黄筒花提取物及其药物的制备和医药应用 技术领域：
本发明公开一种黄筒花提取物和含该提取物的药物组合物的制备方法，同时也公开了黄筒花提取物的医药用途，属于中药有效成分提取物制备方法和医药用途应用技术领域。
背景技术：
黄筒花Phacellathus tubiflorus sieb.et zucc，以列当科植物黄筒花的全草入药。产于安图，扶松等县。分布于中国东北，西北，华中。功用为滋补强壮。用于先天不足，病后体虚等症。目前由于发现黄筒花有很高的药用价值，因而对其药用价值正在深入研究。但用黄筒花为原料，大量制备黄筒花提取物，并制成药物，用于在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝、抗疲劳、增强性功能、抗心肌缺血、强壮作用的医学应用未见报道。
发明内容：
本发明提供了一种具有药用价值的黄筒花提取物。
本发明还提供了从黄筒花中提取上述物质的制备方法，适用于工业化生产。
本发明进一步提供了以黄筒花提取物组分为主要药物或与其他药物组方用于在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝、抗疲劳、增强性功能、抗心肌缺血、强壮作用的药物。
黄筒花提取物是通过以下提取方法获得的：
将白树花或其菌丝体粉碎，加4～8倍水煎煮2～4小时，过滤取滤液，反复2～4次，合并滤液，浓缩至1200～1800ml，放置，冷却至室温，经活性炭过柱2次，收集流出液，浓缩至800～1500ml，减压干燥(温度65～75□，真空度0.085～0.095mPa)，即得黄筒花提取物，为褐色粉末。
用酚硫酸法，在490nm紫外波长，以葡萄糖为对照品测得黄筒花提取物多糖含量为5～15％。
经过药理学试验筛选，上述化合物具有在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝、抗疲劳、增强性功能、抗心肌缺血、强壮作用的药理活性。
按药剂学方法，可以将本发明的黄筒花提取物制备成多种临床药物剂型作为在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝、抗疲劳、增强性功能、抗心肌缺血、强壮作用的药物，所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的上述化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。
上文的载体是指药学领域常规的药物载体，包括稀释剂、赋型剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体。
本发明可以组合物的形式通过口服、直肠、静脉、肌肉注射或胃肠外给药方式施用于这种治疗的患者。按照药学领域的常规生产方法制备各种剂型如片剂、颗粒剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂。也可使其活性成分与一种或多种载体或药物混合，自成所需剂型。
本发明的药物优选含有1％-99％的黄筒花提取物和99％-1％的赋型剂(包括其他配伍用的药物)，优选含有30％-80％的黄筒花提取物和70％-20％地赋型剂(包括其他配伍用的药物)，最好含有60％-70％的黄筒花提取物和40％-30％的赋型剂(包括其他配伍用的药物)。
下述的药理实验证实了黄筒花提取物具有在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝、抗疲劳、增强性功能、抗心肌缺血、强壮作用等药理活性：
黄筒花提取物的药理学作用
摘要 黄筒花提取物不仅具有抗肿瘤作用，还能增强机体的免疫能力。另外，黄筒花提取物还具有明显的升高白细胞、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝、抗疲劳、增强性功能、抗心肌缺血、强壮作用。
1 材料
1.1 药物：黄筒花提取物为褐色粉末。批号：20040501。注射用环磷酰胺为江苏恒瑞医药股份有限公司产品，批号：20040326。
1.2 S180和H22瘤株购自北京药物研究所。
1.3 动物：昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，Wistar大鼠，体重160～180g，雌雄各半，购自长春高新医学动物实验研究中心，合格证编号为(吉)2003-0004.常规饲料，自由饮水。
2 方法和结果
2.1.对荷S180瘤及H22瘤小鼠肿瘤生长的影响
无菌下取生长7日的S180和H22瘤株，按1∶4稀释，接种在小鼠右侧腋下0.2ml/只，第二日分组，分别灌胃10ml/kg蒸馏水，腹腔注射20mg/kg环磷酰胺，灌胃黄筒花提取物。每日一次，连续10日。末次给药后1小时，称体重后，拉颈处死小鼠。取瘤称重。结果见表1，2。结果表明，黄筒花提取物0.3～1.2g/kg·d对S180移植性小鼠肿瘤和H22移植性小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用。
表1黄筒花提取物对荷S180小鼠的影响
组别(g/kg) 动物数 肿瘤重(g) 抑制率(％)
(只)
对照组 - 10 2.72±0.51
环磷酰胺 0.02 10 0.86±0.39*** 68.12
黄筒花提取物1.2 10 1.61±0.45*** 43.15
黄筒花提取物0.6 10 1.92±0.41*** 31.54
黄筒花提取物0.3 10 2.36±0.87 13.14
与对照组比较***表示P＜0.001，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05下同
表2黄筒花提取物对荷H22小鼠的影响
组别(g/kg) 动物数(只) 肿瘤重(g) 抑制率(％)
对照组 - 10 2.39±0.59
环磷酰胺 0.02 10 0.91±0.31*** 65.24
黄筒花提取物1.2 10 1.51±0.71** 39.28
黄筒花提取物0.6 10 1.68±0.58** 33.57
黄筒花提取物0.3 10 1.94±0.48 15.02
2.2.黄筒花提取物对小鼠吞噬功能的影响
取小鼠60只，随机分6组，分别灌胃10ml/kg蒸馏水，人参皂苷0.1g/kg，黄筒花提取物粉1.2、0.6、0.3g/kg，每日灌胃一次，连续7日，末次给药后1小时，各鼠尾静脉注射一得阁墨汁(1∶4稀释)10ml/kg，分别在2和15分钟后，由眼静脉取血0.05ml，置4ml0.1％碳酸钠溶液中混匀，在625nm处比色。结果以吞噬指数表示。结果见表3。结果表明，黄筒花提取物能够显著增强小鼠的吞噬功能。
表3黄筒花提取物对吞噬功能小鼠的影响
组别(g/kg) 动物数(只) 吞噬指数 P
正常对照组 - 10 0.0431±0.009
人参皂苷 0.1 10 0.0529±0.018 ＜0.05
黄筒花提取物1.2 10 0.0572±0.019 ＜0.05
黄筒花提取物0.6 10 0.0532±0.017 ＜0.05
黄筒花提取物0.3 10 0.0495±0.018 ＞0.05
2.3.对小鼠免疫器官的影响
取未成年雄性小鼠，随机分6组，按表中所示剂量灌胃给药，每日一次，连续10日。末次给药后1小时断头处死小鼠，取脾脏和胸腺称重，并计算脏器指数。结果见表4。黄筒花提取物灌胃给药，可以增加未成年小鼠免疫器官胸腺和脾脏指数。
表4黄筒花提取物对小鼠脏器指数的影响
组别 动物数 脾脏指数 胸腺指数
(g/kg) (只) (mg/10g) (mg/10g)
对组 - 10 61.92±17.9 68.75±10.91
人参皂苷0.1 10 79.95±10.33** 89.76±11.14**
黄筒花提取物1.2 10 75.98±10.65** 84.98±11.12**
黄筒花提取物0.6 10 72.56±11.71* 80.36±10.67*
黄筒花提取物0.3 10 67.76±11.87 75.94±7.35*
2.4对化疗小鼠的升高白细胞作用
除对照组外，模型组和给药组小鼠腹腔注射5-氟尿嘧啶225mg/kg/d，连续14天。造模后，各组动物按表中所示剂量灌胃给药，结果表明，黄筒花提取物对化疗小鼠具有明显的升高白细胞作用。结果见表5。
表5黄筒花提取物对化疗小鼠升高白细胞作用(x±s，n＝10)
组别/剂量 WBC(109/L)
(g/kg) 0d 3d 6d 9d 12d
对照 8.6±1.23 8.8±0.42 8.6±0.42 8.9±0.65 9.8±0.51
模型组 8.7±1.26 3.9±0.38*** 3.2±0.41*** 5.1±0.69*** 7.7±0.52*
黄筒花提取物
1.2 8.8±0.71 7.5±0.90## 6.2±0.51### 8.8±0.39### 9.9±0.41##
0.6 8.9±0.75 6.8±0.61# 5.9±0.61## 7.8±0.36## 9.2±0.38##
0.3 8.8±0.71 5.8±0.88 5.3±0.49# 7.7±0.39## 8.6±0.38
与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001。
2.5抗胃溃疡作用
按表6分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药2h后，按文献方法，用乙醚轻度麻醉大鼠，将大鼠四肢绑于铁网上，头朝下垂直放置16小时，处死大鼠，取胃，检查大鼠应激型溃疡等级。结果见表6。黄筒花提取物具有明显的抗溃疡作用。
表6黄筒花提取物的抗溃疡作用(x±s)
组别 剂量(g/kg) 动物数(只) 溃疡等级(x±s)
对照 10 4.89±0.69
胃乐新 1.0 10 1.87±0.17***
黄筒花提取物 1.2 10 1.78±0.26***
黄筒花提取物 0.6 10 1.98±0.34***
黄筒花提取物 0.3 10 2.65±0.65***
与对照比较，**P＜0.01，***P＜0.001
2.6保肝作用
取小鼠60只，随机分6组，第一组为正常对照组，灌胃10ml/kg蒸馏水，第二组为模型组，灌胃10ml/kg蒸馏水，第三组为阳性药组，灌胃给予复方益肝灵0.8g/kg，第4～6组为黄筒花提取物组，分别灌胃给予黄筒花提取物粉0.3、0.6、1.2g/kg，每日灌胃一次，连续7日，第六次给药后，后四组分别腹腔注射0.01％CCL4花生油，禁食16小时，次日给药后1小时，由眼静脉采血，离心。取血清，用赖氏法测定谷丙转氨酶含量(根据北京中生生物工程高新技术公司试剂盒说明书上方法进行)。结果见表7。
表7黄筒花提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的影响
组别 动物数(只) 谷丙转氨酶(u/L) P
(g/kg)
正常对照组 - 10 45.9±8.56 ＜0.001
模型组 - 10 122.3±12.6
复方益肝灵 0.8 10 106.5±13.1 ＜0.05
黄筒花提取物1.2 10 86.8±15.4 ＜0.001
黄筒花提取物0.6 10 91.6±15.9 ＜0.01
黄筒花提取物0.3 10 94.5±13.4 ＜0.05
结果表明，黄筒花提取物灌胃给药，能对四氯化碳造成小鼠急性肝损害具有明显的保护作用。
2.7降血脂作用
将小鼠按表8所示分组给药，每组动物雌雄各半，对照组和模型组灌胃蒸馏水10ml/kg。于7天内每天灌胃一次，末次给药1h后，模型组和给药组按10ml/kg腹腔注射75％蛋黄生理盐水溶液，对照组腹腔注射等体积生理盐水，禁食16h后，再灌胃给药一次，1h后，处死动物，取血，分离血清，按常规方法测总胆固醇TC、甘油三酯TG、低密度脂蛋白LDL-C，结果见表8。黄筒花提取物高剂量可明显降低高脂血症小鼠总胆固醇TC、甘油三酯TG、低密度脂蛋白LDL-C水平。
表8.黄筒花提取物对小鼠血脂的影响(x±s)
组别 剂量 动物数 甘油三酯 总胆固醇 低密度脂蛋白
(g/kg) (只) (mmol/L) (mmol/L) (mmol/L)
对照组 - 10 0.47±0.09### 2.46±0.58## 0.46±0.08###
模型组 - 10 0.96±0.05 3.88±0.59 0.97±0.05
血脂康 0.4 10 0.58±0.05### 2.61±0.37## 0.55±0.06###
黄筒花提取物 1.2 10 0.55±0.06### 2.49±0.37*** 0.50±0.07###
黄筒花提取物 0.6 10 0.61±0.08#* 2.71±0.49## 0.58±0.09#**
黄筒花提取物 0.3 10 0.65±0.07#* 2.79±0.51## 0.61±0.07**
与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
2.8降血糖作用
除对照组外，模型组和给药组小鼠尾静脉注射四氧嘧啶70mg/kg/d，造成糖尿病模型后，各组动物按表中所示剂量灌胃给药，10天后，处死动物，取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖，结果表明，黄筒花提取物对糖尿病模型小鼠血糖升高具有明显的降低作用。结果见表9。
表9黄筒花提取物降血糖作用
组别 动物数(只) 血糖(mmol/L) P
(g/kg)
正常对照组 - 10 8.13±2.15 ＜0.001
模型组 - 10 19.9±6.58
消渴丸 0.2 10 8.45±3.34 ＜0.001
黄筒花提取物 1.2 10 8.76±3.84 ＜0.001
黄筒花提取物 0.6 10 9.68±5.54 ＜0.001
黄筒花提取物 0.3 10 10.67±5.97 ＜0.01
2.9抗疲劳作用
按表中所示剂量灌胃给药，每日灌胃一次，连续7日，实验前禁食16小时，末次给药后1小时，将小鼠放入水深20cm，水温30～320℃水缸中，观察小鼠沉水底不能上浮(即体力耗尽)所用的时间。结果见表10。黄筒花提取物能显著延长小鼠游泳时间，具有抗疲劳作用。
表10黄筒花提取物对小鼠游泳时间的影响
组别(g/kg) 动物数(只) 游泳时间 P
(分)
正常对照组 - 10 202.5±39.8
人参皂苷 0.1 10 259.8±46.7 ＜0.01
黄筒花提取物0.6 10 261.5±46.7 ＜0.01
黄筒花提取物0.3 10 257.5±52.7 ＜0.01
3.0对未成年小鼠性器官重量的影响
将未成年雄性小鼠(10～14g)按表10所示分组给药，对照组灌胃蒸馏水10ml/kg。于15天内每天灌胃一次，末次给药1h后，处死动物，取包皮腺、前列贮腺精囊和睾丸，称重，结果见表10。黄筒花提取物0.6g/kg可明显增加未成年雄性小鼠包皮腺、前列贮腺精囊和睾丸重量。
表11黄筒花提取物对未成年雄性小鼠性器官重量的影响(x±s，n＝10)
组别 剂量(g/kg) 包皮腺(mg/10g) 前列腺贮精囊(mg/10g) 睾丸(mg/10g)
对照 6.8±1.68 14.6±2.85 46.6±5.99
甲基睾酮 0.003 9.8±2.14** 22.9±5.07** 60.4±8.89**
黄筒花提取物 0.6 8.8±1.56* 18.7±4.71* 52.9±4.84*
0.3 7.6±1.37 15.9±3.59 49.9±4.75
与对照比较 *P＜0.05 **P＜0.01；下同
3.1黄筒花提取物对去势雄性小鼠性器官重量的影响
将成年雄性小鼠(20～24g)摘除睾丸，术后二周，按表2所示分组给药，对照组灌胃蒸馏水10ml/kg。于15天内每天灌胃一次，末次给药1h后，处死动物，取包皮腺和前列腺贮精囊，称重，结果见表12。黄筒花提取物0.6g/kg可明显增加去势雄性小鼠包皮腺和前列腺贮精囊重量。
表12黄筒花提取物对去势小鼠性器官重量的影响( x±s，n＝10)
组别 剂量(g/kg) 包皮腺(mg/10g) 前列腺贮精囊(mg/10g)
对照 7.5±2.86 17.8±3.89
甲基睾酮 0.003 14.1±4.13** 29.7±4.89**
黄筒花提取物 0.6 11.9±2.47* 26.8±4.49*
0.3 9.3±5.27 20.8±4.97
3.2抗心肌缺血作用
按表13所示分组ig给药，每组动物雌雄各半，对照组ig蒸馏水10ml/kg。于10天内每天ig一次，从第8天开始，模型组和给药组ip ISO 30mg/kg，对照组ip等体积生理盐水，至第10天，末次给药2h后，处死动物，取血，分离血清，按常规方法测LDH、GOT、CPK活性，结果见表13。黄筒花提取物可明显降低ISO致心肌缺血大鼠血清LDH、GOT、CPK活性。
表13黄筒花提取物对心肌缺血大鼠血清LDH、GOT、CPK影响(x± s，n＝10)
组别 剂量 LDH GOT CPK
(g/kg) (mmol/L·s) (mmol/L·s) (mmol/L·s)
对照 1.2±0.19** 1.8±0.21** 3.2±0.65**
模型 2.8±0.43 3.6±0.50 6.9±1.21
黄筒花提取物1.2 1.5±0.21** 1.9±0.31** 3.5±0.71**
黄筒花提取物0.6 1.9±0.33* 2.5±0.37* 4.2±0.87*
与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01
3.3强壮作用(促进核酸和蛋白质合成作用)
按表分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药1h后，将小鼠处死，取肝组织，按文献方法[1]测DNA、RNA和蛋白质含量，结果见表。黄筒花提取物可明显增加小鼠肝组织核酸RNA和蛋白质含量，对DNA含量也有增加趋势。表明黄筒花提取物具有明显的强壮作用。
表14黄筒花提取物对小鼠肝DNA、RNA和蛋白质含量的影响( x±s，n＝10)
组别 剂量(g/kg) DNA(mg/g) RNA(mg/g) 蛋白质(mg/g)
对照 3.7±0.3 15±1.2 256±29
黄筒花提取物 1.2 5.2±0.7 19±1.2* 289±26*
0.6 4.8±0.5 18±1.3* 278±20*
0.3 4.7±0.5 17±1.2* 272±18*
与对照比较*P＜0.05
4 结论
黄筒花提取物具有明显的抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝、抗疲劳、增强性功能、抗心肌缺血、强壮作用。
具体实施方式：
通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1
将黄筒花1kg粉碎，加6倍水煎煮3小时，过滤取滤液，反复3次，合并滤液，浓缩至2000ml，放置，冷却至室温，经活性炭过柱2次，收集流出液，浓缩至减压干燥(温度70℃，真空度0.090mPa)，即得黄筒花提取物。用酚硫酸法，在490nm紫外波长，以葡萄糖为对照品测得黄筒花提取物多糖含量为10％。
实施例2
将黄筒花1kg粉碎，加6倍水煎煮3小时，过滤取滤液，反复3次，合并滤液，浓缩至2000ml，放置，冷却至室温，经活性炭过柱2次，收集流出液，浓缩减压干燥(温度70℃，真空度0.090mPa)，即得黄筒花提取物。用酚硫酸法，在490nm紫外波长，，以葡萄糖为对照品测得黄筒花提取物中多糖含量为10％。配液后G4漏斗过滤，滤液分装灭菌，制成注射剂，其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版注射液项下要求。
实施例3
黄筒花提取物1kg，药用淀粉0.5kg，用80％浓度的乙醇湿法制粒，整粒，干燥，装1#胶囊，每粒0.2g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项下要求。
实施例4
黄筒花提取物1kg，药用淀粉0.5kg，糊精1kg，50％浓度乙醇适量，制粒，整粒，干燥，压片，每片0.2g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版片剂项下要求。