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1、10申请公布号CN104093738A43申请公布日20141008CN104093738A21申请号201380007553322申请日2013013061/592,83720120131US61/644,03820120508US61/692,92520120824USC07K16/18200601A61K39/395200601A61P29/0020060171申请人瑞泽恩制药公司地址美国纽约州72发明人L麦克唐纳M高MR莫拉NM阿莱桑德里哈贝尔ML拉克鲁瓦福拉丽什74专利代理机构北京市中咨律师事务所11247代理人黄革生林柏楠54发明名称抗ASIC1抗体及其使用57摘要本发明提供了与表。
2、达酸敏感离子通道1ASIC1的细胞特异性结合的抗体及其抗原结合片段。依照本发明的某些实施方案，该抗体抑制表达人ASIC1的细胞内酸诱导的ASIC1介导的离子流。本发明之抗体可用于治疗疼痛，包括与外科手术及各种疾病和失调相关的疼痛。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014073186PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0237842013013087PCT国际申请的公布数据WO2013/116296EN2013080851INTCL权利要求书2页说明书34页序列表103页附图4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书34页序列表103页附图4。
3、页10申请公布号CN104093738ACN104093738A1/2页21与细胞表面表达的ASIC1序列号401特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段。2如权利要求第1项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与细胞表面表达的ASIC1特异性结合，以FACS荧光激活细胞分类术测量的EC50值为1NM或以下。3如权利要求第1项或第2项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段抑制表达人ASIC1的细胞内酸诱导的ASIC1介导的离子流。4如权利要求第3项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段于约50至约60的PH值在表达ASIC1的细胞内抑制酸诱导的细胞。
4、内钙通量，以FLIPR检测法测量的IC50值为6NM或以下。5如权利要求第3项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段于约50至约60的PH值抑制酸诱导的离子流，以膜片钳分析法测量的IC50值为10NM或以下。6分离的抗体或其抗原结合片段，其在与细胞表面表达的ASIC1结合过程中与包含HCVR/LCVR序列对的参照抗体竞争，该序列对选自如下序列对组2/10；34/42；50/58；66/74；114/122；130/138；146/154；162/170；194/202；210/218；242/250；258/266；以及274/282。7如权利要求第6项所述之抗体或其抗原结合片。
5、段，其中该抗体或其抗原结合片段抑制表达人ASIC1的细胞内酸诱导的ASIC1介导的离子流。8与细胞表面表达的ASIC1序列号401特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含A重链可变区HCVR的互补决定区CDR，该重链可变区含有选自下列序列组的氨基酸序列2、34、50、66、114、130、146、162、194、210、242、258和274；以及B轻链可变区LCVR的CDR，该轻链可变区含有选自下列序列组的氨基酸序列10、42、58、74、122、138、154、170、202、218、250、266以及282。9如权利要求第8项所述之分离的抗体或其抗原结合片段。
6、，其中该抗体或其抗原结合片段包含选自下列序列对组的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR2/10；34/42；50/58；66/74；114/122；130/138；146/154；162/170；194/202；210/218；242/250；258/266；以及274/282。10如权利要求第8项所述之分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段分别包含HCDR1HCDR2HCDR3LCDR1LCDR2LCDR3结构域，其选自下列序列组468121416；363840444648；525456606264；687072767880；116118120124126128；。
7、132134136140142144；148150152156158160；164166168172174176；196198200204206208；212214216220222224；244246248252254256；260262264268270272；以及276278280284286288。11一种与细胞表面表达的ASIC1序列号401特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含A重链可变区HCVR，其含有选自下列序列权利要求书CN104093738A2/2页3组的氨基酸序列2、34、50、66、114、130、146、162、194、210、242、。
8、258和274；以及B轻链可变区LCVR，其含有选自下列序列的氨基酸序列10、42、58、74、122、138、154、170、202、218、250、266以及282。12如权利要求第11项所述之分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含选自下列序列对组的HCVR/LCVR氨基酸序列对2/10；34/42；50/58；66/74；114/122；130/138；146/154；162/170；194/202；210/218；242/250；258/266；以及274/282。13含有如权利要求第1至12项中任何一项所述之抗体或抗原结合片段以及药学上可接受载体或稀释剂的医药组合。
9、物。14含有如权利要求第1至12项中任何一项所述之抗体或抗原结合片段的医药组合物，用于治疗或减轻人类患者的疼痛。15如权利要求第14项所述之医药组合物，其中所述的疼痛是伤害性疼痛或内脏疼痛。16如权利要求第15项所述之药物组合物，其中所述之疼痛与选自一组包括炎症、手术后切口、神经病变、骨折、烧伤、骨质疏松性骨折、骨癌、痛风、偏头痛和纤维肌痛等病症相关。17如权利要求第14项所述之医药组合物，其中所述的疼痛是与癌症相关的疼痛或化疗引起的疼痛。18一种治疗或减轻疼痛的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用一种与细胞表面表达的ASIC1序列号401特异性结合的抗体或其抗原结合片段。19如权利要求第18。
10、项所述之方法，其中该抗体或其抗原结合片段包含选自下列序列对组的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR2/10；34/42；50/58；66/74；114/122；130/138；146/154；162/170；194/202；210/218；242/250；258/266；以及274/282。20如权利要求第19项所述之方法，其中该抗体或其抗原结合片段分别包含HCDR1HCDR2HCDR3LCDR1LCDR2LCDR3结构域，其选自下列序列组468121416；363840444648；525456606264；687072767880；116118120124126128；1321。
11、34136140142144；148150152156158160；164166168172174176；196198200204206208；212214216220222224；244246248252254256；260262264268270272；以及276278280284286288。权利要求书CN104093738A1/34页4抗ASIC1抗体及其使用发明领域0001本发明涉及对人ASIC1具有特异性的抗体及其抗原结合片段，以及其使用方法。背景技术0002酸敏感离子通道ASIC是在中枢和外周神经系统表达的质子门控阳离子通道。人类的ASIC家族包括ASIC1、ASIC2、ASIC。
12、3和ASIC4等亚单位，它们在神经细胞膜内排列成同源或异源多聚体离子通道。ASIC1、ASIC2和ASIC3显著地表达在小型和中型伤害性感觉神经元内，该伤害性感觉神经元能够检测有害的化学刺激、热刺激以及高阈值机械刺激。ASIC2和ASIC3也表达在大型、基本上相当于低阈值机械性刺激感受器的神经元内。0003ASIC可让NA和CA2离子通过，且被外部PH68至40的PH变化激活。据信ASIC在感觉局部酸中毒过程中起重要作用。局部组织酸中毒是疼痛和炎症的特点标志，发炎的组织经常显示出低PH值低达约47。ASIC的阻断已被建议作为治疗各种失调和病症的方法。ASIC1的阻断尤其被建议为治疗疼痛、神经退。
13、行性疾病以及精神疾病等各种病症的方法。0004ASIC1的药理学抑制剂包括特异性抑制ASIC1同聚体的狼蛛肽PSALMOTOXIN1普萨莫毒素PCTX1，以及小分子、非选择性ASIC抑制剂阿米洛利和A317567。业已显示，从海葵分离出的40种氨基酸肽毒素APETX2能抑制ASIC3同聚体以及ASIC3/1和ASIC3/2异聚体。0005目前，尚无已知能特异性阻断ASIC的抗体。因此，本领域需要可用于治疗ASIC信号介导的疾病和病症的新型ASIC抑制剂，如抗ASIC1抗体。发明概述0006本发明提供了与人ASIC1特异性结合的抗体，包括例如与细胞表面表达的ASIC1特异性结合的抗体。依照某些实。
14、施方案，本发明之抗体抑制表达人ASIC1的细胞内酸诱导的ASIC1介导的离子流。除其他用途之外，本发明之抗体还可用于抑制ASIC1介导的信号以及治疗由ASIC1活性和/或信号所引起的或与其相关的疾病和失调。例如，本发明之抗体可施予患者以治疗或减轻疼痛及相关病症。0007本发明之抗体可以是全长的例如IGG1或IGG4抗体，或可仅包含一个抗原结合部分例如FAB、FAB2或SCFV片段，并可加以修饰以实现其功能，例如消除残余的效应子功能REDDYETAL,2000,JIMMUNOL16419251933。0008本发明还提供了一种包含一个重链可变区HCVR的抗体或抗体的抗原结合片段，该重链可变区含有。
15、一个选自下列一组序列的氨基酸序列2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370和386，或一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列。0009本发明还提供了一种包含一个轻链可变区LCVR的抗体或抗体的抗原结合片段，该轻链可变区含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、3。
16、78和394，或说明书CN104093738A2/34页5一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列。0010本发明还提供了一种抗体或其抗原结合片段，其包含一个选自下列一组序列对的HCVR和LCVRHCVR/LCVR序列对2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、3。
17、70/378及386/394。0011本发明还提供了一种抗体或抗体的抗原结合片段，其包含一个重链CDR3HCDR3结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344、360、376和392，或一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列；以及一个轻链CDR3LCDR3结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、。
18、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368、384和400，或一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列。0012在某些实施方案中，该抗体或抗体的抗原结合片段包含一个选自下列一组序列对的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对8/16、24/32、40/48、56/64、72/80、88/96、104/112、120/128、136/144、152/160、168/176、184/192、200/208、216/224、232/240、248/256、264/272、280/288、296/304、312/320、328。
19、/336、344/352、360/368、376/384及392/400。0013本发明还提供了一种抗体或其片段，其进一步包含一个重链CDR1HCDR1结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356、372和388，或一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列；以及一个重链CDR2HCDR2结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列6、22、38、54、70、86、102、11。
20、8、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358、374和390，或一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列；以及一个轻链CDR1LCDR1结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364、380和396，或一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列；以及一个轻链CDR2LCD。
21、R2结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366、382和398，或一个与其基本上相似且具有至少90、至少95、至少98或至少99序列同一性的序列。0014本发明之某些非限制性、典型的抗体和抗原结合片段分别包含HCDR1HCDR2HCDR3LCDR1LCDR2LCDR3结构域，其含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列468121416如H1M6712N；202224283032如H1M6716N；363840444648。
22、如H1M6718N；525456606264如H1M7101N；687072767880如H2M7103N；848688929496如H3M6713N；100102104108110112如H3M6715N；116118120124126128如H3M6720N；132134136140142144如H3M6721N；148150152156158160如H3M6721N2；说明书CN104093738A3/34页6164166168172174176如H3M6726N；180182184188190192如H3M6760N；196198200204206208如H3M7102N；212214。
23、216220222224如H3M7118N；228230232236238240如H4H6362P；244246248252254256如H4H6363P；260262264268270272如H4H6364P；276278280284286288如H4H6366P；292294296300302304如H4H6372P；308310312316318320如H4H6374P；324326328332334336如H4H6375P；340342344348350352如H4H6379P；356358360364366368如H4H6380P；372374376380382384如H4H6381。
24、P；以及388390392396398400如H4H6383P。0015在一个相关的实施方案中，本发明包括一种与ASIC1例如细胞表面表达的ASIC1特异性结合的抗体或抗体的抗原结合片段，其中该抗体或抗体片段包含重链和轻链CDR区，该重链和轻链CDR区位于选自下列一组序列的重链和轻链可变区HCVR/LCVR序列内2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/3。
25、14、322/330、338/346、354/362、370/378及386/394。鉴定HCVR/LCVR氨基酸序列内CDR区的方法和技术是本领域内众所周知的，并可用于鉴定本文所公开的特定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR区。可用于鉴定CDR区边界的典型的规则包括例如KABAT定义、CHOTHIA定义以及ABM定义。总的来说，KABAT定义是基于序列可变性，CHOTHIA定义是基于结构环区的位置，ABM定义则是KABAT定义与CHOTHIA定义两者之间的折衷。参阅例如KABAT,“SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTEREST“,NATIONAL。
26、INSTITUTESOFHEALTH,BETHESDA,MD1991；ALLAZIKANIETAL,JMOLBIOL2739279481997；以及MARTINETAL,PROCNATLACADSCIUSA86926892721989。公共数据库也可供利用，以鉴定抗体内的CDR序列。0016在另一方面，本发明提供了编码抗ASIC1抗体或其片段的核酸分子。本发明还包括载有本发明之核酸的重组表达载体以及引入这类载体的宿主细胞，并包括一些生产抗体的方法，通过在允许生产抗体的条件下培养宿主细胞，以及回收所生产的抗体。0017在一个实施方案中，本发明提供了一种抗体或其片段，其包含一个由选自下列一组序列的。
27、核酸序列编码的HCVR1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369和385，或一个与其基本上相同且具有至少90、至少95、至少98或至少99同源性的序列。0018本发明还提供了一种抗体或其片段，其包含一个由选自下列一组序列的核酸序列编码的LCVR9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、249、265、281、297、313、329、345、361、377和393，或一个与其基本上相同且具有至少90、至。
28、少95、至少98或至少99同源性的序列。0019本发明还提供了一种抗体或抗体的抗原结合片段，其包含一个由一个选自下列一组序列的核苷酸序列编码的HCDR3区7、23、39、55、71、87、103、119、135、151、167、183、199、215、231、247、263、279、295、311、327、343、359、375和391，或一种与其基本上相同且具有至少90、至少95、至少98或至少99同源性的序列；以及一个由一个选自下列一组序列的核苷酸序列编码的LCDR3区15、31、47、63、79、95、111、127、143、159、175、191、207、223、239、255、271。
29、、287、303、319、335、351、367、383和399，或一个与其基本上相同且说明书CN104093738A4/34页7具有至少90、至少95、至少98或至少99同源性的序列。0020本发明还提供了一种抗体或其片段，其进一步包含一个由选自下列一组序列的核苷酸序列编码的HCDR1区3、19、35、51、67、83、99、115、131、147、163、179、195、211、227、243、259、275、291、307、323、339、355、371和387，或一种与其基本上相同且具有至少90、至少95、至少98或至少99同源性的序列；以及一个由一个选自下列一组序列的核苷酸序列编码的。
30、HCDR2区5、21、37、53、69、85、101、117、133、149、165、181、197、213、229、245、261、277、293、309、325、341、357、373和389，或一种与其基本上相同且具有至少90、至少95、至少98或至少99同源性的序列；以及一个由一个选自下列一组序列的核苷酸序列编码的LCDR1区11、27、43、59、75、91、107、123、139、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379和395，或一种与其基本上相同且具有至少90、至少95、至少98或至少99同源性的序列。
31、；以及一个由一个选自下列一组序列的核苷酸序列编码的LCDR2区13、29、45、61、77、93、109、125、141、157、173、189、205、221、237、253、269、285、301、317、333、349、365、381和397，或一个与其基本上相同且具有至少90、至少95、至少98或至少99同源性的序列。0021依照某些实施方案，抗体或其片段包含由如下核酸序列编码的重链和轻链CDR序列1和9如H1M6712N、17和25如H1M6716N、33和41如H1M6718N、49和57如H1M7101N、65和73如H2M7103N、81和89如H3M6713N、97和105如。
32、H3M6715N、113和121如H3M6720N、129和137如H3M6721N、145和153如H3M6721N2、161和169如H3M6726N、177和185如H3M6760N、193和201如H3M7102N、209和217如H3M7118N、225和233如H4H6362P、241和249如H4H6363P、257和265如H4H6364P、273和281如H4H6366P、289和297如H4H6372P、305和313如H4H6374P、321和329如H4H6375P、337和345如H4H6379P、353和361如H4H6380P、369和377如H4H6381P、3。
33、85和393如H4H6383P。0022本发明包括具有一种经修饰的糖基化模式的抗ASIC1抗体。在某些应用中，为除去不合乎需要的糖基化位点所进行的修饰，或寡糖链上缺乏岩藻糖基的抗体，也许是有益的。0023在另一方面，本发明提供了一种由与ASIC1例如细胞表面表达的ASIC1特异性结合的重组人源抗体或其片段以及一种药学上可接受载体组成的医药组合物。在一个相关的方面，本发明之特点是一种抗ASIC1抗体和第二种治疗剂结合的医药组合物。在一个实施方案中，上述第二种治疗剂是可与一种抗ASIC1抗体有益地结合的任何药剂。可与一种抗ASIC1抗体有益地结合的典型的药剂包括，但不限于，抑制ASIC1活性的其他。
34、药剂包括其他抗体或其抗原结合片段、肽抑制剂、小分子拮抗剂等和/或一些不直接与ASIC1结合但干扰、阻断或减弱细胞内ASIC1介导的离子流的药剂。0024在另一个方面，本发明提供了一些用本发明之抗ASIC1抗体或抗体的抗原结合片段抑制ASIC1介导的离子流的方法，其中该治疗方法包括施用一种治疗有效量的含有本发明之抗体或抗体的抗原结合片段的医药组合物。所治疗的失调是通过除去、抑制或降低ASIC1介导的离子流而得到改善、减轻、抑制或预防的任何疾病或病症。本发明之抗ASIC1抗体或抗体片段可以阻断酸诱导的ASIC1介导的离子流，或抑制ASIC1的信号活性。0025本发明还包括将本发明之抗ASIC1抗体。
35、或抗体的抗原结合片段用于制造一种药说明书CN104093738A5/34页8物，以治疗患者与ASIC1介导的离子流相关或由其引起的疾病或失调。0026在审阅随后的详细说明的过程中，其它实施方案将变得明显。附图简要说明0027图1描绘了用抗ASIC1抗体H1M6718N或同型对照抗体处理的小鼠，当其尾巴亚图A或腓肠肌亚图B被器械钳夹之后的退缩阈值。其结果以钳夹后的退缩阈值表示，以克为单位每组小鼠的平均值SEM。0028图2显示了在以抗ASIC1抗体H1M6718N或同型对照抗体处理的小鼠中，以酸性盐水诱导的肌肉痛敏反应的退缩阈值从基线的百分比变化。0029图3亚图A和B显示了在以抗ASIC1抗体。
36、H1M6718N，10或40MG/KG亚图A；或H4H6721N210或30MG/KG亚图B或同型对照抗体处理的小鼠中，以角叉胶聚糖诱导的肌肉痛敏反应的退缩阈值从基线的百分比变化。0030图4显示了在分别用30MG/KG皮下同型对照抗体、30MG/KG皮下H1M6718N，或100MG/KG皮下加巴喷丁治疗的经紫杉醇处理的小鼠中，紫杉醇诱导的触诱发痛反应随时间的变化。以用VONFREY纤维测量的退缩阈值G表示结果如实施例10所述。详细说明0031在说明本发明之前先要声明，应该理解，本发明并不局限于所说明的具体方法和实验条件，因为这些方法和条件是可以改变的。还应理解，本文所用的术语仅出于说明具体。
37、实施方案之目的，并非意在限制本发明，因为本发明之范围仅受所附权利要求书的限制。0032除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语均将具有与本发明所属领域专业人士通常理解的相同含义。本文所用的术语“大约”，当用于列出的某一具体数值时，意为该数值可能在与所列数值相差不大于1的范围内变化。例如，本文所用的措词“大约100”，包括99和101以及这两者之间的所有数值例如991、992、993、994等。0033尽管与本文所述之方法和材料类似或相当的任何方法和材料都可用于本发明之实施或试验，但现在描述的是首选的方法和材料。定义0034本文所用的措词“ASIC1“和“ASIC1片段“是指人ASIC1蛋白或。
38、片段，除非说明是源自非人类物种例如“小鼠ASIC1“、“小鼠ASIC1片段“、“猴ASIC1“、“猴ASIC1片段“等。人ASIC1含有如401号序列所示的氨基酸。本文所用的措词“ASIC1”包括ASIC1胞外域的可溶性片段例如，包含存在于401号序列的第63至第424个氨基酸内至少30个相邻氨基酸或由其构成的肽，以及细胞表面表达的ASIC1如下文所定义的术语。0035本文所用的术语“与ASIC1结合的抗体”或“抗ASIC1抗体”包括与一个ASIC1蛋白的可溶性片段例如ASIC1胞外域的一部分和/或细胞表面表达的ASIC1结合的抗体及其抗原结合片段。“细胞表面表达的ASIC1”这一措词意为在体。
39、外或体内被表达在细胞表面的一个或多个ASIC1蛋白，使得该ASIC1蛋白的至少一部分例如401号序列中第63至第424个氨基酸暴露于细胞膜的胞外侧且让抗体的抗原结合部分易于触及。“细胞表面表达的ASIC1”包括在细胞膜内功能性ASIC1离子通道的情況下所包含的ASIC1蛋白。在某些情况下，“细胞表面表达的ASIC1”是一种作为异源多聚体的一部分表达在细胞表面的ASIC1蛋白例如ASIC1/2、ASIC1/3或ASIC1/4异源多聚体。在另一些情况下，“细胞表面表达的ASIC1”是一种作为同源多聚体的一部分表达在细胞表面的ASIC1蛋白。此外，“细说明书CN104093738A6/34页9胞表面。
40、表达的ASIC1”可包含通常表达ASIC1蛋白的细胞表面上所表达的ASIC1蛋白，或由其构成。或者，“细胞表面表达的ASIC1”可包含通常不表达其表面人ASIC1蛋白的细胞之表面所表达的ASIC1蛋白，但经人为工程改造表达其表面的ASIC1蛋白，或由这样的ASIC1蛋白构成。0036本文所用的术语“抗体”意为包含至少一个互补决定区CDR的任何抗原结合分子或分子复合体，该互补决定区与一个特定的抗原如ASIC1特异性地结合或与其相互作用。术语“抗体”包括由四条多肽链，即两条重H链和两条轻L链，以二硫键相互连接而组成的免疫球蛋白分子，及其多聚体例如IGM。每条重链均包含一个重链可变区本文中缩写为HC。
41、VR或VH和一个重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链均包含一个轻链可变区本文中缩写为LCVR或VL和一个轻链恒定区。该轻链恒定区包含一个结构域CL1。VH和VL区可进一步分为被称为互补决定区CDR的高变区，其中散布着较保守的称为框架区FR的区域。每个VH和VL均由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。在本发明的不同实施方案中，抗ASIC1抗体或其抗原结合部分的FR可能与人类种系序列相同，或可能经过天然或人工的修饰。一个氨基酸共有序列可根据两个或两个以上CDR的并排分析而定义。003。
42、7本文所用的术语“抗体”还包括整个抗体分子的抗原结合片段。本文所用的抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等术语，包括与一个抗原特异性结合而形成复合体的任何天然产生的、可以酶促方式获得的、合成的或基因改造的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可以利用任何适宜的标准技术，例如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变区和恒定区可选的DNA之操纵和表达的重组基因改造技术，从例如完整的抗体分子衍生。这样的DNA是已知的及/或很容易从例如市售来源、DNA库包括例如噬菌体抗体库获得，或可以合成。该DNA可以测序且以化学方法或分子生物学技术加以操纵，例如将一个或多个可变区和/或恒定区排列成一种适宜的构型，或引入密。
43、码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或删除氨基酸等。0038抗原结合片段的非限制性实例包括IFAB片段；IIFAB2片段；IIIFD片段；IVFV片段；V单链FVSCFV分子；VIDAB片段；以及VII由模拟该抗体高变区例如一个孤立的互补决定区CDR，如CDR3肽或一个FR3CDR3FR4构型约束肽的氨基酸残基组成的最小识别单位。本文所用的“抗原结合片段”这一表达还包括其它工程改造的分子，如结构域特异性抗体、单域抗体、结构域删除的抗体、嵌合抗体、CDR嫁接的抗体、双抗体、三聚抗体、四聚抗体、微型抗体、纳米抗体例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等、小模块免疫药物SMIP，以及鲨鱼可变IGNAR域。00。
44、39一个抗体的抗原结合片段通常会包含至少一个可变区。可变域可以是任何大小或具有任何氨基酸组成，且通常会包含至少一个邻近一个或多个框架序列或位于其中的CDR。在含有与VL区相关联之VH区的抗原结合片段中，该VH区和VL区的相对位置可为任何适宜的排列。例如，该可变区可以是二聚化的且含有VHVH、VHVL或VLVL二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可含有一个单一的VH区或VL区。0040在某些实施方案中，一个抗体的抗原结合片段可含有与至少一个恒定区共价连接的至少一个可变区。在本发明之抗体的抗原结合片段内可发现的可变区和恒定区说明书CN104093738A7/34页10的非限制性典型的构型包括IVHCH。
45、1；IIVHCH2；IIIVHCH3；IVVHCH1CH2；VVHCH1CH2CH3；VIVHCH2CH3；VIIVHCL；VIIIVLCH1；IXVLCH2；XVLCH3；XIVLCH1CH2；XIIVLCH1CH2CH3；XIIIVLCH2CH3；以及XIVVLCL。在可变区和恒定区的任何构型中，包括上述任何典型的构型中，该可变区和恒定区可直接相互连接或可通过一个完整或部分的铰链区或连接区连接。一个铰链区可含有至少2个例如5、10、15、20、40、60个或以上氨基酸，其在一个单一肽分子中相邻的可变区和/或恒定区之间形成一种柔性或半柔性连接。此外，本发明之抗体的抗原结合片段可包含上述可变区。
46、和恒定区任何构型的同二聚体或异二聚体或其它多聚体，该可变区和恒定区以非共价键相互连接和/或与一个或多个单一VH区或VL区例如通过二硫键连接。0041如同完整的抗体分子，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性例如双特异性。一个抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变区，其中每个可变区都能够特异性地与另一个抗原或同一抗原的不同表位结合。对于任何多特异性抗体形式，包括本文所公开的典型的双特异性抗体形式，均可利用本领域内可利用的常规技术，使其适应于涉及本发明之抗体的抗原结合片段的用途。0042本文所用的术语“人源抗体”意在包括含有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明之人源。
47、抗体可包括非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基例如通过体外随机诱变或位点特异性诱变，或通过体内体细胞突变所引入的突变，例如可在CDR中尤其是在CDR3中包括上述氨基酸残基。但是，本文所用的术语“人源抗体”并不意图包括这样的抗体，其中衍生自另一哺乳动物物种如小鼠的CDR序列被嫁接到人类框架序列上。0043本文所用的术语“重组人源抗体”意在包括所有以重组方法制备、表达、产生或分离的人源抗体，例如用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体将在下文中进一步说明，从重组的、组合人源抗体库分离的抗体将在下文中进一步说明，从人类免疫球蛋白基因转基因动物例如小鼠分离的抗体参阅例如TAYLORETAL199。
48、2NUCLACIDSRES2062876295，或者以任何其他涉及将人类免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的方法所制备、表达、产生或分离的抗体。这类重组人源抗体含有衍生自人类种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。但是，在某些实施方案中，这类重组人源抗体经受体外诱变或者，当使用人类IG序列转基因动物时，经受体内体细胞诱变，从而使得该重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列成为这样的序列它们虽然衍生自人类种系VH序列和VL序列并与它们相关，但也许并不天然地以活体状态存在于人源抗体种系之中。0044人源抗体可以两种与铰链异质性相关的形式存在。在第一种形式中，一个免疫球蛋白分子包含一个分子量约为1501。
49、60KDA的稳定的四链构建物，其中二聚体由一根链间重链二硫键连接在一起。在第二种形式中，该二聚体不是由链间二硫键连接在一起，而是一个由共价偶联的轻链和重链半抗体组成的分子量约为7580KDA的分子。这些形式的分离一直极为困难，甚至在亲和纯化之后也是如此。0045第二种形式在各种完整IGG同型中的出现频率，是由于但不限于与抗体的铰链区同型相关的结构差异。人类IGG4铰链的铰链区内单个氨基酸替换可将第二种形式ANGALETAL1993MOLECULARIMMUNOLOGY30105的出现频率显著地降低到利用人类IGG1铰链时通常观察到的水平。本发明包括在铰链区、CH2区或CH3区中含有一个或多个突变的抗说明书CN104093738A108/34页11体；所述突变可能是合乎需要的，例如在生产中用于提高所需抗体形式的产率。0046本文所用的“分离的抗体”意为从其自然环境的至少一个组分中识别、分离和/或回收的抗体。例如，从一个生物体的至少一个组成部分或从抗体自然存在或自然产生的一种组织或细胞分离或移除的抗体，就是一种符合本发明目的之“分离的抗体”。“分离的抗体”也包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是经过至少一个纯化或分离步骤的抗体。依照某些实施方案，分离的。