慢性髓细胞白血病的免疫疗法 发明背景
慢性髓细胞白血病(CML)是一种非常特殊的疾病，这种疾病是由严格的血液学参数，包括示病性白细胞分类计数定义的。通常，CML伴有骨髓细胞中Ph染色体的存在，即通常与人肿瘤性疾病有关的第一染色体异常。慢性髓细胞白血病是一种分布广泛且主要在中年发病的疾病。当所述疾病表现为分化的肿瘤时，它的特征在于最初的慢性期，对单一的非加强疗法有非常好的反应。在一段可变的时间间隔后，CML对不应期发生变态，其对疗法的反应很差或根本不反应，即使是当加强时。见Spiers，Semin.Oncol.，22(4)：380-95(1995)。在变态阶段，会产生多种临床和血液学图像，且CML可模拟髓增殖性疾病，髓发育异常，亚急性白血病，急性髓细胞白血病(AML)，或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。从慢性期到所谓暴发危象的突然暴发性转变的旧观念是错误的。见Spiers，Semin.Oncol.，22(4)：380-95(1995)。在大多数情况下，观察到CML经历了两次或更多次地逐步发展，例如从慢性期到快速髓增殖期到类似AML的时期。
已经使用过多种疗法治疗CML。治疗白血病的常规方法，包括化学疗法和放射性疗法由于毒副作用而限制使用。单克隆抗体针对放射性核素，毒素的使用或其它治疗剂选择性针对肿瘤位点的使用降低了对正常组织的毒性水平。然而，由于必须给予大量的接合物，这种疗法会持续产生毒副作用。这些方面限制了这种疗法的有效性和持续时间。另一种疗法，即异源骨髓移植物可对CML患者的存活产生巨大的影响。见Clarkson，J.Clin.Oncol.，3：135-139(1985)。然而，就像前述疗法那样，患者对骨髓移植物的耐受较差。
最近的研究表明，利用裸抗体的免疫疗法很可能是治疗某些癌症的有效方法。裸人源化抗-CD33抗体的使用已被证实可有效治疗急性髓细胞白血病，并减轻患者的后遗症。见Caron等，Clin.Cancer Res.，4：1421-1428(1998)；Jurcic等，Clin.Cancer Res.，6：372-380(2000)。同样，含裸人源化抗-HER2/neu抗体的免疫疗法已经在乳腺癌的治疗中产生了有希望的结果。见Baselga等，Semin.Oncol.，26：78-83(1999)；Weiner，Semin.Oncol.，26：43-51(1999)。针对CD20的未接合免疫球蛋白已经显示出可在直到50％的患者中诱导不完全和完全的应答，其中所述患者患有晚期的，无痛非-Hodgkin’s淋巴瘤。见Weiner，Semin.Oncol.，26：43-51(1999)。
裸抗体治疗恶性肿瘤的用途具有很多优点。首先，仅仅含裸抗体的免疫疗法很少具有与其它疗法，如放射性免疫疗法(RAIT)或利用接合毒素的免疫疗法有关的毒副作用。第二，循环裸抗体可比其它疗法保持更长时间的治疗活性。例如，RAIT的有效性是由接合同位素的半衰期限制的，通常为一周或更短的时间。同样，由于毒素的体内修饰，接合免疫毒素的功效可能很短暂。第三，因为裸抗体可被患者良好地耐受，因此可多次给予这种疗法。第四，利用裸抗体的联合疗法可被患者更好地耐受，这是因为获得有效结果所需的联合疗法毒性成分的量较低。最后，裸抗体的使用可通过减少昂贵的放射性或治疗接合物而显著减少治疗癌症的费用，其具有较短的储藏期限，且它的给药通常需要特殊的设备和人员。因此，这种费用的降低可使更多患者从这种疗法受益。
因此，我们需要研制利用裸抗体治疗CML的免疫疗法。这种疗法可成本-有效地治疗患者，且不会诱导毒副作用。
发明概述
因此，本发明其中一个目的是提供利用裸免疫疗法治疗髓细胞白血病的方法。
为了实现此目的和其它目的，按照本发明其中一个方面，提供了一种治疗患者慢性髓细胞白血病(CML)的方法，包括给予所述患者一种含药学上可接受的载体和至少一种裸抗-粒细胞抗体的治疗组合物。多种抗-粒细胞抗体均可用于本发明中。例子包括，但不限制于，抗-NCA-90，抗-NCA-95，MN-2，MN-15，NP-1和NP-2。在其中一个实施方案中，给予患者单一的裸抗-粒细胞抗体，而在另一个实施方案中，给予患者不止一种抗-粒细胞抗体。在又一个实施方案中，将至少一种裸抗-粒细胞抗体与针对存在于单一粒细胞前体中的抗原的裸抗体，如抗-CD33或抗-CD15抗体联合给予患者。
在本发明另一实施方案中，裸抗-粒细胞抗体可与其它癌症疗法，例如免疫接合物疗法或化学疗法联合使用。优选的免疫接合物包括放射性标记的抗体成分和抗-粒细胞抗体成分与免疫调制剂的接合物，如细胞因子，干细胞生长因子，淋巴毒素或造血因子。在又一实施方案中，本发明的联合疗法可含有抗体-毒素融合蛋白。
在本发明另一实施方案中，裸抗-粒细胞抗体是与提高或诱导靶抗原表达的诱导剂联合给予的。这种诱导剂可通过上调目标细胞表面上的靶抗原的表达而提高所给予疗法的功效。此外，诱导剂可通过诱导通常不在这些细胞表面显示的抗原的表达而扩展本发明疗法对其它细胞类型和癌症的肿瘤杀伤力。因此，本发明的抗体可用于治疗AML，及CML。
因此，本发明另一个实施方案提供了一种治疗患者急性髓细胞白血病(AML)或急性前髓细胞白血病(APML)的方法，包括给予所述患者一种含药学上可接受的载体和至少一种裸抗-粒细胞抗体及诱导剂的治疗组合物，其中所述诱导剂可诱导极少在成髓细胞表面显示的抗原的表达。如上所述，本发明的方法还可与其它裸抗-粒细胞抗体，抗体-毒素融合蛋白及其它的癌症疗法，例如，免疫接合物疗法或化学疗法联合使用。
本发明的其它目的，特征和有利之处从下面的详细描述中显而易见。详述和及作为优选实施方案的具体实施例，仅用于举例说明，因为，从该详述可知，落在本发明精神和范围内的各种变化和改进对于本领域那些技术人员而言也是显而易见的。此外，所述实施例证明了本发明的原理，且不希望被用于具体说明本发明的应用仅及于所有实施例中的感染，很明显这些实施例对于本领域技术人员是有益的。
详述
本发明提供改进的治疗髓细胞白血病，特别是CML的方法。本发明的方法利用裸粒细胞-特异性抗体破坏骨髓性白血病的细胞，且该方法没有通常与前述形式的疗法有关的毒副作用。在其中一个实施方案中，所述治疗仅仅使用裸粒细胞-特异性抗体。在另一实施方案中，所述裸抗体与免疫接合物或其它疗法联合使用。在任一形式的疗法中，为患者提供慢性髓细胞白血病的有效治疗，防止常量抗癌药物给药所伴有的毒副作用。
本发明所用的抗-粒细胞抗体针对的是与粒细胞系中的各种细胞类型有关的抗原。与AML不同，CML患者的恶性成髓细胞分化成各种细胞类型，包括髓细胞，后髓细胞，带，和粒细胞。因此，涉及一种或两种这些细胞类型的免疫疗法不能有效地减少白细胞数。因为本发明疗法的抗体可识别未成熟的和成熟的粒细胞，因此本发明提供一种有效的，清除CML患者骨髓中的恶性细胞的方法。
各种抗-粒细胞抗体均可用于本发明中。在其中一个实施方案中，本发明的方法使用抗-NCA-90抗体。这种抗体的优选例子是MN-3。见Hansen等，Cancer，71：3478-3485(1993)；Becker等，Semin.Nucl.Med.，24(2)：142-53(1994)。在另一实施方案中，使用了抗-NCA-95抗体。在又一实施方案中，使用了IIa类抗-CEA抗体MN-2和NP-2，及I类抗-CEA抗体MN-15和NP-1。见Hansen等，Cancer，71：3478-3485(1993)；Primus等，Cancer Res.，43：686-692(1983)。优选这些抗体的人类形式和嵌合形式，最优选完全的人类和人源化译本。
定义
在下面的描述中，广泛使用了多个术语。提供下列定义以帮助理解本发明。
术语“髓细胞白血病”与术语粒细胞性白血病，骨髓原性白血病，骨髓性白血病，骨髓性白血病同义。
慢性髓细胞白血病的特征在于骨髓和骨髓外位置中成髓(myelopoietic)细胞的无控增殖，其中所述恶性成髓细胞可分化并产生髓细胞，后髓细胞，杆状核细胞和粒细胞。
急性髓细胞白血病的特征在于成髓细胞的无控增殖，它不能分化成更多的成熟细胞类型。
术语“抗-粒细胞抗体”是指可识别存在于两种或多种粒细胞/髓细胞系的细胞类型中的抗原的抗体。
“嵌合抗体”是一种重组蛋白，它含有来源于啮齿动物抗体的互补决定区和可变结构域，而抗体分子的剩余部分则来源于人类的抗体。
“人源化抗体”是重组蛋白，其中单克隆抗体的鼠科动物互补决定区已经从鼠科动物免疫球蛋白的重可变链和轻可变链转移到人的可变结构域中。
“治疗剂”是一种分子或原子，它可与抗体部分接合产生接合物，从而用于治疗。治疗剂的例子包括，但不限制于，药物，毒素，免疫调制剂，硼化合物，光活化剂或染料，细胞因子，激素，防辐射药物和放射性同位素。
“裸抗体”是一种完全的抗体，与抗体片段相反，它不与治疗剂接合。裸抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体及某些重组抗体，如嵌合抗体及人源化抗体。
术语“抗体成分”包括完全的抗体和抗体片段。
“免疫接合物”是抗体成分与治疗剂的接合物。
术语“抗体融合蛋白”是指一种重组分子，它含有一种或多种抗体成分和一种治疗剂。适于这种融合蛋白的治疗剂的例子包括免疫调制剂(“抗体-免疫调制剂融合蛋白”)和毒素(“抗体-毒素融合蛋白”)。所述融合蛋白可含有单-的抗体成分，不同抗体成分的多价结合或相同抗体成分的多拷贝。
“结构基因”是一种被转录到信使RNA(mRNA)中的DNA序列，然后它又被翻译成特异性多肽特有的氨基酸序列。
“启动子”是一种针对结构基因转录的DNA序列。通常，启动子位于基因的5’区，与结构基因的转录起始位点最接近。如果启动子是一种诱导型启动子，那么转录速度可随诱导剂而增加。相反，如果所述启动子是一种组成型启动子，那么转录速度则不由诱导剂调节。
“分离的DNA分子”是一种不在生物体基因组DNA中整合的DNA片段。例如，克隆抗体基因是一种从哺乳动物细胞的基因组DNA中分离出来的DNA片段。分离的DNA分子的另一个例子是不在生物体基因组DNA中整合的，化学合成的DNA分子。
“增强子”是一种DNA调节元件，它可增加转录效率，而与增强子相对转录起始位点的距离或方向无关。
“互补DNA”(cDNA)是一种单链DNA分子，它是通过逆转录酶自mRNA模板形成的。通常，与mRNA部分互补的引物可用于引发逆转录。本领域的那些技术人员也使用术语“cDNA”指代双链DNA分子，这种双链DNA分子是由这种单链DNA分子及其互补DNA链组成的。
术语“表达”是指基因产物的生物合成。例如，在结构基因中，表达包括结构基因到mRNA的转录和mRNA至一个或多个多肽的翻译。
“克隆载体”是一种DNA分子，如质粒，粘粒或噬菌体，它具有在宿主细胞中自主复制的能力。克隆载体通常含有一个或少量限制性内切核酸酶识别位点和标记基因，外源DNA序列以可测定的方式被插入到该位点中且不会损失载体的基本生物功能，而所述标记基因适于利用克隆载体转化的细胞的鉴定和选择。标记基因通常包括提供四环素抗性或氨苄青霉素抗性的基因。
“表达载体”是一种DNA分子，它含有在宿主细胞中表达的基因。通常，基因的表达是在某些调节元件，包括组成型启动子或诱导型启动子，组织-特异性调节元件和增强子的控制之下进行的。这种基因与调节元件“可操纵地连接”。
“重组宿主”可以是任何一种原核细胞或真核细胞，它含有克隆载体或表达载体。此术语还包括已经被基因工程改造过，从而在宿主细胞的染色体或基因组中含有克隆基因的那些原核细胞或真核细胞。
“抗体片段”是抗体的一部分，如F(ab’)2，F(ab)2，Fab’，Fab等。不考虑结构，抗体片段与由完整抗体识别的相同抗原结合。例如，抗-CD22单克隆抗体片段与CD22的抗原决定部分结合。
术语“抗体片段”还包括任何一种合成的或基因工程改造过的蛋白，它通过与特异性抗原结合形成复合物而像抗体一样发挥作用。例如，抗体片段包括由轻链可变区组成的分离片段，由重链和轻链可变区组成的“Fv”片段，其中的轻链和重链可变区通过肽键连接的重组单链多肽分子(“sFv蛋白”)，和由模拟高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位。
抗体的产生
对粒细胞特异的啮齿动物单克隆抗体是通过本领域那些技术人员已知的方法获得的。通常见Kohler和Milstein，Nature 256：495(1975)；Coligan等，(eds.)，免疫学的当前方案(John Wiley&Sons 1991)。简言之，单克隆抗体可通过下列步骤得到：使用含NCA-90的组合物给小鼠注射，通过除去血清样品而证实抗体产生的存在，除去脾脏得到B-淋巴细胞，将B-淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤，克隆杂交瘤，选择产生抗-NCA-90抗体的阳性无性系，培养产生针对抗原的抗体的无性系，并从杂交瘤培养物中分离抗体。
单克隆抗体可利用各种熟知的技术从杂交瘤培养物中分离并纯化。这种分离技术包括使用蛋白-A琼脂糖凝胶的亲和色谱法，大小排阻色谱法，和离子交换色谱法。见Coligan等(eds.)，免疫学的当前方案(JohnWiley&Sons 1991)；Baines等，第79-104页，分子生物学的方法(TheHumana Press，Inc.1992)。
NCA-90抗原，也被称为CD66c的适宜量可利用本领域熟知的标准技术获得。例如，NCA-90蛋白可从超量生产NCA-90的转染培养细胞获得。含DNA分子的表达载体可使用公开的NCA-90核苷酸序列构造，其中所述DNA分子编码NCA-90。见Oikawa等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，146：464-460(1987)；Wilson等，J.Exp.Med.173：137(1991)；Wilson等，J.Immunol.150：5013(1993)。同样，用于生产NCA-95蛋白的表达载体可使用公开的NCA-95核苷酸序列构造。见Berling等，Cancer Res.，50：6534-6539(1990)。
作为举例说明，编码NCA-90的DNA分子可通过利用相互引发长链寡核苷酸合成DNA分子而获得。见Ausubel等，(eds.)，分子生物学的当前方案(John Wiley&Sons，Inc.1990)；Wosnick等，Gene60：115(1987)；Ausubel等，(eds.)，分子生物学的短期方案(John Wiley&Sons，Inc.1995)。利用聚合酶链反应的公认技术能够合成长度为1.8千对碱基的基因。Adang等，Plant Molec.Biol.21：1131(1993)；Bambot等，PCRMethods and Applications，2：266(1993)；White(ed.)，分子生物学的方法，第263-268页(Humana Press，Inc.1993)。在这种方法的变化中，抗-NCA-90单克隆抗体可通过使骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞融合而得到，其中小鼠是使用鼠科动物前-B细胞系免疫的，而所述前-B细胞系是利用本领域已知的技术用NCA-90 cDNA稳定转染的。
适宜的鼠科动物抗-NCA-90单克隆抗体的其中一个例子是MN-3单克隆抗体。所述MN-3抗体是从BALB-c小鼠的杂交瘤中分离出来的，所述小鼠是用源于GW-39人结肠腺癌异种移植的部分纯化的癌胚抗原(CEA)免疫的。见Hansen等，Cancer，71：3478-3485(1993)。所述MN-3抗体对于NCA-90抗原，一种在粒细胞，及正常的结肠粘膜和结肠腺癌上表达的同型粘着分子，是特异性的。见Becker等，Semin.Nucl，Med.，24(2)：142-53(1994)；Watt等，Blood，78：63-74(1991)。
适宜的鼠科动物抗-NCA-95抗体的其中一个例子是BW 250/183抗体。见Bosslet等，Int.J.Cancer，36：75-84(1985)；Meller等，J.Nucl.Med.，39：1248-1253。另一个有效的抗-NCA-95抗体是Mab 47。见Audette等，Mol.Immunol.，24：1177-1186(1987)。
另一个适宜的抗体是MN-2单克隆抗体。所述MN-2抗体是从BALB/c小鼠的杂交瘤中分离出来的，所述小鼠是用源于GW-39人结肠腺癌异种移植的部分纯化的癌胚抗原(CEA)免疫的。见Hansen等，Cancer，71：3478-3485(1993)。作为IIA类抗-CEA抗体，MN-2可利用本领域熟知的封闭测定法很容易地鉴定。见美国专利US4,818,709，其全部引入此处作为参考。
另一个适宜的抗体是MN-15单克隆抗体。所述MN-15抗体在NCA-90和NCA-95之间显示交叉-反应性。MN-15是从BALB/c小鼠的杂交瘤中分离出来的，所述小鼠是用源于GW-39人结肠腺癌异种移植的部分纯化的癌胚抗原(CEA)免疫的。见Hansen等，Cancer，71：3478-3485(1993)。作为I类抗-CEA抗体，MN-15可利用本领域熟知的封闭测定法很容易地鉴定。
另一个适宜的抗体是NP-2单克隆抗体。所述NP-2具有与MN-2相似的特异性。NP-2是按照由Krupey等(Immunochem.，9：617(1972))描述，由Newman等(Cancer Res.，34：2125(1974))改进的过程，从BALB/c小鼠的杂交瘤中分离出来的，所述小鼠是用源于人结肠腺癌肝转移瘤的部分纯化的癌胚抗原(CEA)免疫的。见Primus等，Cancer Res.，43：686-92(1983)；美国专利US4,818,709。
另一个适宜的抗体是NP-1单克隆抗体。所述NP-1具有与MN-15相似的特异性。NP-1是按照由Krupey等(Immunochem.，9：617(1972))描述，由Newman等(Cancer Res.，34：2125(1974))改进的过程，从BALB/c小鼠的杂交瘤中分离出来的，所述小鼠是用源于人结肠腺癌肝转移瘤的部分纯化的癌胚抗原(CEA)免疫的。见Primus等，Cancer Res.，43：686-92(1983)；美国专利US4,818,709。
适于多元疗法的抗体的其中一个例子是M195。见美国专利US6,007,814。这种抗体对于CD33抗原是特异性的，其存在于骨髓细胞和单核细胞中。M195是从杂交瘤产生的，而所述杂交瘤是由SP2/0-Ag14小鼠的骨髓瘤细胞和5-周大BALB/c小鼠的脾细胞的融合产生的，所述5-周大的BALB/c小鼠使用AML患者的白血病细胞(FAB-M2)免疫。
适于多元疗法的抗体的其它例子是抗-SSEA-1和PM-81。见Thakur等，J.Nucl.Med.，37：1789-1795(1996)；Ball等，J.Immunol.，30：2937-2941(1983)。这些抗体识别CD-15抗原，其存在于各种骨髓细胞中。抗-SSEA-1是从源于小鼠畸胎癌细胞的杂交瘤产生的。PM-81是从杂交瘤产生的，而所述杂交瘤源于NS-1骨髓瘤细胞系的细胞与小鼠细胞的融合，其中所述小鼠用HL-60前髓细胞的白血病细胞系免疫。
在另一实施方案中，本发明的抗体是一种嵌合抗体，其中人类抗体的可变区已经被啮齿动物抗-NCA-90抗体的可变区代替。嵌合抗体的有利之处包括降低免疫原性并增加体内稳定性。构造嵌合抗体的技术对于本领域的那些技术人员而言是熟知的。见Leung等，Hybridoma，13：469(1994)。
在另一实施方案中，本发明的抗体是低于人的灵长类动物抗体。在狒狒中培养治疗有效抗体的一般技术可在Goldenberg等的国际专利公开号WO91/11465(1991)中找到，其全部引入此处作为参考，还可在Losman等，Int.J.Cancer，46：310(1990)中找到。
在又一实施方案中，本发明的抗体是一种“人源化的”单克隆抗体。即，小鼠互补决定区从小鼠免疫球蛋白的重可变链和轻可变链转移到人的可变结构域中，接着替换它们的鼠科动物相应物构架区中的某些人类残基。本发明的人源化单克隆抗体适用于治疗方法中。克隆鼠科动物免疫球蛋白可变结构域的一般技术是由Orlandi等，在Proc.Nat’lAcad.Sci.USA，86：3833(1989)中描述的。产生人源化单克隆抗体的技术是由Jones等，Nature，321：522(1986)，Riechmann等，Nature，332：323(1988)，Verhoeyen等，Science，239：1534(1988)，Carter等，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA，89：4285(1992)，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.，12：437(1992)和Singer等，J.Immun.，150：2844(1993)描述的。
在另一实施方案中，本发明的抗体是一种人类的单克隆抗体。这种抗体是从转基因小鼠获得的，而所述小鼠已经被“基因工程改造过”，从而产生应答抗原性攻击的特异性人类抗体。在此技术中，人重链和轻链基因座的成分被引入到源于胚胎干细胞系的小鼠品系中，其中所述胚胎干细胞系包括内源性重链和轻链基因座的靶破裂。所述转基因小鼠可合成对人类抗原特异的人类抗体，且所述小鼠可用于产生分泌人类抗体的杂交瘤。从转基因小鼠获得人类抗体的方法在本领域中是熟知的。见Green等，Nature Genet.，7：13(1994)；Lonberg等，Nature，368：856(1994)；Taylor等，Int.Immun.，6：579(1994)；Bruggeman等，Curr.Opin.Biotechnol.，8：455-458(1997)。选择性地，目标抗原的人类抗体还可利用噬菌体展示获得。见Auiame等，Hum.Antibodies，8：155-168(1997)。
免疫接合物的制备
本发明预期裸抗-粒细胞抗体作为CML重要治疗成分的用途。然而，在本发明其中一个实施方案中，可将裸抗-粒细胞抗体，如MN-3或MN-2与一种或多种免疫接合物联合给予患者。这种免疫接合物可通过将治疗剂与抗体成分接合而制备。一般技术在Shih等，Int.J.Cancer，41：832-839(1988)，Shih等，Int.J.Cancer，46：1101-1106(1990)和美国专利US5,057,313中描述，其全部引入此处作为参考。一般方法包括使具有氧化碳水化合物部分的抗体成分与载体聚合物反应，所述载体聚合物具有至少一个游离胺官能团并装载有各种药物，毒素，螯合剂，硼附加物或其它治疗剂。该反应可产生初始席夫碱(亚胺)键，其通过还原成仲胺形成最终的接合物而稳定。
所述载体聚合物优选具有至少50个氨基酸残基的多肽或氨基葡聚糖，虽然也可使用其它基本等价的聚合物载体。为方便给药并有效定向，最终的免疫接合物优选溶于水溶液，如哺乳动物的血清中。因此，载体聚合物的增溶功能可提高最终免疫接合物的血清溶解度。特别优选氨基葡聚糖。
用氨基葡聚糖载体制备免疫接合物的方法通常是以葡聚糖聚合物开始的，优选使用平均分子量约为5,000-100,000的葡聚糖。所述葡聚糖与氧化剂反应，引起其碳水化合物环部分的受控氧化，产生醛基。所述氧化作用是很方便地按照常规步骤，使用糖酵解化学试剂，如NaIO4进行的。
然后，氧化的葡聚糖与多元胺，优选二元胺，更优选单-或多羟基二元胺反应。适宜的胺包括乙二胺，丙二胺或其它类似的聚亚甲基二元胺，二亚乙基三元胺或类似的多元胺，1，3-二氨基-2-羟基丙烷或其它类似的羟基化二元胺或多元胺等。相对于葡聚糖醛基过量的胺用于确保醛基到席夫碱基的基本完全转化。
还原剂，如NaBH4，NaBH3CN或其它可用于影响最终席夫碱中间体的还原稳定。所述最终的附加物可经由常规的筛分柱除去交联葡聚糖而纯化。也可使用其它衍生葡聚糖从而引入胺官能团的常规方法，例如，与溴化氰反应，接着与二元胺反应。然后使氨基葡聚糖与装载的，活化形式的特殊药物，毒素，螯合剂，免疫调制剂，硼附加物或其它治疗剂的衍生物反应，所述活化形式优选羧基-活化的衍生物，它是通过常规方法，例如，使用二环己基碳二亚胺(DCC)或其水溶性变体形成中间体附加物而制备的。
选择性地，多肽毒素，如美洲商陆抗病毒蛋白或蓖麻毒蛋白A-链等，可通过戊二醛缩聚或通过使蛋白上的活化羧基与氨基葡聚糖上的胺反应而与氨基葡聚糖偶联。无线电高导磁性合金或磁共振增强子的螯合剂在本领域中是熟知的。代表性的是乙二胺四乙酸(EDTA)，二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)和1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N’，N”，N-四乙酸(DOTA)的衍生物。这些螯合剂通常具有侧链基团，螯合剂就是通过这种侧链基团与载体连接的。这种侧链基团包括，例如，苄异硫氰酸盐，DTPA或EDTA通过苄异硫氰酸盐与载体的胺基偶联。选择性地，螯合剂上的羧基或胺基可通过活化或先衍生，然后偶联而与载体偶联，所有这些均是熟知的方法。
硼附加物，如碳硼烷可通过常规方法与抗体成分连接。例如，碳硼烷可利用侧链上的羧基官能团而制备，这在本领域中是熟知的。这种碳硼烷与载体，例如氨基葡聚糖的连接可通过活化碳硼烷的羧基，并与载体上的胺缩聚产生中间体接合物而获得。如下所述，然后，这种中间体接合物与抗体成分连接，产生治疗有效的免疫接合物。
可使周多肽载体替换氨基葡聚糖，但多肽载体链中必须具有至少50个氨基酸残基，优选100-5000个氨基酸残基。至少某些氨基酸应当是赖氨酸残基或谷氨酸盐或门冬氨酸盐残基。赖氨酸残基的侧胺和谷氨酸盐或门冬氨酸盐的侧羧酸盐便于连接药物，毒素，免疫调制剂，螯合剂，硼附加物或其它治疗剂。适宜多肽载体的例子包括聚赖氨酸，聚谷氨酸，聚天门冬氨酸，其共聚物，和这些氨基酸与其它，如丝氨酸的混合聚合物，从而给最终装载的载体和免疫接合物带来我们所期望的溶解性。
中间体接合物与抗体成分的接合是通过氧化抗体成分的碳水化合物部分，并使最终的醛(和酮)羰基与装载药物，毒素，螯合剂，免疫调制剂，硼附加物或其它治疗剂后，载体上剩余的胺基反应而进行的。选择性地，中间体接合物可经由胺基团与氧化的抗体成分连接，而所述胺基团已经在装载治疗剂后被引入到中间体接合物中。氧化可方便地使用NaIO4或其它糖酵解试剂化学进行，或使用神经氨酸苷酶和半乳糖氧化酶酶促进行。在使用氨基葡聚糖载体的情况下，不是氨基葡聚糖的全部胺基均可用于装载治疗剂。氨基葡聚糖的剩余胺与氧化的抗体成分缩聚，形成席夫碱附加物，然后通常利用氢硼化物还原剂使其稳定还原。
类似的过程可用于生产本发明其它的免疫接合物。已装载过的多肽载体优选具有残留的游离赖氨酸残基，从而用于与抗体成分的氧化碳水化合物部分缩聚。如果需要，可通过利用DCC活化并与过量的二元胺反应而将多肽载体上的羧基转化成胺。最终的免疫接合物是使用常规技术，例如Sephacryl S-300筛分色谱纯化的。
选择性地，免疫接合物可通过直接将抗体成分与治疗剂接合而制备。所述大概过程与间接的接合方法类似，只是治疗剂是与氧化的抗体成分直接连接的。
也可使用其它治疗剂替换此处所述的螯合剂。本领域的那些技术人员能够在没有不适当实验的情况下设计接合流程。
作为另一种举例说明，治疗剂可通过二硫键的形成在还原抗体成分的铰链区连接。例如，破伤风类毒素肽可使用单一的半胱氨酸残基结构，所述半胱氨酸残基用于连接肽和抗体成分。作为一种选择，还可利用异基双官能交联剂，如N-琥珀酰3-(2-吡啶基二硫)丙酸盐(SPDP)使这种肽与抗体成分连接。见Yu等，Int.J.Cancer.，56：244(1994)。这种接合的一般技术在本领域中是熟知的。见Wong，蛋白接合与交联的化学(CRCPress 1991)；Birch等，(eds.)，单克隆抗体：原理和应用，第187-230页(Wiley-Liss，Inc.1995)；Ritter等(eds.)，单克隆抗体：生产，工程改造和临床应用，第60-84页(Cambridge University Press 1995)。
如上所述，抗体Fc区的碳水化合物部分可用于接合治疗剂。然而，如果将抗体片段用作免疫接合物的抗体成分，那么会导致Fc区的缺乏。然而，可将碳水化合物部分引入到抗体或抗体片段的轻链可变区中。见Leung等，J.Immunol.，154：5919(1995)；美国专利US5,443,953，其全部引入此处作为参考。然后将工程改造过的碳水化合物部分用于连接治疗剂。
此外，本领域的那些技术人员应该能识别接合方法许多可能的改变。例如，所述碳水化合物部分可用于连接聚乙二醇，从而延长完整抗体，或其抗原-结合片段在血液，淋巴或其它胞外流体中的半衰期。此外，可通过使治疗剂与碳水化合物部分和游离巯基连接而构造“二价的免疫接合物”。这种游离巯基位于抗体成分的铰链区。
抗体片段的产生
本发明联合疗法中所用的免疫接合物可含有抗体片段。这种抗体片段可利用常规方法，通过整个抗体的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化而获得。例如，抗体片段可通过用胃蛋白酶裂解，提供被标记为F(ab’)2的5S片段而产生。该片段还可使用硫醇还原剂和选择性的巯基保护基团进一步裂解，从而产生3.5S Fab’单价片段，其中所述巯基是由二硫键裂解产生的。选择性地，使用胃蛋白酶进行酶裂解可直接产生两个单价的Fab片段和一个Fc片段。这些方法在美国专利US4,036,945和US4,331,647中描述，其中包括参考文献。还可见Nisonoff等，Arch.Biochem.Biophys.，89：230(1960)；Porter，Biochem.J.，73：119(1959)；Edelman等，酶学的方法，第422页(Academic Press 1967)，和Coligan等，(eds.)，免疫学的当前方案，(John Wiley&Sons 1991)。
还可使用其它裂解抗体的方法，如分离重链从而形成单价轻-重链片段的方法，片段的进一步裂解或其它酶促，化学或基因技术，只要片段与被完整抗体识别的抗原结合。例如，Fv片段含有VH和VL链的联合。如Inbar等在Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA，69：2659(1972)中所述，这种联合是非共价的。选择性地，可变链可通过分子间的二硫键连接，或通过化学制剂，如戊二醛交联。见Sandu，Crit.Rev.Biotech.，12：437(1992)。
优选Fv片段含有VH和VL链，它们是通过肽键连接的。这些单链抗原结合蛋白(sFv)是通过构造结构基因而制备的，所述结构基因含有编码VH和VL结构域的DNA序列，其是通过寡核苷酸连接的。所述结构基因被插入到表达载体中，随后所述表达载体被引入到宿主细胞，如大肠杆菌中。所述重组宿主细胞利用桥连两个V结构域的肽键合成一种单一的多肽链。生产sFvs的方法在本领域中是熟知的。见Whitlow等，方法：酶学方法手册2：97(1991)；Brid等，Science，242：423(1988)；美国专利US4,946,778；Pack等，Bio/Technology，11：1271(1993)，和Sandhu，Crit.Rev.Biotech.，12：437(1992)。
抗体片段的另一个形式是编码单一互补决定区(CDR)的肽。CDR肽(“最小识别单位”)是通过构造编码目标抗体CDR的基因获得的。这种基因是通过聚合酶链反应从产生抗体的细胞的RNA合成可变区而制备的。见Larrick等，方法：酶学方法手册2：106(1991)；Ritter等，(eds.)，单克隆抗体：产生，工程改造和临床应用，第166-179页(CambridgeUniversity Press 1995)；Brich等，(eds.)，单克隆抗体：原理和应用，第137-185页(Wiley-Liss，Inc.1995)。
抗-粒细胞抗体的治疗用途
因为本发明疗法的抗体可识别存在于未成熟和成熟粒细胞中的抗原，因此本发明提供一种有效的，除去髓细胞白血病，特别是CML患者的恶性细胞的方法。如上所述，各种抗-粒细胞性抗体均可用于本发明的疗法中。
本发明预期了裸抗-粒细胞抗体作为治疗CML的重要治疗成分的用途。这种成分可含有多克隆抗-粒细胞抗体或单克隆抗-粒细胞抗体。
测定抗-粒细胞抗体结合特异性的方法为本领域那些技术人员所熟知。一般方法由Manson(ed.)在分子生物学方法：免疫化学方案，第105-116页(The Humana Press，Inc.1992)中描述。抗原决定部位的特异性还可通过使试验抗体与一组缺少特殊结构域的抗原结合来鉴定。
在本发明另一实施方案中，裸抗-粒细胞抗体可与其它癌症疗法，如免疫接合物疗法或化学疗法联合使用。这种联合方式比本领域先前所用的其它疗法更有利，这是因为它们可获得有效的结果，且毒素较少。因此，这种疗法消除或大大降低了通常与癌症疗法有关的消极副作用。在这种多模式方式中，补充的治疗成分可在给予裸抗-粒细胞抗体之前，同时或之后给予。
优选的免疫接合物包括放射性标记的抗体成分和抗-粒细胞抗体成分与免疫调制剂的接合物。放射性标记的免疫接合物可含有α-放射性同位素，β-放射性同位素，γ-放射性同位素，俄歇电子发射源，发射α-粒子的中子捕获剂或通过电子俘获而衰减的放射性同位素。适宜的放射性同位素包括198Au，32P，125I，131I，90Y，186Re，188Re，67Cu，211At，213Bi，224Ac等。硼附加物优选转化成α-发射源的中子捕获剂。
如上所述，放射性同位素可与抗体成分直接连接或经由螯合剂间接连接。例如，可使用螯合剂，对-溴乙酰氨基-苄基-四乙胺四乙酸(TETA)使67Cu与抗体成分接合，其中67Cu由于其61.5小时的半衰期及β-粒子和γ射线的充足供给而被看作是放射性免疫疗法的其中一种有希望的放射性同位素。见Gennaro等，(eds.)，REMINGTON’S药物科学，第624-652页(Mack Publishing Co.1990)。选择性地，可利用DTPA或DOTA使发射高能β-粒子的90Y与抗体成分偶联。此外，用131I直接放射性标记抗体成分的方法由Stein等，Antibody Immunoconj.Radiopharm.，4：703(1991)描述。选择性地，如上所述，硼附加物如碳硼烷可与抗体成分连接。
在另一实施方案中，免疫接合物可含有免疫调制剂部分。此处所用术语“免疫调制剂”包括细胞因子，干细胞生长因子，淋巴毒素，如肿瘤坏死因子(TNF)，和造血因子，如白介素(例如，白介素-1(IL-1)，IL-2，IL-3，IL-6，IL-10和IL-12)，集落刺激因子(例如粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，干扰素(例如，干扰素-α，-β和-γ)，被标为“S1因子”的干细胞生长因子，红细胞生成素和血小板生成素。适宜免疫调制剂部分的例子包括IL-2，IL-6，IL-10，IL-12，干扰素-γ，TNF-α等。
相关的免疫接合物是一种融合蛋白，它含有一个或多个抗体部分和一个免疫调制剂部分。有效的抗体部分包括与NCA-90或NCA-95结合的抗体成分。二价，三价和四价结构也可用于本发明中。
制造抗体-免疫调制剂融合蛋白的方法在本领域中是熟知的。例如，含白介素-2部分的抗体融合蛋白由Boleti等，Ann.Oncol.，6：945(1995)，Nicolet等，Cancer Gene Ther.，2：161(1995)，Becker等，Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA，93：7826(1996)，Hank等，Clin.Cancer Res.，2：1951(1996)和Hu等，Cancer Res.，56：4998(1996)描述。此外，Yang等描述了一种融合蛋白，它包括一个F(ab’)2片段和肿瘤坏死因子α部分。见Yang等，Hum.Antibodies Hybridomas 6：129(1995)。
这种免疫接合物和抗体-免疫调制剂融合蛋白可提供一种将免疫调制剂递送到靶细胞的方法，且它特别适于抗肿瘤细胞。免疫调制剂的细胞毒性作用在本领域中是熟知的。见Pessuto等(eds.)，生物技术和药剂学，第53-70页(Chapman&Hall 1993)。作为举例说明，干扰素可通过诱导各种细胞表面上的I类组织适合性抗原表达的增加而抑制细胞增殖，且因此可提高细胞毒性的T淋巴细胞所导致的细胞破坏速度。此外，据信肿瘤坏死因子，如TNF-α可通过诱导DNA裂解而产生细胞毒性作用。
制备其中抗体成分与毒素或化疗药物接合的治疗有效的免疫接合物。适于制备这种接合物的毒素和药物的例子是加利车霉素，蓖麻毒蛋白，相思豆毒蛋白，核糖核酸酶，DNA酶I，RNA酶，葡萄球菌肠毒素-A，美洲商陆抗病毒蛋白，gelonin，白喉菌素毒素，假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。见Pastan等，Cell，47：641(1986)；Goldenberg，CA，A Cancer Journal for Clinicians，44：43(1994)。例如，有效的免疫接合物的其中一个例子是与RNA酶接合的抗-NCA-90抗体。另一个例子是与加利车霉素接合的抗-CD33抗体。其它适宜的毒素是本领域熟知的，如蛋白抑制剂，DNA，RNA和细胞-周期毒物。
在另一个实施方案中，利用裸抗-粒细胞抗体的联合疗法可含有抗体-毒素融合蛋白。抗体-毒素融合蛋白是一种含有一个或多个抗体部分和毒素部分的融合蛋白。有效的抗体部分包括与NCA-90或NCA-95结合的抗体成分。二价，三价和四价结构也可用于本发明中。制造抗体-毒素融合蛋白的方法是本领域熟知的。例如，抗体-假单胞菌外毒素A融合蛋白已经由Chaudhary等，Nature，339：394(1989)，Brinkmann等，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA，88：8616(1991)，Batra等，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA，89：5867(1992)，Friedman等，J.Immunol.，150：3054(1993)，Wels等，Int.J.Can.，60：137(1995)，Fominaya等，J.Biol.Chem.，271：10560(1996)，Kuan等，Biochemistry，35：2872(1996)和Schmidt等，Int.J.Can.，65：538(1996)描述。含白喉毒素部分的抗体-毒素融合蛋白已经由Kreitman等，Leukemia，7：553(1993)，Nicholls等，J.Biol.Chem.，268：5302(1993)，Thompson等，J.Biol.Chem.，270：28037(1995)和Vallera等，Blood，88：2342(1996)描述。Deonarain等(Tumor Targeting，1：177(1995))描述了具有RNA酶部分的抗体-毒素融合蛋白，而Linardou等(CellBiophys.，24-25：243(1994))生产了一种含DNA酶I成分的抗体-毒素融合蛋白。Gelonin被用作Wang等所述的抗体-毒素融合蛋白中的毒素部分。见209th ACS National Meeting，Anaheim，CA，2-6 April，1995，Part1，BIOT005的摘要。作为另一个例子，Dohlsten等(Proc.Nat’lAcad.Sci.USA，91：8945(1994))报道了一种含葡萄球菌肠毒素-A的抗体-毒素融合蛋白。
用于制备免疫接合物的有效的癌症化疗药物包括加利车霉素，氮芥类，烷基磺酸盐，亚硝基脲，三氮烯，叶酸类似物，嘧啶类似物，嘌呤类似物，抗生素，表鬼臼毒素，铂配位复合物，激素等。适宜的化疗剂在REMINGTON’S药物科学(Mack Publishing Co.1995)和GOODMANAND GILMAN’S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OFTHERAPEUTICS(MacMillan Publishing Co.1985)中描述。其它适宜的化疗剂，如实验药物对于本领域的那些技术人员是已知的。
此外，治疗有效的免疫接合物可通过使光活化剂或染料与抗体成分接合而得到。荧光和其它色原或染料，如对可见光敏感的卟啉已经通过将适宜光对准损害处而用于检测并治疗损害。在疗法中，它被称为光辐射，光照疗法或光动力疗法。见Jori等，(eds.)，肿瘤和其它疾病的光动力疗法(Libreria Progetto 1985)；范登伯格，Chem.Britain，22：430(1986)。此外，已经将单克隆抗体与光活化染料偶联进行光照疗法。见Mew等，J.Immunol.，130：1473(1983)；Mew等，Cancer Res.，45：4380(1985)；Oseroff等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83：8744(1986)；Mew等，Photochem.Photobio1.，46：83(1987)；Hasan等，Prog.Clin.Biol.Res.，288：471(1989)；Tatsuta等，Lasers Surg.Med.，9：422(1989)；Pelegrin等，Cancer，67：2529(1991)。然而，这些早期研究没有包括内窥镜疗法的使用，特别是抗体片段或亚片段的使用。因此，本发明预期了含光活化剂或染料的免疫接合物的治疗用途。
本发明的多模式疗法还包括含两种或多种裸抗-粒细胞抗体的免疫疗法。在另一实施方案中，多模式疗法包括给予裸抗-粒细胞抗体，它是用针对存在于单一粒细胞前体上的抗原的裸抗体补充的。例如，裸MN-3抗体可与抗-CD33和/或抗-CD15抗体联合给药。
在本发明另一实施方案中，裸抗体是与诱导剂联合给予患者的，其中所述诱导剂可诱导或提高目标细胞类型中靶抗原的表达。各种诱导剂在本领域是熟知的。例如，已知三氧化二砷可上调NCA-90在急性前髓细胞白血病细胞中的表达。见Di Noto等，Tissue Antigens，54：597-602(1999)。同样，视黄酸也可提高NCA-90造急性前髓细胞白血病细胞中的表达。见Boccuni等，Tissue Antigens，52：1-8(1998)。
通过正向调节靶抗原在细胞表面上的表达，这种诱导剂可提高所给予的免疫疗法的功效。因此，在其中一个实施方案中，诱导剂是与本发明的裸抗体共同-给药的，从而提高疗法的毒性。
在另一实施方案中，诱导剂是与裸抗体共同给药的，从而增加疗法的治疗范围。通过诱导通常不在特殊细胞类型表面上显示的抗原的表达，诱导剂可扩展所述疗法对其它细胞类型和癌症的治疗潜力。例如，可给予视黄酸或三氧化二砷来正向调节急性前髓细胞白血病细胞中的NCA-90。见Di Noto等，Tissue Antigens，54：597-602(1999)；Boccuni等，Tissue Antigens，52：1-8(1998)。因此，本发明的抗体可用于治疗AML，及CML。
在另一种形式的多模式疗法中，受试者接受裸抗-粒细胞抗体和标准化学疗法。化疗剂的例子包括，但不限制于，柔红霉素，阿糖孢苷，6-硫代鸟嘌呤，依托泊苷，米托蒽醌，滴吖醌，去甲氧柔红霉素，高三尖杉酯碱，安吖啶，白消安，羟基脲，加利车霉素，CVB(1.5g/m2环磷酰胺，200-400mg/m2依托泊苷，和150-200mg/m2卡莫司汀)，C-MOPP(环磷酰胺，长春新碱，丙卡巴肼，和泼尼松)，CHOP(环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，和泼尼松)，间-BACOD(甲氨蝶呤，博莱霉素，阿霉素，环磷酰胺，长春新碱，地塞米松和甲酰四氢叶酸)和MACOP-B(甲氨蝶呤，阿霉素，环磷酰胺，长春新碱，泼尼松，博莱霉素，甲酰四氢叶酸)。其它有效的药物包括苯基丁酸盐和薯司他丁-1。
通常，所给予的裸抗-粒细胞抗体，免疫接合物，融合蛋白和其它治疗剂的剂量根据各种因素而变化，如患者的年龄，体重，身高，性别，一般的体检状况，疾病状况和先前的医疗史。通常，以大约1pg/kg-20mg/kg(药剂的量/患者的体重)的剂量为受试者提供抗体，免疫接合物或融合蛋白，当然也可根据情况不同而给予较低或较高的剂量。
抗体，抗体成分，免疫接合物或融合蛋白对患者的给药可以是静脉内，动脉内，腹膜内，肌肉内，皮下，胸膜内，鞘内给药，通过局部导管灌注或直接注射到受损处内。当通过注射给予治疗蛋白时，所述给药可以是持续输注或单一或多次的大丸剂。
本领域的那些普通技术人员已经意识到静脉内注射可提供一种有效的给药模式，这是由于其在迅速分布抗体方面的循环彻底性。然而，静脉内给药会受到血管屏障的限制，所述血管屏障包括脉管系统的内皮细胞和内皮下基质。且，血管屏障对于实体瘤对治疗抗体的吸收而言，更是一个值得注意的问题。淋巴组织瘤具有相对较高的血流速度，可促进有效的抗体递送。淋巴内的给药途径，如皮下或肌肉内注射，或淋巴管的导管插入也可提供一种治疗淋巴组织瘤的有效方法。
优选，以较低的蛋白剂量，如20-1500毫克蛋白/剂量给予裸抗-粒细胞抗体一次，或多次非肠道给药。选择性地，裸抗-粒细胞抗体可以20-1000毫克蛋白/剂量，或20-500毫克蛋白/剂量，或20-100毫克蛋白/剂量给药。
如上所述，本发明还预期了治疗方法，其中用免疫接合物或融合蛋白的给药补充裸抗-粒细胞抗体成分。在其中一种变化中，裸抗-粒细胞抗体是与低剂量放射性标记的抗-粒细胞抗体或片段共同给予的。作为第二种选择，裸抗-粒细胞抗体是与低剂量放射性标记的抗-粒细胞-细胞因子免疫接合物共同给药的。作为第三种选择，裸抗-粒细胞抗体是与未放射性标记的抗-粒细胞-细胞因子免疫接合物共同给药的。关于131I-标记的免疫接合物的“较低剂量”，优选15-40mCi，最优选20-30mCi。相反，90Y标记的免疫接合物的优选剂量为10-30mCi，最优选10-20mCi。
用于热中子活化疗法的，具有装载硼附加物的载体的免疫接合物通常是以相似方式进行的。然而，优选在中子辐射之前，等到非-目标免疫接合物清除之前进行。可使用与免疫接合物结合的抗体加速清除。见美国专利US4,624,846，其全部引入此处作为参考。
本发明的抗-粒细胞抗体，免疫接合物和融合蛋白可按照已知的方法配制，从而制备药学有效的组合物，由此使治疗蛋白与药学可接受的载体混合。如果组合物的给药可被受试患者耐受，那么它就是一种“药学上可接受的载体”。无菌的磷酸盐-缓冲生理盐水是药学上可接受载体的其中一个例子。其它适宜的载体是本领域熟知的。见REMINGTON’S药物科学(Mack Publishing Co.1995)。
为了进行治疗，以治疗有效量给予患者本发明所述的抗体和药学上可接受的载体。如果所给予的量是生理学显著的，那么抗体与选择性免疫接合物/融合蛋白，及药学上可接受载体的结合可以“治疗有效量”给药。如果药剂的存在导致受试患者生理学可检测的改变，那么它就是生理学显著的。在本范围内，如果药剂的存在导致靶肿瘤细胞生长的抑制，那么它是生理学显著的。
还可使用其它的药学方法控制治疗应用中，抗体，免疫接合物或融合蛋白的作用持续时间。控释制剂可通过使用聚合物结合或吸附抗体，免疫接合物或融合蛋白而制备。例如，生物相容的聚合物包括聚(乙烯-共-醋酸乙烯酯)基质和硬脂酸二聚物和癸二酸的聚酐共聚物基质。见Sherwood等，BioTechnology，10：1446(1992)。抗体(或免疫接合物)从这种基质释放的速度取决于蛋白的分子量，基质内抗体/免疫接合物/融合蛋白的量，及分散颗粒的大小。见Saltzman等，Biophys.J.，55：163(1989)；Sherwood等，BioTechnology，10：1446(1992)。其它固体给药形式在REMINGTON’S药物科学(Mack Publishing Co.1995)中描述。
本发明还预期了一种治疗方法，其中给予免疫调制剂来防止，减轻或逆转辐射-诱导的或药物-诱导的正常细胞，特别是造血细胞毒性。其它免疫调制剂疗法允许给予较高剂量的细胞毒性剂，这是由于受试哺乳动物的耐受性增加了。此外，其它免疫调制剂疗法可防止，减轻或逆转剂量-限制的骨髓毒性。适于其它疗法的免疫调制剂的例子包括G-CSF，GM-CSF，血小板生成素，IL-1，IL-3，IL-12等。其它免疫调制剂疗法的方法由Goldenberg，在美国专利US5,120,525中公开，其全部引入此处作为参考。
例如，重组IL-2可以6×105IU/kg作为大丸剂静脉内给药，或以18×106IU/m2/d的剂量连续输注。见Weiss等，J.Clin.Oncol.，10：275(1992)。选择性地，重组IL-2可以12×106IU的剂量皮下给药。Vogelzang等，J.Clin.Oncol.，11：1809(1993)。INF-γ可以1.5×106U的剂量皮下给药。见Lienard等，J.Clin.Oncol.，10：52(1992)。Nadeau等，(J.Pharmacol.Exp.Ther.，274：78(1995))指出重组IL-12的单一静脉内给药(42.5μg/kg)可提高恒河猴的IFN-γ水平。适宜的IL-2制剂包括PROLEUKIN(Chiron Corp.，Emeryville，CA)和TECELEUKIN(Hoffmann-La Roche，Inc.；Nutley，NJ)。ACTIMMUNE(Genentech，Inc.，South SanFrancisco，CA)是一种适宜的IFN-γ制剂。
提供下列实施例用于举例说明，而不是对本发明的限制。
实施例
1.使用裸抗-NCA-90抗体治疗CML的方法
用IFN-α2b治疗CML患者6个月，证明缓慢发展成加速期，骨髓中的Ph1细胞明显增加。此时，每周给患者输注500mg的裸人源化MN-3单克隆抗体，共输注4周。6周后，骨髓中的Ph1细胞降至非常低的数量，10周后则检测不到。1年后，患者证明迅速发展成贫血症和血小板减少症，这是通过Ph1细胞的增加证实的。重复4周的hMN3疗法。治疗2个月后，在骨髓中检测不到Ph1细胞，且红细胞和血小板均在正常水平。
2.利用含裸抗-NCA-90抗体的联合疗法治疗CML的方法
用IFN-α2b治疗CML患者6个月，证明缓慢发展成加速期，骨髓中的Ph1细胞明显增加。此时，每周给患者输注500mg的裸人源化MN-3单克隆抗体，共输注4周。6周后，骨髓中的Ph1细胞降至非常低的数量，10周后则检测不到。1年后，患者证明迅速发展成贫血症和血小板减少症，这是通过Ph1细胞的增加证实的。重复4周的hMN3疗法，但该疗法是与以相似剂量给药的，含人源化抗-CD33抗体的裸免疫疗法联合使用的。联合治疗2个月后，在骨髓中检测不到Ph1细胞，且红细胞和血小板均在正常水平。
3.使用裸抗-NCA-90抗体治疗APML的方法
视黄酸疗法是在诊断患有急性前髓细胞白血病的患者中开始的。当发现已经在恶性细胞上诱导了NCA-90时，给患者输注500mg的人源化MN-3。每周都重复该疗法，共进行4周。MN-3治疗后的骨髓检查证实恶性细胞经历了编程性细胞死亡。3个月后，患者骨髓中的正常细胞占优。
对于本领域那些普通技术人员来说，可对所公开的实施方案进行改变，这种改变落在本发明的范围之内，而本发明的范围是由下列权利要求限定的。