灰树花发酵液多糖提取方法.pdf

灰树花发酵液多糖提取方法
    本发明涉及食用菌提取物技术领域，是一种采用灰树花发酵液进行多糖提取的方法。

    灰树花是一种珍稀食药两用真菌。灰树花多糖具有抗肿瘤、抗高血压、降低血糖、抗肥胖、抗肝炎等药效。经国际医学专家试验表明，灰树花多糖抗肿瘤抑制率可达86.5％，比国际认证的抗癌新药“香菇多糖”抑制率高出32％。目前，灰树花提取多糖，一般采用灰树花子实体或菌丝。由于灰树花的人工栽培技术高、产量低、生产周期长、劳动强度大，并受自然条件的限制多，生态条件苛刻，产量难以大幅度提高。采用其子实体及菌丝提取多糖，成本昂贵，很难实现灰树花多糖的普遍应用。

    本发明的目的是，提供一种采用灰树花发酵液提取多糖的方法，可以大幅度降低灰树花提取多糖的生产成本，缩短灰树花多糖提取的时间，使灰树花多糖普遍应用成为现实。

    本发明的发明特点在于采用灰树花发酵液提取多糖。其方法是采用斜面菌种进行一级种子培养、二级种子培养及三级种子培养，再进行发酵培养，最后将发酵液的温度加热到60-100℃，搅拌速度为120-220r/min，维持1-3小时，经泵压将发酵液放入料槽中经板框压滤得到灰树花多糖。该提取液经配伍后即成口服液。斜面菌种组份是，淀粉150-250g，麦麸30-60g，蔗糖10-20g，葡萄糖3-10g，琼脂15-25g，水1000毫升。所述一级种子培养，二级种子培养及三级种子培养的组份是：玉米淀粉0.5-2％；蛋白胨0.1-0.3％，蔗糖0.5-2％，葡萄糖0.5-2％，KH2PO40.1-0.3％，MgSO40.05-0.15％。发酵培养的组份是：玉米淀粉0.5-2％；蛋白胨0.1-0.3％，KH2PO40.1-0.3％，MgSO40.05-0.15％，豆油适量。一级种子培养、二级种子培养及三级种子培养的发酵条件是，搅拌速度120-150r/min，通气量1∶0.5-v/v.min，培养温度25-30℃，培养时间，5-7天，接种量1-5％，罐压为0.3-0.5kg/cm2。发酵培养的发酵条件是：搅拌速度150-220r/min，通气量1∶0.5-1∶1v/v.min，培养温度20-30℃，培养时间7-12天，接种量10-15％，罐压0.3-0.5kg/cm2。

    采用本发明的方法提取灰树花多糖具有以下优点：由于不采用灰树花子实体或菌丝，因而解决了灰树花实体及菌丝人工栽培困难大、产量低、生态条件苛刻，成本昂贵的不足；可选用多糖高的优良菌株；由于人工栽培灰树花子实体生长期需要6-8个月，并对环境要求十分苛刻，本发明的方法只需25-35天，所以大幅度缩短了多糖提取的前处理时间；大幅度降低了劳动强度等。采用本发明所述方法提取灰树花粗多糖可达到30-40％。

    采用本发明的方法制取多糖所需胶囊时，即；当按照本发明所述方法终止发酵后，将发酵液的温度升到60-100℃，并向反应罐中加入0.1-0.2N的草酸铵、搅拌速度为120-220v/min，保持1-3小时，然后经泵压将发酵液放到料槽中经板框压滤，滤液减压浓缩，使之体积控制在原液的1/5-1/10。浓缩液加4倍体积地95％乙醇，醇析24-36小时，后板框过滤或用碟片离心机离心，将沉淀物真空干燥后，即为灰树花多糖粗品，可用来制备胶囊。

    采用本发明提取纯多糖的方法：

    终止发酵后，将发酵液温度升到60-100℃，并向反应罐中加入0.1-0.2N的草酸铵、搅拌速度为120-220v/min，保持1-2小时，然后板框过滤，将滤液减压浓缩。使其体积控制在原液的1/5-1/10，除去蛋白后、加入4-5倍体积的95％乙醇，醇析24-36小时，板框压滤、加收乙醇。用蒸馏水溶解沉淀，溶解度为10-20％硅胶或葡萄糖过柱，淋洗速度为1-2ml/min，减压浓缩到原体积的5-10％，再加4-5倍的乙醇醇析，将醇析后的沉淀真空冷冻干燥，后即得到灰树花的纯多糖。

    采用本发明方法提取灰树花多糖实施例：将筛选后的菌种加入1000毫升水，并加入马铃薯液体200g，麦麸液体60g(也可以只采用马铃薯或麦麸)，蔗糖14g，葡萄糖3g(也可在此两种糖中任选一种)，琼脂22g，将PH值保持自然，然后进行一级种子培养、二级种子培养及三级种子培养，这三级种子培养的组份是，玉米淀粉0.8％，蛋白胨(也可采用硫酸0.1-0.3％铵)，KH2P40.15％，MgSO40.1％，在培养罐中加入一定量的水，一般根据罐的容量决定，通常是罐容量的60％。上述三种种子培养的发酵条件是，搅拌速度120r/min，通气量1∶1v/v.min，培养温度25℃，培养时间7天，接种量4％，罐压0.5kg/cm2。再进行发酵培养，其组份是，玉米淀粉1％，蛋白胨0.2％，硫酸铵0.1％(当提取多糖纯品时不加入该成份)，KH2PO40.1％，MgSO40.1％，再加入适量豆油(也可加入菜子油替代)，便于消沫，PH值保持自然。此时的发酵条件是，搅拌速度200r/min，通气量1∶0.5v/v.min，培养温度25℃，培养时间10天，接种量10％，罐压0.3kg/cm2，当发酵终止后，将发酵液加热到70℃，搅拌速度为750r/min，维持2.5小时，然后经泵压将发酵液放到料槽中经板框压滤，得到灰树花多糖提取液。本方法中可以在发酵液加热时，加入0.1-0.2N的NaOH，也可加入0.1-0.2N的草酸铵，便于将培养物中的多糖浸提出来。