个或多个负电荷和总负电荷,b) 使所述水溶液和所述有机溶液接触,和c) 从所述水溶液中分离出所述有机溶液。0030 在本发明的第三方面的一个实施方案(其也是本发明的第一实施方案的一个实施方案)中,该方法包含步骤:d) 后处理所述有机溶液,优选通过将所述有机化合物反萃到另一水溶液中。0031 在本发明的第三方面的第二实施方案(其也是本发明的第一实施方案的一个实施方案)中,根据本发明的方法的步骤b)中的温度为28至70,优选30至37。说。
20、 明 书CN 103459032 A4/16页60032 在本发明的第三方面的第三实施方案(其也是本发明的第一至第二实施方案的一个实施方案)中,根据本发明的方法的步骤b)中的pH-值为3至8,优选6至8,特别优选6.2至7.2。0033 在本发明的第三方面的第四实施方案(其也是本发明的第一至第三实施方案的一个实施方案)中,在该方法中的液体阳离子交换剂与有机化合物的物质的量的比为至少1。0034 在本发明的第三方面的第五实施方案(其也是本发明的第一至第四实施方案的一个实施方案)中,有机溶液与水溶液的体积比为1:10至10:1。0035 在本发明的第三方面的第六实施方案(其也是本发明的第一至第五实。
21、施方案的一个实施方案)中,所述有机化合物具有至少一个带正电荷的式(I)的取代基N+R2R3R4(I)或者,如果选自R2、R3和R4的至少一个取代基是氢,则为其非质子化形式,其中R2、R3和R4彼此独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、2-丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基、苄基、羟基、取代或未取代的和/或直链或支链或环状的烷基或烯基。0036 在本发明的第三方面的第七实施方案(其也是本发明的第一至第六实施方案的一个实施方案)中,所述有机化合物具有式(II)ZAN+R2R3R4(II)或者,如果选自R2、R3和R4的至少一个取代基是氢,则为其非质子化形式,其中R2、R3和R4彼此独立地选自氢、甲基、乙基、。
22、丙基、2-丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基、苄基、羟基、取代或未取代的和/或直链或支链或环状的烷基或烯基,其中A是包含至少三个碳原子的烃链,优选是未取代的烯基,且其中Z选自COOH、COOR5、COH、CH2OH且包括其非质子化形式,其中R5选自氢、甲基、乙基、丙基、2-丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基、苄基、羟基、取代或未取代的和/或直链或支链或环状的烷基或烯基。0037 在本发明的第三方面的第八实施方案(其也是本发明的第一至第七实施方案的一个实施方案)中,所述有机化合物具有式IIINH3+-A-COOR1(III),或其非质子化形式,其中R1是氢、甲基或乙基且A是具有至少三个碳原子的未取代的直。
23、链亚烷基。0038 在本发明的第三方面的第九实施方案(其也是本发明的第一至第八实施方案的一个实施方案)中,所述液体阳离子交换剂具有至少一个含有至少六个碳原子的烷基或烯基以及包含选自COOH、OSO2H、OPO(OH)2和OPO(OH)O及其非质子化形式的端位取代基。0039 在本发明的第三方面的第十实施方案(其也是本发明的第一至第九实施方案的一个实施方案)中,所述液体阳离子交换剂是不饱和脂肪酸,优选油酸。0040 在本发明的第三方面的第十一实施方案(其也是本发明的第一至第十实施方案的一个实施方案)中,所述水溶液此外包含具有催化活性的生物制剂。0041 在本发明的第三方面的第十二实施方案(其也是。
24、本发明的第一至第十一实施方案的一个实施方案)中,所述生物制剂是细胞,优选细菌细胞。0042 在本发明的第三方面的第十四实施方案(其也是本发明的第一至第十二实施方案说 明 书CN 103459032 A5/16页7的一个实施方案)中,所述有机化合物的存在对催化活性具有不利作用。0043 在本发明的第三方面的第十五实施方案(其也是本发明的第一至第十三实施方案的一个实施方案)中,所述有机溶液此外包含至少一种有机溶剂,优选脂肪酸和/或脂肪酸酯。0044 在本发明的第三方面的第十六实施方案(其也是本发明的第一至第十四实施方案的一个实施方案)中,所述有机溶液包含20至80体积%,优选25至75体积%的油酸。
25、作为液体阳离子交换剂并包含月桂酸甲酯作为溶剂,且所述有机化合物是12-氨基月桂酸甲酯,且在所述水溶液中存在具有参与12-氨基月桂酸甲酯合成的催化活性的细菌细胞。0045 在本发明的第三方面的第十七实施方案(其也是本发明的第一至第十五实施方案的一个实施方案)中,所述有机化合物是具有至少一个氨基,优选具有至少两个氨基的环状糖。0046 在第四方面中,通过包含含生物制剂的水溶液和含液体阳离子交换剂的疏水性有机溶液的生物反应器解决作为本发明的基础的目的。在本发明的一个优选实施方案中,如本文所用的术语“生物反应器”被理解为是指在其中可在受控条件下培养生物技术上有用的微生物和/或可用于生物技术方法,优选用。
26、于合成有机化合物的所有容器。0047 在第四方面的第一实施方案(其也是本发明的第三方面的第一实施方案的一个实施方案)中,所述液体阳离子交换剂是脂肪酸,优选油酸。0048 在第四方面的第二实施方案(其也是本发明的第三方面的第一实施方案的一个实施方案)中,所述疏水性有机溶液此外包含脂肪酸酯,优选月桂酸甲酯。0049 在第四方面的第三实施方案(其也是本发明的第二方面的第一至第二实施方案的一个实施方案)中,所述疏水性有机溶液包含油酸作为阳离子交换剂并包含25至75体积%的月桂酸甲酯作为溶剂。0050 在第四方面的第四实施方案(其也是本发明的第一至第三实施方案的一个实施方案)中,所述有机化合物是根据本发。
27、明的第一方面的实施方案之一的化合物。0051 在第五方面中,通过制备具有一个或多个正电荷的有机化合物的方法实现作为本发明基础的目的,其中所述有机化合物对细胞而言是有毒的,所述方法包括在包含液体阳离子交换剂和任选有机溶剂的疏水性有机溶液存在下,在水溶液中,培养参与有机化合物合成的细胞,优选催化该合成的至少一个步骤的细胞。0052 在本发明的第五方面的第一实施方案中,所述有机化合物是12-氨基月桂酸或12-氨基月桂酸甲酯,所述有机溶剂是月桂酸甲酯。0053 本发明的发明人已经发现,如果这种有机溶液包含液体阳离子交换剂,则可以令人惊讶地提高将具有一个或多个正电荷的有机化合物从水溶液移除到疏水性有机溶。
28、液中的效率。不希望与任何理论相关联,但本发明的发明人推测,所述液体阳离子交换剂的一个或多个负电荷与所述有机化合物的一个或多个正电荷以离子方式相互作用,且这种相互作用导致掩蔽至少一个正电荷,这提高了有机相中的溶解度。0054 在一个优选实施方案中,本文所用的术语“液体阳离子交换剂”是指可溶于疏水性有机溶剂中的化合物,其由于一个或多个负的永久电荷而能与至少一个阳离子形成离子相互作用。通常,液体阳离子交换剂包含至少一个饱和或不饱和的烃链,其可以是直链或支链,以及带负电的基团,例如羧基。在一个优选实施方案中,所述液体离子交换剂是脂肪酸,说 明 书CN 103459032 A6/16页8在一个更优选的实。
29、施方案中是不饱和脂肪酸,例如油酸。在一个优选实施方案中,该液体离子交换剂是二(2-乙基己基)磷酸(也被称作DEHPA或D2EHPA)。0055 在一个优选实施方案中,该液体离子交换剂不仅具有负的总电荷,而且完全没有正电荷。在一个优选实施方案中,术语离子交换剂或其它分子的“总电荷”,如本文中所使用的,被理解为是指与该分子共价键合的所有官能团的电荷总和。例如,月桂酸具有负电荷作为总电荷,不取决于水溶液中存在的其它分子或抗衡离子的存在。0056 在本发明的一个优选实施方案中,本文所用的术语“接触”被理解为是指两相直接且尤其没有物理屏障,如膜的间隔而彼此相对暴露。在最简单的情况中通过将两相置于同一容器。
30、中并以合适的方式例如通过搅拌将它们彼此混合来进行所述接触。0057 在一个优选实施方案中,所述有机化合物具有正的总电荷。在另一优选的实施方案中,所述有机化合物没有负电荷。在一个优选实施方案中,所述有机化合物是-氨基羧酸。在一个优选实施方案中,表述“一个或多个”某类电荷是指至少一个相应电荷。0058 在一个优选实施方案中,本文所用的术语“具有电荷”是指如此指出的化合物在pH 0至14,优选2至12,2至6,8至12,3至10,6至8,最优选在pH 7的水溶液中具有相应电荷。在一个优选实施方案中,其是永久存在的电荷。在另一优选的实施方案中,本文所用的术语“具有电荷”是指相应的官能团或化合物在pH 。
31、7主要具有相应电荷,即至少50,更优选90,还更优选99%。在另一优选的实施方案中,氨基(-NH2)在分子中被视为具有正电荷的基团,无论其是以完全质子化形式、部分质子化形式还是完全非质子化形式存在。0059 在本发明的一个优选实施方案中,可将术语“包含”按“包括”的意义理解,即非封闭地。在此意义上,包含A的混合物可具有除A外的其它成分。0060 在一个优选实施方案中,本文所用的术语“疏水性”被理解为是指一种液体在水相存在下形成与水相清晰分界的其自身的液相的性质。后者可以是连续液相或乳状液。在另一优选的实施方案中,本文所用的术语“疏水性”被理解为是指化合物基本上不溶于水的性质。最后,如本文所用,。
32、该术语在另一优选的实施方案中如此理解,即是指如此提及的化合物具有十进对数大于0,更优选大于0.5,还更优选大于1和最优选大于2的P-值(J. Sangster, Octanol-Water Partition Coefficients: Fundamentals and Physical Chemistry, Wiley Series in Solution Chemistry卷2, John Wiley & Sons, Chichester, 1997)。0061 在本发明的另一实施方案中,所述液体离子交换剂对生物技术相关的微生物没有或仅有适度毒效。本文所用的术语“毒效”在本发明的一个优选实。
33、施方案中被理解为是指化合物在与相应的微生物接触时降低它们的生长速率、降低它们的代谢活性、提高它们的能量消耗、降低它们的光学密度或能生长的细胞的数量和/或直接导致它们死亡和溶解的性质。在一个优选实施方案中,在毒性化合物的情况中,在低浓度下,优选在1000,更优选100,还更优选50或25,最优选5 mg/L的浓度下就已实现这些效应的至少一种。本领域技术人员已知许多可常规用于研究毒性的方法。这些包括例如经由O2-电极或微生物样品的对比析出和集落形成单位(cfus)的随后计数测量相应微生物的呼吸。在一个优选实施方案中,“适度毒效”被理解为是指位于生长期的微生物在该化合物存在下进一步生长和/或是代谢活。
34、性的,但程度低于在不存在相应化合物的相同条件下培养的对照物的情况,和/或具有延长的停滞期。说 明 书CN 103459032 A7/16页90062 水溶液和有机溶液的接触在合适的条件下进行,特别经过足以使所述有机化合物从水相充分转移到有机相中,理想地甚至建立相应平衡的时期。本领域技术人员可以在常规实验范围内确定该时间和条件。0063 在一个特别优选的实施方案中,所述具有一个或多个正电荷的有机化合物是端位胺化的脂肪酸,特别优选12-氨基月桂酸或其酯或这两种化合物的混合物。本领域技术人员会认识到,在包含酯酶活性的生物体系存在下,脂肪酸的酯可以部分以相应的酸的形式存在,并且就此而言,这两种化合物在。
35、这方面被视为等效。因此,如本文所用,在一个特别优选的实施方案中脂肪酸或脂肪酸衍生物还包括相应的酯,优选甲酯,反之亦然。0064 在一个特别优选的实施方案中,本文所用的术语“亚烷基”是式-(CH2)n-的基团,即是具有两个开放的,优选端位的取代基的链烷。这两个取代基可以是例如氨基和羧基。在一个优选实施方案中,n至少为3,还更优选至少为6,还更优选为11。在“取代的亚烷基链”中,至少一个氢原子被非氢原子的取代基或烷基残基,优选非氢原子的原子替代。在一个具体实施方案中,与此相反,本文所用的术语“未取代的亚烷基”是指没有这种取代基的式 (CH2)n的烃链。0065 在本化合物的一个特别优选的实施方案中。
36、,所述具有一个或多个正电荷的有机化合物是环状糖。在另一特别优选的实施方案中,这种环状糖具有至少两个氨基。在一个还更优选的实施方案中,所述“环状糖”是选自二氨基-二脱水-二脱氧-己糖醇,特别是2,5-二氨基-1,4:3,6-二脱水-2,5-二脱氧-D-己糖醇,在最优选实施方案中是它的三种立体异构体:2,5-二氨基-1,4:3,6-二脱水-2,5-二脱氧-D-甘露醇(I)、2,5-二氨基-1,4:3,6-二脱水-2,5-二脱氧-D-葡萄糖醇(II)和2,5-二氨基-5 1,4:3,6-二脱水-2,5-二脱氧-L-艾杜糖醇(III)的糖,它们在2和5位的手性不同。基于该稠合五元环的椅式,氨基在此可以。
37、位于内,内(I)、内,外(II)或外,外(III)位置。0066 在本化合物的一个优选实施方案中,使用选自下述的化合物作为溶剂与作为待除去的有机化合物的环状糖结合:煤油(K), 苯甲酸苄酯(B)、月桂酸甲酯(ML)、顺式-9-十八碳烯-1-醇(OD)。0067 在一个特别优选的实施方案中,所述有机化合物是DAI(二氨基异艾杜糖醇)或DAS(二氨基异山梨醇),所述液体阳离子交换剂是不饱和脂肪酸,优选油酸,且所述水相具有至少6.5或7,优选7至10,还更优选7.5至9.5的pH-值。0068 在一个特别优选的实施方案中,所述有机化合物是DAI或DAS,所述液体阳离子交换剂是DEHPA,且所述水相具。
38、有至少3或至少3.5,优选3至8,优选4至10,还更优选4.5至9,还更优选4.5至7或5至8的pH-值。0069 在一个优选实施方案中,为更好地相分离,将通过使水相和疏水相接触形成的混合物作为步骤c)的一部分或在附加步骤中暴露在升高的温度下,以促进相分离。例如,可以在标准压力下将温度提高到50、55、60、65、70、75、80、85、90或95以上。0070 步骤b)中的温度不仅取决于液体阳离子交换剂的性质,而且,特别对于随着反应进程在水相中发生水溶液与有机溶液的接触的情况而言,还取决于可能的在水相中发生的反应的温度要求。特别对于生物制剂,如活细胞在水相中具有催化活性的情况而言,该温度必须。
39、适合保持这种活性。在一个优选实施方案中,步骤b)中的温度为0至100,更优选20至80,28至70,30至37,35至40。说 明 书CN 103459032 A8/16页100071 步骤b)中的pH-值必须考虑可能的同时进行的反应的要求,原材料、产物、中间体或试剂的稳定性。在一个优选实施方案中,所述pH-值为3至8,更优选6至8,还更优选6.2至7.2。0072 为了将有机化合物尽可能完全地从水相转移到有机相中,需要足量的液体阳离子交换剂。在本发明的一个优选实施方案中,在至少一个步骤中,在连续工艺中在整个反应进程范围合计的液体阳离子交换剂与有机化合物的物质的量的比为至少1,即每分子有机化合。
40、物使用至少1分子液体阳离子交换剂。在还更优选的实施方案中,该比率大于2、3、5、10、15或20,优选1.5至3。0073 在一个优选实施方案中,阳离子交换剂是否是液体阳离子交换剂取决于其在工艺温度下,优选在37下的聚集状态。如果在除阳离子交换剂外还具有其它化合物的有机相中使用该阳离子交换剂,则该混合物的聚集状态是决定性的。如果 任选使用由现有技术已知的常规方法 可以制备在工艺温度下,优选下37完全是液体并包含液体阳离子交换剂的混合物,则是足够的。例如,可能需要在比该方法中所用的温度更高的温度下溶解阳离子交换剂并将该混合物冷却至工艺温度。0074 有机溶液与水溶液的体积比与阳离子交换剂/有机化。
41、合物物质的量的比一起,对高效过程均是重要的。在一个具体实施方案中,其为100:1至1:100,更优选20:1至1:20,还更优选10:1至1:10,4:1至1:4,3:1至1:3或最优选1:2至2:1。0075 在本发明的一个优选实施方案中,使用脂肪酸作为液体阳离子交换剂。在本发明的一个优选实施方案中,本文所用的术语“脂肪酸”被理解为是指具有至少6,优选8,还更优选10,最优选12个碳原子的羧酸,优选链烷酸。在一个优选实施方案中,它们是直链脂肪酸,在另一实施方案中是支链脂肪酸。在一个优选实施方案中,它们是饱和脂肪酸。在一个特别优选的实施方案中,它们是不饱和脂肪酸。在另一个优选的实施方案中,其是。
42、含有双键,优选在9位的具有至少12个碳原子的直链脂肪酸。在另一个优选的实施方案中,其是单不饱和脂肪酸,其中双键在9位和/或11位。在另一个优选的实施方案中,所述液体阳离子交换剂是选自油酸、棕榈油酸和鳕油酸和二十碳烯酸(Icosensure)的不饱和脂肪酸。在最优选的实施方案中,其是油酸。在一个特别优选的实施方案中,其是具有6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26. 27、28、29、30个碳原子,优选多于12个,还更优选多于14个碳原子,还更优选具有14至28,14至22,最优选16至18个碳原子的脂肪酸。0076 在。
43、另一个优选的实施方案中,使用不同脂肪酸的混合物作为液体离子交换剂,例如以大豆油或球蓟油形式存在的不同脂肪酸的混合物。在这种情况下,可能还必须通过相应的酯的水解释放所述脂肪酸,这可以通过降低pH-值或本领域技术人员已知为常规程序的类似措施实现。0077 在本发明的一个特别优选的实施方案中,使用两种液体阳离子交换剂的组合,优选其中至少一种是脂肪酸。0078 本发明的一个特别的优点在于本发明的方法与生物技术方法和其中所用的生物制剂的相容性。在本发明的一个具体实施方案中,本文所用的术语“具有催化活性的生物制剂”被理解为是指在从整个细胞到所分离的分子的所有提纯阶段中由细胞合成的生物催化剂。在一个优选实施方案中,其是表达具有催化活性的酶的细胞。该细胞可以是原核的,包说 明 书CN 103459032 A10。