CN200680046248.5
2006.10.18
CN101326178A
2008.12.17
撤回
无权
发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07D 401/14公开日:20081217|||实质审查的生效|||公开
C07D401/14; C07H17/02; A61K31/506; A61P31/18; A61P37/06
C07D401/14
先灵公司
R·罗曼森; A·古瑟; M·W·米勒; S·K·邱德赫瑞; K·B·艾尔顿
美国新泽西州
2005.10.21 US 11/255,643
中国专利代理(香港)有限公司
关立新;黄可峻
本发明要求保护具有所述核心结构式(I)(AA)的CCR5拮抗剂，其用于治疗HIV、实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化。
1. 纯和分离形式的化合物，所述化合物选自和或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯。2. 权利要求1的化合物，其中所述化合物为或其药学上可接受的盐或溶剂化物。3. 权利要求1的化合物，其中所述化合物为或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯。4. 权利要求1的化合物，其中所述化合物为或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯。5. 权利要求1的化合物，其中所述化合物为或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯。6. 权利要求1的化合物，其中所述化合物为或其药学上可接受的盐或溶剂化物。7. 药物组合物，包含有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯以及药学上可接受的载体。8. 治疗人免疫缺陷病毒的方法，包括给需要这种治疗的人类施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯。9. 权利要求8的方法，还包括与权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯一起组合施用一种或多种用于治疗人免疫缺陷病毒的抗病毒剂或其它药物。10. 权利要求9的方法，其中抗病毒剂选自核苷类逆转录酶抑制剂、非-核苷类逆转录酶抑制剂和蛋白酶类抑制剂。11. 权利要求10的方法，其中抗病毒剂选自齐多夫定、拉米夫定、扎西他滨、去羟肌苷、司他夫定、阿巴卡韦、阿德福韦酯、洛布卡韦、BCH-10652、依米他宾、β-L-FD4、DAPD、洛德腺苷、奈韦拉平、地拉韦定、依法韦仑、PNU-142721、AG-1549、MKC-442、(+)-胡桐素A和B、沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、那非那韦、拉西那韦、DMP-450、BMS-2322623、ABT-378、氨普那韦、羟基脲、利巴韦林、IL-2、IL-12、喷他夫西、Yissum No.11607和AG-1549。12. 治疗实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化的方法，包括给需要这种治疗的人类施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯。13. 权利要求12的治疗实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化的方法，还包括一种或多种用于治疗所述疾病的其它药物。14. 包括装有单包装的用于联合治疗人免疫缺陷病毒的药物组合物的分开容器的药盒，所述药盒包括一个装有有效量的在药学上可接受的载体中的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酯的药物组合物的容器；和装有有效量的在药学上可接受的载体中的用于治疗人免疫缺陷病毒抗病毒剂或其他药物的一种或多种药物组合物的分开容器。15. 确定患者是否已经施用下式化合物的方法，所述方法包括确定来自所述患者的血浆、尿、胆汁或粪便样品是否存在权利要求1化合物的步骤。
用作CCR5拮抗剂的哌嗪衍生物 背景技术 本发明涉及用作选择性CCR5拮抗剂的哌嗪衍生物，含有该化合物的药物组合物，和应用该化合物的治疗方法。本发明也涉及本发明CCR5拮抗剂与一种或多种用于治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)的抗病毒剂或其它药物组合的用途。本发明进一步涉及本发明CCR5拮抗剂单独或与其它药物联合在治疗实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化中的用途。 由获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的病原体HIV引起的全球性健康危机是不容质疑的，虽然在药物治疗中的最新进展已经成功地减缓了AIDS的发展，但仍然需要发现更安全，更有效，更价廉的途径来控制该病毒。 已经报道了CCR5基因在抵抗HIV感染中担任作用。HIV感染是从病毒通过与细胞受体CD4和次级趋化因子辅助受体分子相互作用从而连接到靶细胞膜上开始的，并且通过在血液和其它组织中复制和传播受感染细胞而进行。虽然存在多种趋化因子受体，但对于巨噬细胞-嗜向性(macrophage-tropic)HIV(据认为是感染早期在体内复制的关键病原种系)而言，HIV进入细胞所必须的主要趋化因子受体是CCR5。因此，干扰病毒受体CCR5和HIV的相互作用可以阻止HIV进入细胞。本发明涉及为CCR5拮抗剂的小分子化合物。 据报道CCR-5受体在炎症疾病如关节炎，类风湿性关节炎，特应性皮炎，牛皮癣，哮喘和变态反应中介导细胞转移，并预期这些受体的抑制剂有用于治疗这些疾病以及治疗其它炎症疾病或病症，如炎症性肠病，多发性硬化，实体器官移植排斥和移植物抗宿主病。 作为毒蕈碱拮抗剂用于治疗认知障碍如阿尔茨海默氏病的有关哌嗪衍生物被公开在美国专利5,883,096；6,037,352；5,889,006中。 A.M.Vandamme等在Antiviral Chemistry&Chemotherapy，9：187-203(1998)中公开了目前临床治疗HIV-1在人体中感染的方法，包括至少三种药物联用或所谓的高效抗逆转录病毒治疗(“HAART”)；HAART包括多种核苷逆转录酶抑制剂(“NRTI”)，非-核苷逆转录酶抑制剂(“NNRTI”)和HIV蛋白酶抑制剂(“PI”)的联合用药。对于依从性未用过药(drug-naive)的病人，HAART可有效地降低死亡率和由HIV-1向AIDS的发展。但是，这些多药物疗法并不能消除HIV-1且长期治疗通常导致多药抗药性。开发能提供更好的HIV-1治疗的新药物治疗依然是优先的。 发明概述 本发明涉及HIV的治疗，包括给需要这种治疗的哺乳动物施用有效量的由结构式I表示的CCR5拮抗剂或其药学上可接受的盐： 其中 R为R8-苯基、R8-吡啶基、R8-噻吩基(thiophenyl)或R8-萘基； R1为氢或C1-C6烷基； R2为R9、R10、R11-苯基；R9、R10、R11-取代的6-元杂芳基；R9、R10、R11-取代的6-元杂芳基N-氧化物；R12、R13-取代的5-元杂芳基；萘基；芴基；二苯基甲基， R3为氢、C1-C6烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、C3-C10环烷基、C3-C10环烷基(C1-C6)烷基、R8-苯基、R8-苯基(C1-C6)烷基、R8-萘基、R8-萘基(C1-C6)烷基、R8-杂芳基或R8-杂芳基(C1-C6)烷基； R4、R5、R7和R13独立选自氢和(C1-C6)烷基； R6为氢、C1-C6烷基或C2-C6烯基； R8为1至3个独立选自下列的取代基：氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-CF3、CF3O-、CH3C(O)-、-CN、CH3SO2-、CF3SO2-、R14-苯基、R14-苄基、CH3C(＝NOCH3)、CH3C(＝NOCH2CH3)、-NH2、-NHCOCF3、-NHCONH(C1-C6烷基)、-NHCO(C1-C6烷基)、-NHSO2(C1-C6烷基)、5-元杂芳基和其中X为-O-、-NH-或-N(CH3)-； R9和R10独立选自(C1-C6)烷基、卤素、-NR17R18、-OH、-CF3、-OCH3、-O-酰基，-OCF3和-Si(CH3)3； R11为R9、氢、苯基、-NO2、-CN、-CH2F、-CHF2、-CHO、-CH＝NOR17、吡啶基、吡啶基N-氧化物、嘧啶基、吡嗪基、-N(R17)CONR18R19、-NHCONH(氯-(C1-C6)烷基)、-NHCONH((C3-C1)环烷基(C1-C6)烷基)、-NHCO(C1-C6)烷基、-NHCOCF3、-NHSO2N((C1-C6)烷基)2、-NHSO2(C1-C6)烷基、-N(SO2CF3)2、-NHCO2(C1-C6)烷基、C3-C10环烷基、-SR20、-SOR20、-SO2R20、-SO2NH(C1-C6烷基)、-OSO2(C1-C6)烷基、-OSO2CF3、羟基(C1-C6)烷基、-CONR17R18、-CON(CH2CH2-O-CH3)2、-OCONH(C1-C6)烷基、-CO2R17、-Si(CH3)3或-B(OC(CH3)2)2； R12为(C1-C6)烷基、-NH2或R14-苯基； R14为1至3个独立选自下列的取代基：氢、(C1-C6)烷基、-CF3、-CO2R17、-CN、(C1-C6)烷氧基和卤素； R15和R16独立选自氢和C1-C6烷基，或R15和R16一起为C2-C5亚烷基并且与和它们相连的碳原子形成3至6个碳原子的螺环； R17、R18和R19独立选自氢和C1-C6烷基；和 R20为C1-C6烷基或苯基。 优选的式I化合物为其中R是R8-苯基或R8-萘基，特别是其中R8是单个取代基，并且特别是其中R8取代基在4-位。对于R8-苯基，优选的R8取代基是-CF3，-OCF3，CH3SO2-，CH3CO-，CH3C(＝NOCH3)-，Br和I。对于R8-萘基，R8优选为C1-C6烷氧基。其中R3是氢原子，(C1-C6)烷基，R8-苯基，R8-苄基或R8-吡啶基的式I化合物也是优选的；更优选的R3定义是甲基，乙基，苯基，苄基和吡啶基。R1优选为氢。对于式I化合物，R6优选为氢或甲基，特别是甲基。R4优选为甲基；R5和R7各自优选为氢。 在式I化合物中，R2优选是R9、R10、R11-苯基，R9、R10、R11-吡啶基或其N-氧化物，或R9、R10、R11-嘧啶基。当R2是吡啶基时，优选为3-或4-位吡啶基，当其为嘧啶基时，优选为5-位嘧啶基。R9和R10取代基优选连接在与连接环和分子其余部分的碳原子相邻的环碳原子上，且R11取代基可以连接在所剩余未取代的任何环碳原子上，例如下列结构所示： 优选的R9和R10取代基为：(C1-C6)烷基，特别是甲基；卤素，特别是氯或溴，-OH和-NH2。当R2是苯基时，R11优选为氢或-OH；当R2是吡啶基时，R11优选为氢；当R2是嘧啶基时，R11优选为氢，甲基或苯基。特别优选的R2基团的实例如下： 也要求了结构式II所示的新的CCR5拮抗剂化合物或其药学上可接受的盐， 其中 (1)Ra为R8a-苯基、R8b-吡啶基、R8b-噻吩基或R8-萘基； R1为氢或C1-C6烷基； R2为R9、R10、R11-苯基；R9、R10、R11-取代的6-元杂芳基；R9、R10、R11-取代的6-元杂芳基N-氧化物；R12、R13-取代的5-元杂芳基；萘基；芴基；二苯基甲基， R3为氢、C1-C6烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、C3-C10环烷基、C3-C10环烷基(C1-C6)烷基、R8-苯基、R8-苯基(C1-C6)烷基、R8-萘基、R8-萘基(C1-C6)烷基、R8-杂芳基或R8-杂芳基(C1-C6)烷基； R4、R5、R7和R13独立选自氢和(C1-C6)烷基； R6为氢、C1-C6烷基或C2-C6烯基； R8为1至3个独立选自下列的取代基：氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-CF3、CF3O-、CH3C(O)-、-CN、CH3SO2-、CF3SO2-、R14-苯基、R14-苄基、CH3C(＝NOCH3)、CH3C(＝NOCH2CH3)、-NH2、-NHCOCF3、-NHCONH(C1-C6烷基)、-NHCO(C1-C6烷基)、-NHSO2(C1-C6烷基)、5-元杂芳基和其中X为-O-、-NH-或-N(CH3)-； R8a为1至3个独立选自下列的取代基：氢、卤素、-CF3、CF3O-、-CN、CF3SO2-、R14-苯基、-NHCOCF3、5-元杂芳基和其中X如上所定义； R8b为1至3个独立选自下列的取代基：氢、卤素、-CF3、CF3O-、CH3C(O)-、-CN、CF3SO2-、R14-苄基、CH3C(＝NOCH3)、CH3C(＝NOCH2CH3)、-NHCOCF3、5-元杂芳基和其中X如上所定义； R9和R10独立选自(C1-C6)烷基、卤素、-NR17R18、-OH、-CF3、-OCH3、-O-酰基，-OCF3和-Si(CH3)3； R11为R9、氢、苯基、-NO2、-CN、-CH2F、-CHF2、-CHO、-CH＝NOR17、吡啶基、吡啶基N-氧化物、嘧啶基、吡嗪基、-N(R17)CONR18R19、-NHCONH(氯-(C1-C6)烷基)、-NHCONH((C3-C1)环烷基(C1-C6)烷基)、-NHCO(C1-C6)烷基、-NHCOCF3、-NHSO2N((C1-C6)烷基)2、-NHSO2(C1-C6)烷基、-N(SO2CF3)2、-NHCO2(C1-C6)烷基、C3-C10环烷基、-SR20、-SOR20、-SO2R20、-SO2NH(C1-C6烷基)、-OSO2(C1-C6)烷基、-OSO2CF3、羟基(C1-C6)烷基、-CONR17R18、-CON(CH2CH2-O-CH3)2、-OCONH(C1-C6)烷基、-CO2R17、-Si(CH3)3或-B(OC(CH3)2)2； R12为(C1-C6)烷基、-NH2或R14-苯基； R14为1至3个独立选自下列的取代基：氢、(C1-C6)烷基、-CF3、-CO2R17、-CN、(C1-C6)烷氧基和卤素； R15和R16独立选自氢和C1-C6烷基，或R15和R16一起为C2-C5亚烷基并且与和它们相连的碳原子形成3至6个碳原子的螺环； R17、R18和R19独立选自氢和C1-C6烷基；和 R20为C1-C6烷基或苯基；或 (2)Ra为R8-苯基、R8-吡啶基或R8-噻吩基； R2为芴基、二苯基甲基、 且R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19和R20如(1)中定义。 式II优选的化合物是(1)中定义的化合物。 更优选的化合物是其中Ra为R8a-苯基或R8-萘基的式II(1)化合物，其中R8a为是-CF3、-OCF3或卤素和R8为C1-C6烷氧基。R8a或R8取代基优选是单个取代基；特别优选地R8a或R8取代基在4-位。其中R3是氢原子，(C1-C6)烷基，R8-苯基，R8-苄基或R8-吡啶基的式II(1)化合物也是优选的；更优选的R3定义是甲基，乙基，苯基，苄基和吡啶基。R1优选为氢。对于式II(1)化合物，R6优选为氢或甲基，特别是甲基。R4优选为甲基；R5和R7各自优选为氢。 R2在式II(1)中优选为式I中的定义，即R9、R10、R11-苯基，R9、R10、R11-吡啶基或其N-氧化物，或R9、R10、R11-嘧啶基，其中R9、R10、R11取代如式I优选化合物中的上述定义。 本发明另一方面为用于治疗HIV的药物组合物，该组合物包含与药学上可接受的载体组合的有效量的式II的CCR5拮抗剂。本发明另一方面为用于治疗实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化的药物组合物，该组合物包含与药学上可接受的载体组合的有效量的式II的CCR5拮抗剂。 本发明再一方面为治疗HIV的方法，包括给需要这种治疗的人施用有效量的式II的CCR5拮抗化合物。本发明还一方面为治疗实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化的方法，该方法包括给需要这种治疗的人施用有效量的式I或式II的CCR5拮抗化合物。 本发明还一方面为本发明式I或II的CCR5拮抗剂与一种或多种用于治疗人免疫缺陷病毒的抗病毒剂或其它药物组合用于治疗AIDS中的应用。本发明再一方面为本发明式I或II的CCR5拮抗剂与一种或多种用于治疗实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、炎症性肠病、类风湿性关节炎或多发性硬化的药物组合的应用。CCR5拮抗剂和抗病毒剂或其它药物(它们为组合中的成分)可以以单剂量形式施用或分开施用；本发明也包括包含活性成分的分开剂量形式的药盒。 附图说明 图1展示在14C-VIC单次口服剂量后，维克弗若克(Vicriviroc)在人、猴和大鼠中的生物转化。 图2展示在给健康男性志愿者、雄性猴和大鼠单次口服施用维克弗若克后集合血浆提取物的代表性放射色谱图形的比较。 图3展示在给健康男性志愿者、雄性志猴和大鼠单次口服施用维克弗若克后集合尿提取物的代表性放射色谱图形的比较。 图4展示在给健康男性志愿者、雄性志猴和大鼠单次口服施用维克弗若克后集合粪便提取物的代表性放射色谱图形的比较。 发明的详述 除另有说明，本文所用的下列术语定义如下。 烷基代表直链或支链的碳链且含有1至6个碳原子。 链烯基代表含有一个或两个不饱和键的C2-C6碳链，条件是两个不饱和键彼此不相邻。 取代的苯基是指可在苯环的任何可用位置上取代的苯基。 酰基是指具有下式的羧酸根：烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、芳烷基-C(O)-、(C3-C7)环烷基-C(O)-、(C3-C7)环烷基-(C1-C6)烷基-C(O)-、和杂芳基-C(O)-，其中烷基和杂芳基如本文定义；芳基是R14-苯基或R14-萘基；且芳烷基是芳基-(C1-C6)烷基，其中芳基定义如上。 杂芳基代表5或6个原子的环状芳族基团或11至12个原子的二环基团，且含有1或2个独立选自O、S或N的杂原子，所述杂原子插入碳环结构中并且有足够数量的离域π电子使其具有芳香性，条件是环中不含有相邻的氧原子和/或硫原子。对于6-元杂芳基环，碳原子可以被R9、R10或R11基取代。氮原子可以是N-氧化物的形式。包括所有的位置异构体(regioisomer)，如2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基。一般6-元杂芳基是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基和其N-氧化物形式。对于5-元杂芳环，碳原子可以被R12或R13基取代。一般5-元杂芳基环是呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、咪唑基、吡唑基和异噁唑基。具有一个杂原子的5-元环可以通过2-位或3-位连接；具有两个杂原子的5-元环优选通过4-位连接。二环基通常是由上述杂芳基衍生的苯并-稠合环系，例如喹啉基，2，3-二氮杂萘基，喹唑啉基，苯并呋喃基，苯并噻吩基和吲哚基。 R2中6-元杂芳基环的取代位置优选如上所述。当R2是5-元杂芳基时，R12和R13取代基优选连接在环碳原子上，所述环碳原子邻近于连接环与分子其余部分的碳原子。且R12优选为烷基；但是，如果杂原子邻近于连接环与分子其余部分的碳原子(即例如2-吡咯基)，R12优选连接在环碳原子上，所述环碳原子邻近于连接环与分子其余部分的碳原子。 卤素代表氟、氯、溴和碘。 一种或多种，优选一种至四种用于抗HIV-1治疗的抗病毒剂可以用于与本发明CCR5拮抗剂的组合中。一种或多种抗病毒剂可以以单剂量形式与CCR5拮抗剂组合，或CCR5拮抗剂和一种或多种抗病毒剂可同时施用或以分开的剂量形式相继施用。打算用于与本发明化合物组合的抗病毒剂包括核苷和核苷酸类逆转录酶抑制剂、非-核苷类逆转录酶抑制剂、蛋白酶类抑制剂和以下所列的其它不属于这些种类的抗病毒药物。特别地，称作HAART(高效抗逆转录病毒治疗物)的组合也可用于与本发明CCR5拮抗剂的组合中。 本文所用的术语“核苷和核苷酸类逆转录酶抑制剂”(“NRTI”s)是指抑制HIV-1逆转录酶活性的核苷和核苷酸及其类似物，该逆转录酶催化病毒基因HIV-1RNA向原病毒HIV-1DNA的转化。 通常适宜的NRTIs包括可以从Glaxo-Wellcome Inc.ResearchTriangle，NC27709商购的商品名为RETROVIR的齐多夫定(AZT)；可以从Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543商购的商品名为VIDEX的去羟肌苷(ddl)；可以从Roche Pharmaceutical，Nutely，NJ07110商购的商品名为HIVID的扎西他宾(ddC)；可以从Bristol-Myers SquibbCo.，Princeton，NJ08543商购的商品名为ZERIT的司他夫定(d4T)；可以从Glaxo-Wellcome Inc.ResearchTriangle，NC27709商购的商品名为EPIVIR的拉米夫定(3TC)；公开于WO96/30025并且可以从Glaxo-Wellcome Inc.Research Triangle，NC27709商购的面品名为ZIAGEN的阿巴卡韦(1592U89)；可以从Gilead Sciences，Foster City，CA94404商购的商品名为PREVON的阿德福韦酯[双(POM)-PMEA]；Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543开发的并且公开于欧洲专利0358154和0736533中的核苷逆转录酶抑制剂洛布卡韦(BMS-180194)；由Biochem Pharma，Laval，Quebec H7V，4A7，加拿大开发的逆转录酶抑制剂BCH-10652(BCH-10618和BCH-10619的外消旋体混合物形式)；由Emory University许可的Emory Univ.美国专利5,814,639并且由Triangle Pharmaceuticals，Durham，NC27707开发的依米他宾(emitricitabine)[(-)-FTC]；Yale University许可给VionPharmaceuticals，New Haven CT06511的β-L-FD4(也称为β-L-D4C和β-L-2’，3’-二脱氧-5-氟-胞苷(cytidene))；公开于欧洲专利0656778中并且由Emory University和University of Georgia许可给TrianglePharmaceuticals，Durham，NC27707的DAPD，为嘌啉核苷，(-)-β-D-2，6，-二氨基-嘌呤二氧环戊烷；由NIH公开的并且由U.S.Bioscience inc.，WestConshohoken，PA19428开发的酸稳定的以嘌呤为基础的逆转录酶抑制剂洛德腺苷(lodensine)(FddA)，9-(2，3-二脱氧-2-氟-b-D-苏五呋喃糖基)腺嘌呤。 本文所用的术语“非-核苷类逆转录酶抑制剂”(“NNRTI”s)是指抑制HIV-1逆转录酶活性的非-核苷类物质。 通常适用的NNRTIs包括可以从Boehringer Ingelheim商购的商标为VIRAMUNE的奈韦拉平(BI-RG-587)，生产商为Roxane Laboratories，Columbus，OH 43216；可以从Pharmacia&Upjohn Co.，Bridgewater NJ08807商购的商标为RESCRIPTOR的地拉韦定(delaviradine)(BHAP，U-90152)；于WO94/03440公开的并且可以从DuPont PharmaceuticalCo.，Wilmington，DE 19880-0723商购的商标为SUSTIVA的依法韦仑(DMP-266)苯并噁嗪-2-酮；由Pharmacia和Upjohn Co.，Bridgewater NJ08807开发的氟吡啶-硫-嘧啶PNU-142721；AG-1549(以前为Shionogi#S-1153)；于WO96/10019中公开的并由AgouronPharmaceuticals，Inc.，LaJolla CA92037-1020临床开发的5-(3，5-二氯苯基)-硫基-4-异丙基-1-(4-吡啶基)甲基-1H-咪唑-2-基甲基碳酸酯；由Mitsubishi Chemical Co.发现并由Triangle Pharmaceuticals，Durham，NC27707开发的MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2，4(1H，3H)-嘧啶二酮)；和NIH在美国专利5489,697中公开的由Med Chem Research获得许可的香豆素衍生物，(+)-胡桐素(calanolide)A(NSC-675451)和B，Med Chem Research与Vita-Invest共同开发(+)胡桐素A作为口服产品。 本文所用的术语“蛋白酶抑制剂”(“PI”)是指HIV-1蛋白酶抑制剂，该酶是病毒多蛋白前体(例如病毒GAG和GAG Pol多蛋白)溶蛋白性裂解成为感染HIV-1中所发现的个体功能蛋白质所必须的酶。HIV蛋白酶抑制剂包括具有拟肽结构，高分子量(7600道尔顿)和基本上具有肽的特性的化合物，如CRIXIVAN(可以从Merck商购)以及包括非肽蛋白抑制剂，如VIRACEPT(可以从Agouron商购)。 通常适宜的PIs包括可从Roche Pharmaceuticals，Nutley，NJ07110-1199商购得到的商标为INVIRASE的硬胶囊和商标为FORTOUASE的软胶囊的沙奎那韦(Ro31-8959)；可从AbbottLaboratories，Abbott Park，IL60064商购得到的商标为NORVIR的利托那韦(ABT-538)；可从Merck&Co.，Inc.，West Point，PA19486-0004商购得到的商标为CRIXIVAN的茚地那韦(MK-639)；可从AgouronPharmaceuticals，Inc.，Lajolla CA92037-1020商购得到的商标为VIRACEPT的那非那韦(nelfnavir)(AG-1343)；由VertexPharmaceuticalsInc.，Inc.，Cambridge，MA02139-4211开发并且可从Glaxo-Wellcome Research Triangle，NC扩展为自己的项目后商购得到的商标为AGENRASE的非-肽蛋白酶抑制剂氨普那韦(141W94)；可从Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543商购得到的拉西那韦(BMS-234475)(最初由Novaritis，Basel，Switzerland公开的(CGP-61755))；DMP-450，由Dupont发现并由Triangle Pharmaceuticals开发的环脲；BMS-2322623，由Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543开发的氮杂肽，为第二代的HIV-1PI；由Abbott，Abbott Park，IL60064开发的AB-378；和由Shionogi(Shionogi#S-1153)发现的并由AgouronPharmaceuticals，Inc.，Lajolla CA92037-1020开发的作为口服活性咪唑氨基甲酸酯的AG-1549。 其它抗病毒剂包括羟基脲，利巴韦林，IL-2，IL-12，喷他夫西(pentafuside)和Yissum项目号11607。羟基脲(Droxia)，是一种核糖核苷三磷酸还原酶抑制剂，该酶涉及T-细胞激活，并在NCI中发现并由Bristol-Myers Squibb开发；在临床前研究中显示其对去羟肌苷的活性具有协同作用并与司他夫定一起进行了研究。IL-2公开于Ajinomoto的EP-0142268，Takeda的EP-0176299，和Chiron的美国专利号RE33653、4530787、4569790、4604377、4748234、4752585、和4949314中；并可从Chiron Corp.，Emeryville，CA94608-2997商购得到的商标PROLEUKIN(阿地白介素)，为用于静脉输注或皮下(sc)施用的用水重建和稀释的冻干粉；剂量为约1-约20百万IU/天，优选皮下注射；更优选皮下注射，剂量为约15百万IU/天。IL-12公开于WO96/25171并可从Roche Pharmaceuticals，Nutley，NJ07110-1199和American HomeProducts，Madison，NJ07940商购得到；剂量约0.5毫克/kg/天至约10毫克/kg体重/天，优选皮下注射。喷他夫西(DP-178，T-20)为具有36个氨基酸的合成多肽，公开于Duke University转让给Trimens的美国专利号5,464,933，并由Trimeris与Duke University合作开发喷他夫西；喷他夫西通过抑制HIV-1的融合作用于靶膜。喷他夫西(3-100mg/天)可以与依法韦仑和2个Pi’s一起连续的皮下输注或注射给抗三联治疗的HIV-1阳性的患者；优选用100mg/天。Yissum Project No.11607，是一种基于HIV-1Vif蛋白的合成蛋白，正由Yissum Research DevelopmentCo.，Jerusalem 91042，Israel进行临床前开发。利巴韦林，即1-β-D-核糖呋喃糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，可从ICN Pharmaceuticals Inc.，Costa Mesa，CA商购得到；其生产和制剂见美国专利号4,211,771的描述。 本文所用的术语“抗-HIV-1治疗物”是指单独或作为多药联合治疗物(特别是HAART三联和四联联合治疗物)的一部分用于治疗人HIV-1感染中所发现的任何抗HIV-1药物。通常适宜的已知抗-HIV-1治疗物包括但不限于多种药物联合治疗物例如(i)选自两种NRTIs、一种PI、第二种PI、和一种NNRTI的至少三种抗-HIV-1药物；和(ii)至少两种选自NNRTIs和Pis的抗-HIV-l药物。通常适宜的HAART-多种药物联合治疗包括： (a)三联治疗物如两种NRTIs和一种PI；或(b)两种NRTIs和一种NNRTI；和(c)四联治疗物如两种NRTIs、一种PI和第二种PI或一种NNRTI。在患者初次治疗中，优选用三联治疗物开始抗-HIV-1的治疗；优选用两种NRTIs和一种PI除非不能耐受PI。药物依从性是基本的。应该每3-6个月监测CD4+和HIV-1-RNA血浆水平。如果病毒载量高，可以加入第四种药物，如一种PI或一种NNRTI。参见下表，其中进一步描述了通常的治疗物： 抗-HIV-1多种药物联合治疗物 A.三联联合治疗物 1.两种NRTIs1+一种PI2 2.两种NRTIs1+一种NNRTI3 B.四联联合治疗物4 两种NRTIs+一种PI+第二种PI或一种NNRTI C.可替换物5 两种NRTI1 一种NRTI5+一种PI2 两种PIs6±一种NRTI7或NNRTI3 一种PI2+一种NRTI7+一种NNRTI3 上表脚注 1.下列之一：齐多夫定+拉米夫定；齐多夫定+去羟肌苷；司他夫定+拉米夫定；司他夫定+去羟肌苷；齐多夫定+扎西他滨 2.茚地那韦、那非那韦、利托那韦、或沙奎那韦软胶囊。 3.奈韦拉平或地拉韦定。 4.参见A-M.Vandamne等，Antiviral Chemistry&Chemotherapy9：187，第193-197页和图1+2。 5.可替换的方案是用于由于依从性问题或毒性而不能接受推荐方案的患者，和用于对于推荐方案失败或复发的患者。两种核苷联合会使很多患者产生HIV-耐药性，导致临床失败。 6.大多数数据来自沙奎那韦和利托那韦(各服400mg，1天2次)。 7.齐多夫定，司他夫定或去羟肌苷。 可以与本发明CCR5拮抗剂联合施用的治疗类风湿性关节炎，移植和移植物抗宿主病，炎症性肠病和多发性硬化的已知药物如下： 实体器官移植排斥和移植物抗宿主病：免疫抑制剂如环胞菌素和白细胞介素-10(IL-10)，他克莫司，抗淋巴细胞球蛋白，OKT-3抗体和甾族化合物； 炎症性肠病：IL-10(见美国专利5,368,854)，甾族化合物和柳氮磺胺吡啶； 类风湿性关节炎：甲氨喋呤，硫唑嘌呤，环磷酰胺，甾族化合物和麦考酚酸莫酯； 多发性硬化：β-干扰素，α-干扰素和甾族化合物。 本发明的某些化合物可以存在不同的异构体形式(如对映异构体，非对映异构体，阻转异构体和旋转异构体)。本发明包括所有这些纯异构体形式和其混合形式，包括外消旋混合物。 某些化合物本身是酸性的，如具有羧基和酚羟基的那些化合物。这些化合物可以形成药学上可接受的盐。这些盐的实例可以包括钠，钾，钙，铝，金和银盐。也包括与药学上可接受的胺如氨水，烷基胺，羟基烷基胺，N-甲基葡糖胺等形成的盐。 某些碱性化合物也可形成药学上可接受的盐，如酸加成盐。例如，吡啶-氮原子可以与强酸形成盐，当化合物具有碱性取代基如氨基时也可以与弱酸形成盐。成盐用的适宜酸的实例是盐酸，硫酸，磷酸，乙酸，柠檬酸，草酸，丙二酸，水杨酸，苹果酸，富马酸，琥珀酸，抗坏血酸，马来酸，甲磺酸和其它本领域众所周知的无机酸和羧酸。通过本领域常规方法将游离碱与足量的所需酸接触而形成盐，可以制备这些盐。通过将盐用适宜稀碱水溶液如稀NaOH，碳酸钾，氨水和碳酸氢钠水溶液处理，可以再生成游离碱的形式。游离碱形式与其各自的盐形式在一些物理特性上不同，如在极性溶剂中的溶解性，但是酸和碱盐与其各自的游离碱形式对本发明目的而言又是等同的。 旨在本发明范围内的所有这些酸和碱盐为药学上可接受的盐并且酸和碱盐与相应化合物的游离形式对本发明目的而言被认为是等同的。 本发明化合物可以用本领域已知的过程生产，例如用下列反应方案中所述的过程，用下列实施例所述的方法，和WO96/26196和WO98/05292中所述的方法。 下列溶剂和试剂可以用所示缩写表示为：四氢呋喃(THF)；乙醇(EtOH)；甲醇(MeOH)；乙酸(HOAc或AcOH)；乙酸乙酯(EtOAc)；N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；三氟乙酸(TFA)；1-羟基苯并三唑(HOBT)；间-氯过苯甲酸(MCPBA)；三乙胺(Et3N)；乙醚(Et2O)；二甲亚砜(DMSO)；和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(DEC)。RT是室温，和TLC是薄层色谱。Me是甲基，Et是乙基，Pr是丙基，Bu是丁基，Ph是苯基，和Ac是乙酰基。 方案1 试剂和条件：a：R4CH(OSO2CF3)CO2CH3，碱(如K2CO3)；b：ClCH2COCl；c：NH3；d：NaBH4-BF3；e：N-Boc-4-哌啶酮，NaBH(OAc)3；f：CF3CO2H；g：乙酰化；h：N-Boc-4-哌啶酮，Ti(Opr-i)4，Et2AICN；i：CH3MgBr。 在方案1中，将苄胺(1)(其中R和R3定义如上和R1是氢)经过(2)和(3)转化成哌嗪二酮(4)，其中R4定义如上，再将其还原为哌嗪(5)。根据所需的R6取代基，有两种方法进行。还原胺化得到(6)，再脱保护得到(7)并且最后酰化得到式IA化合物其中R5和R6是H；替代选择地，对(5)进行改进的Strecker反应得到氨基腈(8)，然后再用甲基格里雅(Grignard)处理得到(9)，脱保护得到(10)，最后N-酰化得到式IB化合物，其中R5是H和R6是甲基。(7)和(10)的酰化在标准条件下进行，如用化合物R2COOH和试剂如DEC和HOBT。在步骤a用式1的手性化合物，如(S)-甲基-4-取代的苄胺，和手性乳酸酯，如(R)-乳酸甲酯三氟甲磺酸酯(methyl(R)-lactate triflate)可以得到手性的式IA和IB化合物。 方案2 试剂：j：氧杂硼杂氮茂啶(oxaborazolidine)，BH3；k：CH3SO2Cl，碱；l：CF3CO2H。 在方案2中，化合物通过对预先形成的哌嗪衍生物进行烷基化过程而制得。例如，优选的具有S，S立体化学的化合物可以用这种方法将酮(11)进行手性还原得到醇(12)，活化为甲磺酸酯，通过用适宜的哌嗪处理进行反转置换，所述哌嗪可以是单保护的，这种情况下最终加工步骤需要先脱保护然后进行方案1中所述的步骤(e)-(g)得到IC，或可在置换步骤之前进行处理，此种情况下最后的步骤是方案1中的(f)和(g)(脱保护和酰化)得到ID。 方案3 对于R3和R1各自是H的化合物，可以应用方案2的烷基化途径或方案3中代表的还原胺化方法。 方案4 对于其中R和R3各自是芳基的二芳基化合物，优选方案4中代表的烷基化方法。 方案5 式14的哌嗪，特别是其中R3是C2-C6烷基或苄基的化合物可以通过如上所示烷基化-脱氰基顺序引入 部分的方法而获得。反应可以由其中R是CF3O-苯基，R1是氢，R3是乙基和R4是甲基的化合物举例说明，但用适宜的起始原料，式14其它化合物可以类似地制得。 方案6 试剂：m：BOC2O，碱；n：R6MgBr；o：CCl3CO2H，NaBH3CN；p：CF3CO2H；q：NaBH4，BF3。 如方案6所示，在哌嗪环R5上携带另外烷基的化合物可以由方案1中的哌嗪二酮中间体(4)制备。(4)通过转化成N(叔丁氧基羰基)化合物(17)而被活化；格里雅试剂的加成和后续的还原，脱保护和内酰胺还原提供(21)，该化合物可以用方案1所述中间体(5)的方法制备式I化合物。 方案7 方案1中所示的其中R是R8-苯基(或其BOC衍生物)的多数哌嗪可以从其中R8是I的普通中间体获得。多个实例如上述方案所示，其中将R8转化为Cl、CN、-C(O)NH2、H、Ph和p-ClC6H4CH2-。这种转化的详细过程提供在下列实施例中。所得哌嗪或BOC-哌嗪然后如方案1所示处理。 方案8 本发明的一些化合物可以用曼尼希(Mannich)方法得到，如方案8的具体实例所示。 本发明所用的化合物用下列制备实例说明，但不应被解释为对公开范围的限制。在本发明范围内的可替换机制途径和类似结构对本领域技术人员而言是显而易见的。 实施例1 步骤1：在-70℃将R-乳酸甲酯(5.0g)的CH2Cl2(40ml)溶液搅拌并加入三氟甲磺酸酐(7.6ml)，然后加入2，6-二甲基吡啶(7.8ml)。除去冷却，搅拌0.5小时。用2N HCl洗涤然后将有机溶液加入(S)-甲基4-溴苄胺(9.0g)和K2CO3(11.2g)的水(60ml)溶液中。室温搅拌20小时，在经K2CO3干燥有机相，蒸发并在硅胶上用Et2O-CH2Cl2进行色谱法，得到预期产品(7.50g)，为粘稠状油。 步骤2：将步骤1的产品(7.5g)在1，2-二氯乙烷(40ml)和ClCH2COCl(5.0ml)中回流5小时，然后蒸发并将所得剩余物直接用于下一步骤中。 步骤3：冰浴冷却下将步骤2产品在DMSO(80ml)、水(10ml)和NaI(8g)中搅拌，加入浓NH4OH溶液(15ml)并室温搅拌20小时。滴加水(200ml)，收集固体，用水充分洗涤并在70℃/5mm干燥得到哌嗪二酮，适用于下一步骤。 步骤4：在N2下，将步骤3的产品(6.8g)、1，2-二甲氧基乙烷(60ml)和NaBH4(3.4g)的混合物搅拌，滴加BF3·OEt2(6.8ml)，然后在100℃加热10小时。冷却并滴加CH3OH(20ml)，然后加入浓HCl(30ml)。在100℃加热1小时，冷却，用过量2N NaOH碱化，用EtOAc萃取。经K2CO3干燥并蒸发得到哌嗪(5.85g)，适用于下一步。 步骤5：室温下将步骤4的产品(5.48g)、N-Boc-4-哌啶酮(4.32g)、HOAc(1.15ml)、CH2Cl2(80ml)和三乙酰氧基-硼氢化钠(NaBH(OAc)3)(8.3g)的混合物搅拌20小时。缓缓加入过量的Na2CO3水溶液，搅拌0.5小时，用硅胶垫分离和过滤有机相，用10∶1CH2Cl2-Et2O洗脱所有产品。蒸发并将剩余物溶解在Et2O(100ml)中。搅拌并滴加4MHCl的1，4-二噁烷(10ml)溶液。收集固体，用Et2O洗涤，与CH2Cl2和过量NaOH水溶液一同搅拌。经K2CO3干燥有机相并蒸发得到所需产品(5.45g)。 步骤6：室温下将步骤5的产品(1.5g)和TFA(4ml)的混合物搅拌2小时。蒸发，将其溶解在CH2Cl2中并用过量1N NaOH溶液洗涤。经K2CO3干燥并蒸发得到产品(1.15g)。 化合物1A：按照标准方法，让步骤6产品与2，6-二甲基苯甲酰氯在CH2Cl2和含水NaOH中起反应，将产品转化为盐酸盐。Mp185-192℃(分解)。HRMS测定值：498.2130；MH+计算值：498.2120。 化合物1B：按照标准方法，应用HBOT和DEC以及二异丙基乙基胺在DMF中将步骤6产品与2-氨基-6-甲基苯甲酸偶联，通过制备的TLC纯化酰胺并将其转化为盐酸盐。Mp188-196℃(分解)。HRMS测定值：499.2069；MH+计算值：499.2072。 化合物1C：按照上述方法，将步骤6产品与2-氨基-6-氯苯甲酸偶联并在纯化后转化为盐酸盐。Mp192-200℃(分解)。HRMS测定值：519.1530；MH+计算值：519.1526。 实施例2 步骤1：室温下将实施例1步骤4的产品(1.00g)、N-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(0.77g)和四异丙氧基钛(Ti(OiPr)4)(1.00g)在CH2Cl2(15ml)中搅拌20小时，回流3小时并冷却至室温。加入二乙基氰化铝(Et2AlCN)(4.2ml 1M甲苯溶液)并在干燥N2下室温搅拌5天。用CH2Cl2-NaOH水溶液处理，干燥并蒸发有机相，用CH2Cl2-CH3OH(100∶1)进行硅胶色谱法，得到所需产品(0.72g)。 步骤2：在N 2下将步骤1产品(0.70g)的无水THF(15ml)溶液与CH3MgBr(4ml 3M Et2O溶液)在室温下反应20小时。用EtOAc-水处理并用硅胶过滤有机相，用EtOAc洗涤。蒸发得到所需产品(0.65g)。 步骤3：根据实施例1步骤6所述的操作，将步骤2产品用TFA脱保护。 化合物2A：如实施例1所述，让步骤3产品与二甲基苯甲酰氯反应并将其转化为HCl盐。Mp180-187℃(分解)。HRMS测定值：512.2272；MH+计算值：512.2276。 化合物2B：如实施例1所述，让步骤3产品与2-氨基-6-氯苯甲酸反应，通过制备的TLC纯化粗品并将其转化为HCl盐。Mp195-200℃(分解)。HRMS测定值：535.1662；MH+计算值：535.1652。 化合物2C：用实施例1所述方法，让步骤3产品与2-羟基-6-甲基苯甲酸起反应，通过制备的TLC纯化粗品并将其转化为HCl盐。Mp206-210℃(分解)。HRMS测定值：514.2067；MH+计算值：514.2069。 化合物2D：用与实施例1所述类似的方法，让步骤3产品与2-氨基-6-甲基苯甲酸起反应，通过制备的TLC纯化粗品并将其转化为HCl盐。Mp202-209℃(分解)。HRMS测定值：513.2227；MH+计算值：513.2229。 实施例3 步骤1：将S-丙氨酸甲酯盐酸盐(14g)、无水Na2CO3(60g)、无水CH3CN(125ml)，氯代二苯基甲烷(22.3g)和NaI(5g)的混合物回流并搅拌6小时。冷却，加入冰水并用Et2O(350ml，然后50ml)萃取。合并Et2O萃取液并用1N HCl水溶液分批洗涤：200ml，100ml，然后4×10ml。合并水溶性酸萃取液，搅拌并以小批量地加入过量Na2CO3直至混合物成碱性。用Et2O萃取，经MgSO4干燥并蒸发得到N-二苯基甲基化合物(23.2g)。 步骤2：将所有上述化合物与ClCH2COCl(10ml)在二氯乙烷中回流4小时。蒸发，和用甲苯(20ml)共蒸发。将剩余物溶解在CH2Cl2(200ml)中，与活性炭(10g)一起搅拌0.5小时，滤过并蒸发。在冰冷却下将剩余物在DMSO(200ml)中搅拌并渐渐加入浓NH3水溶液(100ml)，然后加入NaI(10g)。室温搅拌20小时。加入冰水(500ml)，收集固体，用水充分洗涤，然后用几次小批量的10∶1己烷-Et2O混合物洗涤，在50℃高真空干燥得到固体哌嗪二酮(15.5g)。用CH2Cl2-己烷重结晶少量样品：mp186-188℃；[α]D20＝+272.6°。 步骤3；将步骤2的产品(4.0g)的二甲氧基乙烷(40ml)溶液和NaBH4(1.6g)在N2下搅拌并缓缓加入BF3·OEt2(3.2ml)。回流20小时。冷却并滴加CH3OH(10ml)，然后加入浓HCl(15ml)。回流2小时，用过量2N NaOH水溶液处理并用CH2Cl2萃取。经K2CO3干燥并蒸发。硅胶色谱法用CH2Cl2-CH3OH混合物洗脱，最后用5∶1∶0.1v/v/vCH2Cl2∶CH3OH∶NH4OH洗脱。合并且蒸发产品部分得到所需产品(1.95g)，为浅黄色胶状物。 步骤4：将步骤3的产品(0.50g)，N-烯丙氧基羰基-4-哌啶酮(0.40g)，CH2Cl2(5ml)和NaBH(OAc)3(0.70g)室温下搅拌20小时。用CH2Cl2和过量NaOH水溶液处理，经MgSO4干燥，蒸发并通过制备TLC分离产品，用10％Et2O的CH2Cl2溶液洗脱，得到所需化合物(0.8g)，为油状物，染有少量起始酮，但可以适合用于下一步骤。 步骤5：将步骤4的产品(0.80g)，CH3CN(20ml)，水(5ml)和哌啶(1.5ml)的混合物搅拌。加入三(4-磺基苯基)膦(0.072g)和乙酸钯(II)(0.02g)并在N2下室温搅拌2小时。用NaOH水溶液处理，用5∶1v/v甲苯∶CH2Cl2萃取，经K2CO3干燥并蒸发得到黄色油状物，适用于酰化反应。 化合物3A：将步骤5的产品(0.10g)、N-(2，6-二甲氧基苯甲酰基)-4-哌啶酮(0.10g)、CH2Cl2(2ml)和NaBH(OAc)3(0.15g)的混合物搅拌并回流2.5小时，冷却，并用CH2Cl2和NaOH水溶液处理。经MgSO4干燥，蒸发并通过制备TLC分离主要产品，用3∶1v/v Et2O∶CH2Cl2洗脱。沉淀盐酸化物得到为HCl盐的所需化合物(0.13g)。Mp173-177℃(分解)。HRMS测定值：482.3175；MH+计算值：482.3171。 化合物3B：如实施例1所述，应用DEC-HOBT将步骤5的产品与2-氨基-6-氯苯甲酸偶联，通过PTLC分离产品，并沉淀盐酸盐得到化合物3B。Mp188-195℃(分解)。HRMS测定值：503.2567；MH+计算值：503.2578。 化合物3C：如上所述应用DEC-HOBT将步骤5的产品与2，4-二甲基烟酸偶联，通过PTLC分离产品，并沉淀盐酸盐得到化合物3C。Mp180-188℃(分解)。HRMS测定值：483.3114；MH+计算值：483.3124。 应用与上述相似的方法，制备了下列化合物： 3D：Mp.85-89℃；HRMS(MH+)测定值：496.3343 3E；Mp.170-175℃ 3F；Mp.180-185℃ 实施例4 步骤1：将4-三氟甲基苯乙酮(1.88g；10mmol)的无水THF(10ml)溶液在冰浴上冷却并用新制备的固体(S)-2-甲基氧杂硼烷(oxaborolidine，氧杂硼戊定？)(0.54g；2mmol)处理。10分钟后，在5分钟内滴加2M硼烷-二甲硫复合物(3ml；6mmol)的THF溶液。在30分钟结束时进行的TLC显示起始原料已经转化成了极性更大的产品。将反应用约5mlCH3OH小心淬灭直至泡腾停止；真空除去挥发物。将剩余物溶解在CH2Cl2中并用1N HCl，水，10％NaHCO3溶液和盐水洗涤。真空浓缩得到2g黄色胶状物。快速硅胶色谱法(FSGC)应用10-20％EtOAc的己烷溶液洗脱，提供所需的手性醇(1.6g；84％)，为无色油状物。在25％的EtOAc∶己烷中，TLC的Rf＝0.6。 步骤2：向在冰浴中冷却的步骤1产品(1.55g；8.16mmol)的10mlCH2Cl2溶液中加入Et3N(2.3ml；16.32mmol)和CH3SO2Cl(0.87ml；10.6mmol)，形成浑浊的白色溶液。将反应用水淬灭并将有机产品用CH2Cl2萃取，用水，1N HCl，10％NaHCO3溶液和盐水洗涤。真空浓缩得到手性甲磺酸酯(2.1g；96％)，为浅黄色油状物。在25％的EtOAc∶己烷中，TLC的Rf＝0.6。 步骤3：将步骤2产品(2.1g；7.8mmol)，N-BOC保护的2(S)-甲基哌嗪(1.56g；7.8mmol-由商购的2(S)-甲基哌嗪与N-(叔丁氧羰基氧基)邻苯二甲酰亚胺制备)和2，2，6，6-四甲基哌啶(134ml；8mmol)的14ml无水CH3CN溶液加热回流直至TLC显示甲磺酸酯完全消失(16小时)。将反应混合物冷却至室温，用CH2Cl2(50ml)稀释并用水(3×100ml)和盐水洗涤。将有机萃取液经固体MgSO4干燥然后浓缩得到2.8g黄色胶状物。用FSGC(20％EtOAc在己烷中)分离所需的(S，S)-非对映异构体(1.5g；52％)和其苄型差向异构体，(R，S)-非对映异构体(0.5g；17％)收率合计69％。在25％的EtOAc∶己烷中TLC的Rf＝0.75(S，S)和0.56(R，S)。 步骤4：向步骤3产品的12ml CH2Cl2溶液中加入TFA(6ml)，并将所得黄-橙色溶液室温搅拌8小时。通过加入1N NaOH溶液调节pH至10将反应淬灭。用CH2Cl2萃取处理得到1.1g黄色浆状物。FSGC用10％CH3OH的CH2Cl2溶液除去极性更少的杂质，并用含1％Et3N的10％CH3OH∶CH2Cl2梯度洗脱液洗脱预期的游离胺的(S，S)非对映异构体。产量＝0.9g(75％)。在10％CH3OH∶CH2Cl2中，TLC的Rf＝0.5。 步骤5：将步骤4的产品(0.90g，3.3mmol)，4-哌啶酮(0.86g；4.3mmol)，NaB(OAc)3H(1.05g；4.95mmol)和冰AcOH(80μl)的8mlCH2Cl2无色溶液在环境温度搅拌1天。TLC显示没有起始原料存在。将反应混合物用50ml CH2Cl2稀释，用1N NaOH溶液、水(2x)和盐水洗涤。将CH2Cl2萃取液经无水MgSO4干燥并浓缩得到1.7g黄色油状物。应用FSGC(25％丙酮的己烷溶液)分离得到纯品(1.3g，86％)，为白色泡沫。在25％丙酮/己烷中TLC的Rf＝0.6。 步骤6：将TFA(5ml)加入步骤5产品(1.3g，2.87mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中并将所得黄橙色溶液室温搅拌7小时。将反应用1NNaOH溶液淬灭并将pH调至10。将有机产品萃取到50ml CH2Cl2中并用水，然后用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。浓缩得到游离胺(0.98g；98％)，为黄色浆状物。在25％丙酮/己烷中TLC的Rf＝0.1。 步骤7：将步骤6产品(0.78g；2.21mol)、DEC(0.65g；3.4mmol)、HOBT(0.46g；3.4mmol)和2-氨基-6-氯苯甲酸(0.51g；2.9mmol)溶解在8mlCH2Cl2中，向其中加入二异丙基乙胺(0.7ml)并将混合物在环境温度搅拌16小时。TLC分析显示没有起始原料存在并形成两个互相重叠的中等极性(受阻酰胺的旋转异构体)的点为主产物。将粗品(1.3g)通过萃取处理分离，并应用25％丙酮的CH2Cl2溶液作为洗脱剂通过FSGC纯化，得到标题化合物(0.88g；80％)，为浅黄色泡沫。在25％丙酮∶CH2Cl2中TLC的Rf＝0.5。 向标题化合物游离碱(0.76g；1.54mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液中加入氯化氢的Et2O溶液(1M；3ml)，得到瞬间的白色沉淀。室温搅拌2小时后，旋转蒸发除去挥发物并将白色剩余物悬浮在无水甲苯(3×10ml)中并共沸蒸馏。将因此所得白色固体悬浮在含有10％EtOAc的无水Et2O中，搅拌30分钟，过滤并用Et2O(100ml)洗涤。将标题化合物的盐酸盐在高真空干燥得到灰白色固体(0.88g；95％)。Mp：205-210℃。 如步骤7所述，用适宜的羧酸将步骤6的产品转化为其它酰胺(4A-4E)。具有下列结构式的化合物4-4E的物理数据如下： 其中R8和R2如下表中定义： 实施例5 将从相应的甲醇(carbinol)新制备的外消旋苄基氯24(1.26g，5.62mmol)溶液，2(S)-甲基哌嗪(1.12g，5.62mmol)和2，2，6，6-四甲基哌啶(TMP)(1.9ml，11.2mmol)溶解在无水DMF(2ml)中并加热至100-110℃(内部温度)10小时。TLC分析显示没有24存在且形成两个完全分离的产物。将混合物用水稀释并将有机物萃取到Et2O中。将有机萃取液用饱和NH4Cl和盐水洗涤并在真空中浓缩得到2g粗品。进行快速硅胶色谱法，先用25％Et2O-己烷随后用25％EtOAc-己烷洗脱，分别得到～0.5克25a和～0.5克25b(总收率～45％)。在25％EtOAc-己烷中TLC的Rf＝0.6(25a)和0.4(25b)。将纯化的25a用前述方法处理得到具有下列结构式的最终产品5至5F。 其中R2如下表中定义： 实施例6 步骤1： 将醛26(3.9g，20.5mmol)，2(S)-甲基-N-BOC-哌嗪(4.1g，20.5mmol)和Ti(OiPr)4(6.1ml；20.5mmol)在40ml CH2Cl2中的混合物在室温搅拌24小时。加入Et2AlCN并再搅拌1天。将反应混合物用前述方法处理并在FSGC后得到4.71克(58％)氰基胺27(用25％Et2O-己烷为溶剂，可见到TLC非对映异构体的Rf＝0.4/0.5)。 步骤2：向干冰/丙酮浴上冷却的27(1g；2.5mmol)的无水THF溶液中加入六甲基二硅烷胺基钠(1M；3.1ml)。将所得亮黄色溶液用CH3CH2I(7.5mmol；0.6ml)处理。除去干冰浴并将反应液在环境温度搅拌15分钟。然后在温水浴(40℃)中温和加热30分钟。TLC显示两个完全分离的点。用标准的萃取处理并用FSGC纯化得到两个烷基化化合物(总收率：0.7g；70％)。TLC的Rf＝0.6和0.4(25％EtOAc-己烷)。 步骤3：将步骤2的产品与NaBH(OAc)3(2x)和MgBr2∶OEt2(1x)的CH3CN溶液搅拌1天。将反应混合物用水淬灭，将有机物萃取到EtOAc中并处理得到0.8克的粗品。经FSGC(25％EtOAc-己烷)得到～0.4克各自的非对映异构体(总收率～100％)。25％EtOAc-己烷中TLC Rf＝0.55(28a)和0.45(28b)。 步骤4：将化合物28a(S，S-非对映异构体)通过常规的5步反应完全合成实施例6的化合物，化合物6，6A和6B具有本位-甲基而化合物6C和6D则没有本位-甲基： 实施例7 在对位具有烷基或芳基磺酰基R8基的化合物合成是从相应的对位-取代的苯乙酮开始用实施例4，步骤1-6中的方法将其处理，得到含有具有下式结构的实施例7砜化合物： 其中R8和R2如下表中定义： 实施例8 步骤1：将实施例4步骤4产物(125g，4.6mmol)、N-BOC-4-哌啶酮(0.91g，4.6mmol)和(Ti(OiPr)4)(1.4ml；4.6mmol)于10mlCH2Cl2中的溶液在环境温度下搅拌24小时。然后将反应液用Et2AlCN(5.5ml；1M甲苯溶液)处理并继续搅拌20小时。将反应混合物用EtOAc稀释并与饱和NaHCO3溶液一起搅拌(10分钟)并使其尽可能充分地分层。将浑浊(来自不可分水层)的有机层用过量的硅藻土处理并过滤，将滤饼用EtOAc洗涤。分离滤液层并将有机层用水和盐水洗涤，无水经MgSO4干燥并浓缩得到2.16g(98％)琥珀色胶状物。 步骤2：将步骤1的斯特雷克(Strecker)胺1(2.16g)溶解在无水THF中，冰浴冷却并用CH3MgBr(7.5ml 3M的Et2O溶液)。1小时后，除去冰浴并将黄色多相反应混合物在室温搅拌18小时。将反应用饱和NH4Cl溶液淬灭，用水稀释并用CH2Cl2萃取。浓缩得到2.2g黄色胶状物，再用FSGC将其纯化，用1∶1的CH2Cl2-EtOAc混合物从极性更大的杂质中洗脱得到主产物。分离得到本位甲基混合物，为黄色胶状物(1.85g；88％)。在1∶1的Et2O∶己烷中TLC的Rf＝0.5。 步骤3：将TFA(6ml)加入步骤2产物(1.5g；3.2mmol)的10mlCH2Cl2溶液中并在25℃搅拌2小时。将反应用1N的NaOH溶液淬灭使其pH为9-10，并用CH2Cl2萃取得到1.2g粗品。应用FSGC方法，用1∶1的CH2Cl2∶EtOAc洗脱除去所有更小极性的杂质并用10％CH3OH的CH2Cl2溶液和最后为10％(大约7N-NH3)CH3OH/CH2Cl2的梯度洗脱法分离得到游离哌啶，为黄色胶状物(1.07g；90％)。在10％CH3OH的CH2Cl2中TLC的Rf＝0.2。 步骤4：将步骤3产品(103g；2.8mmol)、2，4-二甲基烟酸(0.42g；2.8mmol)、DEC(0.8g；4.2mmol)、HOBT(0.57g；4.2mmol)和二异丙基乙胺(1ml；5.6mmol)的CH2Cl2(15ml)溶液在25℃搅拌24小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释(25ml)，用水、10％NaHCO3溶液和盐水洗涤，浓缩得到1.6g粗品油状物。将其用10％丙酮-CH2Cl2继而用含2-5％CH3OH的CH2Cl2梯度洗脱液，经FSGC法得到标题化合物(1.1g；80％)，为白色泡沫。在5％CH3OH∶CH2Cl2中TLC的Rf＝0.45。 将上述分离的标题化合物游离碱(1g；2mmol)溶解在1∶1的EtOAc∶Et2O(8ml)中，并向其中加入新制备的氯化氢的Et2O溶液(6.1ml1M溶液)，立刻析出白色沉淀。在25℃搅拌1小时后，真空除去挥发物。将产品悬浮在Et2O中并过滤，将滤液用Et2O洗涤。将因此得到的标题化合物的盐酸盐在真空中干燥(1.1g；mp.213-215℃)。HRMS(MH+)503.2997。 用相似的方法从步骤3的产品用适宜的酸制备下列8A-8E酰胺，相似地制备其中R8-取代基是对-甲基磺酰基的化合物8F-8H。 其中R8和R2如下表中定义： 用下表所述方法，制备下列结构式的化合物8S-8EE 其中R11如下表中定义： 8S：将实施例8步骤3产品的三-盐酸盐(75mg；0.16mmol)、EDC(61mg；0.32mmol)、HOBT(49mg，0.32mmol)、iPr2NEt(0.16ml，0.96mmol)、和2，6-二甲基-4-羟基苯甲酸(53mg，0.32mmol)溶于CH2Cl2并在25℃搅拌20小时。浓缩溶液。经制备TLC(EtOAc，SiO2)纯化得到标题化合物为黄色油状物。m.p(2×HCl盐)210-220℃。C29H39O2N3F3的HRMS(MH+)计算值518.2994；测定值：518.2997。 8T：将8S(100mg；0.19mmol)、异氰酸乙酯(0.05ml，0.58mmol)、和Et3N(0.13ml，0.95mmol)溶于CH2Cl2中并在25℃搅拌16小时。将溶液用CH2Cl2稀释并用1N NaOH洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。经制备TLC(2/1EtOAc/己烷，SiO2)纯化得到标题化合物为黄色油状物。 8U：将8S(250mg；0.48mmol)、甲磺酸酐(250mg，1.44mmol)和NaH(38mg，60重量％的油溶液)溶于THF中并在25℃搅拌20小时。将溶液用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。经制备TLC(1/1EtOAc/己烷，SiO2)纯化得到标题化合物为黄色油状物(280mg，98％)。 8V：将实施例8步骤3产品的三-盐酸盐(50mg；0.1mmol)、EDC(38mg；0.2mmol)、HOBT(27mg，0.2mmol)、iPr2NEt(0.07ml，0.4mmol)，和2，6-二甲基-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸(73mg，0.3mmol)(见下列制备)溶于CH2Cl2中并在25℃搅拌19小时。浓缩溶液。用制备TLC(2/1丙酮/己烷，SiO2)纯化得到8V为黄色油状物(23mg，39％)。 2，6-二甲基-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸的制备 步骤A：在25℃让4-苄氧基-2，6二甲基苯甲酸(8.7g，34mmol；Thea，S.等Journal of the American Chemical Society 1985，50，1867)、MeI(3.2ml，51mmol)和Cs2CO3(17g，51mmol)在DMF中搅拌17小时。将溶液过滤并在Et2O和水中分配。将水层用Et2O萃取。将合并的Et2O层用水和盐水洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。经快速色谱法(10/1己烷/Et2O，SiO2)纯化得到8.6g(94％)为无色油状物的甲酯。 步骤B：将苄基保护的苯酚(8.5g，32mmol)和Pd/C(750mg，10wt％Pd)溶于CH3OH中。在溶液中通50psi的氢气，并在25℃在帕尔(Parr)仪上振摇17小时。过滤溶液(硅藻土)。浓缩得到5.6g(98％)为白色固体的苯酚。 步骤C：在0℃将苯酚(3.5g，19.4mmol)和iPr2NEt(3.76g，29.1mmol)溶于CH2Cl2中。在0℃向该溶液中滴加三氟甲磺酸酐(Tf2O)(4.2ml，25.2mmol)。将溶液加温至25℃并在此温度搅拌4.5小时。将溶液用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3洗涤。将水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥。过滤并浓缩得到三氟甲磺酸芳基酯粗品。经快速色谱法(10/1己烷/Et2O，SiO2)纯化得到5.7g(94％)为无色油状物的三氟甲磺酸酯。 步骤D：将三氟甲磺酸酯(1g，3.2mmol)，4-吡啶基硼酸(1.2g，9.6mmol)，Pd(PPh3)4(370mg，0.32mmol)，和Na2CO3(1g，9.6mmol)溶于DME/H2O(4/1，25ml)。在氮气下将溶液加热至90℃(油浴)18小时。将溶液在EtOAc和水中分配。用EtOAc萃取水层。将合并的EtOAc层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到深棕色油状物。经快速色谱法(3/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化得到770mg(100％)为橙色油状物的吡啶衍生物。 步骤E：将吡啶衍生物(390mg，1.6mmol)和mCPBA(550mg，3.2mmol)溶于CH2Cl2中。将溶液在25℃搅拌18小时。将溶液用CH2Cl2稀释并用1N NaOH洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到400mg(97％)为橙色油状物的N-氧化物。C15H16O3N的HRMS(MH+)计算值258.1130；测定值：258.1131。 步骤F：将甲酯(400mg，1.6mmol)溶于5ml 3N的NaOH和2mlEtOH中。将溶液回流加热20小时。浓缩溶液。将剩余物用浓盐酸处理。将所得固体过滤并用水和盐水洗涤。高真空干燥后，得到黄褐色固体游离酸(377mg，100％)。M.p.＞225℃(分解)。C14H14O3N的HRMS(MH+)计算值244.0974；测定值：244.0981。 8W：将实施倒8步骤3产品的三-盐酸盐(1.34g；2.8mmol)、2，6-二甲基-4-甲酰基苯甲酸(500mg，2.8mmol)(见下列制备)、EDC(1.1g；5.6mmol)、HOBT(760mg，5.6mmol)和iPr2NEt(2ml，11mmol)在标准偶联条件下偶联。经快速色谱法(2/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化898mg(61％)为黄色泡沫的8W。 2，6-二甲基-4-甲酰基苯甲酸的制备 步骤A：将4-羟基-2，6-二甲基-苯甲酸叔丁酯(6.4g，29mmol)和iPr2NEt(5.6g，43mmol)溶于CH2Cl2中并冷却至0℃。在0℃向该溶液中缓缓加入TF2O(5.8ml，34mmol)。将溶液在0℃搅拌3小时。将溶液在饱和NaHCO3和CH2Cl2之间分配。将水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到棕色油状物。经快速色谱法(20/1己烷/Et2O，SiO2)纯化得到得到7.99g(82％)为黄色固体的三氟甲磺酸酯。 步骤B：在氮气下将三氟甲磺酸酯(5g，15mmol)、LiCl(1.25g，30mmol)，Pd(PPh3)4(340mg，0.3mmol)和乙烯三丁基锡(4.5ml，16mmol)溶于THF中。将溶液加热至70℃16小时。将溶液在EtOAc和饱和KF之间分配。将混合物过滤。分离有机层，将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到深黄色油状物。经快速色谱法(20/1己烷/Et2O，SiO2)纯化得到1.96g(57％)为黄色油状物的烯烃。 步骤C：将烯烃(0.6g，2.6mmol)溶于CH2Cl2/MeOH (1/1)。将溶液冷却至-78℃。将臭氧吹入溶液中直至持续为深蓝色。将反应用二甲硫淬灭。将反应液浓缩得到为油状物的醛。 步骤D：将叔丁酯(650mg，2.8mmol)和TFA(3ml)溶于CH2Cl2中并在25℃搅拌19小时。将溶液浓缩得到米色固体的酸。 8X：将8W(100mg，0.19mmol)、H2NOMe-HCl(28mg，0.34mmol)、NaOAc(32mg，0.46mmol)溶于MeOH中。将溶液在25℃搅拌17小时。浓缩溶液。将剩余物在CH2Cl2和1N NaOH之间分配。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到粗品。经制备TLC(1/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化得到85mg(84％)的8X。 8Y：将实施例8步骤3产品的三-盐酸盐(75mg；0.16mmol)和4-二氟甲基-2，6-二甲基苯甲酸(32mg，0.16mmol)在标准偶联条件(EDC/HOBT/iPr2NEt)下偶联。经制备TLC(2/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化得到64mg(73％)的8Y。 4-二氟甲基-2，6-二甲基苯甲酸的制备 步骤A：将醛(400mg，1.7mmol)、[二(2-甲氧基乙基)氨基]-三氟化硫(640mg，2.9mmol)、和EtOH(0.02ml，0.34mmol)溶于1，2-二氯乙烷中并在65℃搅拌6小时和在25℃19搅拌小时。将溶液用饱和NaHCO3淬灭。将水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到粗品。经制备TLC(10/1己烷/Et2O，SiO2)纯化得到210mg(50％)二氟衍生物。 步骤B：将叔丁酯(210mg，0.82mmol)和HCl(2.1ml 4M二噁烷溶液，8.2mmol)溶于MeOH中。将溶液在45℃搅拌20小时。浓缩溶液得到为白色固体的酸。 8Z：将实施例8步骤3产品的三-盐酸盐(811mg；1.7mmol)和4-[(乙基氨基)羰基氨基]-2，6二甲基苯甲酸(400mg，1.7mmol)(见下制备)在标准偶联条件(EDC/HOBT/iPr2NEt)下偶联。经快速色谱法(1/1己烷/丙酮，SiO2)纯化得到803mg(81％)为泡沫的8Z。 4-[(乙基氨基)羰基氨基]-2，6二甲基苯甲酸的制备 步骤A：将3，5-二甲基苯胺(18.5ml，149mmol)溶于CH2Cl2中。将溶液在水浴上冷却。向溶液中缓缓加入三氟乙酸酐(29.5ml，209mmol)。加完后，将溶液在25℃搅拌15分钟。向溶液中缓缓加入溴(7.3ml，142mmol)并同时保持在室温的水浴中。将溶液在25℃搅拌3.5小时。将溶液用10％Na2S2O3淬灭。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并用活性炭处理并过滤。浓缩得到橙色固体。经重结晶纯化(己烷/Et2O)得到两批产品(共34g，77％)，为白色固体的溴化物衍生物。 步骤B：将芳基溴化物(17g，57mmol)溶于THF中并在氮气下冷却至-78℃。在-78℃向该溶液中缓缓加入甲基锂/LiBr(54ml，1.5M的Et2O溶液，80mmol)。搅拌5分钟后，在-78℃向该反应溶液中缓缓加入仲-BuLi(62ml，1.3M的环己烷溶液，80mmol)。5分钟后，在-78℃向该溶液中加入二碳酸二叔丁酯(22.5g，103mmol)的THF溶液。将溶液加温至25℃。30分钟后，将反应混合物在水和CH2Cl2之间分配。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)。过滤并浓缩得到黄色固体。经快速色谱法(1/1至1/4的己烷/CH2Cl2，SiO2)纯化得到13.1g(72％)为灰白色固体的叔丁酯。 步骤C：将三氟-乙酰胺(10g，31mmol)和NaOH(2.5g，62mmol)溶于MeOH/H2O(3/1)中并在60℃加热3小时。将溶液在CH2Cl2和水之间分配。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层用水洗涤并干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到6.4g(93％)为橙色固体的苯胺。 步骤D：在0℃将苯胺(1g，4.5mmol)、异氰酸乙酯(0.4ml，5mmol)和CuCl(90mg，0.9mmol)溶于DMF中。将溶液加温至25℃并在该温度下搅拌2小时。将溶液在EtOAc和10％NH4OH之间分配。将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。过滤并浓缩得到黄色固体。经快速色谱法(3/1至1/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化得到904mg(69％)为黄色固体的脲。 步骤E：将叔丁酯(900mg，3.1mmol)和4M HCl的二噁烷(3ml)溶于iPrOH中，并在45℃加热3.5小时以及在25℃加热16.5小时。溶液在减压下浓缩。将剩余物在Et2O和1N NaOH之间分配。将碱性的水层用Et2O萃取。将水层冷却至0℃并用浓盐酸酸化(pH＝1-2)。水层用EtOAc萃取。将合并的EtOAc层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到400mg(55％)为白色固体的酸。 8AA：将实施例8步骤3产品的三-盐酸盐(2g；4.3mmol)和4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸(710mg，4.3mmol)(见下制备)在标准偶联条件(EDC/HOBT/iPr2NEt)下偶联。经快速色谱法(2/1己烷/丙酮，SiO2)纯化得到1.16g(52％)为黄色泡沫的8AA。 4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸的制备 将叔丁酯(950mg，4.3mmol)和HCl(11ml 4M的二噁烷溶液)溶于MeOH中。在45℃加热20小时。将溶液浓缩定量得到酸(710mg)。 8BB：将8AA(100mg，0.19mmol)和乙磺酰氯(0.02ml，0.21mmol)溶解在吡啶中并在25℃搅拌19小时。将溶液浓缩。让剩余物在1N的NaOH和CH2Cl2之间分配。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到棕色油状物。经制备TLC(2/1己烷/丙酮，SiO2)纯化得到100mg(86％)为无色油状物的8BB。 8CC：将实施例8步骤3产品的三盐酸盐(127mg；0.27mmol)和4-氟-2，6-二甲基苯甲酸(58mg，0.35mmol)(见下制备)根据一般程序(EDC/HOBT/iPr2NEt)偶联。经制备TLC(2/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化得到为无色油状物的8CC(87mg，双盐酸盐，54％)。 4-氟-2，6-二甲基苯甲酸的制备 将4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸(200mg，1.1mmol)和NOBF4(196mg，1.7mmol)在1，2-二氯苯中于100℃加热30分钟。将溶液冷却并用MeOH和水稀释。加入几片(2-3)KOH，将溶液回流加热16小时。浓缩溶液。让剩余物在Et2O和1N的NaOH之间分配。水层用Et2O萃取。将水层冷却至0℃并用浓盐酸酸化(pH＝1-2)。水层用CH2Cl2萃取。将有机层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到58mg(31％)为黄褐色固体的酸。 8DD：将实施例8步骤3产品的三盐酸盐(150mg；0.31mmol)和4-氯-2，6-二甲基苯甲酸(76mg，0.41mmol)(见下制备)根据一般程序(EDC/HOBT/iPr2NEt)偶联。经制备TLC(4/1己烷/丙酮，SiO2)纯化得到为无色油状物的8DD。 4-氯-2，6-二甲基苯甲酸的制备 在0℃将4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸(172mg，0.96mmol)和CuCl2(155mg，1.15mmol)溶于CH3CN中。在0℃向该溶液中加入亚硝酸叔丁酯(0.17ml.1.4mmol)。将溶液加热至25℃然后在65℃加热45分钟。让该溶液在Et2O和水之间分配。水层用Et2O萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。过滤并浓缩得到甲基酯。将甲酯用上述氟衍生物的方法水解(KOH)。萃取处理后，得到为黄色固体的4-氯-2，6-二甲基苯甲酸(158mg，89％)。 8EE：将实施例8步骤3产品的三盐酸盐(180mg；0.38mmol)和4-溴-2，6-二甲基苯甲酸(95mg，0.41mmol)(见下制备)根据一般程序(EDC/HOBT/iPr2NEt)偶联。经制备TLC(4/1己烷/丙酮，SiO2)纯化得到为无色油状物的8EE(140mg，双盐酸盐，56％)。 4-溴-2，6-二甲基苯甲酸的制备 步骤A：在氮气下将三氟甲磺酸酯(500mg，1.48mmol)、六甲基二锡(0.31ml，1.48mmol)、LiCl(377mg，8.9mmol)和Pd(PPh3)4(171mg，0.15mmol)在THF中加热(70℃)21小时。让溶液在Et2O和pH＝7的缓冲液(NH4OAc)中分配。水层用Et2O萃取。将合并的Et2O层用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到为黄色半固体的芳基锡烷粗品。 步骤B：在0℃将芳基锡烷(0.74mmol)溶于CH2Cl2中。向该溶液中加入溴(0.7ml，1M Br2的CH2Cl2溶液)。将溶液在0℃搅拌30分钟。将溶液用CH2Cl2稀释并用10％Na2S2O3洗涤。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)。将溶液过滤。向溶液中加入TFA(2ml)并在25℃将其搅拌17小时。浓缩溶液。让剩余物在Et2O和1N NaOH之间分配。水层用Et2O萃取。将水层冷却至0℃并用浓盐酸酸化(pH＝1-2)。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到100mg(59％)为白色固体的酸。 用下表中所述方法，制备结构式如下的化合物8FF-8HH 其中R11如下表中定义： 8FF：将实施例8步骤3产品的三盐酸盐(100mg；0.21mmol)和2，6-二氯-4-甲氧基-苯甲酸(140mg，0.63mmol)根据一般程序(EDC/HOBT/iPr2NEt)偶联。经制备TLC(3/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化，得到为无色油状物的8FF(27mg，23％)。 8GG：将实施例8步骤3产品的三盐酸盐(330mg；0.7mmol)和2，6-二氯-4-羟基-苯甲酸(290mg，1.4mmol)(见下列制备)根据一般程序(EDC/HOBT/iPr2NEt)偶联。经制备TLC(1/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化得到为无色油状物的8GG(75mg，19％)。 2，6-二氯-4-羟基-苯甲酸的制备 将2，6-二氯-4-甲氧基-苯甲酸(500mg，2.3mmol)溶于CH2Cl2中并冷却至-78℃，在-78℃向该溶液中加入BBr3(6.9ml，1M CH2Cl2溶液)。将溶液加热至25℃并在该温度搅拌16小时。将溶液用3N NaOH淬灭。水层用CH2Cl2萃取。将水层冷却(0℃)并用浓盐酸酸化(pH＝1-2)。水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到粗苯酚，不需要进一步纯化就可使用。 8HH：将实施例8步骤3产品的三盐酸盐(96mg；0.2mmol)和2，6-二氯-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸(55mg，0.2mmol)(见下列制备)根据一般程序(EDC/HOBT/iPr2NEt)偶联。经制备TLC(1/5己烷/丙酮，SiO2)纯化得到为无色油状物的8HH(54mg，43％)。 2，6-二氯-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸的制备 将2，4，6-三氯苯甲酸叔丁酯(500mg，1.8mmol)、4-吡啶硼酸(270mg，2.16mmol)、Pd(PCy3)2Cl2(130mg，0.18mmol)和CsF(540mg，3.6mmol)溶于NMP中并在氮气下加热至100℃(16小时)。让溶液在EtOAc和水之间分配。水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。过滤并浓缩得到粗品。经制备TLC(1/1己烷/EtOAc，SiO2)纯化得到68mg(12％)吡啶酯。如前述二甲基衍生物的处理方法将叔丁酯转化为酸(a.mCPBA/b.TFA)。 用适宜的原料和实施例8S至8HH所述的方法，制备下列结构的化合物： 其中R11如下表中定义： 所有熔点除8PP是对游离碱进行外其余均是对二盐酸盐(2xHCl)测定的。 用8Z中所述的三氟甲磺酸酯中间体衍生物，通过上文所述的相似方法和根据表下8AO-8AQ的相似方法，制备下列结构的的化合物： 其中R11如下表中定义 Ex. R11 m.p.(℃) 8AO -CN 240-250 8AP -CONHEt 215-220 8AQ -N(CH3)CONHEt 186-203 8AR -CONH2 200-208 8AS -CONHCH3 215-220 8AT -CON(CH2CH2OCH3)2 165-173 8AU -CON(Et)2 170-180 8AV -N(CH3)CONHCH3 198-210 8AW -NHCH3 190-200 8AX -N(CH3)CONH2 190-2208AO： 步骤1：将三氟甲磺酸酯中间体(0.4g)(参见8W)、Zn(CN)2(0.2g)、Pd(PPh3)4(0.3g)和DMF(1.5ml)在80℃加热17小时。将反应液冷却至室温，用EtOAc和饱和NaHCO3水溶液稀释。移出EtOAc层，用水洗涤，用盐水干燥并蒸发得到粗品油，通过制备板色谱法(2000μM硅胶板；8∶1己烷∶EtOAc洗脱液)将其纯化，在分离适当的带后得到氰基中间体(0.2g)，收率77％。 步骤2：将步骤1产品(0.2g)溶解在MeOH(1.5ml)中并加入HCl(4M的1，4-二噁烷溶液，2ml)。将所得溶液在50℃搅拌3小时并蒸发。按照实施例8步骤4相同的方式，将该粗中间体(0.038g)和实施例8步骤3产品(65mg，三盐酸盐形式)用DMF(2ml)、HOBT(45mg)、DEC(60mg)和二异丙基乙胺(0.1ml)处理，在分离纯化后，得到游离碱形式的8AO，将其转化为盐酸盐(45mg)，收率95％。 8AP： 步骤1：将2，6-二甲基-4-甲酰基苯甲酸(1.96g)(见8W)溶解在叔丁醇(94ml)和2-甲基-2-丁烯(24ml)中。向该溶液中滴加NaClO2(6.89g)、NaH2PO4单水合物(8.17g)和水(45ml)的溶液。加完后将pH调节至3，得到两层溶液。移出有机层并蒸发得到中间体酸(1.80g)，为白色结晶固体，其没有纯化就可使用。 步骤2：向步骤1产品(0.62g)、CH2Cl2(5ml)和DMF(1滴)的溶液中，加入草酰氯(0.31ml)并将所得溶液搅拌10分钟，在此期间加入第二部分的草酰氯(0.3ml)。将反应搅拌10分钟，加入甲苯并将混合物蒸发至干。加入CH2Cl2(10ml)和EtNH2(1ml)并将反应搅拌2天，然后让其在盐水和CH2Cl2之间分配。将CH2Cl2层蒸发并加入HCl(4ml，4M的1，4-二噁烷溶液)。将所得溶液搅拌3小时并蒸发得到固体，将所得固体用Et2O洗涤并收集得到酰胺中间体(0.13g)，收率24％。 步骤3：将实施例8步骤3产品(60mg；三盐酸盐形式)和步骤2产品(35mg)用实施例8步骤4相同的方式处理，在处理和纯化后得到游离碱形式的8AP，将其转化为盐酸盐(50mg)，收率62％。 8AQ： 步骤1：向胺中间体(2g)(见8Z)溶液中加入NaH(0.4g，60％油分散物)。将所得悬浮液搅拌15分钟并加入Me2SO4。回流加热1.5小时后，将反应液冷却至室温，将其倾入饱和HN4Cl水溶液中并用Et2O萃取。蒸发后，将粗反应混合物在硅胶上进行色谱法，用4∶1己烷∶EtOAc洗脱，在蒸发适宜馏分后得到甲基胺中间体(0.8g)，收率38％。 步骤2：将步骤1产品(0.12g)、THF(5ml)和EtNCO(54mg)加热回流17小时。加入EtNCO(54mg)和1，4-二噁烷(2ml)，并将所得溶液在密封管中65℃下加热17小时。将溶液冷却，蒸发并通过制备板色谱法(硅胶；25％EtOAc∶CH2Cl2)纯化，得到所需产品(0.1g)，为结晶固体，收率64％。 步骤3：将步骤2产品(0.1g)以实施例8步骤3(p28)相同的方式处理，得到所需中间体(0.08g)，直接用于下一步骤。 步骤4：将实施例8步骤3产品(75mg；三盐酸盐形式)和步骤3产品(0.04g)以实施例8步骤4相同的方式处理，在处理和纯化后得到为游离碱形式的8AQ，将其转化为盐酸盐(65mg)，收率62％。 使用上述方法和应用可商购的酸，制备下列结构的化合物8AY-8BT 其中R10和R11如下表中定义 用与上述方法相似的方法，制备下列化合物： 其中R8、R3、R6和R2如下表中定义 实施例9 步骤1：将4-N-BOC-2(S)-甲基哌嗪(1.5g；7.5mmol)、4-甲氧基-苄基氯(1.1ml；8.1mmol)和二异丙基乙胺(1.5ml)的无水CH3CN溶液加热回流5小时。将反应混合物冷却至室温并在真空中除去挥发物。将剩余物溶于CH2Cl2(30ml)中并用水和盐水洗涤。浓缩得到粗品，将其通过FSGC(10％EtOAc-己烷)纯化，得到2.1g(88％)为浅黄色液体的产品。 向上述化合物(2.1g，6.56mmol)的12ml CH2Cl2溶液中，加入将TFA(6ml)并在25℃将混合物搅拌1.5小时。将反应用1N NaOH淬灭并调节pH至10。用CH2Cl2萃取处理后得到所需产品(1.4g；97％)，为无色胶状物。 步骤2：在25℃将步骤1产品(1.4g，6.36mmol)、N-BOC-4-哌啶酮(1.27g；6.4mmol)和Ti(OiPr)4(1.9ml；6.4mmol)的混合物搅拌24小时。向该反应混合物中加入1M Et2AlCN的甲苯(7.6ml)溶液并将混合物在环境温度再搅拌1天。将因此形成的斯特雷克胺用实施例8步骤2所述的方法处理和分离(2.7g，100％)。在25％EtOAc-CH2Cl2中TLC的Rf＝0.3。 在0℃将斯特雷克胺(2.7g；6.3mmol)溶解在15ml无水THF中，向其中加入CH3MgBr(3M的Et2O溶液；10.5ml)。1小时后，移去冰浴，让反应在室温进行15小时，此时多相反应混合物的TLC分析显示起始原料没有变化；将混合物在60℃加热5小时，没有观察到TLC行为的变化。将反应混合物用饱和NH4Cl淬灭并有机产品萃取到CH2Cl2中。用FSGC纯化粗品(2.7g)，用15％丙酮-己烷作为洗脱剂，得到所需本位-甲基化合物，为无色胶状物(2.3g；87％)。 步骤3：将步骤2产品(1.7g；4.08mmol)、甲酸铵(1.4g；22mmol)和10％钯/炭(0.4g)混合在20ml CH3OH中并加热回流5小时。将反应混合物用硅藻土过滤并除去挥发物。将剩余物溶解在CH2Cl2中并用10％NaOH溶液、水和盐水洗涤。真空浓缩得到1.1g(92％)浅黄色胶状物。 步骤4：将步骤3产品(0.12g；0.4mmol)、对-三氟甲基苄基溴(0.1g；0.4mmol)和二异丙基乙胺(0.1ml)在无水CH3CN中的溶液温和地加热(60-70℃)16小时。将混合物冷却，经CH2Cl2萃取处理分离有机产品。FSGC法(10-30％Et2O-CH2Cl2；Rf＝0.4)得到为无色薄膜的主产品(0.12g；68％)。 将上述产品(在CH2Cl2中)用TFA(1ml)处理1小时，然后用标准处理方法碱化得到所需化合物(0.09g；96％)，为无色薄膜。 步骤5：将步骤4产品(0.045g；0.13mmol)和6-氯邻氨基苯甲酸(0.022g；0.13mmol)用实施例1所述方法偶联，并在处理和FSGC(5％CH3OH的CH2Cl2溶液)后，分离得到无色薄膜的标题化合物(0.058g；90％)。 通过以常规方式将游离碱与1M HCl-乙醚反应并处理沉淀，得到浅褐色固体(0.066g)，制得标题化合物的盐酸盐。 用相似方法，将步骤3产品转化其它化合物，首先将哌嗪氮原子用适宜的卤化物烷基化，然后脱保护并将哌啶基部分与适宜的酸偶联，以形成下列通式结构的酰胺： 其中R和R2如下表中定义 用下述相似的方法，也制得其中R为4-乙氧基萘基的化合物： 步骤1-3：见实施例9。 步骤4A：将4-羟基萘醛(0.86)和K2CO3(1.38g，2当量)在CH3CN(35ml)中用CH3CH2I(0.80ml，2当量)处理，将所得混合物在室温搅拌20小时。在真空中浓缩反应混合物，剩余物用EtOAc处理，过滤混合物。滤液用H2O分配。将EtOAc层干燥(MgSO4)并在真空中浓缩，得到橙-棕色剩余物(0.89g)。将该剩余物置于制备薄层板(10,1000μ)上，用CH2Cl2洗脱得到标题混合物(0.82g)。 步骤4：在氩气下，将步骤3产品(0.270g；0.95mmol)和步骤4A产品(0.571g；2.9mmol)在CH2Cl2(25ml)中室温搅拌30分钟。加入Na(OAc)3BH (0.506g；3.4mmol)。19小时后，将反应混合物用稀NaOH淬灭。水层用CH2Cl2洗涤(3x)。将合并的CH2Cl2溶液用水(3x)和盐水洗涤。将干燥(MgSO4)后的CH2Cl2溶液浓缩至～50ml。加入Amberlyst15(4.5meq/g∶2.4g；11.025mmeq)。19小时后，再加入Amberlyst 15(2.3g)。7小时后将树脂用CH2Cl2(5x)、THF(5x)、THF∶水(5x)、水(5X)、CH3OH(5X)和CH2Cl2(5x)洗涤。将树脂用2M NH3的CH3OH(300ml)溶液(3X)洗脱，然后真空浓缩得到琥珀油(0.215g)。将粗产物置于制备薄层板(4,1000μ)上，用CH2Cl2∶2M NH3的CH3OH溶液(9∶1)洗脱，得到琥珀油(0.125g，收率36％) 步骤5：应用实施例9步骤5方法中的适宜羧酸，制备了下列化合物： LCMS测定值M+H＝531；HPLC*保留时间为5.52分钟。 LCMS测定值M+H＝516；HPLC*保留时间为5.66分钟。 *HPLC:VYDAC218TP5405柱；梯度5-95％B/10分钟保持2分钟；溶液A0.1％TFA/水，溶液B0.1％TFA/CH3CN，波长245nm。 应用其中起始哌嗪没有甲基取代基的相似方法，制备下列化合物： 实施例10 步骤1：将4-N-BOC-2(S)-甲基哌嗪(0.4g；2mmol)、对-碘代苯甲醛(0.46g；2mmol)和NaBH(OAc)3(0.65g；3mmol)在6ml CH2Cl2中的溶液温和地回流加热14小时。冷却内容物，用30ml CH2Cl2稀释，然后用1N NaOH溶液、水和盐水洗涤，分离得到黄色油(0.8g)。经FSGC法(25％乙酸乙酯-己烷)得到无色薄膜的所需产品(0.66g；79％)。在25％乙酸乙酯-己烷中TLC的Rf＝0.6。 用于CH2Cl2(2ml)中的TFA(1ml)处理，使BOC保护基从产品(0.66g，1.58mmol)中除去。随后标准化处理，得到单烷基化哌嗪(0.5g；100％)，为无色胶状物。 步骤2：向步骤1产品(0.5g；1.58mmol)和N-BOC-哌啶酮(0.6g；3mmol)的5ml CH2Cl2溶液中，加入NaBH(OAc)3(0.63g；3mmol)和两滴AcOH，将所得溶液在环境温度搅拌16小时。在常规处理和FSGC后，得到无色油状所需产品(0.6g；76％)。在25％丙酮-CH2Cl2中TLC的Rf＝0.4。 通过用TFA(2ml)在CH2Cl2(5ml)中处理N-BOC保护的化合物(0.6g；1.2mmol)，制备游离哌啶(0.38g；79％)。 化合物10A：在DEC(0.092g；0.48mmol)、HOBT(0.065g；0.48mmol)和二异丙基乙胺(0.1ml)存在下，将6-氯邻氨基苯甲酸(0.065g；0.38mmol)与步骤2产品(0.127g；0.32mmol)偶联，然后按前述方法进行产品分离。得到无色薄膜化合物10A(0.13g；73％)。在10％CH3OH-CH2Cl2中一对旋转异构体的TLC Rf＝0.5/0.45。 以常规方式制备标题化合物的盐酸盐。Mp：198-202℃；HRMS(MH+)＝553.1231。 化合物10B：将步骤2产品与6-甲基邻氨基苯甲酸偶联得到化合物10B(盐酸盐)，收率73％。Mp：197-200℃；HRMS(MH+)＝533.1774。 化合物10C：将2，6-二甲基苯甲酸偶联到步骤2产品上，得到酰胺10C(盐酸盐)，收率50％。Mp：202-205℃；HRMS(MH+)＝532.1826。 实施例11 步骤1：在15分钟内，将于CH2Cl2(50ml)中的(S)-甲基苄基胺(27ml，0.2mol)滴加到冰冷却的三氟乙酸酐(40ml)的CH2Cl2(200ml)溶液中。将混合物在室温搅拌1小时，然后在冰水浴中冷却，加入碘(27g，0.106mol)，然后加入[双(三氟乙酰氧基)碘]-苯(25g，0.058mol)。在黑暗中室温搅拌过夜后，再次加入[双(三氟乙酰氧基)碘]-苯(24g，0.056mol)并再将混合物在室温搅拌1天。混合物用CH2Cl2(500ml)和冰冷却的Na2SO3(10％水溶液，500ml)稀释并搅拌0.5小时。分离有机层，用NaHCO3洗涤，通过短硅胶柱过滤并用CH2Cl2(500ml)洗涤。蒸发CH2Cl2后，加入乙醚(125ml)并将混合物搅拌10分钟。将己烷(600ml)逐渐加入乙醚溶液中并将混合物搅拌半小时。收集沉淀并用己烷洗涤。将白色固体在室温干燥，得到碘化物(36.5g，收率53％，Rf＝0.7，1∶3乙酸乙酯/己烷)。 步骤2：将步骤1产品(11.2g；0.033mol)溶解在甲醇(200ml)中，并滴加NaOH(15g；0.375mol)的水(100ml)溶液。将混合物在室温搅拌2.5小时。蒸发甲醇后，水层用乙醚(3×100ml)萃取并将合并的有机部分用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到游离胺。 在氮气氛下将R-乳酸甲酯(4.08g；0.039mol)溶解在CH2Cl2(40ml)中，将混合物搅拌并在丙酮-二氧化碳浴中冷却至-78℃。加入三氟甲磺酸酐(10.2g；0.036mmol)，然后加入2，6-二甲基吡啶(6.27g，0.059mol)，将混合物在-78℃搅拌5分钟。将混合物加热至室温并搅拌30分钟。向混合物中再次加入CH2Cl2然后将溶液用2N HCl洗涤。将上述新制备的胺加入三氟甲磺酸酯溶液中，然后加入碳酸钾(18g；0.132mol)的水(20ml)溶液。将混合物在室温搅拌过夜。用CH2Cl2萃取处理，然后进行硅胶柱色谱，得到黄色浆状物仲胺(8.27g；75％产率，Rf＝0.65，3∶1己烷/乙酸乙酯)。 步骤3：将步骤2的胺(17.3g，0.052mol)溶解在二氯乙烷(100ml)和ClCH2COCl(117.2g，82ml，1.04mmol)中。将混合物在回流条件下搅拌3小时。真空中除去溶剂和ClCH2COCl。在0℃将剩余黄色浆状物溶解在DMSO(40ml)中并加入NaI(5.2g，0.035mol)和NH4OH(56ml，1.04mol)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟。加热至室温并搅拌过夜。向混合物中加入水(100ml)，过滤沉淀，用水洗涤。将所得白色固体在空气中干燥得到哌嗪二酮(14.3g，收率77％，Rf＝0.56己烷/乙酸乙酯，3∶1)。 步骤4：将步骤3的哌嗪二酮(14.3g，0.04mol)溶解在二甲氧基乙烷(200ml)中，向该溶液中加入NaBH4(15.1g，0.4mol)和BF3·OEt2(34g，29.5ml，0.24mol)。将混合物在回流条件下搅拌3小时，然后在冰浴中冷却至大约0℃。然后向混合物中缓缓加入甲醇(500ml)和浓盐酸(300ml)。将溶液在室温搅拌20分钟，然后在回流条件下搅拌45分钟。将混合物浓缩并加入NaOH直至pH超过10。用乙酸乙酯萃取处理得到所需哌嗪(12.9g，收率98％)，为黄色浆状物。 步骤5：将步骤4产品(1.9g，5.79mmol)、N-BOC-4-哌啶酮(5.73g，28.8mmol)、NaBH(OAc)3(6.1g，28.8mmol)和2M AcOH(5.76ml，11.52mmol)并入CH2Cl2(150ml)中，并将混合物搅拌过夜。除去溶剂后，加入NaOH(3N)，用EtOAc萃取处理，然后经硅胶色谱法，得到哌嗪子基-哌啶酮纯品(2.21g，收率75％，Rf＝0.18，己烷/乙酸乙酯，1∶1中)，为浆状物。 步骤6：将步骤5产品(1.9g，3.7mmol)溶解在CH2Cl2(10ml)中并加入TFA(10ml)。在室温将混合物搅拌2小时。减压除去溶剂和TFA后，向剩余浆液中加入氢氧化钠溶液(3N)，用乙酸乙酯萃取处理得到哌嗪子基-哌啶(1.3g，收率85％)，为黄色浆状物。向游离哌嗪子基-哌啶(200mg，0.484mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液中加入2，6-二甲基苯甲酸(150mg，0.99mmol)、DEC(191mg，0.99mmol)和HOBT(135mg，0.99mmol)。在室温将混合物搅拌过夜，然后减压除去溶剂。向剩余浆液中加入氢氧化钠溶液(3N)，用乙酸乙酯萃取处理，然后用柱色谱法，得到标题化合物(210mg，80％收率，Rf＝0.37，20∶1的CH2Cl2/CH3OH)。C27H37N3OI(M+H+)的HRMS(盐酸)计算值：546.1981，测定值：546.1965。Mp：190℃(分解)。 应用相似方法，制备下式化合物 其中R9和R10如下表中定义： Ex R9 R10 Mp(℃) HRMS 11A -CH3 -NH2 198(dec.) 547.1928 11B -Cl -NH2 203(dec.) 567.1395 11C -OH -OH 200(dec.) 550.1555 11D -OCH3 -OCH3 200(dec.) 578.1860实施例12 步骤1：向实施例11步骤4产品(1.4g，4.2mmol)和1-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(0.93g，4.67mmol)的CH2Cl2的溶液中，加入Ti(OiPr)4(1.19g，4.2mmol)，在室温将混合物搅拌过夜。加入1M Et2AlCN(5.04ml，5.04mmol)，在室温将混合物搅拌过夜，蒸发溶剂。在剩余物加入饱和NaHCO3，用乙酸乙酯萃取处理得到斯特雷克胺，为黄色浆状物。将该浆液溶解在THF(40ml)中，向该溶液中加入3M CH3MgBr(7ml，21mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后冷却至0℃并加入饱和NH4Cl和水。用乙酸乙酯萃取处理，然后进行硅胶色谱法，得到哌嗪子基-哌啶产品(1.78g，81％收率，Rf＝0.52，己烷/乙酸乙酯，2∶1中)。 步骤2：用实施例11步骤6所述的方式处理步骤1的产品，得到标题化合物。Mp：190℃(分解)；HRMS(盐酸盐)：测定值：560.2145。 应用相似方法，制备下式化合物 其中R2如下表中定义： 实施例13 步骤1：向实施例11步骤4的N-BOC保护的产品(250mg，0.581mmol)的DMF(2.5ml)溶液中，加入CuCl(1g，10.1mmol)。在氮气下将悬浮液在110℃搅拌24小时。在混合物冷却至室温后，加入NH4OH，溶液逐渐转化为亮蓝色。用乙酸乙酯萃取处理，得到氯-取代的哌嗪和其BOC衍生物的混合物。将混合物在CH2Cl2(2ml)中用TFA(5ml)处理2小时后，蒸发溶剂，加入NaOH(3N)。用乙酸乙酯萃取处理后得到纯哌嗪(110mg，79％)，黄色浆状物。 步骤2：将步骤1产品用与实施例11的步骤5和6相似的方式处理，得到标题化合物。Mp：180℃(分解)；HRMS(盐酸盐)：测定值：454.2617。 应用相似方法，制备下式化合物 其中R9和R10如下表中定义： Ex R9 R10 Mp(℃) HRMS 13A -CH3 -NH2 200(dec.) 455.2577 13B -Cl -NH2 200(dec.) 475.2023 13C -Cl -Cl 187(dec.) 494.1536根据实施例12的方法，应用步骤1的产品制备下式化合物： 其中R2如下表中定义： 实施例14 步骤1：向实施例11步骤4的N-BOC保护的产品(5g，0.012mol)的DMF(20ml)溶液中，加入CuCN(20.8g，0.23mol)。在氮气下将该悬浮液在110℃搅拌22小时。在混合物冷却至室温后，加入NH4OH，溶液逐渐转化为亮蓝色。用乙酸乙酯萃取处理，随后通过硅胶柱色谱法，得到氰基衍生物(2.29g，60％收率，Rf＝0.5，己烷/乙酸乙酯，4∶1)、甲酰胺衍生物(0.95g，23.6％收率，Rf＝0.2，CH2Cl2/CH3OH，10∶1)和未取代的衍生物(85mg，2.4％收率，Rf＝0.75，己烷/乙酸乙酯，2∶1)。 步骤2：首先在酸性条件下除去步骤1氰基化合物上的BOC基团，然后根据实施例11的步骤5和6的方法将所得胺转化为标题化合物。HRMS(盐酸盐)：测定值：445.4970。 实施例15 步骤1：在0℃向实施例11步骤4的N-BOC保护分产品(1.4g，3.26mmol)和CuCl(1.61g，16.3mmol)的甲醇溶液中，缓缓加入NaBH4(3.69g，97.6mmol)。形成黑色沉淀。将混合物加热至室温并搅拌过夜。通过硅藻土过滤除去沉淀，真空除去甲醇。用乙酸乙酯萃取处理得到所需化合物(1g，100％收率，Rf＝0.55己烷/乙酸乙酯，5∶1)，为浆状物。 步骤2：在酸性条件下除去步骤1产品上的BOC基团，然后根据实施例11的步骤5和6的方法将所得胺转化为标题化合物。Mp：195℃；HRMS(盐酸盐)：测定值：420.3016。 应用相似方法，制备下式化合物： HRMS(盐酸盐)：测定值441.2426。 实施例16 步骤1：向实施例11步骤4中N-BOC保护的产品(2.5g，5.8mmol)的苯溶液中，加入苯基硼酸(1.68g，13.8mmol)、2M Na2CO3(14ml)和四(三苯基膦)钯(0.67g，0.58mmol)。在回流下将混合物搅拌过夜。用乙酸乙酯萃取处理，然后通过硅胶柱色谱法，得到苯基衍生物(1.37g，62％收率，Rf＝0.55，己烷/乙酸乙酯，5∶1)，为浆状物。 步骤2：在酸性条件下除去步骤1产品上的BOC基团，然后根据实施例11的步骤5和6的方法将所得胺转化为标题化合物。Mp：190℃；HRMS(盐酸盐)：测定值：496.3319。 应用相似方法，制备下式化合物： 其中R2如下表中定义： *游离碱 实施例17 步骤1：将实施例11步骤4中N-BOC保护的产品(800mg，1.88mmol)溶解在无水THF中，并在氮气下将温度降低至-78℃。加入丁基锂(2.5M溶液，0.832ml，2mmol)并在-78℃将混合物搅拌10分钟。然后在-78℃将该溶液滴入对-氯苯甲醛(234mg，2.07mmol)的THF溶液中。将混合物在-78℃搅拌30分钟，然后逐渐升温至室温。向该混合物中加入饱和NH4Cl，用乙酸乙酯萃取处理，随后经硅胶柱色谱法得到所需醇(30mg，3.6％收率，Rf＝0.5，己烷/乙酸乙酯，2∶1)，为黄色浆状物。 步骤2：将步骤1的醇(40mg，0.09mmol)、三乙基硅烷(52mg，0.45mmol)和TFA(5ml)的CH2Cl2(5ml)溶液在回流条件下搅拌2小时。减压除去CH2Cl2，三乙基硅烷和TFA后，向残余的浆状物中加入氢氧化钠溶液(3N)。用乙酸乙酯萃取处理，得到氯苄基衍生物(20mg，68％收率)，为黄色浆状物。 步骤3：根据实施例11中步骤5和6的方法，将步骤2产品转化为标题化合物。Mp：170℃(分解)；HRMS(盐酸盐)：测定值：544.3101。 实施例18 步骤1：向实施例14中步骤1的氰基化合物的N-BOC保护的4-哌啶基衍生物(510mg，1.24mmol)的乙醚(4ml)溶液中，以滴加的方式加入3M CH3MgBr(4ml)。将混合物回流下搅拌过夜。在冰浴上冷却溶液后，加入12N HCl(4ml)并将混合物在蒸汽浴上搅拌2小时。将溶液冷却至室温，加入固体氢氧化钠片直至pH超过10。用乙酸乙酯/甲醇(3∶1)萃取处理，得到所需的甲基酮(249mg，61％收率)，为浆状物。 步骤2：按照实施例11中步骤6的标准DEC肽偶联方法，处理步骤1产品，得到标题化合物。Mp：210℃；HRMS(盐酸盐)：测定值：483.2522。 应用相似方法，制备下式化合物 Mp：210℃(分解)；HRMS(盐酸盐)：测定值：463.3088。 实施例19 步骤1：向实施例22产品(140mg，0.29mmol)的甲醇(10ml)和乙醇(1ml)的溶液中，加入NH2OCH3·HCl(738mg，8.84mmol)和NaOAc(725mg，8.84mmol)。在40℃将悬浮液搅拌过夜，蒸发溶剂并将水加入剩余物中。用乙酸乙酯萃取处理，然后经硅胶柱色谱法得到标题化合物(99mg，68％收率，Rf＝0.38，CH2Cl2/CH3OH，20∶1)，C31H45N4O2(M+H+)的HRMS(酒石酸盐)计算值：505.3543；测定值：505.3542。 应用相似方法，制备下式化合物 其中R8、R6、R2如下表中定义： 实施例20 将实施例11中步骤6的游离哌嗪子基-哌啶(1.7g，3.3mmol)溶解在氯仿(30ml；＝原液A)中。将250μl原液A(0.027mmol)加入0.15g(～0.14mmol)树脂键合碳化二亚胺浆液中(在100℃通过Argopore-Cl树脂与1-(3-二甲基-氨基丙基)3-乙基碳化二亚胺的DMF溶液在聚乙烯SPE筒中的DMF(1.5ml)中反应制备)。向该混合物中加入75μl 1M 5-甲基-3-苯基异噁唑-4-羧酸的DMF溶液(0.075mmol)、和HOBT(24μl的1M DMF溶液)。将该混合物振摇14小时，过滤并向滤液中加入0.1g Amberlyst-15树脂(0.47mmol)。振摇1至2小时，过滤并用下列溶剂各洗涤两次：THF、CH2Cl2和甲醇，然后用THF和CH2Cl2洗涤。用2M NH3的甲醇溶液处理树脂(1次30分钟，和1次5分钟)。合并并在减压下浓缩滤液得到标题化合物。LCMS测定值MH+＝599.1(计算MW598)；TLC Rf＝0.74(CH2Cl2/CH3OH/NH4OH(95/5/0.5))。 应用上述方法及适宜的羧酸，得到下列化合物 其中R2如下表中定义： 实施例21 步骤1：首先在酸性条件下将实施例14中步骤1的氰基化合物上的BOC基团除去，然后将所得胺(1.59g，6.96mmol)、1-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(1.66g，8.35mmol)和Ti(OiPr)4(2.18g，7.66mmol)在CH2Cl2中室温搅拌过夜。加入1M Et2AlCN(8.35ml，8.35mmol)，在室温将混合物搅拌过夜，然后蒸发溶剂。向剩余物中加入饱和NaHCO3，用乙酸乙酯萃取处理，然后通过柱色谱法，得到斯特雷克胺(1.76g，0.58收率，Rf＝0.70，己烷/乙酸乙酯，2∶1)，为黄色浆状物。 步骤2：将步骤1的胺(200mg，0.46mmol)溶解在无水THF(2ml)中并滴加3M的CH3MgBr(0.76ml，2.29mmol)。在室温将混合物搅拌过夜，然后冷却至0℃。加入饱和NH4Cl(10ml)，出现沉淀。加入水(40ml)，沉淀消失。用乙酸乙酯萃取处理，随后经柱色谱法得到所需的本位-甲基衍生物(169mg，86％收率，Rf＝0.53，己烷/乙酸乙酯，2∶1)。 步骤3：以实施例11中步骤6所述的方式，处理步骤2产品，得到标题化合物。198℃(分解)；HRMS(盐酸盐)测定值：460.3079。 应用相似方法，制备下式化合物 其中R2如下表中定义： 实施例22 步骤1：将实施例21中步骤1的斯特雷克胺(380mg，0.87mmol)用CH3MgBr(2.9ml，8.7mmol)的乙醚(5ml)溶液处理并在回流条件下过夜。将混合物用冰冷却并滴加入水(5ml)。加入12N HCl(6ml)并将混合物在蒸气浴上搅拌2小时。在混合物用冰冷却后，加入氢氧化钠直至溶液的pH为10以上。用乙酸乙酯萃取处理得到游离胺(307mg，100％收率)，为浆状物。 步骤2：根据实施例11中步骤6所述的肽偶联方法，将步骤1产品转化为标题化合物。Mp：80-85℃；HRMS的测定值：476.3271。 应用相似方法，制备下式化合物 其中R2如下表中定义： 实施例23 步骤1-3： 步骤1：用高架机械搅拌器将二乙酰乙酸乙酯(93.4g)、Cs2CO3(185g)和CH3CN(550ml)混合在一起。加入CH3CN(50ml)并将所得混合物冷却至0℃。滴加三氟甲磺酸甲酯(88.6g)，加完后除去冷却浴。在室温将混合物搅拌1小时，过滤，并将盐用乙醚(2×50ml)洗涤。合并有机萃取液并加入乙醚(300ml)。将所得混合物过滤，滤饼用乙醚(2×100ml)洗涤，合并乙醚萃取液并蒸发至一半体积。将溶液用冰浴冷却并用冷的(0℃)2N氢氧化钠(pH＝11)洗涤一次。将乙醚层用硫酸镁干燥，过滤并蒸发得到所需产品为黄色液体(64.7g)，收率65％，将其直接用于下一步骤。 步骤2：在室温将步骤1产品(64.2g)、乙醇钠的乙醇溶液(商购溶液：21重量％；113g)、乙醇(587ml)和乙酸甲脒酯(36.2g)混合在一起。回流4小时后，将混合物冷却至室温，将所得沉淀滤出，然后真空下除去乙醇。让所得液体在水和二氯甲烷之间分配，并将水层用二氯甲烷(3×150ml)萃取。将二氯甲烷萃取液用硫酸镁干燥，过滤并蒸发得到粗制暗色液体(50.7g)，将其通过硅胶色谱法(980g，4∶1己烷∶乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化。在蒸发适宜馏分后，分离出所需产品(28.5g)，收率46％，其直接用于下一步骤。 步骤3：在室温将步骤2产品(28.1g)、氢氧化钠(6.72g)、水(65ml)和乙醇(130ml)混合在一起并加热回流1小时。将所得溶液冷却至室温，在真空下除去挥发物直至得到粘稠的膏状物。加入水(20ml)，将混合物冷却至0℃并在搅拌下向其中滴加浓盐酸(14.3ml)。过滤收集所得白色沉淀，用冰水(2×10ml)洗涤并通过抽吸风干30分钟。将所得白色固体用甲苯(2×20ml)处理，在50℃真空下除去溶剂然后真空(1mm Hg)干燥18小时。分离得到白色固体所需产品(14.9g)，收率63％，mp：176-178℃。C7H8N2O2元素分析计算值：C55.26％，H5.30％，N18.41％；测定值：C55.13％，H5.44％，N18.18％。 通过蒸发水性滤液(来自上面)至干，分离得到第二批产品，加入水(20ml)。在室温将所得混合物搅拌5分钟，冰浴冷却，经过滤收集所形成的沉淀。将所得固体用冰水洗涤(2×5ml)，如上所述干燥得到产品(4.68g)为奶白色固体，合并的收率为83％。 步骤4：将实施例4中步骤6产品(三盐酸盐形式；5.4g)、DMF(11.3ml)、HOBt(3.07g)、二异丙基乙胺(12.3ml)和步骤3产品(3.45g)混合在一起，在15分钟内分批加入DEC(4.35g)。将所得混合物在45℃加热18小时，冷却至室温，用乙酸乙酯(80ml)稀释并用2N氢氧化钠(25ml)洗涤。水层用乙酸乙酯(3×25ml)萃取，合并有机萃取液，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将所得油状物粗品用硅胶色谱法(170g，76∶19∶5的己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺作为洗脱剂)纯化。在蒸发适宜的馏分后，分离得到游离碱形式的标题化合物(5.21g)，为浅色泡沫，收率91％。 步骤5：向步骤4游离碱(2.00g)的乙酸乙酯(20ml)冷却(0℃)溶液中，加入HCl(3.0ml，4.0M的1，4-二噁烷溶液)。将所得混合物加热至室温，用乙醚(20ml)稀释，过滤，用乙醚洗涤(2×20ml)，抽吸10分钟空气干燥，然后在90℃真空(1mmHg)干燥5小时，得到白色固体标题混合物(2.3g)，收率97％。Mp：159-162℃。C27H36N5OF3·2HCl·0.5H2O元素分析的计算值：C55.38％，H6.71％，N11.96％，Cl12.11％；测定值：C55.19％，H6.69％，N11.75％，Cl11.45％。 应用相似方法制备其它的嘧啶衍生物-化合物： 步骤1-2： 步骤1：以实施例23中步骤2同样的方式处理实施例23中步骤1产品，但用盐酸乙脒(2.03g)代替乙酸甲脒。反应试剂的用量为：实施例23中步骤1产品(4.0g)，乙醇(20ml)和乙醇钠的乙醇溶液(商购溶液，21重量％；8.03g)。在用上述方法萃取和纯化后，分离得到产品(1.7g)，为无色油状液体，收率41％，可直接用于下一步骤。 步骤2：以实施例23中步骤3同样的方式，应用乙醇(5ml)、水(5ml)和氢氧化钠(1.0g)处理步骤1产品(1.7g)。在用上述方法萃取和纯化后，分离得到为白色固体的产品(0.12g)，收率8％，直接用于下一步骤中。 步骤3：在以实施例23中步骤4相同的反应条件下，应用HOBT(20mg)、DEC(45mg)、二异丙基乙胺(40mg)和DMF(1.5ml)，将实施例4中步骤6产品(0.05g)与步骤2产品(0.028g)(直接用上述产品)进行反应。在用上述方法萃取和纯化后，应用实施例23中步骤5所述的方法将产品转化为其盐酸盐，得到标题化合物(77mg)，为白色固体，两步的收率为97％。Mp：185-190℃。 步骤1-2： 步骤1：以实施例23中步骤2同样的方式处理实施例23中步骤1产品，但用盐酸苯甲脒(3.35g)代替乙酸甲脒。反应试剂的用量为：实施例23中步骤1产品(4.0g)、乙醇(20ml)和乙醇钠的乙醇溶液(商购溶液，21重量％；8.03g)。在用上述方法萃取和纯化后，分离得到液体产品(4.5g)，收率82％，直接用于下一步骤。 步骤2：以实施例23中步骤3同样的方式，应用乙醇(10ml)、水(10ml)和氢氧化钠(2.0g)处理步骤1产品(4.5g)。在用上述方法萃取和纯化后，分离得到为白色固体的产品(3.0g)，收率77％，直接用于下一步骤中。 步骤3：在以实施例23中步骤4相同的反应条件下，应用HOBT(35mg)、DEC(53mg)、二异丙基乙胺(100mg)和DMF(2ml)，将实施例4中步骤6产品(75mg)与步骤2产品(39mg)(直接用上述产品)进行反应。在用上述方法萃取和纯化后，应用实施例23中步骤5所述的方法将产品转化为其盐酸盐，得到标题化合物(98mg)，为白色固体，两步的收率为96％。Mp：250-253℃。 步骤1-2： 步骤1：在室温将实施例23中步骤2产品(528mg)溶解在二氯甲烷(5.0ml)中，并分三份加入间-氯过苯甲酸(mCPBA)(600mg)。在室温将所得混合物搅拌24小时，然后加入二氯甲烷(2ml)和mCPBA(200mg)。3小时后，将混合物倾入硅胶柱上(40g)，用1∶1己烷∶乙酸乙酯然后用10∶1二氯甲烷∶甲醇洗脱。蒸发适宜馏分后，分离出产品(512g)，为蜡状白色固体，收率89％，直接用于下一步中。 步骤2：将步骤1产品溶解在甲醇(18ml)中，加入1.0M碳酸钠溶液(1.5ml)。室温搅拌36小时后，将所得混合物蒸发至干，加入甲苯(2ml)，然后将混合物蒸发至干。将所得粗固体(153mg)不用纯化直接用于下一步骤中。 步骤3：在以实施例23中步骤4相同的反应条件下，应用HOBT(92mg)，DEC(130mg)、二异丙基乙胺(0.14ml)和DMF(0.25ml)，将实施例4中步骤6产品(94mg)与步骤2产品(76mg)(直接用上述产品)进行反应。在萃取和经制备薄层色谱法(1000μM硅胶板；95∶5乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化后，分离得到游离碱形式的标题化合物(52mg)为泡沫，收率40％。C27H37N5O2F3的HRMS:MH+：计算值为520.2899；测定值为520.2908。 步骤4：在实施例23中步骤5的反应条件下，将步骤3产品(52mg)与乙酸乙酯(1.0ml)和HCl(4.0M的1，4-二噁烷溶液；75μl)起反应，处理后得到白色固体标题化合物(44.5mg)，收率76％。Mp：161℃以上分解。 应用相似方法，还制备了下式化合物 其中R8a和R11如下表中定义： 实施例24 芳基环丙基酰胺 方法A： 步骤1：向锡烷的(0.39g，0.95mmol)DMF(10ml)溶液中，加入2-氯-4-氟碘苯(0.73g，2.86mmol)、CuI(0.19g，1.05mmol)和四(三苯基膦)钯(O)(0.11g，0.095mmol)。在氮气室温下将反应搅拌21小时。将反应混合物加入乙醚中，并将该不均匀溶液通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯洗涤。滤液用水和盐水洗涤并干燥(硫酸镁)。过滤，真空中蒸发溶剂，得到剩余物，将其预吸附在硅胶上。通过硅胶色谱法(4％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到芳基丙烯酸酯(0.19g，78％)，直接用于下一步骤。 步骤2：向三甲基碘化亚砜(trimethylsulfoxonium iodide)(0.18g，0.81mmol)的DMSO(16ml)溶液中加入叔丁醇钾(0.09g，0.81mmol)。在室温将反应混合物搅拌1小时，此时加入芳基丙烯酸酯(0.19g，0.74mmol)的DMSO(1.6ml)溶液。在室温将反应混合物搅拌5小时，然后加入水。将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤并干燥(硫酸镁)。过滤，真空中蒸发溶剂，得到芳基环丙基酯，将其直接溶解在二氯甲烷(3ml)中并加入TFA(0.5ml)。在室温将反应混合物搅拌15小时，然后真空浓缩得到芳基环丙基羧酸(0.14g，91％-2步)。不用进一步纯化，将该羧酸与实施例8中步骤3的产品偶联，应用实施例8中步骤4的方法得到24A，为盐酸盐。HRMS(M+H)：测定值为566.2561。 方法B： 向2-氟苯基乙腈(0.80g，5.92mmol)、氯化苄基三乙基铵(0.03g，0.12mmol)、和1-溴-2-氯乙烷(1.7g，11.9mmol)中，加入50％氢氧化钠水溶液(3.5ml)。在45℃将反应液搅拌21小时，加入乙二醇(3ml)。然后将反应液加热至100℃并搅拌7小时。冷却至室温，将反应液用水稀释并用乙酸乙酯洗涤。将水层用6N盐酸水溶液酸化至pH2-3。将酸化的溶液用乙醚萃取。将合并的乙醚萃取液用水和盐水洗涤并干燥(硫酸镁)。过滤并真空蒸发溶剂得到浅黄色固体(1.06g，99％)。将芳基环丙酸与实施例8中步骤3的产品用实施例8，步骤4的方法偶联，应用实施例8中步骤4的方法得到24B为盐酸盐。HRMS:(M+H)：测定值：532.2949。 应用相似方法，制备了下式化合物 其中如下表中定义： 实施例25 步骤1： 将环丙基甲醛(3.4ml)、S-甲基N-BOC哌嗪(8.28g)、二氯甲烷(82ml)和Ti(OiPr)4(15.80ml)混合在一起并室温搅拌23小时，然后将所得溶液冷却至0℃，加入Et2AlCN(1.0M的甲苯溶液；62.1ml)。在室温将溶液搅拌5小时。加入KF(20g)和硅藻土(10g)混合物，然后小心加入乙酸乙酯(120ml)和水(120ml)。将所得浆液搅拌15分钟，过滤，用乙酸乙酯洗涤(3×35ml)，移出乙酸乙酯层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到所需中间体(12.0g)，直接用于下一步。 步骤2： 向0℃的4-碘三氟甲苯(40g)和THF(52ml)的溶液中，加入氯化异丙基镁(2.0M的乙醚溶液；74ml)。在室温将所得溶液搅拌1小时，然后在10分钟内加入到0℃的步骤1产品(10.0g)和THF(26ml)溶液中。将反应溶液加热至室温，搅拌过夜，加入乙酸乙酯(50ml)。搅拌10分钟后，加入2N氢氧化钠(50ml)，将所得混合物搅拌30分钟，过滤并用乙酸乙酯(3×20ml)洗涤该盐。将合并的乙酸乙酯萃取液用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到粗品(28g)，为金黄色油状物，将其在硅胶(1kg)上进行色谱，用己烷∶乙酸乙酯(8∶1)洗脱。以单馏分形式收集得到两个非对映异构体(15.9g)，通过上述柱色谱法进一步纯化得到中间体A(在4∶1己烷∶乙酸乙酯中Rf＝0.47；5.34g)，含有未确认的杂质。(也收集第二个非对映异构体B(在4∶1己烷∶乙酸乙酯中Rf＝0.29)。 步骤3： 向步骤2的A(3.96g)和二氯甲烷(120ml)溶液中，加入DOWEX50X2-100离子交换树脂(15g)，并在室温将所得混合物振摇2.5小时。过滤除去树脂并用二氯甲烷(2×40ml)洗涤。将树脂用7N NH3的甲醇(30ml)溶液处理，过滤除去树脂并重复该过程两次。合并甲醇萃取液并蒸发。将所得油状物用甲苯∶二氯甲烷(1∶1；15ml)处理并蒸发得到哌嗪中间体(0.80g)为澄明油。C16H21N2F3的HRMS:MH+：计算值：299.1735；测定值：299.1748。 步骤4： 以实施例8中步骤1相同的方式，应用N-BOC4-哌啶酮(0.42g)、二氯甲烷(3.84ml)、Ti(OiPr)4(3.39ml)、Et2AlCN(2.88ml)和CH3MgBr(3.0M的乙醚溶液；3.2ml)处理步骤3产品(0.57g)，得到所需产品(0.78g)为澄明油，收率82％。 步骤5：将步骤4产物(0.12g)用乙酸∶二氯甲烷(3∶1，v/v；1.4ml)处理然后用BF3·Et2O(0.14ml)处理。搅拌1小时后，将所得溶液用二氯甲烷(10ml)稀释，冷却至0℃并用固体氢氧化钠将pH调节至10。加入水(2ml)然后移出二氯甲烷层。用二氯甲烷进一步萃取(2×10ml)后，有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到游离哌啶(80mg)，收率81％。 步骤6：以实施例8中步骤4相同的方式，应用DMF(0.30ml)、HBOt(41mg)，DEC(57mg)，二异丙基乙胺(0.08ml)和4，6-二甲基-5-嘧啶羧酸(43mg)处理步骤5产品(57mg)；在45℃将反应搅拌5小时。将粗品油通过制备板色谱法(硅胶吸附；2000μM；76∶19∶5乙酸乙酯∶己烷∶三乙胺作为洗脱剂)进行纯化，在洗脱预期的带(1∶1二氯甲烷∶甲醇)并浓缩溶剂后，得到标题化合物(70mg)为澄明油，收率93％。用实施例8中步骤4所述的方法制备盐酸盐(78mg)，收率100％，mp：147-149℃。 应用相似方法，制备了下式化合物 m.p.＞188(分解)。 实施例26 步骤1： 以实施例25中步骤1相似的方式，应用对-三氟甲基苯甲醛(20g)代替环丙基甲醛，处理后得到非对映异构体混合物(22.7g)，收率59％，制得所需化合物。。 步骤2： 向-70℃的步骤1产品(1.9g)和THF(15ml)的溶液中，加入NaHMDS(1.0M的THF溶液，7.5ml)然后加入苄基溴(2ml)。除去冷却浴并将所得溶液搅拌45分钟。加入浓NH4OH(10ml)并将反应液搅拌30分钟。将所得混合物在水和二氯甲烷之间分配，将二氯甲烷萃取液移出并蒸发得到粗品油，通过柱色谱法(硅胶；2∶1己烷∶二氯甲烷；10∶1至7∶1己烷∶乙酸乙酯作为洗脱剂)，在蒸发适宜馏分后，得到中间体混合物(1.92g)为黄色泡沫。 步骤3： 将步骤2产品(1.91g)、CH3CN(35ml)、三乙酰氧基硼氢化钠(4.0g)和溴化镁乙醚合物(2.25g)混合并在室温搅拌70小时。加入水(25ml)然后逐渐加入碳酸钠(10g)的水(50ml)溶液。用乙酸乙酯萃取(2×50ml)，干燥并蒸发有机层，将所得油状物通过制备板色谱(5×2000mM硅胶板；6∶1己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。除去更小极性带部分，用1∶1的甲醇∶二氯甲烷处理，过滤并蒸发得到为白色泡沫的中间体A(0.84g)。C25H29O2N2F3的HRMS MH+：计算值为449.2407；测定值为449.2416。 步骤4：以实施例8中步骤3相同的方式，应用TFA(5ml)和二氯甲烷(10ml)处理步骤3产品(0.81g)，处理后得到游离哌嗪(0.60g)为澄清胶状物。C20H23N2F3的HRMS MH+：计算值为349.1892；测定值为349.1894。 步骤5：以实施例8中步骤1相同的方式，应用N-BOC4-哌啶酮(0.25g)、二氯甲烷(8ml)、Ti(OiPr)4(0.40mg)、Et2AlCN(2ml)和CH3MgBr(3.0M的乙醚溶液，1.5ml)处理步骤4产品(0.39g)，得到所需的BOC-保护的哌啶基中间体(0.44g)为澄清油，收率72％。C31H42O2N3F3的HRMS MH+：计算值为546.3307；测定值为546.3315。 步骤6：以实施例8中步骤3相同的方式，应用TFA(3ml)、二氯甲烷(2ml)和水(0.2ml)处理步骤5产品(0.43g)，处理后得到游离哌啶基中间体(0.37g)，为澄清油。 步骤7：以实施例8中步骤4相同的方式，应用二氯甲烷(3ml)、HOBt(28mg)、DEC(40mg)、二异丙基乙胺(42mg)和4，6-二甲基5-嘧啶羧酸(24mg)处理步骤6产品(50mg)；在室温将反应液搅拌2天。用实施例8中步骤4所述的方法，制备标题化合物的盐酸盐(59mg)收率91％(以步骤5产品计)。M.p：187-196℃。C33H40ON5F3的HRMS MH+：计算值：580.3263；测定值：580.3263。 应用相似方法，制备了下式化合物 其中R8a、R3和R2如下表中定义： 实施例27 步骤1： 将4’-三氟甲基)苯丙酮(2.02g，0.01mol)和(S)-2-甲基-CBS-氧氮杂硼茂烷(oxazaborolidine)(1M的THF溶液)(2.0ml，0.002mol)的THF(10ml)溶液在冰浴上冷却，并向该混合物中滴加硼烷-二甲硫复合物(2M的THF溶液)(3ml，0.006mol)。在0℃将混合物搅拌30分钟并缓缓加入甲醇直至没有气泡产生。减压除去溶剂，并向混合物中加入盐酸溶液(1N)。用乙酸乙酯萃取处理后，经硅胶色谱法得到醇(1.47g)，收率72％。 步骤2：将步骤1产品(4.32g，0.021mol)和三乙胺(5.9ml，0.042mol)的二氯甲烷(2ml)溶液用冰浴冷却至0℃，向其中滴加CH3SO2Cl(2.13ml，0.028mol)。在0℃将混合物搅拌1小时并移去冰浴。向混合物中加入水，用二氯甲烷萃取处理后得到定量产率的甲磺酸酯(5.99g)。 步骤3：将步骤2产品(5.93g，0.021mol)和1-叔丁氧基-羰基-3S-甲基哌嗪(4.2g，0.021mol)溶解在无水CH3CN(20ml)中，向该溶液中加入烘干的碳酸钾(4.35g，0.032mol)。将混合物回流搅拌2天，然后用水稀释。乙酸乙酯萃取处理后，经硅胶色谱法得到所需产品(3.16g)，收率39％。 步骤4：将TFA(10ml)加入步骤3产品(1.15g，2.59mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，在室温并将混合物搅拌2小时。减压浓缩。向剩余物中加入氢氧化钠(3N)并用乙酸乙酯萃取处理，得到定量产率的所需胺。 步骤5：以实施例8中步骤1相似的方法，将步骤4产品和1-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(0.94g，4.74mmol)用Ti(OiPr)4、Et2AlCN和CH3MgBr处理得到所需产品(1.09g)，收率87％(自步骤4的胺开始计算)。 步骤6：向步骤5产品(0.76mg，1.57mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中，加入TFA(4ml)，并在室温将混合物搅拌2小时，然后减压浓缩。向剩余物中加入氢氧化钠(3N)并用乙酸乙酯萃取处理，得到定量产率的所需胺。 步骤7：将步骤6的胺和4，6-二甲基嘧啶5-羧酸(0.36g，2.35mmol)，用实施例8中步骤4所述方法偶联，得到标题化合物(0.58g)，收率72％。M.p160；HRMS(MH+)测定值：518.3123。 应用相似方法，制备了下式化合物 其中Z、R3、R6和R2如下表中定义： 应用相似方法，还制备了下式化合物 实施例28 步骤1-4： 步骤1：按照实施例6中步骤1所述的方法，由对-三氟甲基苯甲醛和2(S)-甲基-4-(叔丁氧羰基)哌嗪恰好制备氰基胺。 步骤2：将氰基胺2(2.5g；6.53mmol)的30ml无水THF溶液置于氮气层下并冷却至-78℃。将该溶液用六甲基二硅烷胺基钠的THF溶液(1M；26ml)处理，然后用纯烯丙基溴(6ml)处理5分钟。除去冷却浴后，让反应混合物加热至室温(～1小时)。溶液从黄色变为深棕红色。将反应用饱和NH4Cl溶液淬灭，将产品用乙酸乙酯萃取，用水、盐水洗涤并干燥。真空浓缩得到棕色半固体。将该产物经FSGC法，用25％乙醚的己烷溶液洗脱得到2.5克(92％)所需产品为琥珀色胶状物(TLC Rf＝0.65，0.6两个重叠的点)。 步骤3：将步骤2产品(2.4g)的甲醇溶液用10％Pd/C(0.2g)处理，并置于氮气缸中。室温搅拌4小时后，通过硅藻土过滤除去催化剂，将滤液浓缩得到琥珀色胶状物。 将上述得到的α-丙基腈溶解在CH3CN(12ml)中。加入溴化镁乙醚合物(2.1g，8.14mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(3.44g；16.2mmol)，并在室温将反应混合物搅拌过夜。将反应用水淬灭并用饱和碳酸氢钠碱化。将有机产品用乙酸乙酯萃取并处理得到～2g粗品。用FSGC(10-25％乙醚的己烷溶液)分离得到两种非对映异构体产品(共1.7g；两步79％)： (S，S)-非对映异构体(A)：TLC Rf＝0.6(25％乙醚-己烷)。0.9g无色胶状物。 (R，S)-非对映异构体(B)：TLC Rf＝0.5(25％乙醚-己烷)。0.8g无色胶状物。 步骤4：将中间体A用TFA的二氯甲烷溶液处理，实现去除其BOC-保护基。将分离的游离哌嗪(0.68g；2.3mmol)，N-(叔丁氧羰基)-4-哌啶酮(0.45g；2.3mmol)和Ti(OiPr)4(0.7ml；2.5mmol)溶解在10ml二氯甲烷中并搅拌过夜。向反应混合物中加入Et2AlCN(1M的甲苯溶液；2.7ml)然后将所得溶液搅拌1天。反应液用乙酸乙酯稀释并用水淬灭。加入硅藻土以便过滤钛和铝盐。将两相滤液用水、盐水洗涤并干燥。真空浓缩得到1.1g黄色胶状物(在25％乙酸乙酯-己烷中TLC的Rf＝0.55)。 将所得本位-氰基化合物溶解在无水THF(8ml)中，并用CH3MgBr(3M的乙醚溶液；6ml)溶液处理，在室温搅拌过夜。将反应烧瓶置于冷水浴上，用饱和NH4Cl溶液小心淬灭反应。将有机产品用乙酸乙酯萃取，用水和盐水洗涤。浓缩粗品后，用快速FSGC(10-25％乙酸乙酯的己烷溶液)将其纯化，得到BOC-哌啶基化合物，为浅黄色胶状物(1.1g；100％)。在25％乙酸乙酯-己烷中TLC的Rf＝0.6。 步骤5：通过用TFA的二氯甲烷溶液处理，将步骤4产品哌啶氮原子上的BOC-保护基除去。用1M的氢氧化钠碱化并用二氯甲烷处理，得到未保护的哌啶，收率90％。将该中间体与芳基和杂芳基羧酸偶联(EDCl，HOBt)，得到下表所列的酰胺： 其中R2如下表中定义： 应用相似方法，制备以下化合物 其中R8、R3和R2如下表中定义： 应用三氟苄基溴化物或氯化物替代实施例28的步骤1-4(步骤3中处理异构体B)过程中的苄基溴，然后用实施例1中步骤5的方法，接着进行实施例26中步骤6-7的方法，制得下列化合物(HCl盐)： 实施例29 步骤1-3： 步骤1：将向对-三氟甲基苯乙烯(3g；17.4mmol)的30ml二氯甲烷溶液中，加入固体m-CPBA，在室温搅拌20小时。加入约20ml饱和碳酸氢钠溶液，并在室温搅拌2小时。混合物用20ml二氯甲烷稀释，将有机产品萃取到二氯甲烷层中。将有机萃取液处理后得到粗品。经FSGC得到3g(90％)所需环氧化物，为无色油。TLC Rf＝0.8(25％乙酸乙酯-己烷)。 步骤2：向步骤1产品(2g；10.6mmol)的20ml无水甲醇溶液中，加入新制备的甲醇钠(0.6g；10.6mmol)。在室温搅拌1天后，真空除去甲醇。将剩余物溶解在二氯甲烷中并用水和盐水洗涤。浓缩，然后进行FSGC，得到1.3g(55％)甲醇，为无色油(Rf＝0.3，50％乙醚-己烷)。 步骤3：将步骤2的甲醇(1.3g；5.9mmol)溶解在二氯甲烷中并用冰浴冷却。依次用Et3N(1.7ml；12mmol)和CH3SO2Cl(0.6ml；7.7mmol)处理，搅拌30分钟形成甲磺酸酯。将产品用标准方法萃取处理(收率＝100％)。 将甲磺酸酯(1.76g；5.9mmol)和2(S)-甲基-4-(叔丁氧羰基)哌嗪(2.4g；12mmol)溶解在5ml CH3CN中，加热回流19小时。将反应混合物冷却至室温并直接在硅胶上进行快速色谱法。用25％乙醚-己烷，然后50％乙醚-己烷洗脱分离非对映异构体产品A和B(总收率86％)。 A：Rf＝0.5(50％乙醚-己烷)。浅黄色胶状物(0.9g；42％)。 B：Rf＝0.4(50％乙醚-己烷)。琥珀色胶状物(1.13g；44％)。 步骤4：按照实施例1中步骤4所述的方法，用具有本位-甲基的N-BOC-哌啶-4-酮将由A(0.9g；2.2mmol)衍生的游离哌嗪进行还原胺化，得到BOC-保护的哌啶基化合物(0.87g；92％)。Rf＝0.3(50％乙酸乙酯-己烷)。 步骤5：经由TFA处理，除去哌啶氮原子上的BOC保护基，应用按照实施例8中步骤4的EDCI/HOBt方法，将所得化合物与酸偶联，得到下表所示化合物： 其中R2如下表中定义： 实施例29E 将哌啶A(130mg)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(130mg)、1-羟基苯三氮唑(92mg)和二异丙基乙胺(0.3ml)溶于CH2Cl2中，在25℃搅拌19小时。溶液用CH2Cl2稀释，用1N NaOH(水溶液)洗涤。水层用CH2Cl2萃取，经MgSO4干燥。过滤并浓缩，得到黄色油。经制备薄层色谱法(10/1丙酮/己烷，SiO2)纯化，得到95mg(51％)化合物29E，为无色油。HRMS(MH+)：计算值为550.3005；测定值为550.3000。 根据上述实施例29中步骤1-5的方法，制得A。 根据上述实施例23C中步骤1和2所提出的方法，制备了嘧啶酸。 如以下实施例29F中所示，化合物29E也可以作为化合物29A在患者血浆、尿、胆汁或粪便样品中的代谢产物而分离得到，所述患者已经施用化合物29A。除了化合物29E之外，也可以作为人类或其它动物种类的代谢产物而分离得到的其它化合物，包括下列化合物： 实施例29F-代谢产物的分离 化学制品：14C/-维克弗若克[1-[(4，6-二甲基-5-嘧啶基)羰基]-4-[4-[2-甲氧基-1(R)-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]-3(S)-甲基-1-哌嗪基]-4-甲基哌啶，即以下所示的14C-化合物29A] 维克弗若克(化合物29A；*表示14C标记的位置) 14C/-维克弗若克在Schering-Plough Research Institute(Kenilworth，NJ)得到合成，它具有＞97％放射化学纯度。所有其它化合物/参照标准品得自Schering-Plough Research Institute的化学研究部。HPLC级别的乙腈和甲醇来自Burdick和Jackson(Muskegon，MI)。水应用MilliporeMilli-QplUs纯水系统(Bedford，MA)纯化。 测试种类： 样品收集：服用后336-小时、432-小时和168-小时内分别收集健康雄性志愿者、猴和大鼠的所选周期内的尿和粪便以及所选时间点的血液。 放射活性：应用液体闪烁分光仪(LSS)测量总放射活性。 为了得到代谢产物的图形和性质所进行的样品处理： 样品集合： 至于各个种类，分别按照时间点集合受试者/动物的血浆样品。首先集合所需收集周期内的每个受试者/动物的所有别样基质，然后将受试者/动物的基质按照时间点混合，以获得含有排泄在各自基质中＞90％放射活性的混合样品。 样品处理： 基质方法 血浆SPE，应用Oasis HLB筒(Waters Corp.，MA)；或蛋白质沉淀的溶剂提取，应用乙腈 尿SPE，应用Oasis HLB筒(Waters Corp.，MA)；或直接注射 粪便应用甲醇的溶剂提取流动相和HPLC条件： 对于所有的LC-MS和LC-MSn实验，均将HPLC柱维持在室温。流动相由含有5％乙腈的95％10-mM乙酸铵(pH 6.0)(A)以及95％乙腈和5％水(B)组成，维持其恒定的流速(1mL/min)。对于所有的LC-MS实验，分流柱流出液，使其20-25％转入TSQ Quantum(ThermoElectron，SanJose，CA)质谱仪且平衡进入流式闪烁分析(Flow ScintillationAnalyzer)(FSA)分析器。 流动相梯度： 如下表所述，应用流动相组成的程序线性变化，实现代谢产物的分离： 时间(分) ％A ％B 0.0 10.0 40.0 40.1 50.0 50.1 60.0 90 70 30 10 10 90 90 10 30 70 90 90 10 10HPLC和FSA系统： 装置 型式和卖主 HPLC泵，控制器，脱气器，柱 加热炉和自动进样器 Alliance Model 2690(Waters Corp.，Milford，MA) Flow Scintillation Analyzer (FSA) Model 500TR(Packard Instrument Co.，Meriden，CT) Flow Scintillation Analyzer单 元体积(Cell Volume) 250或500μl(Packard Instrument Co.，Meriden，CT) Scintillation Fluid (闪烁液) Ultima Flo M(Packard Instrument Co.，Meriden，CT)，2.4ml/min 柱 Luna Phenyl-Hexyl 250×4.6mm，5μm 粒度(Phenomenex，Torrance，CA)。 保护柱 MetaGuard Polaris C18-A，5μm粒度 (Metachem Technologies，Torrance，CA)。质谱仪： 应用TSQ质谱仪(ThermoElectron，San Jose，CA)，按照以下列出的操作条件，进行所有的LC-MS和LC-MS/MS实验： 参数 设置 电离源 电离模式 喷雾针电压 毛细管温度 样品流速 套气 辅助气 电喷射电离(ESI) 阳性 4.0-4.5KV 250-270℃ 分流后0.20-0.25mL/min 氮(25-50) 氮(4-15)检测实验研究样品的放射性色谱图，以确定相应代谢产物的放射活性峰。在校正延迟时间(0.2-0.5分钟)后，检测相对其药物和/或其推定代谢产物可能的分子离子各自的放射性标记峰。基于洗脱顺序，将代谢物峰标记指定为M1～M48，其中M48为首先洗脱的化合物以及M1为最后从柱中洗脱的(参见以下图1-3)。可得到时，应用合成参考标准，证实结构排布。 结果 如表1所示，给健康男性志愿者单次口服施用50mg VIC后，该剂量近似等于尿和粪便中消除的量。对比地，从所有调查的非临床种类的粪便中回收到该剂量的多数(53-71％)。如表1所示，在人、猴和大鼠分别单次口服施用50mg、6-mg/kg、和5-mg/kg的14C-VIC后，VIC迅速且广泛地代谢。在VIC代谢中由于没有性别-相关的定性差别，图2-4中只显示出来自雄性大鼠和猴的各自基质的图形。 表1.在单次口服14C-维克弗若克后，以人(50mg用量)、猴(5mg/kg用量)和大鼠(6mg/kg用量)中的％量表示排泄的放射活性。 图1显示维克弗若克在人、猴和大鼠中单次口服剂量14C-VIC后的生物转化。 图2显示在给健康男性志愿者、雄性猴和大鼠单次口服施用维克弗若克后，集合血浆提取物的代表性放射色谱图形的比较。 下表描述了化合物29A(维克弗若克)及其代谢产物在人、猴和大鼠种类血浆中的分布。 基于上述，可得出下列观测结论： ·在人、猴和大鼠的血浆中观察到性质相似的图形。 ·在人、猴和大鼠中主要循环药物衍生成分为VIC。 ·虽然O-去甲基-VIC(M35)的葡糖苷酸结合物为人和猴的血浆中的主要循环代谢产物，在大鼠中只能检测到痕量的这种代谢产物。 ·没有检测到人类特异的循环代谢产物。 图3显示在给健康男性志愿者、雄性猴和大鼠单次口服施用维克弗若克后，混合尿的代表性放射色谱图形的比较。 下表描述了化合物29A(维克弗若克)及其代谢产物在人、猴和大鼠种类尿中的分布。 基于上述，可得出下列观测结论： ·主要尿代谢产物N-去烷基-VIC(M41)和O-去甲基-VIC-葡糖苷酸(M35)在人、猴和大鼠中分别总计为所述剂量的21％，8％和4％。 ·虽然在人和猴的尿中M35为分别所述剂量的11％和3％，但大鼠尿中该代谢产物小于1％。 图4显示在给健康男性志愿者、雄性猴和大鼠单次口服施用维克弗若克后，混合粪便提取物的代表性放射色谱图形的比较。 下表描述了化合物29A(维克弗若克)及其代谢产物在人、猴和大鼠种类的粪便中的分布。 基于上述，可得出下列观测结论： ·主要粪便代谢产物，其共计为人、猴和大鼠所施用剂量的16-35％，包括N-去烷基-VIC(M41)、O-去甲基-VIC(M15)和M15的氧化产物(M20/M20a，m/z为534)。 代谢产物研究总结论如下： ·在给健康志愿者单次50mg口服施用后，维克弗若克(VIC，compound 29A)及其代谢产物接近相等地排泄在粪便和尿中。对比地，给大鼠和猴分别单次5mg/kg和6mg/kg口服施用VIC后，放射活性物主要地消除在粪便中。 ·在所有调查的种类中，VIC主要的生物转化包括O-脱甲基化、N-脱烷基化、氧化和葡萄苷酸化。 给健康男性志愿者单次50mg口服施用VIC后，没有观察到人类特异性代谢产物。 实施例30 步骤1： 将对-三氟甲氧基苯甲醛(0.48ml，3.36mmol)、哌啶子基-哌嗪(1.00g，3.36mmol)和苯并三唑(0.48g，4.00mmol)的无水甲苯溶液加热回流6小时。将反应混合物冷却至室温并在真空中除去溶剂。然后用NMR确认产品的形成，产品没有进一步纯化就可用于下一步骤中。 步骤2： 向步骤1产品(1.16g，1.97mmol)的20ml甲苯溶液中，加入正丙基溴化镁溶液(2M乙醚溶液，1.1ml)并将混合物在室温搅拌15小时。通过倾入冰和饱和NH4Cl水溶液而淬灭反应。水层用乙酸乙酯萃取，用1M氢氧化钠溶液、水和盐水洗涤。浓缩并用FSGC(20％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到所需产品A。进一步用30％乙酸乙酯-己烷洗脱得到(R，S)-非对映异构体B。 步骤3：将胺A用TFA的二氯甲烷溶液处理以除去BOC-保护基。将游离哌啶和酸用EDCI/HOBt偶联得到下表中的化合物30-30B；应用相似的方法制备化合物30C-I。 *非对映异构体的混合物。 实施例31 将实施例12步骤2产品(150mg，0.27mmol)、咪唑(27.4mg，0.403mmol)、1，10-菲咯啉(48mg，0.27mmol)、反，反-二亚苄基丙酮(6.28mg，0.027mmol)、三氟甲磺酸铜(II)苯复合物(15mg，0.027mmol)和Cs2CO3(96.1mg，0.30mmol)的二甲苯(2ml)溶液在110℃搅拌5天。将反应混合物冷却至室温并加入饱和碳酸氢钠。乙酸乙酯萃取处理后，经硅胶色谱法得到标题化合物(70mg，收率52％)。分解熔点215℃(盐酸盐)。C29H39ClN3OS的HRMS(M+H+)计算值为500.3389；测定值为500.3396。 下列试验可以用来测定本发明化合物的CCR5拮抗活性。 CCR5膜结合测定试验： 利用CCR5膜结合测定的高流通量筛选法鉴定RANTES结合的抑制剂。该测定使用由表达人CCR5趋化因子受体的NIH 3T3细胞所制备的膜，该受体具有与RANTES(即受体的天然配体)结合的能力。应用96-孔板格式，在化合物存在或缺失下与125I-RANTES一起孵育膜制品1小时。在0.001μg/ml-1μg/ml宽范围内连续稀释化合物，并且一式三份进行试验。反应混合物通过玻璃纤维滤器采集，并且充分洗涤。求出平行测定总数的平均值，数据以抑制50％总125I-RANTES结合所需的浓度报道。在膜结合试验中具有有效活性的化合物进一步用随后的基于细胞的HIV-1进入和复制试验来表征。 HIV-1进入试验： 如Connor等，Virology，206(1995)，p.935-944所述，通过共转染编码HIV-1NL4-3株(其已通过包膜基因的突变和引入荧光素酶报告质粒而被修饰)的质粒以及编码数个HIV-1包膜基因之一的质粒，产生复制缺损型HIV-1报告病毒体。在经磷酸钙沉淀法将两种质粒转染后，第3天收集病毒上清液，并测定功能性病毒滴定度。这些原种然后用于感染稳定表达CD4和趋化因子受体CCR5的U87细胞，这些细胞已经用含或不含测试化合物预孵育过。感染在37℃下进行2小时，然后洗涤细胞，并将培养基用含化合物的新鲜培养基替换。将细胞孵育3天，裂解并测定荧光素酶活性。结果以抑制对照培养组中50％荧光素酶活性所需化合物的浓度报道。 HIV-1复制试验： 该试验使用原始外周血单核细胞或稳定的U87-CCR5细胞系来测定抗-CCR5化合物阻止初级HIV-1株感染的效果。将来自正常健康供体的原始淋巴细胞纯化，并感染前三天在体外用PHA和IL-2刺激。应用96-孔平板格，37℃用药物预处理细胞1小时，随后用巨噬细胞嗜向性HIV-1(M-tropic HIV-1)分离物感染。感染后，洗涤细胞以除去残留的接种物，在化合物存在下培养4天。收集培养物上清液，通过测定病毒p24抗原浓度测量病毒复制。 钙流出试验： 加入化合物或天然CCR5配体之前，将表达HIV共同受体CCR5的细胞负载钙敏感染料。具有激动剂特性的化合物将在细胞中诱导钙流出信号，而CCR5拮抗剂则被鉴定为它们本身不能诱导发出信号但能阻止天然配体RANTES发出信号的化合物。 GTPγS结合试验： GTPγS结合试验用来测量由CCR5配体引起的受体活化。该试验测量合适配体引起受体活化而出现的35S标记-GTP与G-蛋白偶联受体的结合。在该试验中，CCR5配体RANTES与CCR5表达细胞的膜一起孵育，并且通过分析结合的35S标记物测定结合至受体的活化(或结合)。通过诱导受体活化，该试验能定量测定化合物是否显示出激动剂特性，或者通过以竞争或非竞争方式结合RANTES的抑制测量，该试验能定量测定化合物是否显示出拮抗剂性质。 趋化试验： 趋化试验是表征试验化合物的激动剂-拮抗剂性质的功能性试验。该试验测量表达人CCR5的非粘附鼠细胞系(BaF-550)应答试验化合物或天然配体(即RANTES，MIP-1β)的跨膜移动能力。细胞跨越渗透性膜移向具有激动剂活性的化合物。拮抗剂化合物不仅不能诱导趋化性，而且还会抑制对已知CCR5配体应答的细胞移动。 CC趋化因子受体如CCR-5受体在炎症性疾病中的作用已经报道于出版物中，这些出版物如Immunology Letters，57，(1997)，117-120(关节炎)；Clinical&Experimental Rheumatology，17(4)(1999)，p.419-425(类风湿性关节炎)；Clinical&Experimental Immunology，117(2)(1999)，p.237-243(特应性皮炎)；International Journal ofImmunopharmacology，20(11)(1998)，p.661-7(牛皮癣)；Journal of Allergy&Clinical Immunology，100(6，Pt2)(1997)，p.S52-5(哮喘)；以及Journalof Immunology，159(6)(1997)，p.2962-72(变态反应)。 在测定抑制RANTES结合的试验中，本发明化合物在活性上Ki值为大约0.5～大约1500nM，优选化合物的活性值为大约0.5～大约750nM、更优选为大约0.5～大约300nM、最优选大约0.5～大约50nM的活性。下表中给出了测定抑制RANTES结合的试验中优选的及代表性的式I与II化合物的结果。表中“Ex.No.”代表“实施例序号”，且“nM”代表“纳摩尔”。 Ex.No. 抑制RANTES结合的Ki(nM) 3C 9.97 6C 30.0 6E 1.43 11 10.5 16 60 20A 1300 23 2.95为了制备本发明所述CCR5拮抗剂化合物的药物组合物，惰性的药学上可接受的载体可以为固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散性颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可包含约5～约95％的活性成分。合适的固体载体是本领域已知的，例如碳酸镁，硬脂酸镁，滑石，糖或乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂均可用作适合口服给药的固体剂型。药学上可接受的载体以及制备各种不同组合物方法的实例可见于A.Gennaro(编)，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。 液体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳液。可提及的实例有适合肠道外注射的水或水-丙二醇溶液，或者对于口服溶液、悬浮液和乳液可加入甜味剂和遮光剂。液体形式制剂也可包括鼻内施用的溶液。 适合吸入给药的气雾剂可以包含溶液和粉末形式的固体，它们可与药学上可接受的载体如惰性压缩气体(例如氮气)混合。 同样还包括旨在临用前转化为供口服或肠道外施用的液体形式制剂的固体制剂。这种液体形式包括溶液，悬浮液和乳液。 本发明的CCR5拮抗剂化合物也可以透皮给药。透皮组合物可以为霜剂，洗剂，气雾剂和/或乳剂形式，并且它们可以包括在本领域常规用于此目的的基质型或储库型透皮贴剂内。 优选地，CCR5拮抗剂化合物通过口服给药。 优选地，所述药物制剂为单位剂型。在此类剂型中，所述制剂可细分为含有适当量(如实现所需目的的有效量)活性成分的适当大小的单位剂量。 根据具体应用，单位剂量制剂中的活性化合物的量可以在大约10mg至大约500mg之间变化或调整，优选大约25mg～大约300mg，更优选大约50mg～大约250mg，且最优选大约55mg～大约200mg。 所用实际剂量可能会随患者的需要和受治疗疾病的严重程度而变化。本领域技术人员可以确定具体情况下的适宜剂量方案。为了方便起见，根据需要可以将总日剂量分开，并在全天分次给药。 本发明CCR5拮抗剂化合物和/或其药学上可接受盐的给药量与给药频率由临床主治医师根据下列因素加以判断调整：如患者的年龄、身体状况和身高体重以及所治疗症状的严重程度。口服给药通常推荐日剂量方案为大约100mg/天～大约300mg/天，优选150mg/天～250mg/天，更优选大约200mg/天，并且分成2～4个分剂量施用。 NRTIs、NNRTIs、PIs和其它药物的剂量与剂量方案由临床主治医师根据包装内附说明书中的批准剂量与剂量方案或如治疗方案所述考虑患者的年龄、性别和身体状况以及HIV-1的感染程度而定。 尽管本发明已经结合上述具体实施例进行了说明，但对本领域技术人员来讲，其各种替代、修饰和改变都将是显而易见的。所有这些替换、修饰和改进都落在本发明的精神和范围内。
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本发明要求保护具有所述核心结构式(I)(AA)的CCR5拮抗剂，其用于治疗HIV、实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化。。
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