取代的降冰片基氨基衍生物，它们的制备方法，用作 药物和诊断剂的用途以及包含它们的药物 本发明涉及取代的降冰片基氨基衍生物，该化合物具有式I的外型的氮与内型稠合的五，六或七元环，或具有式Ia的外型地氮与外型稠合的五，六或七元环，
其中：
A为(C1-C4)-亚烷基；
S1为自由电子对或(C1-C4)-烷基；
S2为(C1-C4)-烷基或H；
其中，如果S1和S2为烷基，在所得基团[-N+(S1S2)-X-]中的X-对应于药学上可接受的阴离子或三氟乙酸盐；
B为饱和或不饱和的五，六或七元碳环，此碳环可以被以下基团单取代或彼此独立地多取代：氧，羟基，(C1-C4)-烷氧基和(C1-C4)-烷基；
而
R1，R2，R3，R4和R5彼此独立地为H，OH，F，Cl，Br，I，CN，NO2，脒基，-CO2R(11)，-CONR(11)R(12)，-SOrR(11)，-SOsNR(11)-R(12)，(C1-C4)-烷基，(C1-C4)-烷氧基，(C1-C4)-烷氧基-(C1-C4)-烷基，(C1-C4)-烷氧基-(C1-C4)-烷氧基，羟基-(C1-C4)-烷基，(C3-C7)-环烷氧基或苯氧基，
其中，苯基未被取代或被至多三个取代基取代，这些取代基彼此独立地为F，Cl，Br或甲氧基；
氨基，(C1-C4)-烷基氨基，二-(C1-C4)-烷基氨基，氨基-(C1-C4)-烷基，二-(C1-C4)-烷基氨基-(C1-C4)-烷基，(C1-C4)-烷基氨基-(C1-C4)-烷基，
其中，这些烷基中的一些或全部的氢原子可被氟取代；
R11和R12
彼此独立地为H或(C1-C4)-烷基，其中，这些烷基中的一些或全部的氢原子可被氟取代；
r为0，1或2；
s为1或2；
或者
R1和R2，R2和R3，R3和R4或R4和R5在每一种情况下一起形成基团-O-(CH2)n-O-；
n为1或2；
和
每种情况剩余的基团R1，R2，R3，R4或R5：
彼此独立地为H，OH，F，Cl，Br，I，CN，NO2，脒基，-CO2R(11)，-CONR(11)R(12)，-SOrR(11)，-SOsNR(11)-R(12)，(C1-C4)-烷基，(C1-C4)-烷氧基，(C1-C4)-烷氧基-(C1-C4)-烷基，(C3-C7)-环烷氧基，羟基-(C1-C4)-烷基，氨基，(C1-C4)-烷基-氨基，二-(C1-C4)-烷基氨基，氨基-(C1-C4)-烷基，二-(C1-C4)-烷基氨基-(C1-C4)-烷基，(C1-C4)-烷基氨基-(C1-C4)-烷基，
其中，这些烷基中的一些或全部的氢原子可被氟取代；
R11和R12
彼此独立地为H或(C1-C4)-烷基，
其中，这些烷基中的一些或全部的氢原子可被氟取代；
r为0，1或2；
s为1或2；
其中苄基(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺除外，
和其药学上可接受的盐和三氟乙酸盐。
优选的化合物具有式I的外型的氮和内型稠合的五或六元环，或具有式Ia的外型的氮和外型稠合的五或六元环，其中：
A为(C1-C2)-亚烷基；
S1为自由电子对或甲基；
S2为H；
B为饱和或不饱和五或六元碳环；
R1，R2，R3，R4和R5彼此独立地为H，氨基，羟基甲基，OH，甲氧基，F，Cl，Br或碘；
或
R2和R3一起形成-O-CH2-O-；
和
剩余基团R1，R4和R5彼此独立地为H，OH，F，Cl，Br，I，CN，NO2，(C1-C2)-烷氧基，氨基，(C1-C2)-烷基氨基或二-(C1-C2)-烷基氨基，
其中，这些烷基中的一些或全部的氢原子可被氟取代；
其中苄基(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺除外，和其药学上可接受的盐或三氟乙酸盐。
特别优选具有式I的外型的氮与内型稠合的五或六元环，或具有式Ia的外型的氮与外型稠合的五或六元环的化合物，其中：
A为(C1-C2)-亚烷基；
S1为自由电子对；
S2为H；
B为饱和或不饱和五或六元碳环；
R1，R3和R5为氢；
和R2和R4彼此独立地为H，甲氧基，F或Cl；
或
R2和R3一起形成-O-CH2-O-；
和
R1，R4和R5为氢；
其中苄基(八氢)-4，7-亚甲基茚-5-基)胺除外，
和其药学上可接受的盐或三氟乙酸盐。
特别优选以下化合物，这些化合物具有式I的外型的氮和内型稠合的五或六元环，或者具有式Ia的外型的氮和外型稠合的五元环：
外型/内型-(3-氯苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(3-氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-苯并[1，3]二氧戊环-5-基甲基(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺，
外型/内型-(外消旋)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺，
外型/内型-(+)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(-)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-[1-(3-甲氧基苯基)乙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺，
外型/内型-(3-氟苄基)(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(3-氟苄基)(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)(3-甲氧基苄基)胺，
外型/内型-(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)(3-甲氧基苄基)胺，
外型/内型-(十氢-1，4-亚甲基萘-2-基)(3-甲氧基苄基)-胺，
外型/内型-(3，5-二氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/外型-(3-氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，和
外型/外型-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
和其药学上可接受的盐或三氟乙酸盐。
最优选以下化合物，这些化合物具有式I的外型的氮和内型稠合的五或六元环：
外型/内型-(3-氯苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(3-氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(3-氟苄基)(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(3-氟苄基)(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-苯并[1，3]二氧戊环-5-基甲基(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺，
外型/内型-(外消旋)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(+)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
外型/内型-(十氢-1，4-亚甲基萘-2-基)(3-甲氧基苄基)-胺，
外型/内型-(-)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
和
外型/内型-(3，5-二氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺，
和其药学上可接受的盐或三氟乙酸盐。
适宜的酸加成盐为所有药学上可接受的酸的盐，如卤化物，特别是盐酸盐，乳酸盐，硫酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，乙酸盐，磷酸盐，甲磺酸盐，对甲苯磺酸盐，己二酸盐，延胡索酸盐，葡萄糖酸盐，谷氨酸盐，磷酸甘油酯，马来酸盐和扑酸盐。该组还对应于药学上可接受的阴离子。但是三氟乙酸盐也是适宜的。
如果式I或Ia的化合物含有一或多个不对称中心，则它们可以是S-或R-构型。这些化合物可以光学异构体，非对映异构体，外消旋体或其混合物存在。但是，氨基取代基必须在外型位置，而环必须是内型或外型稠合的。
所述的烷基或亚烷基可以是直链或支链的。
本发明进一步涉及式I或Ia的化合物的制备方法，该方法包括：
a)a)使式II或IIa的化合物
与式III的化合物在适宜的还原剂和可选择的路易斯酸存在下直接反应得到式I或Ia的化合物
其中S1，S2，B，R1，R2，R3，R4和R5如上述，彼此独立地，A’为键或(C1-C3)-烷基，A”为H或(C1-C3)-烷基，且A’和A”与羰基的碳原子一起代表与A相同的碳原子数；
b)将由式II或IIa和III的化合物形成的式IV或IVa的中间产物分离，
其中，如果S1为(C1-C4)-烷基，则形成与抗衡离子如氯化物或甲苯磺酸盐有关的鎓氮，
然后用适宜的还原剂将中间产物转化成式I或Ia的化合物，
或者
c)使式II或IIa的化合物与式V的烷化剂反应
其中，U为可亲核取代的基团-如氯，溴和碘，还为甲磺酸盐，甲苯磺酸盐或三氟甲磺酸盐或其它容易离去的基团，而其它基团如以上定义，但其中的与U结合的碳原子对应于羰基的碳原子，
该反应优选在非亲核性碱如二异丙基乙基胺存在下进行，
或者
d)将式VI或VIa的酰胺还原成对应的胺
其中，A*为键或(C1-C3)-烷基，而其它基团如以上定义，
或者
e)将式I或Ia的化合物，其中S1为自由电子对，而S2为氢，使用式VII的烷基化试剂进行单或双烷基化
S*-U VII
其中S*为(C1-C4)-烷基，而U为上述含义，从而由该反应得到叔胺或季铵盐，
或者
f)使式VIII的二环戊二烯基铂配合物
与式IX的类型的胺反应
其中，S1，S2，R1，R3，R4和R5如以上定义，彼此独立地，A’为键或(C1-C3)-烷基，A”为H或(C1-C3)-烷基，且A’和A”与结合氮原子的碳原子一起代表与上述A相同的碳原子数，
然后还原形成的中间产物得到式I的化合物(J.K.Stille，D.B.Fox JACS 1970(92)，1274)；
可选择随后转化为药学上可接受的盐或三氯乙酸盐。
美国专利4,024,274(Hoe 74/F018)描述了具有类似结构类型，但未知空间结构的降冰片基胺，此胺具有良好的利尿和促尿食盐排泄活性。
在筛选该专利提供的大量实施例期间，令人惊奇地发现这种结构类型的某些化合物是有效的钠/质子交换剂的抑制剂，亚型3(NHE3)。然后检查最有效化合物的促尿食盐排泄活性，意外发现没有促尿食盐排泄活性，从而未能表明NHE3活性和利尿之间的关系。
由于未知此三环的空间结构，因此在四种可能的对映体对之间存在某种选择，即总共八种不同的空间结构。关于这些对映体对，发现仅有两对具有有效的NHE3-抑制活性，而其它两对对映体几乎没有任何NHE3-阻滞性质。采用X射线分析法阐明最有活性的结构，表明最高NHE3活性的对映体对为具有确定的外型氮和确定的内型稠合的五元环的化合物。活性较小的对映体对具有确定的外型氮和确定的外型稠合的五元环。两个剩余的对映体对分别具有确定的内型/外型和内型/内型构型，几乎没有显示出任何NHE3阻滞活性。
此外，令人惊奇的是，具有确定的外型的氮和确定的内型稠合的的五元环的实施例化合物之一的确定的分离的对映体在NHE3上具有类似的活性。由于对映体的呈镜像的空间排列，可以预期相当的活性差异。
相对于根据EP-A 825 178(HOE 96/F226)的已知钠/质子交换剂的抑制剂，亚型3，它表示相对极性的结构并对应于酰基胍类型(J.-R.Schwark等人Eur.J.Physiol(1998)436：797)，本发明的化合物为令人惊奇的亲脂性物质，它并非酰基胍类型，且代表全新的NHE3抑制作用结构。根据我们的研究，它们只是刚才所述的酰基胍和迟延作用的角鲨胺(M.Donowitz等人Am.J.Physiol.276(Cell Physiol.45)：C136-C144；活性在1小时后被看到)之后的迄今所公开的第三类NHE3抑制剂物质。与上述已知的NHE3抑制剂相比，它们能更好地穿透膜，并且不表现出其抑制作用开始的迟延。
发现NHE3在不同种的体内，优选在胆囊，肠和肾(Larry Fliegel等，Biochem.Cell.Biol.76：735-741，1998)，还可以在大脑内检测到它(E.Ma等人Neuroscience 79：591-603)。
本发明的式I或Ia的化合物适于用作治疗原发性和继发性高血压的抗高血压药。而且，这些化合物本身或与其它亚型特异性的NHE抑制剂组合可以通过降低或防止缺血诱导的损害而保护急性或慢性供氧不足的器官。因此它们适于作为药物，如用于外科手术(如用在肾和肝脏器官移植中，其中，这些化合物可以用于保护在切除之前或期间的供体的器官，以在生理浴液中处理和保存期间保护切除的器官；和用在转移到达受体时)或者急性或慢性肾衰。特别有利的，它们可以用于保护缺血诱导的肠损害。
与其对缺血诱导的损害的保护作用相一致的是，这些化合物还有效地用作治疗神经系统，特别是CNS的局部缺血的药物，其中，这些化合物适于治疗中风或大脑水肿。而且本发明的式I或Ia的化合物同样适于治疗休克形态，如变应性，心原性，血容量减少性和细菌性休克。
这些化合物还导致呼吸驱动的改善，并因此用于在以下临床症状和疾病中的呼吸症状的治疗：受损的中枢呼吸驱动(如中枢睡眠性呼吸暂停，婴儿猝死，术后低氧症)，肌肉相关的呼吸疾病，长期呼吸后的呼吸疾病，在高山区域适应期间的呼吸疾病，阻碍性或混合类型的睡眠性呼吸暂停，兼有低氧症和高钙酸血症的急性和慢性肺疾病。
此外，这些化合物增加上呼吸道的肌肉音调，从而抑制打鼾。
NHE抑制剂与碳脱水酶抑制剂(如乙酰唑胺)的组合由于活性化合物的作用增加而使用量减少证明是有利的，其中，后者产生代谢性酸中毒，并因此增大呼吸活动。
已发现本发明的化合物具有轻微的通泻作用，因而它们可以有利地用作通泻剂和用于紧迫的肠梗阻，其中，与肠区域的梗塞有关的局部缺血损害的预防是特别有利的。
它还可能防止形成胆结石。
本发明的式I或Ia的化合物还可以具有抑制细胞增殖的作用，例如成纤维细胞增生和血管平滑肌细胞增殖。式I或Ia的化合物还适于作为细胞增殖为其原发性或继发性病因的有用治疗剂，并因此可以用作抗动脉粥样硬化剂和抗以下疾病的试剂：晚期糖尿病综合症，癌症，纤维变性疾病，如肺纤维变性，肝纤维变性，或肾纤维变性，内皮机能障碍，和器官肥大与增生，特别是前列腺增生或前列腺肥大。
本发明的化合物为细胞钠/质子反向转运剂的有效抑制剂，这些反向转运剂在多数疾病中(特发性高血压，粥样硬化，糖尿病等)增加，即使在易于测定的细胞中，如在红细胞，血小板或白细胞中。因此，本发明的化合物适于作为杰出的和简单的科学工具，如其用作确定和区别某些类型高血压的诊断剂，还可用于粥样硬化，糖尿病，增生性疾病等。而且，式I或Ia的化合物适于用于预防高血压发生的预防治疗，如特发性高血压。
还发现NHE抑制剂具有对血清脂蛋白的有利影响。一般认为动脉硬化性血管变化的形成，特别是冠心病，过度的高血脂值，所谓的高血脂蛋白症，是重要的风险因素。因此，升高的脂蛋白的降低对于预防和消退动脉粥样硬化变化非常重要。因此本发明的化合物还用于预防和消退动脉粥样硬化变化，是通过它们排除了原因风险因素。由于对内皮机能障碍综合症的血管保护作用，式I或Ia的化合物是预防和治疗冠状血管痉挛，动脉粥样化形成和动脉粥样硬化，左室肥大和膨胀性心肌病，以及血栓形成性疾病的有用药物。
因此，所述的化合物有利地用于生产用于预防和治疗睡眠性呼吸暂停和与肌肉相关的呼吸疾病的药物；用于生产预防和治疗打鼾的药物；用于生产降低血压的药物；用于生产具有预防和治疗肠梗阻的通泻作用的药物；用于生产预防和治疗由局部缺血和中枢与外周器官的再灌注导致的疾病的药物，如急性肾衰，中风，内源性休克症，肠疾病等的药物；用于生产治疗血胆甾醇过多的药物；用于生产预防动脉粥样化形成和动脉粥样硬化的药物；用于生产预防和治疗由升高的胆固醇水平导致的疾病；用于生产预防和治疗由内皮机能障碍导致的疾病的药物；用于生产治疗外寄生物感染的药物；和用于生产与低血压物质组合，优选与血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂和血管紧张肽受体拮抗剂组合用于治疗所述疾病的药物。式I或Ia的NHE抑制剂与血脂水平降低活性化合物的组合，优选与HMG-CoA还原酶抑制剂(如洛伐地丁或pravastatin(普拉伐地丁))的组合由于活性化合物的作用增加而使用量减少证明是有利的，其中后者产生低脂血作用并因此增大式I或Ia的NHE抑制剂的低脂血性质。
本申请要求施用式I或Ia的钠/质子交换抑制剂作为使升高的血脂水平降低的新药物，还要求钠/质子交换抑制剂与低血压和/或低血脂药物的组合。
含有化合物I或Ia的药物可以口服，肠道外，静脉内，直肠或吸入给药，优选的给药取决于关于疾病的具体临床症状。式I或Ia的化合物可以独立地使用或与药学辅料一起使用，可以用于兽医和人类医学。
本领域技术人员根据其专业知识熟悉辅料，这些辅剂适用期望的药剂。除了溶剂，胶凝剂，栓剂基质，片剂辅料和其它活性化合物赋形剂以外，可以使用抗氧剂，分散剂，乳化剂，止泡剂，矫味剂，防腐剂，加溶剂或着色剂。
对于口服给药剂型，将活性化合物与适于此目的添加剂混合，如赋形剂，稳定剂或惰性稀释剂，并采用常规的方法将其变成适宜的给药剂型，如片剂，包衣片，硬凝胶胶囊，或水，醇或油性溶液。可以使用的惰性赋形剂为阿拉伯胶，氧化镁，碳酸镁，磷酸钾，乳糖，葡萄糖或淀粉，尤其是玉米淀粉。在这种情况下，可以进行干或湿颗粒制备。适宜的油性赋形剂或溶剂是植物或动物油，如向日葵油或鳕鱼肝油。
对于皮下或静脉内给药，将活性化合物制成溶液，悬浮液或乳剂，如果需要的话，使用用于此目的的常规物质，如加溶剂，乳化剂或其它辅料。可能的溶剂是：水；生理盐水溶液或醇，如乙醇，丙醇，甘油；或糖溶液，如葡萄糖或甘露糖醇溶液；或可选择上述各种溶剂的混合物。
适宜的气溶胶或喷雾形式给药药剂为式I或Ia的化合物的溶液，悬浮液或乳剂，这些药剂处在药学上可接受的溶剂中，如特别是在乙醇或水，或者这些溶剂的混合物中。
如果需要，此制剂还可以含有其它药学辅料，如表面活性剂，乳化剂和稳定剂，以及抛射剂。这种制剂所含的活性化合物的浓度一般约为0.1-10，特别是0.3-3％重量。
式I或Ia的活性化合物的给药剂量和给药频率取决于所用化合物的效力和作用持续时间，此外还取决于治疗疾病的性质和严重性，以及接受治疗的哺乳动物的性别，年龄，体重和个体反应。
一般来说，当患者的体重大约为75kg时，式I或Ia的化合物的日剂量至少为体重的0.001mg/kg，优选1-10mg/kg，到至多100mg/kg。在疾病的急性发作中，即便是更高和尤其更为频繁的剂量也是必须的，例如至多四个单独剂量每天。特别是在静脉注射给药中，例如在强化护理单元中的梗死患者的情况下，可以需要至多200mg每天。
实验部分：
所用的缩写：CH2Cl2二氯甲烷CI化学电离DIP二异丙醚EA乙酸乙酯ES电喷雾HOAc乙酸H2O水H2O2过氧化氢Bp沸点MeOH甲醇MgSO4硫酸镁Mp熔点MS质谱MTB甲基叔丁基醚NaBH4氢硼化钠NaHCO3碳酸氢钠NaOH氢氧化钠RT室温THF四氢呋喃TFA三氟乙酸Hcl盐酸某些胺合成的说明：胺1)外型/内型的八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺的合成：
a1)双-(6-氯-3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)-二氮烯N，N’-二氧化物和异构体
将167g的亚硝酸异戊酯加到167g二环戊二烯，160ml冰醋酸和160ml乙醇的混合物中，然后在-10℃下搅拌滴加入在乙醇中的420ml 15％浓度的氯化氢溶液。再在室温下搅拌混合物3小时。加入500ml二异丙醚，再将混合物搅拌10分钟，然后滤出结晶。基本上无色结晶，mp.177-178℃。
b1)八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺
在100℃和100atm的H2压力条件下，氢化10g双-(6-氯-3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)二氮烯N，N’-二氧化物，60ml甲醇和阮内镍的悬浮液10小时。滤去催化剂，减压下使用旋转蒸发器蒸发溶剂，将半结晶残余物与水混合，加入10N NaOH使混合物为强碱性。用甲基叔丁基醚提取混合物3-4次，并用硫酸钠干燥有机相，然后蒸馏掉溶剂，并减压精馏此油。Bp5mm86-91℃。
或
a2)3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基胺和3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基胺
将20g外型-5-异氰硫基-5，6-二氢内型二环戊二烯(MaybridgeInternational)溶于60ml的蚁酸，回流下将溶液煮沸27小时。减入除去挥发性组分，加入5ml 20％浓度的NaOH水溶液，并在每种情况下用100ml的CH2Cl2萃取三次。用MgSO4干燥萃取物，减压下除去溶剂。得到13.4g灰黄色油。
Rf(CH2Cl2/MeOH/HOAc/H2O 32∶8∶1∶1)＝0.57；MS(ES+)：150(M+H)+
b2)(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)-氨基甲酸叔丁酯和(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯
将12.8g的3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基胺和3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基胺的混合物溶于200ml的THF，并在RT下，与在200ml的THF中的18.7g的二叔丁基碳酸氢酯混合，然后滴加入12ml的三乙胺，并在RT下搅拌混合物2小时。减压除去挥发性组分，并用DIP在硅胶上色谱处理残余物。得到15g无色油，从正庚烷将其结晶；mp 94℃。
Rf(DIP)＝0.68MS(Cl+)：250(M+H)+
C2)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁基酯
将500mg(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯和(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物溶于20ml甲醇和2ml乙酸，并在氢气氛下(1bar)，在200mg Pd/C 10％(50％水)的辅助下氢化6小时。滤掉催化剂，并在减压下除去挥发性组分。得到470mg树脂样无定形固体。
Rf(DIP)＝0.70MS(Cl+)：252(M+H)+
d2)八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺三氟乙酸盐
将460mg(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯溶于5ml三氟乙酸，并在RT下搅拌混合物24小时。然后减压下除去挥发性组分，得到390mg灰黄色泡沫。
Rf(EA/HEP/MeOH/CH2Cl2/饱和的NH3水溶液10∶5∶5∶5∶1)＝0.30
MS(Cl+)：152(M+H)+
或
a3)八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺
将3.3g的3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基胺和3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基胺(实例胺1，a2)的混合物溶于30ml甲醇，并在氢气氛下，在0.5g Pd/C(10％)存在下进行还原。4小时后，滤掉催化剂并用甲醇洗涤。真空浓缩滤液得到3g目标产物，为一种油。
MS(ES+)：152(M+H)+
胺2)
内型/外型的八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺的合成：
在加入阮内镍之后，将事先已在10℃下用NH3饱和的处在60ml甲醇中的15g三环[5，2，1，02，6]癸-8-酮溶液在90℃下和100bar的氢气压下，在高压釜中氢化10小时。滤去催化剂，减压下蒸馏掉溶剂，然后用10N的NaOH使混合物成为强碱性，并用乙酸乙酯或二异丙醚萃取2-3次。干燥混合的有机相，并在减压下进行级分蒸馏。Bp6-7mm 86-88℃。
胺3)
内型/内型-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基-胺的合成
a)1，3a，4，6，7，7a-六氢-4，7-亚甲基茚-5-酮肟
将10g的来自胺1，a1)的双-(6-氯-3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)-二氮烯N，N’-二氧化物悬浮在75ml的异戊醇中，并搅拌将悬浮液缓慢加热至回流。一旦所有的物质已被溶解，则用冰浴将混合物冷却至室温，加入25ml的无水乙醇，12.5ml的冰醋酸和6g的锌粉。保持混合物回流1小时，然后冷却，滤去锌，并在减压下蒸发乙醇。将残余物与300ml醚搅拌，并静置过夜。然后从沉淀物中洗脱掉醚，并用碳酸钠溶液洗涤三次，用水洗涤二次。用硫酸镁干燥有机相并过滤，然后浓缩滤液。随后减压下蒸馏得到3.3g油，其进一步直接反应。
b)八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺
将2.2g的1，3a，4，6，7，7a-六氢-4，7-亚甲基茚-5-酮肟溶于50ml的甲醇，并加入溶于50％水中的约10％的阮内镍。在100bar和100℃下氢化混合物20小时，然后滤掉催化剂，减压下蒸发溶剂。残余物在醚和6N氢氧化钠水溶液中处理，分离相，用醚萃取水相三次，用硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并浓缩滤液。得到1.8g无色，用球管蒸馏法纯化此油。得到0.96g目标胺，为一种油。MS(Cl+)：152.2(M+H)+
胺4)
外型/外型的八氢-4，7-亚甲基茚-5-基-胺的合成
a)八氢-4，7-亚甲基茚-5-醇
将25g的三环[5.2.1.0(2，6)]癸-8-酮(Aldrich)溶于100ml甲醇，并在室温下，轻微冷却和搅拌下，在2小时内分批与6.3g的固体氢硼化钠混合。然后再次搅拌混合物2小时，并静置过夜。接着冷却下滴加入约40ml 2N HCl，然后加入20ml水。浓缩混合物，残余物与乙酸乙酯混合，乙酸乙酯相用水洗涤一次，并用碳酸氢钠溶液洗涤一次。用硫酸镁干燥乙酸乙酯相，然后过滤并浓缩。得到26g油，减压下蒸馏法纯化此油。如此得到20.7g油状液体(bp0.576℃)。
b)2-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)异吲哚-1，3-二酮
搅拌下将用5ml的THF稀释的1.7g偶氮二甲酸二乙酯加到在15mlTHF中的1.66g八氢-4，7-亚甲基茚-5-醇，1.47g邻苯二甲酰亚胺，和2.62g三苯基磷化氢的溶液。使反应混合物静置过夜，然后浓缩，残余物与醚一起搅拌，抽滤掉沉淀物，并将滤液浓缩。在硅胶上用甲苯纯化残余物。如此得到1.36g黄色油。
MS(Cl+)：282.2(M+H)+
c)外型/外型-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺
将0.4g肼水合物滴加到1.12g 2-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)异吲哚-1，3-二酮和15ml乙醇的溶液中，并在65℃下将混合物搅拌2小时。用浓HCl调节至PH 1-2，并与10ml乙醇混合，滤掉沉淀物，浓缩滤液。通过制备型HPLC在RP-18上采用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)纯化残余物。冻干得到567mg的三氟乙酸盐产物。用氢氧化钠水溶液和乙酸乙酯处理得到322mg游离胺。
MS(Cl+)：152.0(M+H)+
实施例
除非另外指明，本文给出的实施例为消旋体。
实施例1
(外型/内型)-(3-氯苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺盐酸盐
往在20ml的甲苯中的0.54g外型/内型的八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)和0.562g 3-氯苯甲醛的溶液加入小催化量的对甲苯磺酸后，将此溶液煮沸加热5小时，然后在室温下静置过夜，随后滤去溶剂。将残余物溶于甲醇，然后搅拌下分小部分将0.181g的氢硼化钠(boranate)加到冰冷的黄色溶液中。室温下搅拌混合物数小时，然后用过量的甲醇盐酸盐溶液使溶液成强酸性。简短地搅拌混合物，滤掉沉淀，并从滤液中蒸馏掉溶剂。残余物形成元色至浅黄色结晶状物质，mp 241℃。
实施例2
(外型/内型)-(3-氟苄基)-(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺和(外型/内型)-(3-氟苄基)-(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺
将300mg的3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基胺和3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基胺(见胺1，a2)的混合物，315μl 3-氟苯甲醛和10mg对甲苯磺酸溶于5ml甲苯(无水)，并将混合物在回流下煮沸5小时。然后在减压下除去挥发性组分，残余物在20ml MeOH中处理，加入152mg NaBH4，并将混合物在RT下静置15小时。然后用200ml的EA稀释反应混合物，并在每一种情况下用50ml饱和NaHCO3水溶液洗涤两次。用MgSO4干燥混合物并在减压下除去溶剂。在RP-18上使用乙腈/水(梯度：5∶95-95∶5)的制备型HPLC得到150mg无色油。
Rf(EA)＝0.40；MS(Cl+)：258(M+H)+
实施例3
(外型/内型)-(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)(3-甲氧基苄基)胺和(外型/内型)-(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)(3-甲氧基苄基)胺
与实施例2类似地合成实施例3的化合物。
Rf(EA)＝0.35；MS(Cl+)：270(M+H)+
实施例4
(外型/内型)-5-(3-甲氧基苄基氨基)八氢-4，7-亚甲基茚-2-醇
a)(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)-氨基甲酸叔丁基酯和(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯
将12.8g 3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基胺和3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基胺的混合物溶于200mlTHF，并在RT下与在200ml THF中的18.7g二叔丁基碳酸氢酯溶液混合。然后滴加12ml三乙胺，并在RT下搅拌混合物2小时。减压下除去挥发性组分。在硅胶上使用DIP色谱处理得到15g无色油。从正庚烷中结晶得到4.9g无色结晶，mp 94℃。
Rf(DIP)＝0.68；MS(ES+)：250(M+H)+
b)(2-羟基八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯
将4.87g(3a，4，5，6，7，7a-六氢-1H-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯和(3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物溶于30ml甲苯(无水)，并在RT下注射加入在甲苯中的20ml 2M硼烷/二甲基硫化物配合物溶液，在RT下搅拌24小时，再注射加入在甲苯中的10ml 2M硼烷/二甲基硫化物配合物的溶液，并在RT下再搅拌混合物6小时。然后在减压下除去挥发性组分，加入200ml CH2Cl2和33ml 3N NaOH水溶液，并将混合物与7ml 30％浓度的H2O2水溶液缓慢混合。RT下搅拌混合物10分钟，再加入100ml3N NaOH水溶液和20ml 30％浓度的H2O2水溶液。再在RT下搅拌反应混合物10分钟，然后在每一种情况下用200ml CH2Cl2萃取三次。用MgSO4干燥萃取物并在减压下除去溶剂。在硅胶上用MTB色谱处理得到2.9g无定形固体，此固体仍混杂有区域异构体。
Rf(MTB)＝0.47；MS(Cl+)：268(M+H)+
c)5-氨基八氢-4，7-亚甲基茚-2-醇三氟乙酸盐
将300mg(2-羟基八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)氨基甲酸叔丁酯溶于3ml三氟乙酸，RT下搅拌溶液30分钟。然后减压下除去挥发性组分。如此得到340mg树脂样固体，此固体本身进一步被使用。
Rf(EA/HEP/MeOH/CH2Cl2/饱和氨水溶液10∶5∶5∶5∶1)＝0.28；MS(ES+)：168(M+H)+
d)5-(3-甲氧基苄基氨基)八氢-4，7-亚甲基茚-2-醇
将309mg的5-氨基八氢-4，7-亚甲基茚-2-醇三氟乙酸盐和225mg的3-甲氧基苯甲醛溶于10ml甲苯(无水)，回流煮沸混合物5小时。然后在减压下除去挥发性组分。残余物在10ml的MeOH中处理，与108mg的NaBH4混合，并在RT下搅拌16小时。用100ml的EA稀释混合物，并在每一种情况下用30ml 10％浓度的NaHCO3水溶液洗涤两次。用MgSO4干燥有机相，并在减压下除去溶剂。在硅胶上用EA/MeOH 2∶1色谱处理得到100mg无定形固体。
Rf(EA/MeOH 2∶1)＝0.20；MS(ES+)：288(M+H)+
实施例5
外消旋-(外型/内型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
将1.08g的3-甲氧基苯甲醛，1.1g的(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)，催化量的对甲苯磺酸，和20ml无水甲苯的混合物回流煮沸3小时，减压下蒸馏掉甲苯，将残余物溶于20ml甲醇。冷却下将0.36g氢硼化钠分小部分加至此甲醇溶液中，室温下搅拌混合物18小时。加入在甲醇中的氯化氢溶液，滤掉沉淀物，并在减压下蒸馏掉溶剂。在乙醇中煮沸残余物并滤去，搅拌下将150ml二乙醚加至滤液。将混合物置于冰箱中数小时，然后滤掉结晶状物质。无色晶体，mp.190-194℃。
实施例6
(+)-(外型/内型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
和
(-)-(外型/内型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
在购自Diacel Chemicals(CSP-Chiralpak-AS 250×25，10μ)的制备柱上，将来自实施例5)的500mg外消旋-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐进行数轮的分离。采用的条件如下：流速：3ml/min；温度：24℃；洗脱剂混合物：正己烷/乙醇/异丙醇/TFA10/1/1/0.1；和波长：230nm。
冻干得到：
(+)-对映体：198mg，HPLC法纯化：98％
(-)-对映体：218mg，HPLC法纯化：99％
为了将这些化合物转化为盐酸盐，将所述的75mg对映体与碳酸钾溶液和乙酸乙酯混合，并良好地摇晃混合物。相分离后，用乙酸乙酯萃取含水相两次。用硫酸镁干燥混合的有机相并过滤，并在减压下浓缩滤液。残余物在乙酸乙酯中处理并在5g硅胶上过滤，浓缩滤液，将残余物与2N的盐酸混合并冻干。
冻干得到：
(+)-对映体：53mg，旋光：+33°，(Na，589nm)，MS(ES+)：272.2(M+H)+
(-)-对映体：51mg，旋光：-32°，(Na，589nm)，MS(ES+)：272.2(M+H)+
实施例7
(内型/内型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
在高压釜中，在80℃和60bar的氢压力下，将2.2g 3-甲氧基苯甲醛，40ml甲醇，3.3g(内型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺2)，和阮内镍催化剂的混合物氢化6小时。将残余物溶于乙酸乙酯，滤掉催化剂，减压下蒸馏掉溶剂，用硫酸钠干燥混合物，再一次用旋转蒸发器除去溶剂。将残余物溶于少量的乙酸乙酯，并与过量的盐酸醚溶液混合，搅拌下形成沉淀。无色结晶状物质(来自二异丙醚/甲醇)，mp.206-208℃。
实施例8
(内型/内型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
最初在排出湿气的条件下，在5ml的无水CH2Cl2中处理190mg 3-甲氧基苯甲醛，211mg(内型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺3)，和423mg三乙胺。利用隔膜搅拌下滴加0.7ml 1摩尔浓度的四氯化钛甲苯溶液。室温下18小时后，加入887mg三乙酰氧基氢硼化物，并再次搅拌混合物1小时。然后加入3ml 5N氢氧化钠溶液和10ml水，混合物用20ml的乙酸乙酯萃取三次，干燥萃取物，过滤并减压浓缩。将残余物溶于2N盐酸并用醚萃取溶液。蒸发浓缩水相并用制备型HPLC在RP-18上采用乙腈/水对残余物进行纯化。合并纯馏分，用旋转蒸发器除去乙腈，用碳酸钾调节残余物为pH11，并用CH2Cl2萃取，干燥混合相并浓缩。在2N盐酸和少量乙腈中处理残余物并冻干。如此得到10mg盐酸盐，为白色固体。
MS(ES+)：272.2(M+H)+
实施例9
(外型/外型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
回流下将150mg 3-甲氧基苯甲醛，167mg(外型/外型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺4)，催化量的对甲苯磺酸，和15ml的无水甲苯的混合物煮沸3小时，减压下蒸馏掉甲苯，将残余物溶于10ml甲醇。冷却下将50mg氢硼化钠分小部分加至此甲醇溶液中，然后将混合物加热至室温。加入在甲醇中的盐酸溶液，滤掉沉淀物，并在减压下蒸馏掉溶剂。用制备型HPLC在RP-18上采用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对残余物进行纯化。冻干后得到三氟乙酸盐，用氢氧化钠水溶液/乙酸乙酯将其转化成游离胺，然后用2N HCl将其转化为盐酸盐。如此得到125mg白色产物。
MS(Cl+)：272.2(M+H)+
实施例10
(外型/内型)-(3-氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
最初在排出湿气的条件下，在10ml的无水CH2Cl2中处理124mg 3-氟苯甲醛，151mg(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)，和303mg三乙胺。利用隔膜，搅拌下滴加0.5ml 1摩尔浓度的四氯化钛甲苯溶液。室温下18小时后，加入在THF中的3ml 1摩尔浓度氰基氢硼化钠溶液，并再次搅拌混合物15分钟。然后加入5ml 5N氢氧化钠溶液和15ml水，混合物用25ml的乙酸乙酯萃取三次，干燥萃取物，过滤并减压浓缩。在硅胶上(CH2Cl2/甲醇97∶3)上过滤残余物，并再次蒸发至干，用制备型HPLC在RP-18上采用乙腈/水对残余物进行纯化。合并纯馏分，用旋转蒸发器除去乙腈，用碳酸钾调节残余物为pH11，并用CH2Cl2萃取，干燥混合相并浓缩。在2N盐酸和少量乙腈中处理残余物并冻干。如此得到144mg白色固体。
MS(Cl+)：260(M+H)+
实施例11
(外型/内型)-(3，5-二氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
将200mg 3，5-二氟苯甲醛和151mg(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)溶于15ml甲苯(无水)，并与11mg对甲苯磺酸混合，回流下将混合物煮沸3小时。然后在减压下除去挥发性组分。残余物在10ml的甲醇中处理，并在冰冷却和搅拌下与64mg NaBH4混合，并将混合物静置过夜。
用HCl甲醇液将溶液调节至pH 1-2，滤掉沉淀物，并浓缩溶液。将残余物溶于热乙醇，过滤溶液并搅拌冷却。加入二乙醚沉淀产物，抽滤，用醚洗涤并干燥。如此得到212mg白色固体。
MS(Cl+)：278.3(M+H)+
实施例12
(外型/内型)-[1-(3-甲氧基苯基)乙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
在5-10℃下，10分钟内将0.73g四氯化钛和3ml正戊烷的混合物滴加到在15ml正戊烷中的0.75g 3-甲氧基苯乙酮和2.7g(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)的溶液。5-10℃下再次搅拌混合物1小时，然后在室温下静置过夜。滤掉沉淀物，然后用旋转蒸发器蒸馏掉溶剂。然后将残余物溶于20ml甲醇，在5-10℃的冷却下分批与0.96g氢硼化钠混合。室温下搅拌混合物15-20小时，然后蒸馏掉溶剂。残余物与水混合，用盐酸酸化，并用乙酸乙酯萃取，沉淀出结晶，将此结晶滤出并从少量中重结晶(mp.257-259℃)。用2NNaOH使含水滤液调为强碱性并用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥有机溶液，并滤掉溶剂。将残余物溶于少量乙酸乙酯，然后用在二乙醚中的盐酸溶液将此溶液强酸化，滤掉结晶并从少量水中重结晶(mp.257-259℃)。
实施例13
(外型/内型)-(3-溴苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
将1.9g 3-溴苯甲醛，1.5g(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)，和60mg对甲苯磺酸溶于180ml无水甲苯，并将混合物回流煮沸5小时。减压下除去挥发性组分并将残余物溶于120ml甲醇。加入530mg NaBH4并在RT下搅拌混合物2小时。将混合物于RT下静置18小时，然后在减压下除去挥发性组分。在200ml饱和NaHCO3水溶液中处理残余物，然后在每种情况下用200ml的EA萃取混合物三次。用MgSO4干燥萃取物并在减压下除去溶剂。在12ml 10％浓度的HCl水溶液中处理残余物，并在减压下除去挥发性组分。在50ml的EA中搅拌残余物，得到3.0g结晶状盐酸盐，mp 248℃。
Rf(EA)＝0.44；MS(Cl+)：320(M+H)+
实施例14
(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)-甲基]苯甲酸
a)3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]苯甲酸丁酯
将来自实施例13的1g(3-溴苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐，115mg 1，3-双(二苯基膦基)丙烷，63mg Pd(II)乙酸盐，和4ml三-正丁胺溶于10ml的1-丁醇和2ml的DMF，并在110℃下，于CO气氛(大气压)下搅拌8小时。然后再加入115mg 1，3-双(二苯基膦基)丙烷和63mg Pd(II)乙酸盐，并在110℃下再搅拌混合物7小时。冷却，然后加入100ml饱和Na2CO3水溶液，并在每种情况下用100ml的EA萃取混合物三次。用MgSO4干燥萃取物并在减压下除去溶剂。在硅胶上采用DIP/2％三乙胺进行色谱处理得到600mg无色油。
Rf(DIP/2％三乙胺)＝0.42；MS(ES+)：342(M+H)+
b)3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]苯甲酸
将600mg 3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]苯甲酸丁酯溶于1ml正丁醇，并加入2.1ml 1N NaOH水溶液。RT下搅拌混合物18小时，然后在60℃下搅拌4小时。然后在减压下除去挥发性组分，随后在减压下，每种情况下用5ml水两次共沸蒸馏掉残余的正丁醇。在5ml 10％浓度的HCl溶液中处理残余物，在减压下除去挥发性组分，并在减压下，每种情况下使用5ml甲苯两次共沸蒸馏掉水。由于产物仍含有相当量的原料，因而再次将其溶于6ml甲醇，并与1ml 2N NaOH水溶液混合。RT下搅拌混合物3小时，然后再次加入5ml 2N NaOH水溶液，并在回流下将混合物煮沸4小时。减压下除去挥发性组分，在20ml水中处理残余物，并用稀HCl水溶液调节混合物至PH＝7。RT下搅拌混合物1小时，抽滤掉产物并在减压下干燥。如此得到260mg结晶状固体，mp 258-261℃。
MS(Cl+)：286(M+H)+
实施例15
(外型/内型)-[3-(2-甲氧基乙氧基)苄基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
a)3-(2-甲氧基乙氧基)苯甲醛
40℃下在10ml DMF(无水)中将1.0g 3-羟基苯甲醛，1.1g 1-溴-2-甲氧基乙烷，和10.7g Cs2CO3搅拌4小时。用100ml水稀释混合物，并在每种情况下用50ml的EA萃取两次。用MgSO4干燥萃取物，并在减压下除去溶剂。如此得到1.3g无色油。
Rf(DIP)＝0.24；MS(Cl+)：181(M+H)+
b)[3-(2-甲氧基乙氧基)苄基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
将300mg 3-(2-甲氧基乙氧基)苯甲醛，253mg(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)，和10mg对甲苯磺酸溶于30ml无水甲苯中，回流下将混合物煮沸5小时。减压下除去挥发性组分并将残余物溶于20ml甲醇。加入90mg NaBH4并在RT下搅拌混合物2小时。使混合物在RT下静置18小时，然后在减压下除去挥发性组分。在50ml饱和NaHCO3水溶液中处理残余物，在每种情况下用50ml的EA将混合物萃取三次。用MgSO4干燥萃取物并在减压下除去溶剂。在2ml10％浓度的HCl水溶液中处理残余物，并在减压下除去挥发性组分。在10ml二乙醚中搅拌残余物，得到163mg结晶状盐酸盐，mp 134℃。
Rf(EA)＝0.30；MS(Cl+)：316(M+H)+
实施例16
(外型/内型)-(3-碘苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺盐酸盐
a)1-溴甲基-3-碘苯
将4.4g 3-碘甲苯溶于10ml的氯苯，并在132℃下分批与3.6gN-溴-琥珀酰亚胺和100mg二苯甲酰过氧化物的混合物混合。在132℃将混合物再搅拌1小时，冷却后用100ml EA稀释，然后先用100ml饱和Na2SO3水溶液洗涤，接着用100ml饱和Na2CO3水溶液洗涤。用MgSO4干燥有机相并减压除去溶剂。如此得到5.3g灰黄色油。
Rf(EA/HEP 1∶8)＝0.44；MS(ES+)：298(M+H)+
b)(3-碘苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
将755mg(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)和830μl三乙胺溶于20ml无水THF，并在0℃下缓慢地与2.8g 1-溴甲基-3-碘苯混合。0℃下搅拌混合物30分钟，然后在RT下搅拌5天。接着加入100ml饱和Na2CO3水溶液，在每种情况下用100ml的EA萃取混合物两次。用MgSO4干燥萃取物并在减压下除去溶剂。将残余物溶于20ml甲醇，并用10％浓度的HCl水溶液将溶液调节至PH＜2。然后在减压下除去挥发性组分，在10ml的EA中搅拌残余物，并减压下干燥。如此得到1.74g无色结晶，mp 220-224℃(分解)
MS(Cl+)：368(M+H)+
实施例17
(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)-甲基]苄腈盐酸盐
最初在排除湿气的条件下，在30ml无水CH2Cl2中处理750mg 3-氰基苯甲醛，865mg(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)，和1.74g三乙胺。利用隔膜，搅拌下滴加2.86ml 1摩尔浓度的四氯化钛甲苯溶液。室温下18小时后，加入在THF中的17.2ml 1摩尔浓度氰基氢硼化钠溶液，并将混合物再搅拌15分钟。然后加入20ml 5N氢氧化钠溶液和60ml水，随后用50ml乙酸乙酯萃取混合物三次，并干燥萃取物，过滤并减压浓缩。通过硅胶(CH2Cl2/甲醇97∶3)过滤残余物，并再次蒸发至干，在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)残余物借助制备型HPLC进行纯化。冻干得到1.1g目标产物，为三氟乙酸盐。如实施例9中所述，将250mg的该粉末转化成盐酸盐。得到175mg白色固体。
MS(Cl+)：267.3(M+H)+
实施例18
(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基-氨基)甲基]苯甲酸甲酯盐酸盐
和
(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]-苯甲酸乙酯盐酸盐
a)(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]苯甲亚氨酸乙酯二盐酸盐
将来自实施例17的500mg 3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]苄腈三氟乙酸盐溶于20ml无水乙醇(用5％甲醇和5％异丙醇变性)，并在搅拌和冰冷下使氯化氢气体通入此溶液3小时。混合物室温下静置过夜，第二天用氮冲洗出过量的氯化氢气体，并浓缩残余物。如此得到587mg苯甲亚氨酸乙酯，为一种白色粉末，其混有少量的苯甲酰胺甲酯。
粗产物直接进一步反应。
b)(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]-苯甲酸甲酯盐酸盐
和
(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]-苯甲酸乙酯盐酸盐
将来自a)的100mg产物溶于6ml水和三氟乙酸(5∶1)的混合物，并在室温下将混合物搅拌3小时。使混合物静置过夜，然后除去溶剂，在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对残余物用制备型HPLC进行纯化。在碳酸钾溶液中处理所得的三氟乙酸乙酯和甲酯化合物，并用乙酸乙酯萃取。干燥萃取物并在减压下除去乙酸乙酯，然后将残余物与2N盐酸混合并冻干。
如此得到28mg乙酯和7mg甲酯。
甲酯：MS(ES+).300.2(M+H)+
乙酯：MS(ES+)：314.3(M+H)+
实施例19
(外型/内型)-{3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)-甲基]苯基}甲醇盐酸盐
搅拌和排除湿气下将如实施例18b)所述制备并溶于5ml THF的50mg甲酯/乙酯混合物滴加到在THF中的0.43ml 1摩尔浓度的氢化锂铝溶液。室温下搅拌混合物并静置一个周末，然后在冰冷却下缓慢地加入水，抽滤出所得的沉淀，并用乙酸乙酯进行完全洗涤。含水相用乙酸乙酯萃取，并用硫酸镁干燥混合的有机相。滤去干燥剂，然后在减压下除去溶剂，用制备型HPLC在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对残余物进行纯化。然后如实施例10所述，将产物转化成盐酸盐。
冻干得到7mg产物。
MS(ES+)：272.2(M+H)+
实施例20
(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)-甲基]苯甲酰胺三氟乙酸盐
60℃下将来自实施例18a)的45mg 3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]-苯甲亚胺酸乙酯二盐酸盐加热8小时，然后在室温下静置3周。随后在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对此固体借助制备型HPLC进行纯化。冻干后，分离4mg目标产物。
MS(ES+)：285.2(M+H)+
实施例21
(外型/内型)-(3-氨基甲基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺双三氟乙酸盐
将来自实施例17的溶于5ml无水THF的100mg 3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]苄腈三氟乙酸盐，滴加至在THF中的5ml 1摩尔浓度的氢化锂铝溶液。然后在80℃下将混合物加热5小时。然后在冰冷却下，缓慢地滴加水，将此混合物与氢氧化钠溶液混合。滤去沉淀并用醚洗涤。萃取含水相，然后干燥混合的有机相，滤掉干燥剂。浓缩有机相，并在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对残余物借助制备型HPLC进行纯化。冻干后分离26mg产物。
MS(ES+)：271.2(M+H)+
实施例22
(外型/内型)-3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)-甲基]苄脒双三氟乙酸盐
将来自实施例18a)的200mg 3-[(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基氨基)甲基]苯甲亚胺酸乙酯二盐酸盐溶于15ml无水乙醇，并将约20ml的氨冷凝至该混合物中。回流下在氨中将此化合物煮沸3小时，然后使氨蒸发过夜。浓缩残余物，随后在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对其借助制备型HPLC进行纯化。冻干得到89mg目标产物。
MS(Cl+)：284.3(M+H)+
实施例23
(外型/内型)-(3-硝基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺盐酸盐
最初在排除湿气下，在30ml无水CH2Cl2中处理750mg 3-硝基苯甲醛，751mg(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)，和1.5g三乙胺。利用隔膜，搅拌下滴加在甲苯中的2.48ml 1摩尔浓度四氯化钛溶液。室温下18小时后，加入在THF中的14.89ml 1摩尔浓度氰基氢硼化钠溶液，再将混合物搅拌15分钟。然后加入20ml5N氢氧化钠溶液和60ml水，混合物用50ml乙酸乙酯萃取三次，干燥萃取物，过滤并减压浓缩。通过硅胶(CH2Cl2/甲醇95∶5)过滤残余物并再次蒸发至于，粗产物在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)借助制备型HPLC进行纯化。在乙酸乙酯和碳酸钾溶液(pH 11)之间分配所得的(3-硝基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺三氟乙酸盐的一部分。含水相用乙酸乙酯萃取三次，干燥混合的有机相并浓缩。在2N盐酸和少量乙腈中处理残余物并冻干。如此得到300mg白色固体。
MS(ES+)：287.2(M+H)+
实施例24
(外型/内型)-(3-氨基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺双三氟乙酸盐
将来自实施例23的100mg(3-硝基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺三氟乙酸盐溶于含有5ml乙醇和5ml冰醋酸的混合物中。然后加入57mg锌粉，并在60℃将混合物搅拌4小时。随后再加入25g的锌粉，再将混合物在60℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物，在乙酸乙酯中处理残余物，并用碳酸钾溶液洗涤有机相三次，干燥，过滤并浓缩。在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对残余物借助制备型HPLC进行纯化。冻干得到23mg目标产物。
MS(ES+)：257.2(M+H)+
实施例25
(外型/内型)-(3-甲氧基苄基)甲基(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
最初在5ml无水丙酮中处理来自实施例5的50mg(外型/内型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺，加入20mg碳酸钾，将混合物搅拌30分钟，然后滴加9μl碘甲烷。使反应混合物静置过周末，然后浓缩，在水和乙酸乙酯中处理残余物，分离相，用乙酸乙酯萃取含水相两次，干燥混合的有机相，过滤并浓缩。在硅胶上用乙酸乙酯/庚烷对残余物进行色谱处理。在2N盐酸中处理所得的胺并冻干。如此得到14mg目标产物。
MS(Cl+)：286.4(M+H)+
实施例26
(外型/内型)-(3-甲氧基苄基)二甲基(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)铵三氟乙酸盐
最初在5ml无水丙酮中处理来自实施例5的53mg(外型/内型)-(3-甲氧基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺，然后滴加61μl碘甲烷。使混合物静置过周末，然后再加入50μl碘甲烷。混合物静置过夜，加入3滴N-乙基二异丙基胺，然后再将混合物搅拌5小时。随后浓缩反应混合物并在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)借助制备型HPLC进行纯化。冻干得到53mg目标产物。
MS(ES+)：300.3(M+)
实施例27
(外型/外型)-(3-氟苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺盐酸盐
将80mg 3-氟苯甲醛，97mg(外型/外型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺4)，催化量的对甲苯-磺酸，和7.5ml无水甲苯的混合物回流煮沸3小时，减压下蒸馏掉甲苯，将残余物溶于5ml甲醇。冰冷却下，将29mg氢硼化钠分小部分加至此甲醇溶液，并将混合物加热至室温。加入2N HCl，并滤掉沉淀，将其溶于热乙醇，冷却，并与醚混合。在2N NaOH和二氯甲烷中处理所得的沉淀，分离出含水相，并用2N NaOH洗涤有机相。然后用MgSO4干燥有机，过滤并浓缩。然后用2N HCl将残余物转化成盐酸盐。如此得到35mg白色产物。
MS(Cl+)：260.0(M+H)+
实施例28
(外型/内型)-(2-三氟甲基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
搅拌下将溶于2ml二氯甲烷中的158mg 2-(三氟甲基)苄基溴缓慢滴加至98mg(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)，103mg二异丙基乙基胺，和2ml二氯甲烷的混合物中。然后将混合物静置过夜，随后在减压下除去溶剂，并在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对残余物借助制备型HPLC进行纯化。合并含有产物的馏分，在旋转蒸发器中除去乙腈，并用碳酸钾溶液调至pH11和加入乙酸乙酯。用乙酸乙酯萃取含水相，将混合的有机相干燥并浓缩。在2N盐酸和少量乙腈中处理残余物，并冻干。冻干得到127mg目标产物。
MS(Cl+)：310.2(M+H)+
实施例29
(外型/内型)-(3-二甲基氨基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
a)(外型/内型)-3-二甲基氨基-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-苯甲酰胺
将1.78g(0.011mol)N，N-羰基二咪唑加到在40ml无水THF中的1.65g(0.01mol)3-N，N-二甲基氨基苯甲酸溶液。室温下于氩气氛下搅拌混合物3小时，然后与1.82g(0.012mol)(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)混合。室温下搅拌混合物1小时并静置过夜，然后蒸馏掉溶剂。残余物与水混合并用2N HCl调节至PH3-4。磁搅拌混合物约30分钟，然后滤出无色结晶状(外型/内型)-3-二甲基氨基-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)苯甲酰胺，用水洗涤，并在气流下干燥。mp.：152-156℃；
MS(Cl+)：299.4(M+H)+
b)(外型/内型)-(3-二甲基氨基苄基)(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺盐酸盐
首先将在100ml无水1，2-二甲氧基乙烷中的2g(0.0067mol)(外型/内型)-3-二甲基氨基-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)苯甲酰胺溶液与1.38g(0.0097mol)三氟化硼混合，然后在10-15℃下分批与1.13g(0.03mol)氢硼化钠混合。70℃下加热混合物数小时，然后在90℃下加热，并静置过夜。随后蒸馏掉溶剂，将残余物与水混合，并用2N NaOH使其呈强碱性。用乙酸乙酯萃取混合物4次，用水洗涤有机相并干燥，蒸发溶剂。残余物在硅胶柱上用1份乙酸乙酯和3份甲苯的混合物进行色谱处理，然后与含有过量盐酸的溶液混合。滤出沉淀物(外型/内型)-(3-二甲基氨基苄基)-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐并干燥。无色结晶状固体，mp.：166-170℃(分解)。
MS(Cl+)：285.2(M+H)+
实施例30
(外型/内型)-[2-(3-甲氧基苯基)乙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
a)(外型/内型)-2-(3-甲氧基苯基)-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-乙酰胺
与实施例29a)给出的方法类似，由3-甲氧基苯基乙酸，N，N’-羰基二咪唑，和(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)得到(外型/内型)-2-(3-甲氧基苯基)-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-乙酰胺。黄色粘油。
MS(Cl+)：300.4(M+H)+
b)(外型/内型)-[2-(3-甲氧基苯基)乙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
与实施例29b)给出的方法类似，通过还原(外型/内型)-2-(3-甲氧基苯基)-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)乙酰胺而得到(外型/内型)-[2-(3-甲氧基苯基)乙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺盐酸盐。无色结晶状固体，mp.：222-225℃；
MS(ES+)：286.3(M+H)+
实施例31
(外型/内型)-[3-(3-甲氧基苯基)丙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
a)(外型/外型)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-丙酰胺
与实施例29a)给出的方法类似，由3-甲氧基苯基丙酸，N，N’-羰基二咪唑，和(外型/内型)-八氢-4，7-亚甲基茚-5-基胺(胺1)得到(外型/外型)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-丙酰胺。浅黄色油状产物。
MS(Cl+)：314.0(M+H)+
b)(外型/内型)-[3-(3-甲氧基苯基)丙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)胺盐酸盐
与实施例29b)给出的方法类似，通过还原(外型/外型)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)丙酰胺而得到(外型/内型)-[3-(3-甲氧基苯基)丙基](八氢-4，7-亚甲基茚-5-基)-胺盐酸盐。无色结晶状固体，mp.：186-188℃。
MS(ES+)：300.3(M+H)+
实施例32
(外型/内型)-(十氢-1，4-亚甲基萘-2-基)-(3-甲氧基苄基)胺盐酸盐
a)双-(3-氯-1，2，3，4-四氢-1，4-亚甲基萘-2-基)二氮烯N，N’-二氧化物
将3.34g亚硝酸异戊酯加到在6ml冰醋酸和6ml乙醇中的3.56g苯并降冰片二烯[L.Friedman和F.M.Logullo，J.Org.Chem.34：3089-3092，(1969)]溶液中，然后滴加在乙醇中的8.5ml 15％浓度的氯化氢气体溶液。室温下搅拌所得的悬浮液2个半小时，然后与20mg二异丙醚混合。再将混合物搅拌30分钟，然后滤出固体。澄清的结晶状固体；mp.187-188℃。
MS(FAB)：415.1(M+H)+
b)(外型)-1，2，3，4-四氢-1，4-亚甲基萘-2-基胺
将3g双-(3-氯-1，2，3，4-四氢-1，4-亚甲基萘-2-基)二氮烯N，N’-二氧化物悬浮在150ml甲醇中，并在高压釜中，采用100bar的氢，100℃的条件，用阮内镍催化剂氢化20小时。滤掉催化剂，蒸发溶剂，残余物与水混合，用NaOH使其成强碱性，并重复用甲基叔丁基醚萃取。干燥有机相，得到期望的胺，为浅黄色液体。
MS(ES+)：160.0(M+H)+
c)(外型/内型)-十氢-1，4-亚甲基萘-2-基胺
在高压釜中，采用100bar的氢，90℃的条件，用0.4g RuO2将在10ml甲醇和30ml 2N盐酸中的1g外型-1，2，3，4-四氢-1，4-亚甲基萘-2-基-胺溶液氢化10小时。分离出催化剂，并将混合物蒸发至其原始体积一半。用10N NaOH使所得的水溶液成为强碱性，并用甲基叔丁基醚重复萃取。干燥萃取物并分离溶剂，得到外型-十氢-1，4-亚甲基萘-2-基-胺，为无色油，此油优选在氩下贮藏。
MS(Cl+)：166.2(M+H)+
d)(外型/内型)-(十氢-1，4-亚甲基萘-2-基)-(3-甲氧基苄基)-胺盐酸盐
将0.97g(外型/内型)-十氢-1，4-亚甲基萘-2-基胺溶于25ml无水甲苯，并在加入0.8g 3-甲氧基苯甲醛和小催化量的对甲苯磺酸后，回流煮沸3小时。蒸发溶剂，残余物溶于50ml甲醇，搅拌下分批加入0.26g氢硼化钠，并在室温下搅拌混合物约20小时。然后用在甲醇中的氯化氢气体溶液酸化混合物，并搅拌30分钟，滤去沉淀的盐。浓缩滤液，并从二异丙醚和乙醇的混合物中重结晶残余物。无色结晶状物质；mp.234-236℃。
MS(ES+)：286.3(M+H)+
根据所述的实施例制备以下所述的化合物： 实施例 类似于 实施例 R1 R2 R3 R4 R5 HX MS 33 5 -H -H -OCH3 -H -H HCl Cl+ (M+H)+ 272.3 34 5 -OCH3 -H -H -H -H HCl Cl+ (M+H)+ 272.3 35 5 -H -OCH3 -H -H -OCH3 HCl ES+ (M+H)+ 302.2 36 5 -H -OCH2O- -H -H HCl ES+ (M+H)+ 286.2 37 5 -H -OCH3 -OCH3 -H -H - Cl+ (M+H)+ 302.4 38 5 -OCH3 -H -OCH3 -H -H HCl ES+ (M+H)+ 302.3 39 5 -H -OCH3 -F -H -H HCl Cl+ (M+H)+ 290.3 40 5 -H -OH -H -H -H HCl Cl+ (M+H)+ 258.2 41 10 -H -OCF3 -H -H -H TFA ES+ (M+H)+ 326.2 42 10 -H -OEt -H -H -H HCl Cl+ (M+H)+ 286.3 43 10 -H -OCF2- CF2H -H -H -H TFA ES+ (M+H)+ 358.2
实施例70
(外型/内型)-(3-甲磺酰基-苄基)-(八氢-4，7-亚甲基-茚-5-基)-胺盐酸盐
将65mg来自实施例61的产物溶于3ml甲醇。然后加入4ml的乙酸钠缓冲液，将混合物冷却至0℃。缓慢加入617mg OXONE，然后室温下搅拌混合物3小时。滤出沉淀并真空浓缩滤液。用碳酸氢钠溶液处理残余物并用乙酸乙酯萃取。干燥和过滤后，真空浓缩有机混合物得到60mg粗原料，在RP-18上用乙腈/水(0.05％三氟乙酸)对此原料借助制备型HPLC进行纯化。合并含有产物的馏分，在旋转蒸发器上除去乙腈，用碳酸钾溶液调至pH 11和加入乙酸乙酯。含水相用乙酸乙酯萃取三次，干燥混合的有机相并浓缩。在2N盐酸和少量乙腈中处理残余物并冻干。冻干得到8mg目标产物。
MS(Cl+)：320.1(M+H)+
药理学数据：
利尿实验的说明
方法
采用重量为155-175g的雄性Wistar大鼠进行该利尿实验。在实验开始前16小时，给动物禁食但不禁饮水。将大鼠随机放置于利尿笼中。将来自实施例5的物质溶于饮水中并以在10ml/kg体积中的20mg/kg体重的剂量口服给药。对照组口服相应体积的作为赋形剂的饮水。测量各组在头5小时和6-24小时的尿的排泄。火焰光度测定法(火焰光度计Eppendorf，Hamburg)测定尿电解质钠和钾，并测定氯化物电位(氯化物测量器Eppendorf)。采用凝固点降低法(渗透压力计Vogel，Gieβen)测定尿的同渗重量莫耳浓度。尿和电解质排泄以同渗重量莫耳浓度分别表示为ml/kg，mmol/kg，和mosmol/kg体重。Na+/K+的比率为利尿效果的数量指示。表中的结果为带标准偏差的数学平均。
结果： 尿 Na K Cl同渗重量莫耳 浓度 Na/K ml/kg mmol/kg mosmol/kg 赋形剂 对照饮水 10ml/kg 体重 p.o.n＝5 平均 1-5小时 9.73 0.26 0.48 0.38 6.48 0.61 SD 3.69 0.14 0.20 0.23 1.33 0.36 平均 6-24小时 26.84 1.75 3.95 1.44 32.32 0.45 SD 6.44 0.47 0.93 0.40 7.17 0.12 平均 总和 36.57 2.01 4.42 1.82 38.81 0.47 SD 1-24小时 9.08 0.37 0.97 0.26 7.00 0.11 实施例5 50mg在 10ml饮 水/kg体重 p.o.n＝5中 平均 1-5小时 12.39 0.31 0.75 0.60 7.82 0.47 SD 8.03 0.27 0.43 0.37 3.08 0.31 平均 6-24小时 22.57 1.29 3.57 1.57 30.51 0.37 SD 6.00 0.66 0.60 0.54 5.06 0.18 平均 总和 34.96 1.60 4.31 2.17 38.33 0.38 SD 1-24小时 9.14 0.64 0.61 0.41 3.47 0.16
评价：在50mg/kg的口服剂量处，来自实施例5的物质与对照组相比，不表现出对大鼠的利尿作用。
Caco 2模型的说明
从美国模式培养物保藏所(ATCC)得到Caco 2细胞系，并将其保持在Dulbecco改进的Eagle培养基(高葡萄糖含量)，此培养基添加有非基本氨基酸，L-谷酰胺，青霉素/链霉素，和10％浓度的胎牛血清，处在10％CO2气氛，95％相对大气湿度和37℃下的恒温箱中。细胞在细胞培养瓶(175cm2)中生长。为进行转运研究，将Caco 2细胞以6.5×104细胞/cm2的细胞密度接种到聚碳酸酯细胞培养插入片断上(COSTARTRANSWELLS，孔尺寸：3μm，表面：4.71cm2)，并在6孔培养盘上进行温育，4小时和8天后，以及随后的每两天改变培养基。将21-25天大的单分子层用于实验。
在各试验系列中，用3H-葡聚糖作为渗透性标记物测试21天大的单分子层。120分钟后的转移速率(累积)必须在2％的范围内。
除去顶端和底端的生长培养基，然后用转运缓冲剂(Hank’s平衡盐溶液pH 7.8；含有2.8g/l葡萄糖)冲洗单分子层，37℃下于10％CO2气氛下将细胞平衡15分钟。然后除去HBSS缓冲剂。
将受试化合物溶于HBSS缓冲剂和DMSO的混合物中，并将其加至顶端缓冲剂，得到1％浓度(v/v)的DMSO溶液。第一次实验的试验浓度为1mM，第二次实验的浓度为100μM。实验在37℃下进行，并通过在供体侧(顶端)加入1.5ml试验溶液开始实验。将不含化合物的转运缓冲剂加到受体侧(底端，2.5ml)。在不同的时间点从底面取走试样(1ml)并用温度为37℃的新鲜缓冲液替换。从开始和结束(120分钟)时取底端试样，从而可以利用这些浓度和累积的底端浓度测得化合物的回收率。用HPLC法分析化合物。
采用以下方程式计算表观渗透系数(Papp)：Papp=dc·Vdt·A·cO]]>
其中，dc/dt指通过单分子层的流量(μg化合物/(ml×s))，V指在收集室中液体的体积(ml)，A指单分子层的表面积(cm2)，而c0指在供给室中的最初浓度(μg化合物/ml)。在利用最初的线性数据曲线(直至60分钟的线性)的对应的时间点上，由累积的底端浓度计算通过单分子层的流量。所有的测定重复三次，从而使Papp的计算值为这些测量值的平均数。所选择的化合物的Papp值用文献中已知的吸收值校正，提供了乙状标准曲线。根据Artursson的研究(Artursson P.，Karlsson J.；Biochem.Biophys.Res.Comm.1991；175/3：880-885)，该曲线可用于评价化合物的吸收分数。
结果：
式I或Ia的化合物穿透膜的能力明显优于文献(J.-R.Schwark等人，Eur.J.Physiol(1998)436：797)中已知的酰基胍型的NHE3活性化合物。
NHE活性测定的说明
大部分的分子生物技术依据以下著作的方案：″CurrentProtocols in Molecular Biology(eds.Ausubel，F.M.，Brent，R.，Kingston，R.E.，Moore，D.D.，Seidman，J.G.，Smith，J.A.和Struhl，K.；John Wiley & Sons)″或：″Molecular Cloning：ALaboratory Manual(Sambrock，J.，Fritsch，E.F.和Maniatis，T.；Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989))″。在我们的研究中，生产了稳定转染的细胞系，这些细胞系在每种情况下表达以下一种NHE亚型：人NHE1(Sardet等人Cell 56，271-280(1989))，兔NHE2(Tse等人J.Biol.Chem.268，11917-11924(1993))，人NHE3(Brant等人Am.J.Physiol.269(Cell Physiol.38)，C198-C206(1995))或大鼠NHE3(Orlowski等人；J.Biol.Chem.267，9331-9339(1992))。
在加入适宜的连接体序列以后，将由Pouyssegur教授得到的各NHE亚型的cDNA克隆克隆至表达质粒pMAMneo(可从通过CLONTECH，Heidelberg得到)，从而使在质粒的Nhe1限制核酸内切酶识别序列位于各个NHE亚型的起始密码子之前大约20-100碱基对，而整个编码序列存在于该构建体中。在通过RT-PCR从人肾脏mRNA上得到的人NHE3中，选择RT-PCR底物以使所得的cDNA带具有与pMAMneo匹配的末端限制位点。
采用所谓的“磷酸钙方法”(在“当代分子生物学方案(CurrentProtocols in Molecular Biology″)”第9.1章中描述)，用含有各种NHE亚型编码序列的质粒转染NHE缺陷细胞系LAP1(Franchi等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83，9388-9392(1986))。通过在含有G418的培养基(只有作为转染结果含有新基因的细胞才能够在这些条件下存活)中生长的方法选择转染的细胞，然后对功能性NHE表达进行选择。为此，使用Sardet所述的″酸性加样″技术(Sarde等人；Cell56，271-280(1989))。表达功能NHE亚型的细胞还可以在CO2和HCO3-存在下补偿在此试验期间进行的酸化，但未转染的LAP1细胞则不能。在重复″酸性加样″选择数次之后，将存活的细胞接种至微滴定平皿中，从而使每孔应该基本有一个细胞，大约10天后检查每种生长的菌落数。然后采用XTT扩增试剂盒(Boehringer Mannheim)，根据“酸性加样”后的存活能力调查各菌落的细胞总数。最好的细胞系用于进一步的试验并在含有G418的培养基上，在连续选择压力下培养，避免转染序转染序列损失。
为了通过具体的物质测定各NHE亚型抑制作用的IC50值，对Faber提出基于″酸性加样″技术的试验(Faber等人；Cell.Physiol.Biochem.6，39-49(1996))稍微进行了改动。
在该试验中，测定酸化后细胞内pH(pHi)的恢复，这种恢复即使在不含碳酸氢盐的条件下也用于功能性NHE。为此，用PH敏感性荧光染料BCECF(Calbiochem，使用前物BCECF-AM)测定pHi。首先往细胞加入BCECF。在505和440nm的激发波长和535nm的发射波长下，在″放射荧光光谱计″(Photon Technology International，SouthBrunswick，N.J.，USA)中测定BCECF荧光，并通过标准曲线转化为Phi。与所述的方案不同的是，细胞即使在BCECF加样期间已在NH4Cl缓冲剂(pH 7.4)中温育(NH4Cl缓冲剂：115mM NaCl，20mM NH4Cl，5mM KCl，1mM CaCl2，1mM MgSO4，20mM HEPES，5mM葡萄糖，1mg/mlBSA；用1M NaOH调至pH 7.4)。细胞内酸化是通过将975μl不含NH4Cl的缓冲剂加至在NH4Cl中温育的25μl等分试样的细胞而进行的。随后的PH恢复时间在NHE1的情况下记录为2分钟，在NHE2的情况下记录为5分钟，而在NHE3的情况下记录为3分钟。为了计算受试物质的抑制效力，首先在缓冲剂中研究细胞，其中，PH完全恢复或根本没有恢复。为完全pH恢复(100％)，在含有Na+的缓冲剂(133.8mM NaCl，4.7mM KCl，1.25mM CaCl2，1.25mM MgCl2，0.97mM Na2HPO4，0.23mM NaH2PO4，5mM HEPES，5mM葡萄糖；用1M NaOH调至pH 7.0)中温育细胞。为了测定0％值，在不含Na+的缓冲剂(133.8mM胆碱盐酸盐，4.7mM KCl，1.25mM CaCl2，1.25mM MgCl2，0.97mM K2HPO4，0.23mM KH2HPO4，5mM HEPES，5mM葡萄糖；用1M NaOH调至pH 7.0)中温育细胞。在含Na+的缓冲剂中制备受试物质。在每种受试物质浓度下的细胞内PH的恢复表示为最大恢复百分率。根据pH恢复的百分率数值，通过程序SigmaPlot计算各NHE亚型的具体物质的IC50值。
NHE3活性 实施例 大鼠NHE3 IC50[μM] 5 0.81 (+)-6 0.5 (-)-6 1 10 0.9 9 5 8 70 7 31