钙受体拮抗剂化合物 本发明领域
本发明涉及新的钙受体拮抗剂(calcilytic)化合物、包含这些化合物的药物组合物及其作为钙受体拮抗剂的应用。
在哺乳动物，细胞外Ca2+受到严格的体内平衡性控制并调节各种过程如血凝固、神经和肌肉的兴奋性和正常的骨形成。细胞外Ca2+抑制甲状旁腺细胞分泌甲状旁腺激素(“PTH”)，抑制破骨细胞的骨再吸收和刺激C-细胞分泌降钙素。钙受体蛋白能够使某些专属细胞对细胞外Ca2+浓度的变化产生反应。
PTH是调节血和细胞外液中Ca2+体内平衡的主要的内分泌因子。PHT通过作用于骨和肾细胞增加血中Ca2+的浓度。细胞外Ca2+浓度增加随后产生负反馈信号，抑制PTH分泌。Ca2+和PTH分泌之间的互反关系形成了维持身体Ca2+体内平衡的重要机理。
细胞外Ca2+直接作用于甲状旁腺细胞调节PTH的分泌。现已证明存在探测细胞外Ca2+变化的甲状旁腺细胞表面蛋白。见Brown等人，Nature 366：574，1993。在甲状旁腺细胞中，该蛋白(钙受体)起到细胞外Ca2+受体的作用，探测细胞外Ca2+离子浓度的变化并引发机能细胞反应，分泌PTH。
细胞外Ca2+影响各种细胞功能，见Nemeth等人在Cell Calcium11：319，1990中的评论。例如细胞外Ca2+在滤泡旁细胞(C-细胞)和甲状旁腺细胞发挥作用。见Nemeth等人，Cell Calcium 11：323，1990。现已研究了细胞外Ca2+对骨骨破细胞的作用。见Zaidi，BioscienceReports 10：493，1990。
各种可模拟细胞外Ca2+对钙受体分子作用的化合物是已知的。钙受体拮抗剂是能够抑制钙受体活性并因此引起由细胞外Ca2+唤起的一种或多种钙受体活性降低地化合物。钙受体拮抗剂在有效的钙调节剂(它在Ca2+受体起作用)的发现、开发、设计、修饰和/或构建中用作引导分子。所述钙受体拮抗剂用于治疗各种以一种或多种成分浓度异常为特征的疾病状态，所述成分的实例包括多肽，如激素、酶和生长因子，其表达和/或分泌受其在一个或多个Ca2+受体的活性调节和影响。钙受体拮抗剂化合物的目标疾病和病症包括涉及骨和矿物质体内平衡异常的疾病。
钙体内平衡异常以一个或多个下列活性为特征：血清钙异常增加或降低；钙的尿排泄异常增加或降低；骨钙浓度异常增加或降低(例如通过骨矿物质密度的测定进行评价)；饮食钙的异常吸收；影响血清钙浓度的信使如PTH和降钙素的产生和/或释放异常增加或降低；和由影响血清钙浓度的信使引起的反应异常改变。
因此，对于与骨或矿物质体内平衡异常有关的疾病，如甲状旁腺机能减退、骨肉瘤、牙周病、骨折愈合、骨关节炎、类风湿性关节炎、佩吉特氏病、与恶性肿瘤和骨折愈合有关的体液血钙过多和骨质疏松症的药物疗法，钙受体拮抗剂提供独特的方法。
本发明概述
本发明包括新的由下文式(I)表示的钙受体拮抗剂及其作为钙受体拮抗剂在治疗各种与骨或矿物质体内平衡异常有关的疾病中的应用，所述疾病包括但不限制于甲状旁腺机能减退、骨肉瘤、牙周病、骨折愈合、骨关节炎、类风湿性关节炎、佩吉特氏病、与恶性肿瘤和骨折愈合有关的体液血钙过多和骨质疏松症。
本发明进一步提供拮抗动物包括人钙受体的方法，它包括给予需要治疗的动物有效量下文所显示的式(I)化合物。
本发明进一步提供增加动物包括人血清甲状旁腺浓度的方法，它包括给予需要治疗的动物有效量下文所显示的式(I)化合物。
本发明详述
本发明化合物选自下式(I)：其中：
A为未取代的或由任何选自OH、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基、CF3、OCF3、CN和NO2的取代基取代的下述基团：芳基或稠合芳基、二氢或四氢稠合芳基、杂芳基或稠合杂芳基、二氢或四氢稠合杂芳基；
X1和X5独立地选自H、卤素、CN和NO2，前提条件是X1或X5为H；
X2、X3和X4选自H、卤素、O-C1-4烷基和J-K，其中：
J为共价键、亚烷基、O-亚烷基或亚烯基；并且
K选自CO2R5、CONR4R′4、OH、NR4R′4和CN；
R4和R′4独立地为H、烷基、芳基或杂芳基；
R5为H、烷基、烷基-(O-烷基)m-O-烷基；
n为0-4的整数；并且
m为1-3的整数。
优选的本发明化合物具有下式(II)结构：其中：
A为未取代的或由任何选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、CF3和OCF3的取代基取代的下述基团：芳基或稠合芳基、二氢或四氢稠合芳基、杂芳基或稠合杂芳基、二氢或四氢稠合杂芳基；
X1和X5独立地选自H、卤素、CN和NO2，前提条件是X1或X5为H；
X2、X3和X4选自H、卤素、O-C1-4烷基和J-K，其中：
J为共价键、亚烷基、O-亚烷基或亚烯基；
K选自CO2R5、CONR4R′4和NR4R′4；
R4和R′4独立地为H、烷基、芳基或杂芳基；
R5为H、烷基或烷基-(O-烷基)m-O-烷基；
n为0-4的整数；并且
m为1-3的整数。
更优选的本发明化合物具有下式(III)结构：其中：
A为未取代的或由任何选自卤素、C1-4烷氧基、CF3和OCF3的取代基取代的下述基团：芳基或稠合芳基、二氢或四氢稠合芳基、杂芳基或稠合杂芳基、二氢或四氢稠合杂芳基；
X1和X5独立地选自H、卤素和CN，前提条件是X1或X5为H；
X2、X3和X4选自H、卤素、O-C1-4烷基和J-K，其中：
J为共价键、亚烷基、O-亚烷基或亚烯基；并且
K为CO2R5；
R5为H或烷基；
n为0-4的整数。
本文所使用的术语“烷基”是指由碳-碳单键连接的并且具有1-20个连接在一起的碳原子的未取代或取代的烃基。该烷基烃基可以是直链、支链或环状的、饱和的或不饱和的。优选地，在任选取代的烷基上的取代基选自芳基、杂芳基、CO2R1、CO2NR1R′1、OH、OR1、COR1、NR1R′1、卤素、CF3、OCF3和NO2，其中R1代表H、C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-5链烯基、C2-5炔基、杂环烷基、芳基或杂芳基、C1-4烷基；其他取代基选自F、Cl、Br、I、N、S和O。优选地，所存在的取代基不超过3个。更优选地，所述烷基具有1-12个碳原子并且是未取代的。优选地，所述烷基是直链的。
本文所术语的术语“环烷基”是指未取代的或取代的3-7元碳环，其中任何取代基都选自F、Cl、Br、I、N(R1)2、SR1和OR1，除非另外说明。
本文所使用的术语“亚烷基”是未取代的或由选自C1-4烷基、NR4R′4、OH、O(形成酮)、芳基和杂芳基的取代基取代的多达5个碳原子的连接基。
本文所使用的术语“亚烯基”是未取代的或由选自C1-4烷基、NR4R′4、OH、O(形成酮)、芳基和杂芳基的取代基取代的多达5个碳原子的连接基，它包含一个不饱和双键。
本文所使用的术语“芳基”是指未取代的或取代的且具有至少一个环的芳族基团，它具有共轭π-电子系统，包含多达2个共轭或稠合环系统。芳基包括碳环芳基和联芳基，所有这些基团都可以是未取代的或取代的。优选的芳基包括苯基和萘基。更优选的芳基包括苯基。优选的取代基选自卤素、C1-4烷基、OCF3、CF3、OMe、CN、OSO2R2和NO2，其中R2代表C1-4烷基或C3-6环烷基。
本文所使用的术语“杂芳基”是指未取代的或取代的且具有至少一个环的芳族基团，它具有共轭π-电子系统，包含多达2个共轭或稠合环系统和1-3个选自O、S和N的杂原子。杂芳基包括碳环杂芳基芳基-杂芳基和联杂芳基芳基，所有这些基团都可以是为取代的或取代的。优选的芳基包括苯基和萘基。更优选的芳基包括苯基。优选的取代基选自卤素、C1-4烷基、OCF3、CF3、OMe、CN、OSO2R2和NO2，其中R2代表C1-4烷基或C3-6环烷基。
本文所使用的术语“炔基”是指未取代的或取代的烃基，它包含至少一个碳-碳叁键并且包含多达5个连接在一起的碳原子。所述炔基烃链可以是直链、支链或环状的。任何取代基选自卤素、C1-4烷基、OCF3、CF3、OMe、CN、OSO2R2和NO2，其中R3代表C1-4烷基或C3-6环烷基。
本发明化合物可包含一个或多个不对称碳原子并且可以以外消旋体和有旋光活性体的形式存在。所有这些化合物和非对映异构体都包含在本发明范围内。
优选的本发明化合物包括：
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{4-氰基-3-[(S)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{4-氰基-3-[(S)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸辛酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲氧基-乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸丁酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸异丙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸戊酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-乙氧基乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸3-甲基-丁酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸1-乙基-丙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸仲丁酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲氧基-1-甲基-乙酯；
2，2-二甲基-丙酸3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酰氧基甲酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸(S)-2-氨基-3-甲基-丁酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸5-氨基-戊酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸甲酯；
3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸；
3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，5，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸乙酯；
3-(3-氰基-4-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸；
3-(3-氰基-4-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{2-氯-4-氰基-5-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{2-氯-4-氰基-5-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{2-氟-4-氰基-5-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{2-氟-4-氰基-5-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{2-氰基-3-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
4-{2-氰基-3-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸乙酯；
3-{2-氰基-3-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸；
4-{2-氰基-3-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸；
4-{4-氰基-3-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸乙酯；
4-{4-氰基-3-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸；
4-{3-氰基-4-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸乙酯；
4-{3-氰基-4-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸；
3-{2-氰基-3-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
4-{2-氰基-3-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸乙酯；
3-{2-氰基-3-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸；
4-{2-氰基-3-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸；
4-{4-氰基-3-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸乙酯；
4-{4-氰基-3-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸；
4-{3-氰基-4-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸乙酯；
4-{3-氰基-4-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丁酸；
(S)-2-氨基-3-{4-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-3-硝基-苯基}-丙酸乙酯；
(S)-2-氨基-3-{4-[(R)-3-(1，1-二甲基-2-萘-2-基-乙基氨基)-2-羟基-丙氧基]-3-硝基-苯基}-丙酸；
(R)-2-氨基-5-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-戊酸乙酯；
(R)-2-氨基-5-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-戊酸；
5-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-戊酸乙酯；
5-{4-氰基-3-[(R)-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-戊酸；
(R)-2-氨基-5-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
(R)-2-氨基-5-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
(S)-2-氨基-5-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；和
(S)-2-氨基-5-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；及上述化合物的可药用盐。
更优选的本发明化合物包括：
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{4-氰基-3-[(S)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸异丙酯；
3-{4-氰基-3-[(S)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-乙氧基乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲氧基-1-甲基-乙酯；
3-{4-氰基-3-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{4-氰基-3-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{3-氰基-4-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{3-氰基-4-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；和
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；及
上述化合物的可药用盐和复合物。
更优选的本发明化合物包括：
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；和
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；及它们的可药用盐和复合物。
可药用盐是在所给予的量和浓度下的无毒盐。
可药用盐包括酸加成盐例如硫酸盐、盐酸盐、富马酸盐、马来酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸盐和奎尼酸盐。优选的盐是盐酸盐。可药用盐可由各种酸如盐酸、马来酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸、醋酸、枸橼酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸、富马酸和奎尼酸制得。
当存在酸性官能团如羧酸或苯酚时，可药用盐也包括碱加成盐例如包含苯乍生、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺、普鲁卡因、铝、钙、锂、镁、钾、钠、铵、烷基胺和锌的盐。
本发明提供上述式(I)化合物，它可利用标准工艺方法制备。制备本文所描述的优选化合物的总策略可按如下所述进行。下述的实施例用于说明特定化合物的合成。利用本文所描述的方案作为范例，本领域普通技术人员可以很容易地制备本发明其他化合物。
所有试剂和溶剂通过商业渠道获得。利用标准技术和步骤合成起始物质(例如胺和环氧化物)。
式(I)化合物通过方案1-3所描述的一般方法制备。通常，在适宜的催化剂如LiClO4(0.1-2当量)存在或不存在下，将缩水甘油醚(例如方案1中的7)和伯胺(例如方案1中的2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙胺)在溶剂如无水乙醇、乙腈、甲苯、THF或任何其他类似溶剂中的溶液回流搅拌过夜或更长时间。产物(例如方案1中的8)通过色谱层析和/或重结晶纯化。酸加成盐，例如盐酸盐可通过用酸(例如在气相中或在4M二噁烷溶液中的HCl)处理相应的游离碱，或通过任何其他标准方法制备。在碱性或酸性条件下水解酯得到相应的酸(例如方案1的9)。
方案2中以化合物7作为实施例描述了环氧化物的一般合成。
方案3描述了某些所需要胺的合成。方案1方案2方案3
为了利用式(I)化合物或其可药用盐来治疗人或其他动物，通常将其按照标准制药惯例配制成药物组合物。
钙受体拮抗剂化合物可通过不同的途径包括静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、口服、局部(透皮)或透粘膜给予。在系统给药时，口服给药是优选的。在口服给药时，例如，可将化合物配制成常规口服剂型如胶囊剂、片剂和液体制剂如糖浆剂、酏剂和浓缩滴剂。
或者，可使用注射剂(非胃肠道给药)，例如肌肉内、静脉内、腹膜内和皮下用注射剂。对于注射剂来说，可将本发明化合物配制在液体溶液，优选生理上适宜的缓冲液或溶液如盐水溶液、Hank’s溶液或林格氏溶液中。另外，所述化合物可配制成固体形式并且在使用前立即再溶解或悬浮。也可以制备成冻干形式。
系统给药也可以通过透粘膜或透皮方法进行。在透粘膜或透皮给药时，可在制剂中使用有利于渗透到屏障中的渗透剂。所述渗透剂通常是本领域已知的并且例如，在透粘膜给药时，包括胆汁酸盐和夫西地酸盐。另外，可以使用洗涤剂来促进渗透。例如，透粘膜给药可通过鼻腔喷雾、直肠栓或阴道栓进行。
正如本领域通常已知的那样，在局部给药时，本发明化合物可配制成软膏、药膏、凝胶或霜剂。
所给予各种钙受体拮抗剂化合物的量可按照标准方法，通过考虑因素如化合物的IC50、EC50、化合物的生物半衰期、病人的年龄、大小和体重以及病人的疾病或病症来确定。考虑这些因素和其他因素的重要性是本领域普通技术人员已知的。
所给予的量也依赖于给药途径和口服生物利用度。例如对于口服生物利用度低的化合物来说，必须给予相对高的剂量。
优选地，组合物是单位剂量形式。例如，在口服应用时，可给予片剂或胶囊剂，在鼻腔应用时，可给予可计量的气雾剂剂量，在透皮应用时，可给予局部用制剂或贴剂并且在透粘膜应用时，可给予口腔贴剂。其各情况下，病人可以以单剂量方式服药。
口服给药的各剂量单位适宜地包含按游离碱计算为0.01-500mg/Kg，并且优选0.1-50mg/Kg式(I)化合物或其可药用盐。非胃肠道、鼻腔、口腔吸入、透粘膜或透皮途径的每日剂量适宜地包含0.01-100mg/Kg式(I)化合物。局部用制剂适宜地包含0.01-5.0％式(I)化合物。例如，正如本领域技术人员显而易见的那样，可以每天1-6次，优选每天一次给予活性组分，该活性组分足以显示所需要的活性。
本文所使用的术语疾病的“治疗”包括但不限制于疾病的阻止、迟延和预防。
可治疗或预防的、以受影响的细胞为基础的疾病和病症包括与骨和矿物质有关的疾病和病症；甲状旁腺机能减退；中枢神经系统疾病如癫痫发作、中风、头外伤、脊髓损伤、氧不足诱导的神经细胞损害如发生心动停止或新生儿窘迫症、癫痫症、神经变性性疾病如早老性痴呆、杭廷顿氏舞蹈病和帕金森氏病、痴呆、肌肉紧张、抑郁、焦虑、恐慌性疾病、强迫观念与行为性疾病、外伤后应激反应性疾病、精神分裂症、引起神经病一样症状的恶性综合征和图雷特氏综合征；与肾脏再吸收过量水有关的疾病如不适当的ADH分泌综合征(SIADH)、肝硬化、充血性心衰和肾病；高血压；防止和/或降低阳离子抗体(例如氨基苷类抗生素)的肾毒性；肠运动疾病如腹泻和结肠痉挛；GI溃疡性疾病；与钙吸收过量有关的GI疾病如类肉瘤病；自身免疫性疾病和器官移植排斥；鳞状上皮细胞癌；和胰腺炎。
在优选的本发明具体实例中，本发明化合物用于增加血清中甲状旁腺激素(“PTH”)的浓度。增加PTH的浓度可帮助治疗疾病如甲状旁腺机能减退、骨肉瘤、牙周病、骨折、骨关节炎、类风湿性关节炎、佩吉特氏病、体液血钙过多性恶性肿瘤和骨质疏松症。
本发明另一方面描述了治疗病人疾病的方法，它包括给予所述病人足够增加血清PTH浓度量的本发明化合物。优选地，该方法通过给予有效地引起血清PTH浓度的持续时间和/量增加以提供充分治疗作用量的所述化合物进行。
在各种具体实例中，给予病人的化合物引起血清PTH增加，持续时间达1小时，大约1-24小时，大约1-12小时，大约1-6小时，大约1-5小时，大约1-4小时，大约2-5小时，大约2-4小时或大约3-6小时。
在本发明其他具体实例中，给予病人的化合物引起血清PTH增加，持续时间超过大约24小时，前提条件是与抗再吸收药物一起给予。
在其他不同的具体实例中，给予病人的化合物引起血清PTH增加，峰浓度比并病人血清PTH峰浓度大2倍，2-5倍，5-10倍和至少10倍。测定未经过治疗病人的血清峰浓度。
在优选的本发明具体实例中，本发明化合物与抗再吸收药物一起给予。适宜的用于联合给药的抗再吸收药物包括，但不限制于雌激素、1，25(OH)2维生素D3、降钙素、选择性雌激素受体调节剂、vitronectin受体拮抗剂、V-H+-ATP酶抑制剂、src SH2拮抗剂、二膦酸酯和组织蛋白酶K抑制剂。
口服有效的式(I)组合物及其可药用盐可配制成糖浆剂、片剂、胶囊剂和锭剂。糖浆剂通常包括所述化合物或其盐在液体载体和调味剂或着色剂中形成的悬浮液或溶液剂，所述载体的实例为乙醇、花生油、橄榄油、甘油和水。如果组合物为片剂形式，可以使用制备固体制剂常规使用的任何药用载体。所述载体的实例包括硬脂酸镁、白陶土、滑石粉、明胶、阿拉伯胶、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。如果组合物为胶囊剂形式，任何常规的装胶囊方法都是适宜的，例如通过在硬明胶胶囊壳中使用上述载体，将所述组合物封装到胶囊中。如果组合物是软明胶壳胶囊剂形式，可以考虑常规用于制备分散液或悬浮液的任何药用载体，例如，水性树胶、纤维素、硅酸盐或油并在软明胶胶囊壳中混合。
典型的非胃肠道用组合物包括化合物或其盐在不包含或包含非胃肠道用油，例如乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油的灭菌水性或非水性载体中形成的溶液剂或悬浮液。
典型的吸入组合物为可以利用常规推进剂如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷以干粉或以气雾剂形式给予的溶液剂、悬浮液或乳剂形式。
典型的栓剂包含以该方式给予时有效的式(I)化合物或其可药用盐，和粘合剂和/或润滑剂，例如聚合的二醇、明胶、可可脂或其他低级熔化植物蜡或脂肪或其合成的类似物。
典型的皮肤和透皮制剂包含常规水性或非水性载体，例如霜剂、软膏剂、洗剂或糊剂是以含药膏药、贴剂或膜形式存在。
优选地，所述组合物是单位剂量形式，例如片剂、胶囊剂或可计量剂量的气雾剂，这样病人可以服用单次剂量。
当按照本发明给予本发明化合物时，预计没有任何不适宜的毒性作用。
通过下列试验来证明式(I)化合物分生物活性：
(I)、钙受体抑制剂的测定
通过在稳定地表达人钙受体的HEK293 4.0-7细胞中测定试验化合物阻断由细胞外加IC50来测定钙受体拮抗剂活性。HEK 293 4.0-7细胞如Rogers等人在J.Bone Miner.Res.10 Suppl.1：S483，1995中所述构造(因此引入本文供参考)。细胞外Ca2+从1增加至1.75mM引起细胞内Ca2+的增加。利用氟-3(一种荧光的钙指示剂)来测定细胞内Ca2+。
所述方法如下：
1、在5％CO2：95％空气和37℃下，将细胞保持在含有选择介质(加入10％胎牛血清和200μg/ml潮霉素B的DMEM)的T-150瓶中并生长至90％融合(confluency)。
2、轻轻地倒出介质并将细胞单层用保持在37℃下的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤2次。第二次洗涤后，加入6ml 0.02％EDTA的PBS溶液并在37℃下孵育4分钟。孵育后，通过轻轻地搅动使细胞散开。
3、合并2或3号瓶的细胞并离心(100×g)成沉积物。将细胞沉积物再悬浮在10-15ml SPF-PCB+中并再次离心成沉积物。如此洗涤2次。
不含硫酸盐和磷酸盐的甲状旁腺细胞缓冲液包含20mM Na-Hepes、pH7.4、126mM NaCl、5mM KCl和1mM MgCl2。制备SPF-PCB并在4℃下贮存。在使用的当天，将SPF-PCB中加入1mg/ml D-葡萄糖和1mM CaCl2，然后分为两部分。向其中的一部分中加入5mg/ml(SPF-PCB+)的牛血清白蛋白(BSA；部分V，ICN)。该缓冲液用于洗涤、加样和保养细胞。不含BSA的部分用于稀释吸收池中用于测定荧光的细胞。
4、将沉积物再悬浮在10ml含2.2μM氟-3(分子探针)的SPF-PCB+中并在室温孵育35分钟。
5、在孵育期后，将细胞通过离心沉积。所得到的沉积物用SPF-PCB+洗涤。洗涤后，将细胞以1-2×106个细胞/ml的密度再悬浮在SPF-PCB+中。
6、为了记录荧光信号，将300μl细胞悬浮液稀释在1.2ml包含1mM CaCl2和1mg/ml D-葡萄糖的SPF缓冲液中。在37℃连续搅拌下，用分光荧光计测定荧光。分别在485和535nm下测定激发和发射波长。为了校准荧光信号，加入毛地黄皂苷(5mg/ml的乙醇溶液)得到Fmax，通过加入Tris-EGTA(2.5M Tris-Base，0.3M EGDA)测定表观Fmin。利用下列等式计算细胞内钙的浓度：
细胞内钙＝(F-Fmin/Fmax)+Kd；其中Kd＝400nM。
7、为了测定试验化合物潜在的cacilytic活性，在将细胞外Ca2+浓度从1增加至2mM前，将细胞与试验化合物(或作为对照的载体)一起孵育90秒。通过检测cacilytic化合物以浓度-依赖方式阻断细胞外Ca2+引起的细胞内Ca2+浓度的增加来检测cacilytic化合物。
通常，在钙受体抑制剂测定中具有较低IC50值的那些化合物是更优选的化合物。认为IC50值大于50μM的化合物是非活性的。优选的化合物是那些IC50值为10μM或更低的化合物，更优选的化合物的IC50值为1μM，并且最优选的化合物的IC50值为0.1μM或更低。
(II)、钙受体结合的测定
将用人甲状旁腺钙受体(”HuPCaR”)稳定地转染的HEK 293 4.0-7细胞在T180组织培养瓶中按比例放大。血浆膜可在包含1μM亮肽素、0.04μM抑胃酶素和1mM PMSF的蛋白酶抑制剂混合液存在下，通过在缓冲液(50mM Tris-HCl pH7.4、1mM EDTA、3mM MgCl2)中polytron的均化作用或玻璃douncing获得。将等分试样的膜速冻并在-80℃下贮存。3H标记化合物的放射比活度为44Ci/mmole，将其等分并贮存在液氮中以保证其放化学稳定性。
在反应体积为0.5ml时，典型的反应混合物在包含0.1％明胶和10％EtOH的均化缓冲液中包含2nM3H化合物((R，R)-N-4’-甲氧基-t-3，3’-甲基-1‘-乙基苯基-1-(1-萘基)乙胺)或3H化合物(R)-N-[2-羟基-3-(3-氯-2-氰基苯氧基)丙基]-1，1-二甲基-2-(4-甲氧基苯基)乙胺4-10μg膜。在冰水浴中，在12×75的聚乙烯管中进行孵育。向各管中加入25μl试验样品的100％EtOH溶液，然后加入400μl冷却的孵育缓冲液和25μl 40nM3H-化合物的100％EtOH溶液至最终浓度2nM。通过加入50μl在孵育缓冲液中稀释的80-200μg/ml HEK 2934.0-7膜引发结合反应，并在4℃下孵育30分钟。洗涤缓冲剂为50mM含0.1％PEI的Tris-HCl。非特异性结合通过加入100倍过量未标记的相应配位体测定，并且通常为总结合的20％。该结合反应通过用Brandel Harvestor快速过滤到1％PEI预处理的GF/C滤器上终止。将滤器放在闪烁液中并通过液体闪烁计数来评价放射性。
实施例
分别利用Bruker ARX 300或Bruker AVANCE 400光谱仪，在300或400MHz下记录核磁共振光谱。CDCl3为氘代氯仿，DMSO-d6为硫氘代二甲基亚砜，并且CD3OD为四氘代甲醇。以兆比率(Δ)记录从内标四甲基硅烷向低磁场的化学位移。NMR数据的缩写如下：s＝单峰、d＝双峰、t＝三峰、q＝四峰、m＝多峰、dd＝双双峰、dt＝双三峰、app＝清晰可见的、br＝宽的。J是指以赫兹为单位测定的耦合常数。在Nicolet 510红外光谱计上记录傅里叶变换红外(FTIR)光谱。以传输方式记录FTIR光谱并且以反波数(cm-1)报道谱带位置。在SCIEX5或Micromass仪器上，利用电子喷雾(ES)电离技术获得质谱。利用Perkin-Elmer 240C元素分析器获得元素分析。在Thomas-Hoover熔点仪上获得熔点并且未校正。以摄氏度报道所有的温度。
Analtech硅胶GF和E.Merck硅胶60F-254薄层板用于薄层色谱层析。在E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅胶上进行闪式和重力色谱层析。在Rainin或Beckman色谱仪上进行分析和制备HPLC。ODS是指十八碳硅烷基衍生的硅胶色谱分析载体。5μApex-ODS是指由Jones Chromatography，Littleton，Colorado制备的十八碳硅烷基衍生的硅胶色谱分析载体，其标称粒度为5μ。YMC ODS-AQ是ODS色谱分析载体并且是YMC Co.Ltd.，Kyoto，Japan的注册商标。PRP-1是聚合的(苯乙烯-二乙烯基苯)色谱分析载体并且是Hamilton Co.，Reno，Nevada的注册商标。Celite是由酸洗涤的含硅藻硅石组成的助滤剂并且是Manville Corp.，Denver，Colorado的注册商标。按照上述一般方法已合成了下列化合物：
实施例1制备2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙胺a)、二氢化茚-2-基乙酸甲酯
将二氢化茚-2-基乙酸(Lancaster，20g，0.11mol)的甲醇(200ml)溶液搅拌并在冰浴中冷却至0-10℃，并滴加亚硫酰氯(14.8g，0.125mol)处理。将该混合物在室温下搅拌16小时，真空浓缩，并将油性残渣溶解在乙酸乙酯中，用2.5N氢氧化钠、水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到固化的标题化合物(21g，97％)。b)、1-二氢化茚-2-基-2-甲基-丙-2-醇
将实施例1(a)混合物(6.3g，33mmol)的乙醚(150nl)溶液滴加到1.4M在冰浴中搅拌的甲基锂的乙醚溶液(100ml，4.25eq)中。让该混合物温热至室温，搅拌2小时并通过滴加饱和氯化铵水溶液(150ml)小心地淬灭。分离水相并用乙醚提取，合并的乙醚相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到标题化合物的油状物，放置后结晶(~89％)。c)、N-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基)-乙酰胺
向在冰浴中搅拌45分钟的浓硫酸(1.7ml)乙腈(6ml)混合物中滴加实施例1(b)(3.3g，17.3mmol)的冰醋酸(5ml)溶液。让该混合物温热至室温，搅拌16小时，倾入冰水中，并用乙酸乙酯提取。合并的有机提取液用2.5N氢氧化钠、水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到油状物残渣，将其与己烷和几滴乙酸乙酯一起研磨产生晶种并冷却得到固体，通过过滤分离得到标题化合物的黄褐色固体(1.9g，47％)。MS(ES)m/e 231.9[M+H]+。将滤液真空浓缩得到另一部分标题化合物的油状物(1.5g，37％)。d)、2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙胺
将实施例1(c)化合物(6.5g，28mmol)的乙二醇(170ml)混合物用粉碎的氢氧化钾颗粒(13g)处理，搅拌并加热至190℃24小时。将该混合物倾入水中并用乙酸乙酯提取。合并的有机相用盐水洗涤并用1N盐酸提取。合并的酸性提取液用乙酸乙酯洗涤，用2.5N氢氧化钠碱化，并用乙酸乙酯提取。合并的有机提取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到标题化合物(3.2g，60％)。MS(ES)m/e 190.6[M+H]+。
实施例2制备(R)-4-氰基-3-(环氧乙烷基甲氧基)苯丙酸乙酯a)、3-羟基苯丙酸乙酯
将3-(3-羟基苯基)丙酸(Lancaster，66.4g，0.4mol)的乙醇(700ml)溶液用浓硫酸(6ml)处理，加热回流2小时，并冷却至室温。将该混合物在冰浴中冷却，用10％碳酸钠水溶液中和并真空浓缩至大约50ml。加入水(～200ml)并将该混合物用乙酸乙酯提取3次。合并的乙酸乙酯提取液用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到标题化合物的油状物(70g，90％)。b)、4-甲酰基-3-羟基苯丙酸乙酯
向在氩气下搅拌的实施例2(a)化合物(77.2g，0.4mol)的无水乙腈(1L)溶液中加入三乙胺(152g，1.5mol)，然后加入氯化镁(57.1g，0.6mol)。搅拌5分钟后，加入低聚甲醛(81g)，该反应在氩气下回流1.5小时。将反应物冷却，加入6N盐酸(400ml)，所得到的混合物用乙酸乙酯提取。合并的乙酸乙酯提取液用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。残留的油状物通过闪式柱色谱层析(硅胶，10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到标题化合物(66.6g，75％)。c)、3-羟基-4-[(羟基亚氨基)甲基]苯丙酸乙酯
将实施例2(b)化合物(66.6g，0.3mol)的无水乙醇(500ml)溶液用三乙胺(40.4g，0.4mol)处理，然后用盐酸羟胺(23g，0.33mol)处理。将奋发有为在氩气下搅拌回流18小时，真空浓缩，残留的油状物溶解在乙酸乙酯中并用1N盐酸洗涤。乙酸乙酯相干燥(MgSO4)，过滤，并真空浓缩，得到标题化合物的油状物，该油状物不必纯化即可在下一步中使用。d)、3-乙酰氧基-4-氰基苯丙酸乙酯
将实施例2(c)化合物用乙酸酐(500ml)处理并在氩气下回流90分钟。将反应物真空浓缩，所得到的油状物溶解在乙酸乙酯中并用水洗涤。乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并真空浓缩，得到标题化合物的油状物，该油状物不必纯化即可在下一步中使用。e)、4-氰基-3-羟基苯丙酸乙酯
将实施例2(d)化合物的溶解在乙醇(200ml)并用碳酸钠(64g，0.6mol)的水(1.5L)溶液处理。在室温下搅拌5小时后，将混合物用6N盐酸中和酯pH5并真空浓缩。所得到的混合物用乙酸乙酯提取。将乙酸乙酯溶液干燥(MgSO4)，过滤，并真空浓缩，得到标题化合物的油状物[61.9g，从制备2(c)化合物的总收率为94.2％]。f)、(R)-4-氰基-3-(环氧乙烷基甲氧基)苯丙酸乙酯
将实施例2(c)化合物(28.3g，0.13mol)和(2R)-3-硝基苯磺酸缩水甘油酯(33.7g，0.13mol)的无水丙酮(500ml)溶液用碳酸钾(36g，0.26mol)处理并在氩气下回流18小时。将反应物冷却、过滤并将滤液真空浓缩，所得到的残渣通过闪式柱色谱层析(二氧化硅，30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到标题化合物(29.5g，82.4％)。
实施例3制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯
将实施例2(f)(6g，31.7mmol)和实施例1(d)(8.6g，31.7mmol)在无水乙醇(200ml)中的混合物搅拌并加热回流56小时，冷却，真空浓缩。残渣溶解在二氯甲烷(30ml)中并用1.0N氯化氢和乙醚溶液酸化。所形成的白色固体通过过滤分离并重结晶得到标题化合物(10g，63％)。mp(二氯甲烷/乙醚)155-157℃；MS(ES)m/e 465.4[M+H]+。
实施例4制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸
将实施例3化合物(1.5g，3mmol)的无水乙醇(120ml)和水(40ml)溶液用2.5N氢氧化钠(5ml)处理并在室温和氩气下搅拌过夜。真空除去乙醇，在搅拌下用1N盐酸将pH调至5。通过过滤收集沉淀的白色固体，用水洗涤并真空干燥，得到标题化合物(1.3g，quant)。MS(ES)m/e437.4[M+H]+。
实施例5制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸盐酸盐
将实施例4化合物(80mg，0.18mmol)悬浮在乙腈(8ml)并在搅拌下用1N氯化氢的乙醚溶液处理直至固体溶解。将该混合物快速过滤并在冰浴中冷却。通过过滤分离所形成的白色结晶固体，用乙醚洗涤并真空干燥，得到标题化合物(80mg，94％)。Mp 180-181℃；MS(ES)m/e437.2[M+H]+。
实施例6制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸辛酯盐酸盐
将实施例5化合物(100mg，0.2mmol)的无水DMF(5ml)溶液用碳酸铯(141mg，0.4mmol)和18-冠醚-6(100mg，0.41mmol)处理，然后用1-碘辛烷(144mg，0.6mmol)处理。所得到的混合物在70℃氩气下加热20小时。将反应物冷却，浓缩并将残渣在水和乙酸乙酯之间分配。有机层用10％Na2CO3(水溶液)、盐水洗涤，用MgSO4干燥并蒸发。通过闪式柱色谱层析(4％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到酯的黄色油状物。将油状物的醚溶液用HCl处理并过滤得到上述标题化合物(50mg，46％)。LC-MS m/e 549.4[M+H]+。
实施例7制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲氧基-乙酯盐酸盐
利用实施例6的方法，但用1-溴-2-甲氧基-乙烷代替1-碘辛烷得到上述标题化合物。LC-MS m/e 495.4[M+H]+。
实施例8制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸丁酯盐酸盐
利用实施例6的方法，但用1-碘丁烷代替1-碘辛烷得到上述标题化合物。LC-MS m/e 493.4[M+H]+。
实施例9制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸异丙酯三氟乙酸盐a)、3-(4-氰基-3-羟基-苯基)-丙酸
在室温下，将3-(4-氰基-3-羟基-苯基)-丙酸乙酯(2.2g，10mmol)的乙醇(10ml)和水(40ml)溶液用氢氧化钠水溶液(2.5M，44ml)处理过夜。真空除去溶剂并将残渣溶解在水(150ml)中。通过加入3N HCl(水溶液)将水溶液的pH调至2-4，然后将沉淀物过滤并用水洗涤，得到标题化合物的白色固体(1.88g，0.98mmol，98.4％收率)。ESMS m/z192[M+H]+。b)、3-(4-氰基-3-羟基-苯基)-丙酸异丙酯
将实施例9(a)化合物(0.25g，1.3mmol)和丙-2-醇(0.4g，0.67mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液用4-吡咯烷吡啶(0.2g，1.3mmol)的CH2Cl2(1ml)溶液处理。将该反应混合物在N2下冷却至0℃，然后用EDC(1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐)(Aldirch，0.27g，1.4mmol)。将后来的混合物在0℃下搅拌30分钟，缓慢地升至室温并搅拌过夜。将反应混合物用3N HCl(3×25ml)、盐水(1×25ml)和H2O(1×25ml)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到上述标题化合物。c)、3-(4-氰基-3-环氧乙烷基甲氧基-苯基)-丙酸异丙酯
将实施例9(b)化合物、R-glycidylnosylate(0.33g，1.4mmol)和K2CO3(0.36g，2.6mmol)的丙酮(10ml)溶液在N2下回流过夜。然后将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液真空浓缩，得到上述标题化合物的淡棕色油状物。d)、3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸异丙酯三氟乙酸盐
将实施例9(c)化合物和实施例1(d)化合物溶解在甲苯(12.5ml)中并将混合物在120℃下搅拌过夜。真空除去溶剂，残渣通过制备HPLC(Gilson)纯化，得到上述标题化合物的淡黄色固体。ESMS m/z497[M+H]+。
实施例10制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸戊酯三氟乙酸盐
除了用戊-1-醇代替丙-2-醇外，通过与实施例9相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物的油状物。ESMS m/z 507[M+H]+。
实施例11制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-乙氧基乙酯三氟乙酸盐
除了用2-乙氧基-乙醇代替丙-2-醇外，通过与实施例9相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物的油状物。ESMS m/z509[M+H]+。
实施例12制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲氧基乙酯三氟乙酸盐
除了用2-甲氧基-乙醇代替丙-2-醇外，通过与实施例9相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物的油状物。ESMS m/z495[M+H]+。
实施例13制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸甲基-丁酯三氟乙酸盐
除了用3-甲基-丁-1-醇代替丙-2-醇外，通过与实施例9相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物的油状物。ESMS m/z507[M+H]+。
实施例14制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸1-乙基-丙酯三氟乙酸盐
除了用戊-3-醇代替丙-2-醇外，通过与实施例9相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物的油状物。ESMS m/z 507[M+H]+。
实施例15制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸仲丁酯三氟乙酸盐
除了用丁-2-醇代替丙-2-醇外，通过与实施例9相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物的油状物。ESMS m/z 493[M+H]+。
实施例16制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲氧基-1-甲基-乙酯
除了用1-甲氧基-丙-2-醇代替丙-2-醇外，通过与实施例9相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物的油状物。ESMS m/z509[M+H]+。
实施例17制备2，2-二甲基-丙酸3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酰氧基甲酯盐酸盐
向200mg(0,44mmole)实施例4化合物钠盐的DMF(10ml)悬浮液中加入17mg(0.011mmole)碘化钠、290mg(1.1mmole)18-冠醚-6和100g(0.66mmole)新戊酸氯甲酯。将反应物在27℃下搅拌24小时并浓缩为树胶，通过闪式酯色谱层析在硅胶上用4％MeOH/CH2Cl2洗脱进行纯化，得到100mg油状物，用1N HCl/乙醚进行处理，得到闪式标题化合物(90mg)的白色固体。ESMS m/z 551[M+H]+。
实施例18制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]-苯基}-丙酸(S)-2-氨基-3-甲基-丁酯a)、3-(4-氰基-3-羟基-苯基)-丙酸(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁酯
向0.95g(5mmol)4-氰基-3-羟基苯丙酸、0.74g(5mmol)4-吡咯烷吡啶、1.06g(5.5mmo)EDC-HCl的THF(25ml)溶液中加入1.02g(4.5mmol)叔丁氧基羰基-S-valinol。将反应物搅拌18小时。浓缩反应物，用EtOAc稀释并用3N HCl和5％NaCO3洗涤。将EtOAc提取液浓缩，残渣通过闪式柱色谱层析在硅胶上用10％EtOH/CH2Cl2洗脱，得到1.73g上述标题化合物的黄色油状物。ESMS m/z377[M+H]+。b)、3-[4-氰基-3-((R)-1-环氧乙烷基甲氧基)-苯基]-丙酸(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁酯
向1.73gm(0.0046mole)实施例18(a)化合物的丙酮(25ml)溶液中加入1.19g(4.6mmole)3-硝基苯磺酸(2R)-缩水甘油酯和1.38g(10mmol)K2CO3。将该混合物加热回流18小时，过滤并浓缩，得到上述标题化合物的树胶，不必纯化即可在下一步中使用。c)、3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]苯基}-丙酸(S)-2-氨基-3-甲基丁酯
向0.43gm(1mmol)实施例18(b)化合物的MeCN(25ml)溶液中加入0.19g(1mmol)2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙胺并将该反应物加热回流18小时。将混合物浓缩并用10ml 1∶1 TFA-CH2Cl2溶液处理30分钟。将反应物浓缩，所得到的油状物通过制备HPLC，在50×20mm ID YMCCombiprep ODS柱上，以20ml/分钟的速度用线性梯度的30％MeCN(0.1％TFA)/30％水(0.1％TFA)-70％MeCN(0.1％TFA)洗脱15分钟进行纯化，得到上述标题化合物(25mg)。
实施例19制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]苯基}-丙酸5-氨基-戊酯
除了用叔丁氧基羰基戊醇代替叔丁氧基羰基-S-valinol外，通过与实施例18相同的方法制备标题化合物，得到上述标题化合物(22mg)。ESMS m/z 522[M+H]+。
实施例20制备3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-2-基-1，1-二甲基-乙基氨基)-丙氧基]苯基}-丙酸甲酯盐酸盐
向100mg实施例3混合物的甲醇(100ml)溶液中加入1ml 12MHCl。将反应物加热回流72小时，然后浓缩得到上述标题化合物(77mg)的白色粉末。ESMS m/z 541[M+H]+。
实施例21制备3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1，1-二甲基-2(5，6，7，8-四氢化萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}苯基)-丙酸a)、6-(1，1-二甲基-1-氨基乙基)-1，2，3，4-四氢化萘盐酸盐
在氩气环境下，将1.0g(4.2mmol)6-(1，1-二甲基-1-氨基乙基)萘盐酸盐的冰醋酸(100ml)溶液用PtO2(350mg)处理。将该混合物在Parr震动器中，在50psi的压力下氢化1小时并通过硅藻土塞子过滤。将滤液真空浓缩并从乙醚中浓缩。残渣与乙醚一起研磨，收集白色结晶固体(850mg，85％收率)，用乙醚洗涤并干燥。MS(ES)m/z 204.2(M+H)+；元素分析：C14H21N·HCl·1/2H2O的理论值：C，67.58；H，9.31；N，5.63；实测值：C，67.51；H，9.31；N，5.63。b)、3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢化萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}苯基)-丙酸乙酯
除了用实施例21(a)的胺外，按照实施例3中所描述的方法得到上述标题化合物。MS(ES)m/z 479.6(M+H)+；元素分析：C29H38N2O4·HCl·1/2H2O的理论值：C，66.46；H，7.60；N，5.34；实测值：C，66.11；H，7.66；N，5.24。c)、3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢化萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}苯基)-丙酸
按照实施例4中所描述的方法，将实施例21(b)化合物进行酯水解，得到上述标题化合物。MS(ES)m/z 451.7(M+H)+。
实施例22制备3-(3-氰基-4-{(R)-3-[1，1-二甲基-2-(5，6，7，8-四氢化萘-2-基)-乙基氨基]-2-羟基-丙氧基}苯基)-丙酸
按照实施例3中所描述的方法，用(R)-2-氰基-4-(环氧乙烷基甲氧基)苯丙酸乙酯和实施例2(a)的胺得到上述标题化合物。MS(ES)m/z451.4(M+H)+。
实施例233-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)丙氧基]-苯基}-丙酸a)、5-(2-甲基-丙烯基)-二氢化茚
在氩气下，在火焰干燥的烧瓶中，将碘化异丙基三苯基膦(6.48g，15mmol)的无水THF(30ml)溶液冷却至0℃。然后通过注射器加入n-BuLi(2.5M)的己烷(6.0ml)溶液。该反应混合物在0℃下搅拌45分钟。然后滴加2，3-二氢-1H-茚-5-甲醛(carboxaldehyde)(J.Med.Chem.1993，36，3700-3706)(1.7，12.0mmol)的THF(20ml)溶液并在氩气室温下搅拌过夜。将反应物过滤，滤液真空浓缩，残渣通过闪式柱色谱层析(乙酸乙酯/己烷，1∶99)纯化，得到上述标题化合物的淡黄色油状物91.7g，67％)。b)、N-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基)-乙酰胺
按照实施例1(c)中所描述的方法得到上述标题化合物的结晶固体。熔点130-131℃(乙酸乙酯)；MS(ES)m/z 463.7(2M+H)+，322.7(M+H)+；元素分析：C15H21NO的理论值：C，77.85；H，915；N，6.05；实测值：C，77.54；H，9.09；N，6.03。c)、2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙胺
按照实施例1(d)中所描述的方法得到上述标题化合物。MS(ES)m/z 190.6(M+H)+。d)、3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)丙氧基]-苯基]-丙酸乙酯盐酸盐
按照实施例3中所描述的方法，用实施例23(c)的胺得到上述标题化合物。MS(ES)m/z 465.8(M+H)+；元素分析：C28H36N2O4·HCl·3/4H2O的理论值：C，65.34；H，7.44；N，5.44；实测值：C，65.11；H，7.66；N，5.25。e)、3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-二氢化茚-5-基-1，1-二甲基-乙基氨基)丙氧基]-苯基}-丙酸
按照实施例4中所描述的方法得到标题化合物。MS(ES)m/z437.8(M+H)+。
实施例24非胃肠道用制剂
通过在加热下，将适宜量式(I)化合物溶解在聚乙二醇中制备非胃肠道给药的药物组合物。该溶液用注射用水稀释(至100ml)。然后通过0.22微米膜滤器过滤灭菌并密封在无菌容器中。
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