一种微生物原料药、其生产方法及其用途 【技术领域】
本发明涉及一种微生物原料药及其生产方法，特别是利用微生物发酵生产的含有生物硒的抗癌原料药及其生产方法。
背景技术
硒是人体必需的微量元素，人的血硒水平直接关系人的健康。现代医学研究表明，硒是人体内一种强力抗氧化剂，还具有调节人体内维生素A、C、E等的吸收。缺硒与癌症、心脑血管病、人的衰老等疾病密切相关。目前我国成人人均硒摄入量应为每日50-200μg，如人体日摄入量长期低于50μg，将诱发多种严重疾病。
日常饮食中含硒极少，主要来源有小麦、糙米、玉米、大蒜、海产品、动物肝等。目前市面上补硒产品主要是亚硒酸钠、硒酸钠等化学硒，因毒性较大，只能用于需要严格控制的药品而不能用于食品。
近年来，国内外大量研究表明，硒对癌细胞有“靶向性抑杀作用”，被称为人体内的“生物导弹”，由此而此发全球含硒抗癌药物的研究、生产热潮。但是，经深入的分子生物学研究，表明并非所有的硒化合物都有抗癌作用，只有转化为生物活性硒的物质(包括硒蛋白、含硒酶等)才具有良好的抗癌作用。目前市场上主要的生物活性硒为天然酵母硒，但其生物利用度还有待提高。
因此利用现代生物工程技术将化学硒转化为生物利用度高、天然、安全地生物活性硒，可以从根本上提高硒的生理活性与吸收率，同时降低和消除其毒性。
【发明内容】
本发明的目的提供一种含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料药，该原料药中含有无毒且易被人体接受的生物活性硒，生物活性硒以硒蛋白为主要形态，提高了硒含量及功效，可进一步加工成胶囊或口服液，是提高免疫力、配合肿瘤患者在手术、化疗后理想的抗癌用治疗药和保健药。
本发明的另一目的在于提供一种含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料药的制备方法，该方法能够以高转化率将无机硒转化为生物活性硒，方法简单，具有良好的重现性，易于工业化。
本发明的再一目的在于提供一种含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料药在制备预防及治疗癌症药物上的用途。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料药，其中含有200-400mg/kg的生物活性硒(按Se)和400-600mg/kg的真菌多糖。
其中的生物活性硒为硒蛋白、硒氨基酸及含硒酶一种或一种以上的组合，真菌多糖是由食用真菌提取的、主要成份为蛋白多糖体，属于粘多糖类，生物学上又称朴菇素朴菇素。
其中的生物活性硒为无机硒经酵母和光合菌进行生物转化的酵母硒。其中的无机硒为亚硒酸钠、亚硒酸钙、亚硒酸钴或二氧化硒中的一种或一种以上的组合。其中的酵母为啤酒酵母、产朊假丝酵母、产朊球形酵母。
光合菌菌为红假单胞菌或红螺菌，优选血色红假单胞菌(沼泽红假单胞菌，Rps.Rutila)、嗜硫红假单胞菌(Rps.Sulfidophila)、绿色红假单胞菌(Rps.Viridis)中的一种或其组合
本发明的含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料药中生物活性硒的含量优选为200-400mg/kg。
一种含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料药的生产方法，其特征在于：利用新筛选出的红假单胞菌首先把无机硒转化为生物活性硒发酵液(有机态硒)。与此同时从天然食用菌(W)中分离出真菌多糖粗品，然后把生物活性硒发酵液与真菌多糖粗品混合发酵，经后处理得到含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料药。
具体地说，本发明的制备方法包括如下步骤：
1.利用红假单胞菌液体发酵，使无机硒达到生物转化，制得到硒蛋白为主要形态的生物硒发酵液。
2.利用W菌进行液体深层连续发酵，然后从发酵液中提取真菌多糖粗品。
3.在一定条件下使“生物硒发酵液”与“真菌多糖粗品”进行混合发酵、精制、提纯，最终制得以生物活性硒、真菌多糖为主要成份的抗癌原料药——“富硒生物多糖”或“生物活性硒真菌多糖”。
本发明的菌种为红假单胞菌(Rhodopseudomonas)，特别是血色红假单胞菌(沼泽红假单胞菌，Rps.Rutila)。
其中的天然食用菌(W)为市售金针菇或其他富含朴菇素的食用菌。也可以是经诱变育种培育出专供提取真菌多糖的食用菌，除野生外可在日光大棚内培育。
所述真菌多糖粗品为主要成份为粘多糖类蛋白多糖，优选真菌多糖粗品为朴菇素。
生物活性硒发酵液的制备过程为：在培养基中接入5-10wt％的红假单胞菌菌种、搅拌、灭菌；然后加入200-500mg/kg浓度的无机硒，培养至物料逐渐转成深红色和/或活菌数为10-20亿个/ml。
其中所述无机硒为亚硒酸钠、亚硒酸钙、亚硒酸钴或二氧化硒中的一种或一种以上的组合。
所述培养基为0.1-1g酵母膏、1-10g醋酸钠、0.1-5g氧化铵、0.1-5g磷酸二氢钾、0.1-3g g氧化镁、1-6g碳酸氢钠，使用时将其溶解在1000ml蒸馏水中。
所述培养基优选为0.3g酵母膏、5g醋酸钠、1g氧化铵、1g磷酸二氢钾、0.5g氧化镁、3g碳酸氢钠使用时将其溶解在1000ml蒸馏水中。
所述真菌多糖粗品可以直接采用市售朴菇素，或者在室温下用食用酒精浸提食用菌(W)得到的真菌多糖粗液经后处理得到真菌多糖粗品。
其中食用酒精的用量为食用菌重量的10-40倍。
后处理包括过滤去渣，取上清液经盐析、透析、浓缩、干燥得真菌多糖粗品。
生物活性硒发酵液与真菌多糖粗品混合发酵的过程为：将生物活性硒发酵液置于发酵容器中，加入10-20wt％的真菌多糖粗品，搅匀后加盖密封厌氧发酵48-72h，经后处理得到生物活性硒真菌多糖产品。
其中混合发酵的温度优选为32℃；后处理包括真空过滤、浓缩、干燥。
上述生物活性硒真菌多糖产品可用于配制胶囊。若是用于生产口服液，需经超滤或反渗透加工制成清亮液态产品。
所述真菌多糖粗品也可以采用食用菌进行液体深层连续发酵，然后从发酵液中提取真菌多糖粗品的方法制备。
真菌多糖的制备：精选W菌鲜子实体1000g，按20倍量加入食品酒精，在室温30度(摄氏)下浸提24h，过滤去渣，取上清液经盐析、透析、浓缩、冷冻干燥得真菌多糖粗品。
本发明的生物活性硒中，无机硒盐与酵母及光合菌蛋白结合得到生物活性硒，生物活性硒中的生物硒含量占总硒量的95％以上，非常适合人体吸收利用。是纯天然生物态制剂，符合人体最佳硒需求量，安全无副作用。动物试验还表明，本发明的生物活性硒没有致畸和致突变方面的危险；此外，本发明的生物活性硒硒富含硒蛋白、硒氨基酸及含硒酶、B族维生素和多种微量元素。
本发明的制备过程中，先对无机硒进行发酵，使无机硒转化为生物硒，然后与含有真菌多糖的另一种微生物发醇产品进行混合发醇，经以上两级发酵后硒的转化率达到95％以上，终端产品“富硒生物多糖”或“生物活性硒真菌多糖”中含有高量和活性硒、含硒酶和真菌多糖，用于癌症制药有疗效显著、使用安全、无毒副使用等多种优越性能。由于生物活性硒和真菌多糖具有良好的协同作用，使产品的综合效力更高，临床应用效果更好。本发明“生物活性硒真菌多糖”生产成本低、药效成份明确，疗效显著、无毒副作用，可用于配制各类抗癌新药，不失为一种理想的抗癌原料药。
本发明的产品具有以下优点：
1.加入的无机硒经过两次发酵转化，促使硒的转化充分、安全，转化后的生物硒基本上属无毒物质，可保证制药的安全。
2.生物活性硒与真菌多糖在防治癌症上有极佳协同作用，前者(指生物硒)利用其“靶向抑杀”作用可扑灭原有的癌细胞，后者(指真菌多糖)可显著提高患者免疫功能“抑制癌细胞增生”作用，两种药效成份相结合，可达到“标本兼治”，从根源上防治肿肿瘤病症。
3.克服了目前医药市场上大多数抗肿瘤药物存在的毒副作用大的弊端。本产品对癌细胞针对性强，既具有强的抑杀癌细胞功能，又不伤及健康细胞。它的奥妙在于产品中的真菌多糖具有极佳的刺激抗体增生的作用，真菌多糖虽无直接杀死癌细胞的功能(更不伤及健康细胞)，但可依靠大量的抗体在机体中筑起坚强的防御体系，使癌细胞“无生长的余地”，唯其走向“自然死亡”。发明的详细描述
下面结合附图和具体实施例详细描述本发明
附图说明：
附图1为本发明的生物活性硒真菌多糖的生产工艺流程图；
附图2为本发明中真菌多糖的生产工艺流程图。
下面为本发明的具体实施例，光合菌由中科院微生物所提供，其中红假单胞菌(Rhodopseudomonas)，特别是血色红假单胞菌(沼泽红假单胞菌，Rps.Rutila)、红螺菌(0192Rhodospiriliuml)、酵母为市售产品，见农业部公告第244号，生产单位为惠州市惠山水生生物制品有限公司(许可证号2002-1256)，珠江水产研究所微生物制品厂也生产该产品。
实施例1
1.生物活性硒的制备
在1000ml蒸馏水中加入0.3g酵母膏、5g醋酸钠、1g氧化铵、1g磷酸二氢钾、0.5g氧化镁、3g碳酸氢钠，搅拌溶解后煮沸灭菌，降湿至32℃后按5wt％的比例接入红假单胞菌(Rhodopseudomonas)，特别是血色红假单胞菌(沼泽红假单胞菌，Rps.Rutila)，置日光湿室25℃-26℃培养3天后，加入200mg/kg浓度的亚硒酸钠，继续培养5天，物料逐渐转成深红色，表明已经成熟。取样检测，活菌数为10-11亿个/ml。
2.真菌多糖的制备
精选天然食用菌金针菇菌鲜子实体1000g，按20倍量加入食用酒精，在室温(30℃)下浸提24h，过滤去渣，取上清液经盐析、透析、浓缩、冷冻干燥得真菌多糖粗品。收率约在2％左右。
3.混合发酵
在生物硒发酵容器中按20wt％的比例加入真菌多糖粗品，搅匀后加盖密封，厌氧发酵(调温32℃)48h，放出物料，经真空过滤、弃渣、浓缩去溶剂、干燥得红色粉状物，即为生物活性硒真菌多糖的微生物原料药，该原料药可用于配制胶囊、片剂、冲剂等各种制剂。
上述原料药也可用经超滤及反渗透加工，制成清亮液态产品用于生产口服液。
实施例2
1.生物活性硒的制备
在1000ml蒸馏水中加入1g酵母膏(啤酒酵母菌Brewer′Sreast)、3g醋酸钠、5g氧化铵、3g磷酸二氢钾、0.1g氧化镁、1g碳酸氢钠，搅拌溶解后煮沸灭菌，降湿至32℃后按10wt％的比例接入红螺菌菌种，菌种编号为0192(Rhodospiriliuml共1株)，置日光温室29℃-30℃培养2天后，加入500mg/kg浓度的亚硒酸钴，继续培养3天，物料逐渐转成深红色，表明已经成熟。取样检测，活菌数一般可达19-20亿个/ml。
2.真菌多糖的制备
精选天然食用菌金针菇菌鲜子实体1000g，按10倍量加入食用酒精，在室温(30℃)下浸提至基本提尽朴菇素，过滤去渣，取上清液经盐析、透析、浓缩、真空干燥得真菌多糖粗品。收率约在2％左右。
3.混合发酵
在生物硒发酵容器中按10wt％的比例加入真菌多糖粗品，搅匀后加盖密封，厌氧发酵(调温32℃)72h，放出物料，经真空过滤、弃渣、浓缩去溶剂、干燥得红色粉状物，即为生物活性硒真菌多糖的微生物原料药，该原料药可用于配制胶囊，每颗0.5克，含硒150μg，含真菌多糖300μg。
实施例3
1.生物活性硒的制备
在1000ml蒸馏水中加入0.1g酵母膏、1g醋酸钠、0.1g氧化铵、5g磷酸二氢钾、3g氧化镁、10g碳酸氢钠，搅拌溶解后煮沸灭菌，降湿至32℃后按8wt％的比例接入红假单胞菌菌种(球形红假单胞菌Rps.Globiformis)，置日光湿室28℃-29℃培养2.5天后，加入500mg/kg浓度的亚硒酸钙，继续培养3天，物料逐渐转成深红色，表明已经成熟。取样检测，活菌数一般可达19-20亿个/ml。
2.真菌多糖的制备
精选天然食用菌金针菇菌鲜子实体1000g，按15倍量加入食用酒精，在室温(30℃)下浸提至基本提尽朴菇素，过滤去渣，取上清液经盐析、透析、浓缩、真空干燥得真菌多糖粗品。收率约在3％左右。
3.混合发酵
在生物硒发酵容器中按15wt％的比例加入真菌多糖粗品，搅匀后加盖密封，厌氧发酵(调温32℃)50h，放出物料，经真空过滤、弃渣、浓缩、干燥得红色粉状物，即为生物活性硒真菌多糖的微生物原料药，该原料药可用于配制片剂，每颗1.0克，含硒150μg，含真菌多糖300μg。
实验例
经过多年来的探索。各国科学家取得了共识，微量元素中的硒成为″抗癌之王″。这一研究结果从多方面得到印证。在实验中，给实验鼠体内注入不同程度的肠癌，肝癌致癌物，再在它们的饮用水中加入一定剂量的硒多糖。其结果表明，这两种癌症的发病率分别减少了50％左右。这说明，硒多糖能有效地抑制致癌物的毒性作用。与此同时，挑选了13只患有结肠癌的动物进行的试验，在饲料中加进一定量的硒多糖，然后观察喂养，半年后，科研人员对这13只动物进行检验。结果发现已有7只的癌症病灶神奇地消失了，其余6只也大有好转。
硒还能降低放、化疗的毒副作用，实践证明，如在化疗1小时前或同时补硒，可减少顺铂在杀伤癌细胞的同时所造成的红、白细胞下降，腹泻等不良反应。为了证明硒在放疗中的作用，对经过补硒处理的小白鼠进行全身辐射损伤的防护效应实验。其结果证明，这只小白鼠的正常组织未被伤害，实验证明：硒是抗辐射损伤必需的微量元素。除此之外，硒还可以缓解晚期癌症病人的剧痛。