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1、10申请公布号CN104306417A43申请公布日20150128CN104306417A21申请号201410508745922申请日20140928A61K36/254200601A61K9/0820060171申请人哈尔滨珍宝制药有限公司地址150060黑龙江省哈尔滨市开发区哈平路集中区烟台一路8号72发明人方同华陈景超冯慧乔云峰许照芹刘玉成季庆亮席桂才周广红范玉奇74专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君54发明名称一种低毒的刺五加注射液及其制备方法57摘要本发明涉及一种低毒的刺五加注射液及其制备方法。其中刺五加注射液含有以下活性成分含总黄酮1855MG/ML。
2、、紫丁香苷013070MG/ML和刺五加苷E006034MG/ML，钾离子的数量800G/ML。本发明提供的刺五加注射液钾离子含量低，该制剂的钾离子含量控制由国家标准中1000G/ML，降至800G/ML或计为800G/5MG总黄酮以下；异常毒性小，安全性高。经过动物实验显示，受试对象耐受浓度由国家标准中的5MG/ML，提高达到18MG/ML。本发明提供的刺五加注射液，异常毒性检验结果优于现有市售产品。51INTCL权利要求书3页说明书10页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书10页10申请公布号CN104306417ACN104306417A1/3页21一种刺。
3、五加注射液，其特征在于，含有以下活性成分含总黄酮1855MG/ML、紫丁香苷013070MG/ML和刺五加苷E006034MG/ML，钾离子的数量800G/ML。2根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分每支20ML，总黄酮4555MG/ML、紫丁香苷032070MG/ML和刺五加苷E015034MG/ML，钾离子的数量800G/ML；每支100ML，含总黄酮2733MG/ML、紫丁香苷019042MG/ML和刺五加苷E009020MG/ML，钾离子的数量500G/ML；每支250ML，含总黄酮1822MG/ML、紫丁香苷013028MG/ML和。
4、刺五加苷E006014MG/ML，钾离子的数量300G/ML。3根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分每支20ML，含总黄酮4555MG/ML、紫丁香苷032070MG/ML和刺五加苷E015034MG/ML，钾离子的数量550G/ML；每支100ML，含总黄酮2733MG/ML、紫丁香苷019042MG/ML和刺五加苷E009020MG/ML，钾离子的数量360G/ML；每支250ML，含总黄酮1822MG/ML、紫丁香苷013028MG/ML和刺五加苷E006014MG/ML，钾离子的数量240G/ML。4根据权利要求1所述的注射液，其特征。
5、在于,所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分每支20ML，总黄酮514523MG/ML、紫丁香苷03605MG/ML和刺五加苷E017025MG/ML，钾离子的数量550G/ML。5一种制备权利要求14任一项所述的注射液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤刺五加提取物，用注射用水稀释，过滤，调节PH值，精滤，灌封、灭菌，即得刺五加注射液。6根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述刺五加提取物由以下方法制备1提取用612体积倍量的水提取刺五加药材23次，每次提取12小时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；2第一次醇沉在搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎膏中加入浓度为93以。
6、上的乙醇使得含醇量为7486，充分搅拌，静置6小时以上，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为110118，得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；3石硫法处理将步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均匀后，进行过滤，待滤液温度4050时，用20的石灰乳调节PH值至100120，搅拌，再用20的硫酸调节PH值至5060，继续搅拌，静置，滤取上清液并回收浓缩至80时相对密度为114119，得到浓缩膏；4大孔树脂吸附取步骤3得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为75100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值4055，搅拌均匀，冷藏12小时以上；冷藏后的药液经微。
7、孔滤膜过滤澄清后，调PH值2005，滤液以152BV/H流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用0305倍柱体积纯化水冲洗，然后用36体积倍量的权利要求书CN104306417A2/3页350乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为5065，将50洗脱液浓缩至80时相对密度为113120，得到浓缩膏，备用；5二次醇沉在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏中加入浓度为93以上乙醇使其含醇量为8086，充分搅拌，静置12小时以上，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为111120，得刺五加提取物二次醇沉膏；6热压及超滤热压及超滤取步骤5得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为7。
8、5100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值4050，搅拌均匀，115121灭菌3040分钟，冷藏12小时以上；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值5505，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为111120，即得到刺五加提取物。7根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一次醇沉，包括以下步骤在搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎膏加入浓度为93以上的乙醇使得含醇量为745755，充分搅拌，静置618小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为111115，得到刺五加提取物的一次醇沉膏。8根据权利要求6所述的方法，其特征在。
9、于，所述大孔树脂吸附包括以下步骤将步骤3得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为80100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值5054，搅拌均匀，冷藏1214H；冷藏后的药液经045M微孔滤膜过滤澄清后，调PH值2023，滤液以15BV/H的流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用0305倍柱体积纯化水冲洗，然后用35体积倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为5355，将50洗脱液浓缩至相对密度为115120，得到浓缩膏。9根据权利要求68任一项所述的方法，其特征在于，所述刺五加提取物由以下方法制备1提取用812体积倍量的水提取刺五加药材23次，每次提取12小时，合并提取液，浓缩，。
10、得到刺五加水煎膏，备用；2第一次醇沉在搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎膏中加入浓度为9395的乙醇使得含醇量为745755，搅拌15MIN后，静置618小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为111115，得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；3石硫法处理将步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均匀后，进行过滤，待滤液温度45时，用20的石灰乳调节PH值至105115，搅拌，再用20的硫酸调节PH值至5155，继续搅拌，静置48小时，滤取上清液并回收浓缩至80时相对密度为116119，得到浓缩膏；4大孔树脂吸附取步骤3得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含。
11、量为80100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值5055，搅拌均匀，冷藏1218小时；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值2023，滤液以15BV/H流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用0305倍柱体积纯化水冲洗，然后用35体积倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为5355，将50洗脱液浓缩至80时相对密度为113120，得到浓缩膏，备用；5二次醇沉在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏中加入浓度为9395乙醇权利要求书CN104306417A3/3页4使其含醇量为84855，充分搅拌，静置1216小时，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为114116，得刺五。
12、加提取物二次醇沉膏；6热压及超滤用注射用水稀释至总黄酮含量为80100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值4248，高温蒸汽灭菌，冷藏12小时；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值5255，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为115120，即得到刺五加提取物。10根据权利要求5所述的方法，其特征在于该方法包括以下步骤刺五加提取物用水稀释至总黄酮6010MG/ML，加入活性炭，回流煮沸吸附15MIN，冷却4050，045M滤膜过滤至澄清，用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，再过滤，收集并合并滤液，停止超滤，滤液调PH值至5060，药液经。
13、022M滤芯精滤，分装，经高温蒸汽灭菌，冷却，即得。权利要求书CN104306417A1/10页5一种低毒的刺五加注射液及其制备方法技术领域0001本发明涉及刺五加注射液，具体涉及一种低毒的刺五加注射液。背景技术0002刺五加为五加科植物刺五加ACANTHOPANAXSENTICOSUSRUPRETMAXIMHARMS的干燥根和根茎或茎。具有益气健脾，补肾安神的功效。性辛、微苦，温。刺五加注射液为刺五加经提取加工制成的灭菌水溶液，功效为平补肝肾，益精壮骨。用于治疗肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作，脑动脉硬化，脑血栓形成，脑栓塞等。亦用于治疗冠心病，心绞痛合并神经衰弱和更年期综合症等。0003包括。
14、刺五加注射液在内的中药注射剂，作为现代科学技术发展而产生的中药新剂型，克服了传统中药生物利用度低、起效慢等缺点，逐渐受到广大患者的青睐。然而，临床使用过程中，中药注射液不良反应的报道日益增多，其安全性也越加受到重视。0004临床研究表明静脉滴注含钾离子的药物时，会增加血液中钾离子浓度，能够导致心脏扩张和无力，甚至导致死亡。钾离子能够减慢心率并且阻止心脏从心房到心室的搏动，其原因是细胞外的高浓度钾离子减少了心肌纤维的静息膜电位，导致动作电位降低，心脏收缩无力。如果细胞外的钾离子浓度太高，静息膜电位就会被消除，心肌细胞就不能产生搏动，从而心脏停止跳动。0005因此，静脉滴注含钾离子的药物时，钾离子。
15、一般浓度不超过03，而就现有中药注射剂而言，日最大使用剂量一般在100ML以下，如血塞通注射液416ML、舒血宁注射液20ML、黄芪注射液20ML、双黄连注射液60ML；而刺五加注射液20ML规格200ML含总黄酮1000MG和刺五加注射液250ML规格500ML含总黄酮1000MG的日最大使用剂量特殊情况，为保证人民用药的安全，有必要对刺五加注射液含钾离子的数量进行规定与精确测定。0006而现有中国专利，如CN2012100497551下面简称2012年专利公开了一种刺五加组合物含其制剂及其检测方法，均未提到控制药物中钾离子含量的问题。0007针对现有刺五加注射液中存在的问题，发明人经过大量。
16、的研究，最终提出了本发明。发明内容0008本发明的目的是提供一种低毒的刺五加注射液。0009本发明的另一目的在于，提供该注射剂的制备方法。本发明提供的一种刺五加注射液，含有以下活性成分含总黄酮1855MG/ML、紫丁香苷013070MG/ML和刺五加苷E006034MG/ML，钾离子的数量800G/ML。优选地，所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分0010每支20ML，总黄酮4555MG/ML、紫丁香苷032070MG/ML和刺五加苷E015034MG/ML，钾离子的数量800G/ML；0011每支100ML，含总黄酮2733MG/ML、紫丁香苷019042MG/ML和刺五加苷E说。
17、明书CN104306417A2/10页6009020MG/ML，钾离子的数量500G/ML；0012每支250ML，含总黄酮1822MG/ML、紫丁香苷013028MG/ML和刺五加苷E006014MG/ML，钾离子的数量300G/ML。0013进一步优选，所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分0014每支20ML，含总黄酮4555MG/ML、紫丁香苷032070MG/ML和刺五加苷E015034MG/ML，钾离子的数量550G/ML；0015每支100ML，含总黄酮2733MG/ML、紫丁香苷019042MG/ML和刺五加苷E009020MG/ML，钾离子的数量360G/ML；00。
18、16每支250ML，含总黄酮1822MG/ML、紫丁香苷013028MG/ML和刺五加苷E006014MG/ML，钾离子的数量240G/ML。0017更进一步优选，所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分0018每支20ML，总黄酮514523MG/ML、紫丁香苷03605MG/ML和刺五加苷E017025MG/ML，钾离子的数量550G/ML。0019本发明提供的一种刺五加注射液的制备方法，该方法包括以下步骤用水提取刺五加药材，得到的刺五加水煎膏经过醇沉后，经石硫法处理后，过大孔树脂进行吸附、洗脱，洗脱液经浓缩后再次醇沉，然后再经过热压及超滤，得到刺五加提取物；经配剂、灌封、灭菌，即。
19、得刺五加注射液。0020上述方法中0021所述刺五加提取物由以下方法制备00221提取用612体积倍量的水提取刺五加药材23次，每次提取12小时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；00232第一次醇沉在搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎膏中加入浓度为93以上的乙醇使得含醇量为7486，充分搅拌，静置6小时以上，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为110118，得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；00243石硫法处理将步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均匀后，进行过滤，待滤液温度4050时，用20的石灰乳调节PH值至100120，搅拌，再用20的硫酸调节。
20、PH值至5060，继续搅拌，静置，滤取上清液并回收浓缩至80时相对密度为114119，得到浓缩膏；00254大孔树脂吸附取步骤3得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为75100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值4055，搅拌均匀，冷藏12小时以上；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值2005，滤液以152BV/H流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用0305倍柱体积纯化水冲洗，然后用36体积倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为5065，将50洗脱液浓缩至80时相对密度为113120，得到浓缩膏，备用；00265二次醇沉在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏中加入浓度为93。
21、以上乙醇使其含醇量为8086，充分搅拌，静置12小时以上，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为111120，得刺五加提取物二次醇沉膏；00276热压及超滤热压及超滤取步骤5得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注说明书CN104306417A3/10页7射用水稀释至总黄酮含量为75100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值4050，搅拌均匀，115121灭菌3040分钟，冷藏12小时以上；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值5505，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为111120，即得到刺五加提取物。0028所述刺五加提。
22、取物中0029所述第一次醇沉，包括以下步骤在搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎膏加入浓度为93以上的乙醇使得含醇量为745755，充分搅拌，静置618小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为111115，得到刺五加提取物的一次醇沉膏。0030所述石硫法处理包括以下步骤将步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与醇沉膏体积812倍量的水混合，搅拌均匀后过滤，待滤液温度4050时，用20的石灰乳调节PH值至105115，搅拌，再用20的硫酸调节PH值至5155，继续搅拌，静置，滤取上清液并回收浓缩至80时相对密度为116119，得到浓缩膏。0031所述大孔树脂吸附包括以下步骤将步骤。
23、3得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为80100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值5054，搅拌均匀，冷藏1214H；冷藏后的药液经045M微孔滤膜过滤澄清后，调PH值2023，滤液以15BV/H的流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用0305倍柱体积纯化水冲洗，然后用35体积倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为5355，将50洗脱液浓缩至相对密度为115120，得到浓缩膏。0032所述二次醇沉包括以下步骤在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏加入93以上乙醇使得含醇量为845855，充分搅拌，静置1216小时，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为114。
24、116，得刺五加提取物二次醇沉膏。0033所述热压及超滤包括以下步骤取步骤5得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为80100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值4248，搅拌均匀，115121灭菌3040分钟，冷藏12小时，冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值5255，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为115118，即得到刺五加提取物。0034优选地，所述刺五加提取物由以下方法制备00351提取用812体积倍量的水提取刺五加药材23次，每次提取12小时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；00362第一次醇沉在。
25、搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎膏中加入浓度为9395的乙醇使得含醇量为745755，搅拌15MIN后，静置618小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为111115，得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；00373石硫法处理将步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均匀后，进行过滤，待滤液温度45时，用20的石灰乳调节PH值至105115，搅拌，再用20的硫酸调节PH值至5155，继续搅拌，静置48小时，滤取上清液并回收浓缩至80时相对密度为116119，得到浓缩膏；00384大孔树脂吸附取步骤3得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含说明书CN104306。
26、417A4/10页8量为80100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值5055，搅拌均匀，冷藏1218小时；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值2023，滤液以15BV/H流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用0305倍柱体积纯化水冲洗，然后用35体积倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为5355，将50洗脱液浓缩至80时相对密度为113120，得到浓缩膏，备用；00395二次醇沉在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏中加入浓度为9395乙醇使其含醇量为84855，充分搅拌，静置1216小时，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80时相对密度为114116，得刺五加提取物二次醇沉。
27、膏；00406热压及超滤取步骤5得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为80100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值4248，高温蒸汽灭菌，冷藏12小时；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值5255，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为115120，即得到刺五加提取物。0041步骤3中，所述大孔树脂的型号为ADSF8、ADS17、HPD750、D101、HPD100、HPD450、AB8或DM130。0042步骤4中，纯化水的PH值为30。0043本发明提供的一种刺五加注射液的制备方法，该方法包括以下步骤刺五加提取物用。
28、水稀释至总黄酮6010MG/ML，加入活性炭，回流煮沸吸附15MIN，冷却4050，045M滤膜过滤至澄清，用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，再过滤，收集并合并滤液，停止超滤，滤液调PH值至5060，药液经022M滤芯精滤，分装，经高温蒸汽灭菌，冷却，即得。0044优选地，所述方法包括以下步骤刺五加提取物用水稀释至总黄酮60MG/ML，加入02活性炭，回流煮沸吸附15分钟，冷却至4050，经045M滤膜过滤至澄清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，停止超滤，送检、根据含量稀释至总黄酮25MG/ML，用20氢氧化钠溶液调PH值5255；药液经022M滤芯精滤，灌装于20ML。
29、或250ML、500ML安瓶中，封口；高温蒸汽灭菌，并及时冷却至60以下，即得刺五加注射液。0045上述制备方法中，所用的微孔滤膜的孔径均为045M。0046所述高温蒸汽灭菌是指115121蒸汽灭菌3040分钟。0047本发明提供的刺五加注射液具有以下优点00481、本发明制备低浓度钾离子注射液的原因在石硫法处理后，先经大孔树脂处理，去掉多余杂质，减少离子的同时也会增加部分其它离子，再经二次醇沉后，形成杂质的同时会吸附钾离子，一同除去。00492、本发明提供的刺五加注射液钾离子含量低，该制剂的钾离子含量控制由国家标准中1000G/ML，降至800G/ML或计为800G/5MG总黄酮，甚至550。
30、G/ML以下；异常毒性小，安全性高。00503、经过动物实验显示，受试对象耐受浓度由国家标准中的5MG/ML，提高达到18MG/ML。本发明提供的刺五加注射液，异常毒性检验结果优于现有市售产品。0051初步确定本发明提供的刺五加注射剂的安全性，希望为刺五加注射剂的临床使用打下坚实基础。说明书CN104306417A5/10页9具体实施方式0052以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。0053实施例1刺五加提取物的制备00541提取用12体积倍量的水72L提取刺五加药材6KG3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；00552一次醇沉在搅拌条件下，向步骤1得到。
31、的刺五加水煎膏中加入95乙醇使含醇量达75，充分搅拌，静置6小时；过滤，滤液回收乙醇至无醇味，继续浓缩至相对密度为11580测，得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；00563石硫法处理取步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏适量加入盛有适量的纯化水的罐中，补加纯化水至纯化水的用量为醇沉膏体积10倍量V/V，搅拌15MIN后，进行过滤，待滤液加热至温度45时，用20的石灰乳调节PH值至110，搅拌15MIN，再用20的硫酸调节PH值至55，继续搅拌15MIN，静置4小时，开始滤取上清液回收浓缩至相对密度为11980测，得到浓缩膏；00574大孔树脂吸附取步骤3得到的浓缩膏适量，加入注射用水稀释至1。
32、ML含总黄酮约100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值50，搅拌均匀，冷藏12小时；冷藏后的药液经045M微孔滤膜过滤澄清后，用稀HCL调PH值20，滤液以15BV/H流速上D101大孔树脂柱，然后以同样的流速15BV/H用03倍柱体积纯化水PH值为30冲洗，然后用4倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为54，将50洗脱液浓缩至相对密度为11380测，得到浓缩膏，备用；00585二次醇沉在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏中加入95乙醇使含醇量达855，搅拌15MIN，静置16小时，滤取上清液剩余药渣离心后过滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至相对密度为11480测，收膏得刺五加提。
33、取物二次醇沉膏，备用；00596热压及超滤取步骤5得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值42，搅拌均匀，121灭菌30分钟，冷藏12小时。冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值55，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为11780测，即得到刺五加提取物。0060实施例2刺五加提取物的制备00611提取用8体积倍量的水64L提取刺五加药材8KG2次，每次提取2小时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；00622一次醇沉在搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎膏中加入93乙醇使含醇。
34、量达745，充分搅拌，静置12小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，继续浓缩至相对密度为11180测，得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；00633石硫法处理取步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏适量加入盛有适量的纯化水的罐中，补加纯化水至纯化水的用量为醇沉膏体积12倍量V/V，搅拌15MIN后，进行过滤，待滤液加热至温度45时，用20的石灰乳调节PH值至115，搅拌15MIN，再用20的硫酸调节PH值至53，继续搅拌15MIN，静置6小时，开始滤取上清液回收浓缩说明书CN104306417A6/10页10至相对密度为11780测，得到浓缩膏；00644大孔树脂吸附取步骤3得到的浓缩膏适量，加入注。
35、射用水稀释至1ML含总黄酮约80MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值52，搅拌均匀，冷藏14小时；冷藏后的药液经045M微孔滤膜过滤澄清后，用稀HCL调PH值23，滤液以15BV/H流速上HPD100大孔树脂柱，然后以同样的流速15BV/H用04倍柱体积纯化水PH值为30冲洗，然后用5倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为53，将50洗脱液浓缩至相对密度为11480测，得到浓缩膏，备用；00655二次醇沉在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏中加入95乙醇使含醇量达845，搅拌15MIN，静置14小时，滤取上清液剩余药渣离心后过滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至相对密度为11580测。
36、，收膏得刺五加提取物二次醇沉膏，备用；00666热压及超滤取步骤5得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为80MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值45，搅拌均匀，121灭菌35分钟，冷藏12小时。冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值54，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为11880测，即得到刺五加提取物。0067实施例3刺五加提取物的制备00681提取用12体积倍量的水120L提取刺五加药材10KG2次，每次提取15小时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；00692一次醇沉在搅拌条件下，向步骤1得到的刺五加水煎。
37、膏中加入95乙醇使含醇量达755，充分搅拌，静置18小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，继续浓缩至相对密度为11480测，得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；00703石硫法处理取步骤2得到的刺五加提取物的一次醇沉膏适量加入盛有适量的纯化水的罐中，补加纯化水至纯化水的用量为醇沉膏体积8倍量V/V，搅拌15MIN后，进行过滤，待滤液加热至温度45时，用20的石灰乳调节PH值至105，搅拌15MIN，再用20的硫酸调节PH值至51，继续搅拌15MIN，静置8小时，开始滤取上清液回收浓缩至相对密度为11680测，得到浓缩膏；00714大孔树脂吸附取步骤3得到的浓缩膏适量，加入注射用水稀释至1ML含总黄。
38、酮约100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值54，搅拌均匀，冷藏12小时；冷藏后的药液经045M微孔滤膜过滤澄清后，用稀HCL调PH值22，滤液以15BV/H流速上DM130大孔树脂柱，然后以同样的流速15BV/H用03倍柱体积纯化水PH值为30冲洗，然后用3倍量的50乙醇洗脱，收集洗脱液，调PH为54，将50洗脱液浓缩至相对密度为11580测，得到浓缩膏，备用；00725二次醇沉在搅拌条件下，向步骤4得到的浓缩膏中加入95乙醇使含醇量达850，搅拌15MIN，静置12小时，过滤，滤取上清液剩余药渣离心后过滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至相对密度为11680测，收膏得刺五加提取。
39、物二次醇沉膏，备用；00736热压及超滤取步骤5得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为100MG/ML，搅拌均匀后，过滤，滤液调PH值48，搅拌均匀，115灭菌40分说明书CN104306417A107/10页11钟，冷藏12小时，冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值52，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为11580测，即得到刺五加提取物。0074实施例4制备刺五加注射液每支20ML，含总黄酮类物质100MG0075取实施例1得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮60MG/ML，加入10G活性炭，回流煮沸吸附15MIN。
40、是指加入炭后、回流加热至煮沸，开始计时15MIN，下同，冷却至50，经045M滤膜过滤至澄清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，根据含量稀释至总黄酮50MG/ML，用20氢氧化钠溶液调PH值55；药液经022M滤芯精滤，灌装20ML，封口；经高温蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。0076实施例5制备刺五加注射液每支100ML，含总黄酮类物质300MG0077配剂、灌封、灭菌取实施例2得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮75MG/ML，加入12G活性炭，回流煮沸吸附15MIN，冷却至40，经045M滤膜过滤至澄清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，根据含量稀。
41、释至总黄酮30MG/ML，用20氢氧化钠溶液调PH值54；药液经022M滤芯精滤，灌装100ML，封口；经高温蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。0078实施例6制备刺五加注射液每支250ML，含总黄酮类物质500MG0079配剂、灌封、灭菌取实施例3得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮100MG/ML，加入10G活性炭，回流煮沸吸附15MIN，冷却至45，经045M滤膜过滤至澄清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，根据含量稀释至总黄酮20MG/ML，用20氢氧化钠溶液调PH值52；药液经022M滤芯精滤，灌装250ML，封口；经高温蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。008。
42、0实施例7制备刺五加注射液每支250ML，含总黄酮类物质500MG0081配剂、灌封、灭菌取实施例3得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮80MG/ML，加入15G活性炭，回流煮沸吸附15MIN，冷却至50，经045M滤膜过滤至澄清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，根据含量稀释至总黄酮20MG/ML，用20氢氧化钠溶液调PH值55；药液经022M滤芯精滤，灌装250ML，封口；经高温蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。0082实验例1检验钾离子含量00831、受试药物0084市售品1，每支20ML，含总黄酮类物质100MG；0085市售品2，每支20ML，含总黄酮类物质10。
43、0MG；0086市售品3的三种刺五加注射液，其中每支20ML，含总黄酮类物质100MG；每支100ML，含总黄酮类物质300MG；每支250ML，含总黄酮类物质500MG；0087实施例47制成的刺五加注射液；0088对比例13参照申请号为2012100497551的专利的实施例8、9、10制备得到刺五加注射液。00892、检测方法1按2010年版中国药典附录S注射剂有关物质检查法0090钾离子取注射液2ML，蒸干，先用小火炽灼至炭化，再在500600炽灼至完全灰化，加稀醋酸2ML使溶解。置25ML量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。取10ML说明书CN104306417A118/1。
44、0页12纳氏比色管两支，甲管中精密加入标准钾离子溶液取硫酸钾适量，研细，于110干燥至恒重，精密称取223G，置1000ML量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ML，置100ML量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。每1ML相当于100G的K08ML，加碱性甲醛溶液取甲醛溶液，用01MOL/L氢氧化钠溶液调节PH值至809006ML、3乙二胺四醋酸二钠溶液2滴、3四苯硼钠溶液05ML，加水稀释成10ML，乙管中精密加入供试品溶液1ML，与甲管同时依法操作，摇匀，甲、乙两管同置黑纸上，自上向下透视，乙管中显出的浊度与甲管比较，不得更浓K1000G/ML。。
45、00913、检测方法2原子吸收光度法测定钾离子含量00921仪器与试剂0093仪器HITACHI18050型原子吸收分光光度计，日本日立公司。00942溶液的制备0095对照品溶液的制备取K储备液用超纯水稀释制成高、低2种浓度的对照品溶液。0096供试品溶液的制备取刺五加注射剂，用超纯水稀释50100倍，摇匀，即得。00973测定法0098取对照品溶液和供试品溶液采用火焰法测定供试品溶液中K的含量，计算离子的含量MG/ML。测试参数及对照品溶液浓度见下表1。0099表1测试参数及对照品溶液0100参数K波长NM7665灯电流MA100狭缝NM26燃烧头高度75空气流量L/MIN94乙炔气流量L。
46、/MIN23标准系列MG/L0,10,20010101024、实验结果见表20103表2受试药物中各成分含量0104说明书CN104306417A129/10页130105表2结果显示本发明提供的刺五加注射液在与不同规格市售品、对比例的比较中，在满足刺五加注射液中有效成分含量的同时，钾离子含量应不超过国家标准要求的1000G/ML，钾离子含量越低，则注射液安全性越高。0106结果表明本发明提供的刺五加注射液在同等规格的比较中，优势明显，制备工艺能体现较好的控制钾离子含量的目的。0107实验例2异常毒性检测0108受试药物注，“含总黄酮类物质”是每个注射液的规格及含量标准0109市售品1，每支2。
47、0ML，含总黄酮类物质100MG；0110市售品2，每支20ML，含总黄酮类物质100MG；0111市售品3，三种刺五加注射液，其中每支20ML，含总黄酮类物质100MG；每支100ML，含总黄酮类物质300MG；每支250ML，含总黄酮类物质500MG；实施例47制成的刺五加注射液；0112对比例13参照申请号为2012100497551的专利的实施例8、9、10制备得到刺五加注射液。0113按中国药典2010年版一部附录E异常毒性检查法。0114实验步骤01151、供试品制备取以上样品数支，过045M滤膜，浓缩至总黄酮含量为20MG/ML理论浓度，分装于20ML安瓿中，熔封后116灭菌40。
48、MIN，送检总黄酮浓度；按照各样品总黄酮检验浓度，加生理盐水分别稀释至总黄酮浓度为5MG/ML、10MG/ML、15MG/ML和18MG/ML，然后过045M滤膜过滤，备用。01162、按照规定检验供试品异常毒性取体重在1720G小白鼠5只，自尾静脉注入供试品，速度45秒每只注射05ML供试品，给药后观察48小时内不得有死亡；如有死亡，另取体重在1819G小白鼠10只复试，全部小鼠48小时内不得有死亡。0117实验结果，如下表3所示。0118表3检验供试品异常毒性0119说明书CN104306417A1310/10页145MG/ML10MG/ML15MG/ML18MG/ML实施例420ML合格合格合格合格实施例520ML合格合格合格合格实施例6100ML合格合格合格合格实施例7250ML合格合格合格合格市售品120ML合格合格不合格不合格市售品220ML合格不合格不合格不合格市售品320ML合格合格不合格不合格市售品3100ML合格合格不合格不合格市售品3250ML合格合格不合格不合格对比例120ML合格合格合格不合格对比例2100ML合格合格合格不合格对比例3250ML合格合格合格不合格0120表3结果显示本发明提供的刺五加注射液在与不同规格市售品、对比例的比较中，样品耐受浓度均符合国家标准要。