13氨基丙基哌啶4氨基酰胺类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途.pdf

本发明公开了如下结构式所示的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐、其药物组合物，以及该类化合物的制备方法。该类化合物或其药学上可接受的盐可作为CCR5的拮抗剂，用于制备治疗由CCR5介导的疾病的药物，用于制备治疗HIV感染、哮喘、风湿性关节炎、自身免疫性疾病和慢性梗阻性肺病(COPD)的药物。

1、  一种结构式I所示的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，

式中，R₁和R₃各自独立地为氢或者未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₈环烷基、C₃-C₈环烷基氧基、胺基、苯基、苄基、萘基、C₅-C₁₀芳香性杂环基或C₄-C₇饱和杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、卤素、巯基、羟基、CF₃、CN、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、SO₂NR₆R₇、OR₇和OCOR₇；
G为OCO、CO、NR₇CO或SO₂；
R₂为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苄基、萘基或C₅-C₁₀芳香性杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷巯基、卤素、巯基、羟基、CF₃、CN、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、OR₇和OCOR₇，其中C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷巯基可选择性地被卤素、羟基、氨基、C₃-C₇环烷基、氰基或巯基取代；
X为不存在、O或NH；
R₄为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₁-C₆亚烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆亚烷基、C₁-C₆亚烷氧基、C₂-C₆亚烯基或C₂-C₆亚炔基，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤素、氨基、硝基、腈基、巯基和羟基；
R₅为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₃-C₈环烷基、金刚烷基、苯基、苯酚基、苄基、萘基、C₅-C₁₀芳香性杂环基或C₄-C₇饱和杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤素、巯基、羟基、CF₃、CN、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、SO₂NR₆R₇、OR₇和OCOR₇，且NR₆R₇可共同组成环胺；
R₆为氢、羟基或者C₁-C₆烷基；
R₇为氢或者未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₈环烷基、苯基、苄基、萘基、C₅-C₁₀芳香性杂环基或C₄-C₇饱和杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆烷基、卤素、氨基、硝基、巯基、羟基、CN和CF₃。

2、  根据权利要求1所述的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征是，所述的化合物为如下式II所示的化合物：

其中，R₃为氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基或C₃-C₇环烷基，其中C₁-C₆烷基可选择性地被卤素、羟基、C₁-C₄烷氧基、C₃-C₇环烷基、氰基、巯基、氨基、硝基或C₁-C₄烷巯基取代；
X、R₄、R₅的定义与权利要求1相同；
R₈和R₉独立地为氢、卤素、羟基、氰基、巯基、硝基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷巯基，其中C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷巯基可选择性地被卤素、羟基、氨基、C₃-C₇环烷基、氰基或巯基取代。

3、  根据权利要求2所述的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征是，
R₃为C₁-C₄烷基；
X为不存在；
R₄为C₁-C₄亚烷基；
R₅为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苯酚基、萘基、金刚烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、吡喃基或吲哚基、喹啉基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基或苯并三唑基，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、卤素、羟基、CF₃、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、SO₂NR₆R₇、OR₇和OCOR₇，且NR₆R₇可共同组成环胺，其中R₆为氢或C₁-C₆烷基，R₇为氢、C₁-C₆烷基或C₁-C₆烷氧基；
R₈为氢、卤素或C₁-C₄烷基；
R₉为氢或卤素。

4、  根据权利要求3所述的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征是，所述的化合物为如下化合物之一：
1-乙酰基-N-(3-氯苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-苯基乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-苯基乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3，4-二氯苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-三氟甲基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-羟基苯基)乙酰胺)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3-吲哚基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-氟苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-氯苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-硝基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-萘基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-硝基-1-萘基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(2-萘基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-金刚烷基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(2-氧代乙氧基)苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-乙酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲烷磺酰氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-乙酰氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲氧基甲酰氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(1-吡咯烷基)磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-N，N-二甲胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(1-哌啶基)磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-吗啉基磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-正丙胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-叔丁胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲烷磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-吗啉乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(N-甲基哌嗪)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲酸甲酯哌啶-1-基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(N-叔丁氧羰基哌嗪)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-哌嗪乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(N-甲烷磺酰基哌嗪)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-吲哚)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-吡咯)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺、
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3-硝基苯酚基)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺和
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-乙酰基哌啶-4-基)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺。

5、  根据权利要求1所述的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征是，所述的化合物为如下化合物之一：
1-(3-(1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺基)丙基)哌啶基-4-(乙基)甲氨酸苄酯、
3-氯-4-甲基苯基(3-(4-(N-乙基-2-苯基乙酰氨基)哌啶-1-基)丙基)甲氨酸环己酯、
N-(1-(3-(N-(3-氯-4-甲基苯基)苯磺酰胺基)丙基)哌啶-4-基)-N-乙基-2-苯乙酰胺和
N-(1-(3-(1-(3-氯-4-甲基苯基)-3-环己脲基)丙基)哌啶-4-基)-N-乙基-2-苯乙酰胺。

6、  根据权利要求1～5中任一项所述的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征是，所述的药学上可接受的盐为1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物与盐酸、酒石酸、枸橼酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、硫酸或甲磺酸形成的盐。

7、  一种权利要求1所述的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅的定义与权利要求1相同；
P为叔丁氧羰基、苄氧羰基、苄基、9-芴甲氧羰基、CH₃CO或CH₃OCO其中之一的氨基保护基；
步骤a)：在碱存在下，R₂NH₂与1-溴-3-氯丙烷进行亲核取代反应，得到N-取代3-氯丙胺化合物I；
步骤b)：N-取代3-氯丙胺化合物I与醛或酮发生还原氨化反应、或与酸发生偶联反应、或与卤代烃发生亲核取代反应，得到N-三取代的3-氯丙胺化合物II；
步骤c)：在碱存在下，伯胺或仲胺化合物与N-三取代的3-氯丙胺化合物II发生亲核取代反应，得到4-N-保护的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基化合物III；
步骤d)：化合物III根据氨基保护基采取酸水解或碱水解或氢解，脱氨基保护基得到化合物IV；
步骤e)：游离胺化合物IV与酸发生偶联反应生成1-(3-氨基丙基)-哌啶-4-氨基酰胺VI；
或者，
步骤f)：在碱存在下，游离胺化合物IV与氯乙酰氯生成氯乙酰胺化合物V；
步骤g)：碱、氯乙酰胺化合物V与含杂原子化合物发生亲核取代反应，得到1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺VI。

8、  根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c)中的伯胺或仲胺化合物4-N-取代-4-氨基哌啶的制备步骤如下：

其中，R₃的定义与权利要求1相同；
P₁和P₂为叔丁氧羰基、苄氧羰基、苄基、9-芴甲氧羰基、CH₃CO或CH₃OCO其中之一的氨基保护基；
1-N-保护4-哌啶酮经还原氨化反应得到1-N-保护-哌啶VII，经4-氨基上保护基得到化合物VIII，化合物VIII经1-氨基脱保护基得到中间体4-N-取代-4-氨基哌啶IX。

9、  一种治疗由CCR5介导的疾病的药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

10、  根据权利要求9所述的药物组合物，其特征是，该组合物还包含蛋白酶抑制剂和/或逆转录酶抑制剂。

11、  权利要求1～6中任一项所述的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐作为CCR5的拮抗剂在制备治疗由CCR5介导的疾病的药物中的用途。

12、  根据权利要求11所述的用途，其特征是，在制备治疗HIV感染、哮喘、风湿性关节炎、自身免疫性疾病或慢性梗阻性肺病的药物中的用途。

1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途，该类化合物可作为CCR5拮抗剂。
背景技术
趋化因子是一类引导淋巴细胞定向迁移的细胞因子，在炎症反应、白细胞外渗、组织浸润、肿瘤发生、胚胎发育中有重要的作用。趋化因子属于分泌型信号分子大家族，分子量大约8至14kD。目前这一家族大约有45个成员，它们的共同特征是：含有四个位置保守的半胱氨酸(Cys)。根据其靠近N端的两个Cys间是否含有其它氨基酸，这一家族被分为四类：C-C、C-X-C、C-X₃-C和C。其中，CC类(又称β-趋化因子)和CXC类(又称α-趋化因子)是最重要的两类。
体内趋化因子的功能是通过趋化因子受体介导的。趋化因子受体的目前标准的命名是根据其特异结合的趋化因子的特征(例如，若其配基是CC类趋化因子亚家族，则它就被命名为CCR)。趋化因子的受体属于7次跨膜的G蛋白偶联受体家族(GPCR)，这类受体N端在细胞外，C端在细胞内，含有七个非常保守的由α螺旋构成的跨膜区域。它们在与激动剂结合时能偶联到G蛋白上，从而使细胞外的信号得以传递到细胞内。在激动剂的作用下，趋化因子受体能引起一系列的胞内信号及改变细胞的行为，如抑制腺苷酸环化酶(AC)，动员细胞内钙释放，激活一系列的蛋白激酶，引导细胞定向迁移(趋化)，影响细胞因子的释放等。
目前发现的趋化因子受体有19个，它们是CCR1-11，CXCR1-6，XCR1，CX₃CR1。趋化因子受体被认为是炎症反应和自身免疫性疾病的重要介导者(Gerard et al.，Nature Immunology，2，108-15(2001))，因此，趋化因子受体的调节剂(包括激动剂和拮抗剂)能够用于多种疾病，如炎症或过敏性疾病，过敏反应、自身免疫性疾病、炎症性肠道疾病、硬皮病、嗜酸细胞性肌炎、肿瘤发生和转移等。
作为趋化因子受体家族一成员的CCR5，其内源性激动剂有RANTES、MIP-1α、MIP-1β，它表达于外周血来源的树突状细胞，T淋巴细胞，单核细胞，巨噬细胞以及参与维持长期炎症反应的免疫细胞和炎症细胞。因此，调节CCR5的功能可能调节T细胞向炎症反应损伤处的募集，从而为治疗炎症反应和自身免疫性疾病提供了一个新的靶点，例如，CCR5缺失使得小鼠免于DSS诱导的严重的炎症及黏膜的损伤(Andres et al.，Journal of Immunology，164，6303-12(2000))；在小鼠上，CCR5的小分子拮抗剂TAK-779抑制了胶原诱导的关节炎(Yang et al.，European Journal of Immunology，32，2124-32(2002))。所以，CCR5的拮抗剂可用于下述疾病的治疗：哮喘和局部紊乱(如局部性皮炎，局部过敏)，风湿性关节炎，动脉硬化，牛皮癣，肉状瘤症和其它纤维化疾病，自身免疫性疾病(如多发性硬化症，炎症性肠炎)。此外，由于CD⁸⁺T细胞与慢性梗阻性肺病(COPD)有关(Cosio et al.，Chest，121，160S-165S，(2002))，因此，CCR5的拮抗剂还可能用于COPD的治疗。
除了在炎症和免疫反应中的作用，趋化因子受体还可能是某些寄生虫和病毒入侵细胞的重要受体。例如，Duffy受体是疟原虫进入红细胞的受体，缺少Duffy受体的人群不容易患上疟疾。更为重要的是，有几个趋化因子受体参与了HIV的入侵，被称为HIV进入宿主的共受体。
研究表明，Th细胞上的CD4分子对于HIV的侵入必不可少，但仅CD4不足以介导HIV与细胞的融合。进一步的研究发现，另外的被称为HIV侵入共受体的分子是趋化因子受体中的CCR5，CXCR4，CCR2b，CCR3，CCR8及孤儿受体V28，STRL-33，GPR1，GPR15，APJ(Domes et al.，Virology，235，179-90，(1997))。在体内，CCR5与CXCR4是HIV进入的主要共受体，CCR3也可能参与了一部分HIV的进入。CCR5是巨噬细胞向性(M-向性)HIV-1的共受体而CXCR4是T细胞向性(T-向性)的HIV-1的共受体。因此，CCR5对HIV的传播起重要作用，调节CCR5的物质能影响M向性HIV-1在人群中的传播及把疾病控制在早期。在体外实验中发现能与CCR5结合的趋化因子RANTES，MIP-1α及MIP-1β都能通过抑制M向性的HIV-1进入细胞从而抑制HIV感染。一些能与CCR5结合及拮抗CCR5功能的小分子化合物也在体外非常有效地抑制HIV侵入细胞。
综上所述，本领域迫切需要开发作为具有潜在药物用途的CCR5拮抗剂的化合物。
发明内容
本发明人对具有CCR5拮抗活性的化合物经过广泛而深入的研究，设计和合成了式I化合物。测试结果表明这些化合物是强效的CCR5拮抗剂，可作为HIV病毒的进入抑制剂，并可发展为抗艾滋病药物，在此基础上完成了本发明。
因此，本发明的目的是提供一类作为CCR5拮抗剂的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物。
本发明的另一目的是提供上述化合物的制备方法。
本发明的又一目的是提供一种包含治疗有效量的一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
本发明的还一目的是提供该类化合物作为CCR5拮抗剂，在制备治疗由CCR5介导的疾病的药物中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种式I所示的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，

式中，R₁和R₃各自独立地为氢或者未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₈环烷基、C₃-C₈环烷基氧基、胺基、苯基、苄基、萘基、C₅-C₁₀芳香性杂环基或C₄-C₇饱和杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、卤素、巯基、羟基、CF₃、CN、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、SO₂NR₆R₇、OR₇和OCOR₇；
G为OCO、CO、NR₇CO或SO₂；
R₂为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苄基、萘基或C₅-C₁₀芳香性杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷巯基、卤素、巯基、羟基、CF₃、CN、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、OR₇和OCOR₇，其中C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷巯基可选择性地被卤素、羟基、氨基、C₃-C₇环烷基、氰基或巯基取代；
X为不存在、O或NH；
R₄为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₁-C₆亚烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆亚烷基、C₁-C₆亚烷氧基、C₂-C₆亚烯基或C₂-C₆亚炔基，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤素、氨基、硝基、腈基、巯基和羟基；
R₅为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₃-C₈环烷基、金刚烷基、苯基、苯酚基、苄基、萘基、C₅-C₁₀芳香性杂环基或C₄-C₇饱和杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤素、巯基、羟基、CF₃、CN、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、SO₂NR₆R₇、OR₇和OCOR₇，且NR₆R₇可共同组成环胺；
R₆为氢、羟基或者C₁-C₆烷基；
R₇为氢或者未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₈环烷基、苯基、苄基、萘基、C₅-C₁₀芳香性杂环基或C₄-C₇饱和杂环基，所述的杂环包括1-3个选自N、O和S中的杂原子，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆烷基、卤素、氨基、硝基、巯基、羟基、CN和CF₃。
在本发明优选的实施方案中，本发明的化合物为如下式II所示的化合物：

其中，R₃为氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基或C₃-C₇环烷基，其中C₁-C₆烷基可选择性地被卤素、羟基、C₁-C₄烷氧基、C₃-C₇环烷基、氰基、巯基、氨基、硝基或C₁-C₄烷巯基取代；
X、R₄、R₅的定义如上所述；
R₈和R₉独立地为氢、卤素、羟基、氰基、巯基、硝基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷巯基，其中C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷巯基可选择性地被卤素、羟基、氨基、C₃-C₇环烷基、氰基或巯基取代。
对于式II所示的化合物，更优选的是：
R₃为C₁-C₄烷基；
X为不存在；
R₄为C₁-C₄亚烷基；
R₅为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苯酚基、萘基、金刚烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、吡喃基或吲哚基、喹啉基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基或苯并三唑基，所述的取代基选自下列原子或基团：C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、卤素、羟基、CF₃、NO₂、NR₆R₇、NR₆COR₇、NR₆COOR₇、NR₆SO₂R₇、COOR₇、COR₇、CONR₆R₇、SO₂R₇、SO₂NR₆R₇、OR₇和OCOR₇，且NR₆R₇可共同组成环胺，其中R₆为氢或C₁-C₆烷基，R₇为氢、C₁-C₆烷基或C₁-C₆烷氧基；
R₈为氢、卤素或C₁-C₄烷基；
R₉为氢或卤素。
在本发明中，特别优选的化合物是表1所列的化合物。
本发明的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类化合物药学上可接受的盐，按照药学上常规成盐的方法，为本发明的化合物物与盐酸、酒石酸、枸橼酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、硫酸或甲磺酸形成的盐。
在本发明的第二方面，提供了本发明化合物的制备方法，该方法可用下列所示流程进行制备：
通用流程：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅的定义如上所述；
P为氨基的常用保护基，例如叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、苄基(Bn)、9-芴甲氧羰基(Fmoc)、CH₃CO或CH₃OCO等。
步骤a)：在碱存在下，R₂NH₂与1-溴-3-氯丙烷进行亲核取代反应，得到N-取代3-氯丙胺化合物I；
步骤b)：N-取代3-氯丙胺化合物I与醛或酮发生还原氨化反应、或与酸发生偶联反应、或与卤代烃发生亲核取代反应，得到N-三取代的3-氯丙胺化合物II；
步骤c)：在碱存在下，伯胺或仲胺化合物与N-三取代的3-氯丙胺化合物II发生亲核取代反应，得到4-N-保护的1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基化合物III；
步骤d)：化合物III根据氨基的保护基采取酸水解(对Boc、Ac或CH₃OCO)或碱水解(对Fmoc)或氢解(对Cbz或Bn)，脱氨基保护基得到化合物IV；
步骤e)：游离胺化合物IV与酸发生偶联反应(酰氯法、活化酯法或混合酸酐法)生成1-(3-氨基丙基)-哌啶-4-氨基酰胺VI；或者，
步骤f)：在碱存在下，游离胺化合物IV与氯乙酰氯生成氯乙酰胺化合物V；
步骤g)：碱、氯乙酰胺化合物V与含杂原子化合物发生亲核取代反应，得到1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺VI。
上述步骤c)中的伯胺或仲胺化合物，即中间体4-N-取代-4-氨基哌啶化合物的制备方法如下。
中间体4-N-取代-4-氨基哌啶的制备流程

其中，R₃的定义如上所述；P₁和P₂为氨基的常用保护基，例如Boc、Cbz、Bn、Fmoc、CH₃CO或CH₃OCO等；1-N-保护4-哌啶酮经还原氨化反应得到1-N-保护-哌啶VII，经4-氨基上保护基(得到化合物VIII)，和化合物VIII经1-氨基脱保护基得到中间体4-N-取代-4-氨基哌啶IX。
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐，并可进一步包含药学上可接受的载体，还可以包含蛋白酶抑制剂和/或逆转录酶抑制剂。
在本发明的第四方面，提供了一种本发明式I化合物或药学上可接受的盐的用途，其作为CCR5的拮抗剂，在制备治疗由CCR5介导的疾病的药物中的应用。具体而言，用于制备治疗HIV感染、哮喘、风湿性关节炎、自身免疫性疾病和慢性梗阻性肺病(COPD)的药物。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围。
制备实施例
实施例1
化合物1：1-乙酰基-N-(3-氯苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-苯基乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺

步骤1：1-苄基-4-乙基氨基哌啶
向1-苄基-4-哌啶酮(5.67g，30mmol)的THF(50mL)溶液中加入乙胺盐酸盐(2.74g，33mmol)和甲醇(10mL)，并将得到的混合物室温搅拌10分钟。然后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(8.90g，42mmol)，并将反应混合物室温搅拌1.5小时。之后加入2M氢氧化钠溶液(50mL)淬灭反应，并将得到的混合物用乙醚(30mL)萃取3次，合并萃取得到的有机相，用无水Na₂SO₄干燥，然后旋转蒸发除去溶剂得到黄色油状的1-苄基-4-乙基氨基哌啶(5.03g，收率77％)，不需要纯化，可直接进行下一步反应。
步骤2：N-(1-苄基-4-哌啶基)-N-乙基-2-苯基乙酰胺
搅拌下向1-苄基-4-乙基氨基哌啶(4.59g，21mmol)在二氯甲烷的溶液中加入三乙胺(7.3mL)以保证完全溶解。混合物在冰浴下滴加苯乙酰氯(4.3mL)，之后反应混合物在此温度下继续搅拌2小时。蒸干溶剂，加入乙酸乙酯(50mL)稀释残留物，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na₂SO₄干燥，并旋转蒸发除去溶剂。定量得到的白色固体不需纯化可直接进行下一步反应。
步骤3：N-(4-哌啶基)-N-乙基-2-苯乙酰胺
向N-(1-苄基-4-哌啶基)-N-乙基-2-苯基乙酰胺(440mg，1.3mmol)在乙醇(10mL)的溶液中，加入甲酸铵(589mg，9.1mmol)。再向混合物加入10％钯碳(88mg)并充入氮气。将形成的混合物回流搅拌12小时，然后冷却并过滤。将滤液蒸发得到浅黄色浓稠的油，即为小标题化合物(225mg，收率70％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)7.33-7.23(m，5H)，3.75-3.70(d，J＝14.4Hz，2H)，3.32-3.24(m，2H)，3.16-3.03(m，J＝15.3Hz，12.3Hz，2H)，2.74-2.65(m，1H)，2.48-2.41(m，3H)，1.71-1.53(m，3H)，1.36-1.24(d，J＝12.3Hz，1H)，1.21-1.11(m，3H)；EI-MS：m/z 247[M+1]⁺，246[M]⁺，164，155，127，98，91，83，72。
步骤4：N-(3-氯丙基)-3-氯苯胺
在3-氯苯胺(1.05mL，10mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入1-溴-3-氯丙烷(5.08mL，50mmol)和碳酸钾(4.14g)。混合物在回流搅拌15小时后再加入1-溴-3-氯丙烷(3.0mL)，之后持续回流搅拌72小时。然后蒸干溶剂，向残留物中加水(20mL)，并用乙酸乙酯(30mL)稀释。分离有机相后，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。合并的有机相用饱和食盐水洗涤一次，用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝25/1(v/v))，得到产物为淡黄色的油(1.66g，收率82％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)7.09-7.04(t，J＝8.1Hz，1H)，6.67-6.65(d，J＝8.1Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.49-6.46(dd，J＝2.4Hz，5.7Hz，1H)，3.84(br-s，1H)，3.66-3.62(t，J＝6.3Hz，2H)，3.33-3.29(t，J＝6.6Hz，2H)，2.13-2.01(m，2H)。
步骤5：1-乙酰基-N-(3-氯苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺
N-(3-氯丙基)-3-氯苯胺(144mg，0.71mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，并在冰冷却下依次向该溶液中加入三乙胺(0.4mL，2.84mmol)和1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯(400mg，2.11mmol)。在相同温度下搅拌该混合物1小时。在冰浴下加入饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)，并用乙酸乙酯(20mL)稀释，分离有机相，硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1(v/v))，得到产物为白色的固体(211mg，收率84％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)7.42-7.41(d，J＝4.5，2H)，7.20(s，1H)，7.10-7.08(t，J＝4.2Hz，3.6Hz，1H)，4.54-4.50(d，J＝12.6Hz，1H)，3.81-3.77(t，J＝6.0Hz，7.8Hz，4H)，3.56-3.52(t，J＝6.6Hz，2H)，3.52-3.44(m，1H)，2.89-2.80(m，1H)，2.39-2.32(t，J＝10.2Hz，11.1Hz，2H)，2.12-1.97(m，4H)，2.05(s，3H)；EI-MS：m/z356[M]⁺，338，295，247，204，149，127，112，82，57；Mp：129-132℃。
步骤6：1-乙酰基-N-(3-氯苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-苯基乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物1)
1-乙酰基-N-(3-氯苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(79mg，0.22mmol)，N-(4-哌啶基)-N-乙基-2-苯基乙酰胺(60mg，0.24mmol)，碘化钾(40mg，0.24mmol)和碳酸钾(91mg，0.66mmol)的混合物溶于乙腈(5mL)中，溶液回流搅拌12小时。然后蒸干溶剂，用乙酸乙酯(15mL)稀释，并分别用饱和碳酸氢钠溶液和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1(v/v)至15/1(v/v))，得到产物为白色泡沫状物(66mg，收率53％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)7.39-7.06(m，9H)，4.55-4.50(d，J＝13.2Hz，1H)，3.78-3.62(m，5H)，3.58-3.46(m，1H)，3.31-3.23(m，2H)，3.07(br-s，1H)，2.87-2.79(t，J＝11.4Hz，2H)，2.47(br-s，1H)，2.36-2.21(m，3H)，2.05(s，3H)，1.77-1.54(m，10H)，1.30-1.09(m，5H)；EI-MS：m/z566[M]⁺，523，475，447，259，82，57；HREI计算值C₃₂H4₃ClN₄O₃(M⁺)：566.3024，测量值：566.3012。
实施例2
化合物2：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-苯基乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺

步骤1：1-苄基哌啶基-4-乙基甲氨酸叔丁酯
粗产物1-苄基-4-乙基氨基哌啶(参见实施例1步骤1)溶于1，4-二氧六环(80mL)和水(30mL)，在搅拌的同时分别分批加入三乙胺(13.0mL，100mmol)，和Boc₂O(10.9g，50mmol)，之后在室温下持续搅拌6小时。然后蒸干溶剂，用乙醚(100mL)稀释，并用食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。得到的产物(14.15g，两步收率89％)，不需进一步纯化，可直接进行下一步反应。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.06-1.10(3H，t，J＝6.9Hz)，1.46(9H，s)，1.61-1.77(4H，m)，1.98-2.06(2H，t，J＝11.1Hz)，2.90-2.94(2H，br-d，J＝11.7Hz)，3.12-3.15(2H，br-d，J＝6.6Hz)，3.48(2H，s)，3.95(1H，br-s)，7.30(5H，m)。
步骤2：N-(4-哌啶基)-N-乙基甲氨酸叔丁酯
向N-(1-苄基-4-哌啶基)-N-乙基甲氨酸叔丁酯(14.15g，44.46mmol)在甲醇(120mL)的溶液中，加入甲酸铵(28.03g，440mmol)。再向混合物加入10％钯碳(1.41g)并充入氮气。将形成的混合物回流搅拌12小时，反应过程中不时减压，放出产生的气体。然后冷却并过滤，将滤液蒸发得到无色浓稠的油，即小标题化合物(10g，收率70％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.07-1.12(3H，t，J＝6.9Hz)，1.46(9H，s)，1.50-1.70(5H，m)，2.09(1H，s)，2.61-2.68(2H，t，J＝11.7Hz)，3.10-3.13(4H，br-d，J＝10.5Hz)。
步骤3：N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺
在3-氯-4-甲基苯胺(14.16g，100mmol)的DMF(10mL)溶液中加入1-溴-3-氯丙烷(30.5mL，300mmol)，碘化钾(1.66g，10mmol)和三乙胺(60mL)。该混合物在室温下搅拌3天。然后蒸干溶剂，用乙醚(150mL)稀释，并用食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝25/1(v/v))，得到产物为淡棕色的油(18.64g，收率86％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 2.01-2.09(2H，m)，2.45(3H，s)，3.27-3.31(2H，t，J＝6.6Hz)，3.62-3.66(2H，t，J＝6.3Hz)，6.42-6.46(1H，dd，J＝2.4Hz，5.7Hz)，6.63-6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.98-7.01(1H，d，J＝8.1Hz)。
步骤4：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺
在搅拌下，N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺(18.64g，85.9mmol)溶解于二氯甲烷(350mL)，并在冰冷却下向该溶液中加入三乙胺(47.9mL，343.6mmol)，然后在此温度分批加入1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯(48.72g，257.7mmol)。加料完毕在相同温度下搅拌该混合物1小时，升到室温继续搅拌3小时。在冰冷却下加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(60mL)萃取3次。合并有机相，硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1(v/v))，得到产物为浅棕色的油(26.37g，收率83％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.54-1.84(4H，m)，2.00(3H，m)，2.05(3H，s)，2.34-2.41(2H，m)，2.43(3H，s)，2.85(1H，br-s)，3.51-3.55(2H，t，J＝6.3Hz)，3.74-3.79(2H，t，J＝7.2Hz)，4.50-4.53(1H，m)，6.96-6.99(1H，dd，J＝1.8Hz，6.0Hz)，7.18(1H，d，J＝2.1Hz)，7.30-7.33(1H，d，J＝8.1Hz)。
步骤5：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-N-乙基甲氨酸叔丁酯-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(10.3g，27.8mmol)，N-(4-哌啶基)-N-乙基甲氨酸叔丁酯(6.3g，27.8mmol)，碘化钾(4.6g，27.8mmol)和三乙胺(7.75mL，55.6mmol)的混合物溶于乙腈(70mL)中，溶液回流搅拌13小时。然后蒸干溶剂，用乙酸乙酯(100mL)稀释，并分别用饱和碳酸氢钠溶液和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1至50/1(v/v))，得到产物为白色泡沫状物(9.3g，收率60％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.05-1.09(3H，t，J＝6.9Hz)，1.45(9H，s)，1.45-1.80(12H，m)，1.91-1.99(2H，m)，2.04(3H，s)，2.26-2.39(4H，m)，2.42(3H，s)，2.80-3.12(4H，m)，3.62-3.67(2H，q，J＝5.4Hz，3.0Hz)，3.74-3.78(1H，br-d，J＝13.2Hz)，4.49-4.53(1H，br-d，J＝13.5Hz)，6.94-6.98(1H，dd，J＝2.4Hz，5.7Hz)，7.18(1H，d，J＝2.1Hz)，7.28-7.30(1H，d，J＝8.1Hz)。EI-MS：m/z562[M]+，416，378，364，335，241，227，154，98，82。
步骤6：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-乙基胺-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在搅拌下，步骤5产物(9.4g，16.63mmol)溶解于四氢呋喃(40mL)，并在室温下向该溶液中滴加4N盐酸(40mL)，然后在40℃温度下搅拌该混合物8.5小时。之后，蒸干溶液中的THF，水相用乙酸乙酯(60mL)萃取之后用2N氢氧化钠溶液调整溶液的pH值至10。接着水相用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并的有机相(只包括二氯甲烷相)用硫酸钠干燥，浓缩得到产物为白色固体(5.73g，收率74％)，不需要纯化，可直接进行下一步反应。
步骤7：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-苯乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物2)
搅拌时，在步骤6产物(95mg，0.2mmol)，苯乙酸(27mg，0.2mmol)，和三乙胺(0.08mL，0.6mmol)的DMF(4mL)溶液中加入HBTU(152mg，0.4mmol)。此混合物在室温下搅拌24小时。然后用乙酸乙酯(15mL)稀释，并分别用水和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1(v/v))，得到产物为白色泡沫状物(71mg，收率60％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.16(3H，m)，1.45-1.79(11H，m)，2.04(3H，s)，2.17-2.51(5H，m)，2.41(3H，s)，2.79-2.87(2H，m)，3.07-3.11(1H，br-d，J＝10.5Hz)，3.17-3.26(2H，m)，3.48-3.77(6H，m)，4.48-4.53(1H，br-d，J＝14.1Hz)，6.93-6.99(1H，m)，7.14-7.33(7H，m)；EI-MS：m/z580[M]⁺，489，416，378，364，335，259，154，141，98，82；HREI计算值C₃₃H4₅ClN₄O₃(M⁺)：580.3180，测量值：580.3185。
以下实施例3-16的反应条件与实施例2的相似，最后一个步骤用苯乙酸的衍生物来代替苯乙酸。
实施例3
化合物3：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3，4-二氯苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用3，4-二氯苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到白色泡沫状物(82mg，收率71％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.20-1.25(3H，t，J＝6.9Hz)，1.57-1.81(11H，m)，2.04(3H，s)，2.30-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.63(1H，br-s)，2.80-2.88(1H，t，J＝11.7Hz)，2.97(1H，br-s)，3.13-3.20(1H，m)，3.25-3.34(2H，m)，3.63-3.78(6H，m)，4.50-4.54(1H，br-d，J＝12.9Hz)，6.96-7.12(2H，m)，7.19(1H，br-s)，7.28-7.39(3H，m)；EI-MS：m/z 648[M]⁺，489，416，378，364，335，327，236，160，112，98，82；HREI计算值C₃₃H4₃Cl₃N₄O₃(M⁺)：648.2401，测量值：648.2395。
实施例4
化合物4：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用3，4，5-三甲氧基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到微黄色泡沫状固体(72mg，收率49％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.18-1.23(3H，t，J＝6.9Hz)，1.11-1.25(2H，m)，1.62-1.84(8H，m)，2.04(3H，s)，2.29-2.42(2H，m)，2.42(3H，s)，2.49-3.03(5H，m)，3.19-3.35(2H，m)，3.44-3.51(2H，q，J＝6.9Hz)，3.63-3.79(6H，m)，3.81(3H，s)，3.83(6H，s)，4.48-4.53(1H，br-d，J＝13.2Hz)，6.45-6.50(2H，d，J＝15.3Hz)，6.97-7.05(1H，br-s)，7.18-7.22(1H，m)，7.30-7.34(1H，m)；EI-MS：m/z 670[M]⁺，489，416，378，349，335，236，208，181，141，112，98，82；HREI计算值C₃₆H₅₁ClN₄O₆(M⁺)：670.3497，测量值：670.3501。
实施例5
化合物5：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用3，4-二甲氧基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到微黄色泡沫状固体(82mg，收率65％)
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.23(3H，m)，1.60-1.81(11H，m)，2.04(3H，s)，2.29-2.39(4H，m)，2.39(3H，s)，2.67(1H，br-s)，2.80-2.96(2H，m)，3.15-3.34(3H，m)，3.63-3.79(6H，m)，3.86(6H，s)，4.50-4.54(1H，br-d，J＝12.6Hz)，6.72-6.83(3H，m)，6.96-7.04(1H，m)，7.18-7.19(1H，m)，7.29-7.34(1H，m)；EI-MS：m/z 640[M]⁺，489，416，364，335，319，236，151，141，112，98，82；HREI计算值C₃₅H₄₉ClN₄O₅(M⁺)：640.3391，测量值：640.3383。
实施例6
化合物6：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-三氟甲基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用4-三氟甲基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状固体(64mg，收率52％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.20-1.25(4H，m)，1.57-1.82(10H，m)，2.04(3H，s)，2.33-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.46-2.58(1H，m)，2.68-2.88(1H，m)，2.96-3.00(1H，br-s)，3.20-3.36(3H，m)，3.59-3.79(6H，m)，4.50-4.54(1H，d，J＝12.9Hz)，6.97-7.05(1H，q，J＝7.5Hz)，7.19(1H，br-s)，7.28-7.41(3H，m)，7.56-7.58(2H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 648[M]⁺，550，489，416，364，327，284，236，167，112，98，82；HREI计算值C₃₄H₄₄ClF₃N₄O₃(M⁺)：648.3054，测量值：648.3062。
实施例7
化合物7：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-羟基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用4-羟基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状固体(120mg，收率67％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.25(4H，m)，1.62-1.78(11H，m)，2.05(3H，s)，2.36-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.56(1H，br-s)，2.80-2.93(2H，m)，3.09-3.13(1H，m)，3.21-3.28(2H，m)，3.59-3.79(6H，m)，4.49-4.54(1H，br-d，J＝13.5Hz)，6.75-6.78(2H，m)，6.96-7.09(3H，m)，7.18-7.19(1H，m)，7.26-7.33(1H，m)；EI-MS：m/z 596[M]⁺，489，364，335，319，275，141，127，98，57；HREI计算值C₃₃H₄₅ClN₄O₄(M⁺)：596.3129，测量值：596.3144。
实施例8
化合物8：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用4-甲氧基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(59mg，收率42％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.25(3H，m)，1.58-1.88(11H，m)，2.04(3H，s)，2.20-2.42(5H，m)，2.42(3H，s)，2.70-2.88(2H，m)，3.02-3.04(1H，m)，3.22-3.32(2H，m)，3.62-3.78(6H，m)，3.78(3H，s)，4.50-4.55(1H，br-d，J＝13.2Hz)，6.83-6.86(2H，d，J＝8.4Hz)，6.99-7.08(1H，m)，7.12-7.20(3H，m)，7.27-7.36(1H，m)；EI-MS：m/z 610[M]⁺，489，416，364，335，319，289，236，141，121，112，98，82，57；HREI计算值C₃₄H₄₇ClN₄O₄(M⁺)：610.3286，测量值：610.3288。
实施例9
化合物9：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3-吲哚基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用3-吲哚基乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到微棕色泡沫状物(45mg，收率43％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.18-1.25(3H，m)，1.29-1.34(1H，br-d，J＝12.3Hz)，1.61-1.90(10H，m)，2.04(3H，s)，2.22-2.41(5H，m)，2.41(3H，s)，2.79-2.88(2H，m)，2.95-2.99(1H，m)，3.23-3.35(2H，m)，3.56-3.84(6H，m)，4.49-4.54(1H，br-d，J＝13.5Hz)，6.93-7.02(1H，ddd，J＝2.1Hz，7.8Hz，9.6Hz)，7.10-7.21(4H，m)，7.26-7.38(2H，m)，7.54-7.64(1H，dd，J＝7.2Hz，17.4Hz)，8.21-8.41(1H，br-d)；EI-MS：m/z 619[M]⁺，489，463，364，335，298，202，141，130，112，98，57；HREI计算值C₃₅H₄₆ClN₅O₃(M⁺)：619.3289，测量值：619.3287。
实施例10
化合物10：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-氟苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用4-氟苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到微黄色泡沫状物(83mg，收率68％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.14-1.26(4H，m)，1.57-1.82(10H，m)，2.04(3H，s)，2.29-2.42(5H，m)，2.42(3H，s)，2.79-2.97(2H，m)，3.11-3.18(1H，br-s)，3.22-3.31(2H，m)，3.58-3.78(6H，m)，4.49-4.54(1H，m)，6.97-7.02(3H，t，J＝8.4Hz)，7.18-7.24(3H，m)，7.28-7.33(1H，m)；EI-MS：m/z 598[M]⁺，489，416，364，335，291，277，98，82，57；HREI计算值C₃₃H₄₄ClFN₄O₃(M⁺)：598.3086，测量值：598.3077。
实施例11
化合物11：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-氯苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用4-氯苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(77mg，收率62％)
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.18-1.25(3H，m)，1.42(1H，m)，1.57-1.84(10H，m)，2.04(3H，s)，2.29-2.47(4H，m)，2.42(3H，s)，2.62-2.69(1H，br-s)，2.79-2.88(1H，m)，2.94-2.99(1H，br-s)，3.15-3.33(3H，m)，3.58-3.79(6H，m)，4.48-4.54(1H，m)，6.96-7.04(1H，ddd，J＝1.8Hz，8.4Hz，6.3Hz)，7.14-7.21(3H，m)，7.26-7.33(3H，m)；EI-MS：m/z 614[M]⁺，489，416，364，335，293，112，98，82，57；HREI计算值C₃₃H₄₄Cl₂N₄O₃(M⁺)：614.2790，测量值：614.2773。
实施例12
化合物12：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-硝基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用4-硝基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到红棕色泡沫状物(143mg，收率59％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.11-1.28(4H，m)，1.53-1.87(10H，m)，2.04(3H，s)，2.13-2.45(3H，m)，2.41(3H，s)，2.58-2.87(4H，m)，3.23-3.38(3H，m)，3.62-3.86(6H，m)，4.49-4.53(1H，br-d，J＝13.2Hz)，7.01-7.04(1H，m)，7.19-7.20(1H，d，J＝1.8Hz)，7.31-7.34(1H，d，J＝8.1Hz)，7.40-7.50(2H，m)，8.16-8.19(2H，d，J＝8.7Hz)；EI-MS：m/z 625[M]⁺，489，416，364，335，304，236，141，137，112，98，82；HREI计算值C₃₃H₄₄ClN₅O₅(M⁺)：625.3031，测量值：625.3036。
实施例13
化合物13：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-萘基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用1-萘基乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(82mg，收率65％)。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ 1.04-1.24(4H，m)，1.44-1.93(10H，m)，1.97(3H，s)，1.98-2.12(2H，m)，2.23-2.34(3H，m)，2.34(3H，s)，2.66-2.92(3H，m)，3.21-3.27(2H，m)，3.39-3.81(4H，m)，4.05-4.08(2H，d，J＝13.6Hz)，4.41-4.45(1H，d，J＝17.6Hz)，6.83-6.91(1H，m)，7.07-7.10(1H，m)，7.19-7.23(2H，m)，7.28-7.49(3H，m)，7.60-7.99(3H，m)；EI-MS：m/z 631[M+1]⁺，489，416，335，309，141，85，57；HREI计算值C₃₇H₄₈ClN₄O₃(M+1⁺)：631.3415，测量值：631.3400。
实施例14
化合物14：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-硝基-1-萘基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用4-硝基-1-萘基乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到浅棕色泡沫状物(72mg，收率53％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.12-1.33(3H，m)，1.60-1.90(11H，m)，2.04(3H，s)，2.09-2.34(5H，m)，2.42(3H，s)，2.78-2.88(2H，m)，3.02-3.09(1H，m)，3.27-3.51(3H，m)，3.55-3.78(3H，m)，4.11-4.20(2H，m)，4.49-4.54(1H，m)，6.92-7.03(1H，m)，7.17-7.19(1H，m)，7.28-7.31(1H，m)，7.38-7.78(3H，m)，7.85-7.96(1H，m)，8.03-8.59(2H，m)；EI-MS：m/z 675[M]⁺，645，630，489，462，416，364，335，309，141，112，98，82；HREI计算值C₃₇H₄₆ClN₅O₅(M⁺)：675.3187，测量值：675.3188。
实施例15
化合物15：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(2-萘基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用2-萘基乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(77mg，收率61％)。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ 1.11-1.33(4H，m)，1.59-1.77(10H，m)，2.03(3H，s)，2.19-2.41(4H，m)，2.41(3H，s)，2.78-2.86(3H，m)，3.00-3.03(1H，m)，3.25-3.36(2H，m)，3.56-3.68(3H，m)，3.72-3.77(1H，d，J＝13.5Hz)，4.10-4.15(2H，d，J＝15.6Hz)，4.48-4.53(1H，d，J＝13.2Hz)，6.92-7.01(1H，m)，7.14-7.18(1H，m)，7.26-7.56(5H，m)，7.75-8.05(3H，m)；EI-MS：m/z 630[M]⁺，489，416，335，309，268，141，98，85，71，57；HREI计算值C₃₇H₄₇ClN₄O₃(M⁺)：630.3337，测量值：630.3339。
实施例16
化合物16：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-金刚烷基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用1-金刚烷基乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到白色泡沫状物(96mg，收率78％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.16(1H，m)，1.61-1.83(24H，m)，1.90-2.05(5H，m)，2.05(3H，s)，2.05-2.11(3H，m)，2.32-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.80-2.96(3H，m)，3.24-3.30(2H，q，J＝6.6Hz)，3.60-3.79(3H，m)，4.49-4.54(1H，d，J＝13.8Hz)，6.96-6.98(1H，d，J＝8.1Hz)，7.18(1H，s)，7.28-7.31(1H，d，J＝8.4Hz)；EI-MS：m/z 638[M]⁺，540，416，335，331，317，221，141，135，98，82；HREI计算值C₃₇H₅₅ClN₄O₃(M⁺)：638.3963，测量值：638.3956。
实施例17
化合物17：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(2-氧代乙氧基)苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
搅拌时，在化合物7(120mg，0.2mmol)和三乙胺(0.08mL，0.6mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中滴加醋酸酐(0.03mL，0.3mmol)。此混合物在室温下搅拌过夜。然后用乙酸乙酯(20mL)稀释，并分别用水和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1至25/1(v/v))，得到产物为白色泡沫状物(53mg，收率41％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.25(4H，m)，1.56-1.93(10H，m)，2.04(3H，s)，2.26-2.41(3H，m)，2.28(3H，s)，2.41(3H，s)，2.79-2.95(4H，m)，3.20-3.35(3H，m)，3.62-3.79(6H，m)，4.48-4.52(1H，d，J＝12.9Hz)，6.99-7.02(2H，d，J＝8.1Hz)，7.08-7.10(1H，m)，7.18-7.26(3H，m)，7.34-7.36(1H，m)；EI-MS：m/z 638[M]⁺，489，416，364，335，317，179，141，112，108，82，57；HREI计算值C3₅H₄₇ClN₄O₅(M⁺)：638.3235，测量值：638.3249。
实施例18
化合物18：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-乙酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-乙酰基苯乙酸乙酯
苯乙酸乙酯(3.35g，20mmol)溶于干燥的二硫化碳(15mL)，所得溶液用冰浴冷却，在搅拌时慢慢加入无水的三氯化铝(6.67g，50mmol)。之后保持在0℃搅拌的同时加入乙酰氯(1.85mL，26mmol)，混合物回流反应12小时后用碎冰淬灭。混合物用乙醚(50mL)稀释，再分别用饱和碳酸氢钠溶液和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。残留物放进冰箱冷冻，然后过滤得到的固体即为产物。4-乙酰基苯乙酸乙酯用石油醚重结晶得到白色针状晶体(500mg，收率12％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.22-1.27(3H，dt，J＝7.2Hz，1.2Hz)，2.59(3H，s)，3.67(2H，s)，4.12-4.19(2H，q，J＝7.2Hz，6.9Hz)，7.37-7.39(2H，d，J＝8.1Hz)，7.90-7.93(2H，d，J＝8.1Hz)；Mp：62-64℃。
步骤2：4-乙酰基苯乙酸
4-乙酰基苯乙酸乙酯(234mg，1.13mmol)溶于50％的硫酸溶液(10mL)中室温下搅拌过夜。然后过滤得到的固体，并用少量冰水洗，烘干得到白色粉状固体(198mg，收率98％)。
Mp：106-109℃
步骤3：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-乙酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物18)
用4-乙酰基苯乙酸代替实施例2步骤7的苯乙酸，该步骤反应过程与实施例2步骤7相同，得到白色泡沫状物(60mg，收率48％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.14(1H，m)，1.18-1.25(5H，m)，1.57-1.85(10H，m)，2.04(3H，s)，2.30-2.42(3H，m)，2.42(3H，s)，2.59(3H，s)，2.79-2.92(2H，m)，3.09-3.17(1H，br-s)，3.24-3.33(2H，m)，3.46-3.78(6H，m)，4.49-4.54(1H，d，J＝12.9Hz)，6.94-7.06(1H，m)，7.17-7.19(1H，m)，7.28-7.37(3H，m)，7.89-7.92(2H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 622[M]⁺，489，416，364，335，301，236，141，98，82；HREI计算值C₃₃H₄₇ClN₄O₄(M⁺)：622.3286，测量值：622.3289。
实施例19
化合物19：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
化合物12(1.52g，2.5mmol)的乙醇(20mL)溶液中加入二氯亚锡(2.37g，12.5mmol)。该混合物在氮气保护下回流搅拌3小时后用1N烧碱溶液稀释，用乙酸乙酯(25mL)萃取，并过滤掉不溶物。分离有机相，并用乙酸乙酯(25mL)再次萃取水相。合并的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1至25/1(v/v))，得到产物为微棕色泡沫状物(926mg，收率64％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.07-1.32(4H，m)，1.56-1.79(10H，m)，2.04(3H，s)，2.23-2.42(5H，m)，2.42(3H，s)，2.80-3.01(5H，m)，3.21-3.28(2H，q，J＝6.9Hz)，3.51-3.78(6H，m)，4.48-4.53(1H，d，J＝13.5Hz)，6.60-6.65(2H，m)，6.93-7.03(3H，m)，7.17-7.18(1H，t，J＝2.1Hz)，7.25-7.30(1H，d，J＝8.4Hz)；EI-MS：m/z 595[M]⁺，463，416，364，335，274，141，85，71，57；HREI计算值C₃₃H₄₆ClN₅O₃(M⁺)：595.3289，测量值：595.3285。
实施例20
化合物20：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲烷磺酰氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在化合物19(93mg，0.156mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三乙胺(0.043mL，0.312mmol)。混合物冷却到0℃后滴加甲磺酰氯(0.014mL，0.187mmol)，升到室温继续搅拌1小时。反应物用二氯甲烷(10mL)稀释，食盐水洗，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝25/1至15/1(v/v))，得到产物为淡黄色泡沫状物(79mg，收率75％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.43(4H，m)，1.57-1.88(11H，m)，2.04(3H，s)，2.30-2.42(3H，m)，2.42(3H，s)，2.79-2.89(1H，m)，3.06-3.13(1H，m)，3.24-3.39(2H，m)，3.39(6H，s)，3.61-3.80(5H，m)，4.48-4.54(1H，m)，6.96-7.08(1H，br-d)，7.17-7.23(1H，m)，7.26(1H，s)，7.29-7.39(5H，m)；EI-MS：m/z 673[M]⁺，489，416，352，335，184，154，106，82；HREI计算值C₃₄H₄₈ClN₅O₅S(M⁺)：673.3065，测量值：673.3087。
实施例21
化合物21：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-乙酰氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在化合物19(106mg，0.178mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三乙胺(0.05mL，0.356mmol)。混合物冷却到0℃后滴加乙酰氯(0.014mL，0.195mmol)，升到室温继续搅拌0.5小时。反应物用二氯甲烷(15mL)稀释，食盐水洗，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝20/1至15/1(v/v))，得到产物为微黄泡沫状物(89mg，收率78％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.36(5H，m)，1.57-1.84(11H，m)，2.04(3H，s)，2.15(3H，s)，2.24-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.79-2.98(3H，m)，3.23-3.29(2H，m)，3.52-3.79(5H，m)，4.49-4.54(1H，m)，6.94-7.00(1H，m)，7.15-7.18(3H，d，J＝7.8Hz)，7.26-7.31(1H，m)，7.41-7.46(2H，m)，7.58-7.67(1H，m)；EI-MS：m/z 637[M]⁺，489，416，335，316，154，149，141，106，82；HREI计算值C₃₅H₄₈ClN₅O₄(M⁺)：637.3395，测量值：637.3401。
实施例22
化合物22：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲氧基甲酰氨基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在化合物19(88mg，0.147mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三乙胺(0.04mL)。混合物冷却到0℃后滴加氯甲酸甲酯(0.17mL，0.22mmol)，升到室温继续搅拌过夜。反应物用二氯甲烷(10mL)稀释，食盐水洗，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝25/1至10/1(v/v))，得到产物为微黄泡沫状物(66mg，收率68％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.342(4H，m)，1.60-1.81(15H，m)，2.04(3H，s)，2.24-2.41(3H，m)，2.41(3H，s)，2.80-2.88(2H，m)，3.22-3.29(2H，q，J＝6.9Hz)，3.59-3.67(6H，m)，3.76(3H，s)，4.52-4.53(1H，m)，6.63-6.67(1H，m)，6.93-7.01(1H，m)，7.16-7.19(1H，d，J＝7.5Hz)，7.27-7.33(3H，m)；EI-MS：m/z621[M-32]⁺，489，463，416，364，335，300，274，141，112，98，82。
实施例23
化合物23：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(1-吡咯烷基)磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-氯磺酰基苯乙酸乙酯
在40℃时，向搅拌的苯乙酸乙酯(8.2g，50mmol)中滴加氯磺酸(16.6mL，250mmol)。滴加完毕，混合物在室温继续搅拌0.5小时。之后反应物倒在碎冰上，并用二氯甲烷(50mL)萃取3次，合并的有机相用食盐水洗，硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝6/1(v/v))，得到黄色的油(7.4g，收率56％)。
步骤2：4-(1-吡咯烷基)磺酰基苯乙酸乙酯
4-氯磺酰基苯乙酸乙酯(524mg，2mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液冷却到0℃后滴加吡咯烷(0.2mL，2.4mmol)和三乙胺(0.84mL)。混合物升到室温继续搅拌1小时。反应物用二氯甲烷(20mL)稀释，食盐水洗，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝3/1(v/v))，得到产物为黄色的油(378mg，收率63％)。
步骤3：4-(1-吡咯烷基)磺酰基苯乙酸
4-(1-吡咯烷基)磺酰基苯乙酸乙酯(352mg，1.18mmol)溶于2N的氢氧化钠溶液(10mL)和甲醇(10mL)的混合溶液中，室温下搅拌1.5小时。蒸干甲醇，用少量水稀释，乙酸乙酯(10mL)萃取后的水相用1N盐酸调整pH值至2，再用二氯甲烷(10mL)萃取3次。合并的有机相(只包括二氯甲烷相)用食盐水洗，硫酸钠干燥并在减压下浓缩产生的固体经重结晶(石油醚/二氯甲烷混合溶剂)得到白色针状晶体(200mg，收率98％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.74-1.79(4H，p，J＝3.3Hz)，3.22-3.26(4H，t，J＝6.6Hz)，7.43-7.46(2H，d，J＝7.8Hz)，7.78-7.81(2H，d，J＝8.1Hz)；Mp：123-124℃。
步骤4：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(1-吡咯烷基)磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物23)
采用4-(1-吡咯烷基)磺酰基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(50mg，收率35％)。
  ¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.12-1.25(4H，m)，1.63-1.76(10H，m)，1.76-2.04(3H，m)，2.04(3H，s)，2.15-2.25(2H，m)，2.34-2.55(4H，m)，2.42(3H，s)，2.76-2.88(3H，m)，3.24(4H，br-s)，3.33-3.35(3H，d，J＝6.0Hz)，3.67-3.79(5H，m)，4.49-4.53(1H，d，J＝12.9Hz)，6.98-7.09(1H，m)，7.19(1H，br-s)，7.27-7.30(1H，m)，7.38-7.41(2H，d，J＝8.4Hz)，7.76-7.79(2H，d，J＝7.8Hz)；EI-MS：m/z 713[M]⁺，578，392，335，225，154，112，70；HREI计算值C₃₇H₅₂ClN₅O₅S(M⁺)：713.3378，测量值：713.3355。
实施例24
化合物24：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-N，N-二甲胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-N，N-二甲胺磺酰基苯乙酸
步骤2中采用二甲胺代替吡咯啉，反应过程与实施例23步骤1、2、3相同，得到白色针状晶体(450mg，收率53％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 2.71(6H，s)，3.74(2H，s)，7.45-7.48(2H，d，J＝8.1Hz)，7.73-7.76(2H，d，J＝8.4Hz)；Mp：120-121℃。
步骤2：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-N，N-二甲胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物24)
采用4-N，N-二甲胺磺酰基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(77mg，收率49％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.18-1.28(4H，m)，1.61-1.89(10H，m)，2.04(3H，s)，2.20-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.45-2.50(1H，m)，2.69(3H，s)，2.70(3H，s)，2.80-2.91(2H，m)，3.05-3.08(1H，br-s)，3.29-3.33(2H，m)，3.50-3.68(3H，m)，3.74-3.80(3H，m)，4.48-4.54(1H，m)，6.95-7.01(1H，m)，7.17-7.19(1H，m)，7.29-7.31(1H，d，J＝7.8Hz)，7.40-7.45(2H，m)，7.71-7.73(2H，d，J＝7.8Hz)；EI-MS：m/z 687[M]⁺，644，489，419，366，335，199，154，112，98，82，57；HREI计算值C₃₅H₅₀ClN₅O₅S(M⁺)：687.3221，测量值：687.3204。
实施例25
化合物25：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(1-哌啶基)磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-(1-哌啶基)磺酰基苯乙酸
步骤2中采用哌啶代替吡咯啉，反应过程与实施例23步骤1、2、3相同，得到白色片状晶体(323mg，收率34％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.40-1.45(2H，m)，1.60-1.67(4H，m)，2.97-3.00(4H，t，J＝5.7Hz，5.1Hz)，3.73(2H，s)，7.43-7.46(2H，d，J＝7.8Hz)，7.70-7.73(2H，d，J＝7.8Hz)；Mp：114-115℃。
步骤2：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-(1-哌啶基)磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物25)
采用4-(1-哌啶基)磺酰基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到黄色泡沫状物(35mg，收率24％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.13-1.25(5H，m)，1.63-1.70(11H，m)，1.75-1.92(5H，m)，2.05(3H，s)，2.19-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.75-2.89(3H，m)，2.97-3.01(4H，m)，3.27-3.38(3H，m)，3.64-3.85(5H，m)，4.50-4.55(1H，m)，7.03-7.07(1H，m)，7.21(1H，s)，7.33-7.35(1H，m)，7.39-7.41(2H，d，J＝7.8Hz)，7.68-7.71(2H，d，J＝7.8Hz)；EI-MS：m/z 727[M]⁺，684，406，364，335，239，154，112，98，84；HREI计算值C₃₈H₅₄ClN₅O₅S(M⁺)：727.3534，测量值：727.3560。
实施例26
化合物26：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-吗啉基磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-(1-吗啉基)磺酰基苯乙酸
步骤2中采用吗啉代替吡咯烷，反应过程与实施例23步骤1、2、3相同，得到白色针状晶体(207mg，70％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 2.98-3.02(4H，t，J＝4.8Hz)，3.73-3.76(4H，t)，3.74(2H，s)，7.47-7.49(2H，d，J＝8.4Hz)，7.71-7.73(2H，d，J＝8.1Hz)；Mp：71-73℃。
步骤2：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-吗啉基磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物26)
采用4-(1-吗啉基)磺酰基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到微黄色泡沫状物(56mg，收率42％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.20-1.26(3H，m)，1.38-1.45(1H，m)，1.61-1.83(11H，m)，2.04(3H，s)，2.25-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.80-2.88(2H，m)，2.96-3.01(5H，m)，3.26-3.33(2H，m)，3.61-3.80(10H，m)，4.49-4.54(1H，br-d，J＝13.2Hz)，6.93-7.01(1H，m)，7.17-7.20(1H，m)，7.26-7.31(1H，m)，7.42-7.45(2H，d，J＝8.1Hz)，7.68-7.71(2H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 729[M]⁺，489，408，364，335，319，236，141，112，98，82，57；HREI计算值C₃₇H₅₂ClN₅O₆S(M⁺)：729.3327，测量值：729.3351。
实施例27
化合物27：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-正丙胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-正丙胺磺酰基苯乙酸
在实施例23步骤2中采用正丙胺代替吡咯烷，反应过程与实施例23步骤1、2、3相同，得到白色粒状晶体(190mg，收率24％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 0.84-0.89(3H，t，J＝7.5Hz)，1.43-1.55(2H，hex，J＝7.2Hz)，2.88-2.94(2H，q，J＝6.6Hz)，3.73(2H，s)，4.79-4.83(1H，t，J＝6.0Hz)，7.42-7.44(2H，d，J＝7.8Hz)，7.81-7.84(2H，d，J＝7.8Hz)；Mp：99-100℃。
步骤2：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-正丙胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物27)
采用4-正丙胺磺酰基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(65mg，收率46％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 0.83-0.89(4H，m)，1.10-1.25(4H，m)，1.43-1.52(3H，m)，1.57-1.84(8H，m)，1.88-2.00(2H，m)，2.04(3H，s)，2.28-2.45(3H，m)，2.41(3H，s)，2.50-2.63(1H，m)，2.85-2.92(3H，m)，2.98-3.12(2H，m)，3.25-3.34(2H，m)，3.60-3.81(5H，m)，4.49-4.53(1H，m)，4.83(1H，br-s)，6.97-7.02(1H，m)，7.19(1H，br-s)，7.30-7.44(3H，m)，7.78-7.80(2H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 701[M]⁺，489，462，419，380，364，335，319，255，226，213，154，112，98，82；HREI计算值C₃₆H₅₂ClN₅O₅S(M⁺)：701.3378，测量值：701.3373。
实施例28
化合物28：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-叔丁胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-叔丁胺磺酰基苯乙酸
在实施例23步骤2中采用叔丁胺代替吡咯烷，反应过程与实施例23步骤1、2、3相同，得到白色晶体(180mg，收率21％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.21(9H，s)，3.72(2H，s)，5.04(1H，s)，7.39-7.42(2H，d，J＝8.4Hz)，7.84-7.86(2H，d，J＝8.4Hz)；Mp：133-135℃。
步骤2：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-叔丁胺磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物28)
采用4-叔丁胺磺酰基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到微黄色泡沫状物(87mg，收率56％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.21(2H，m)，1.21(9H，s)，1.35-1.42(1H，m)，1.65-1.82(12H，m)，2.04(3H，s)，2.22-2.42(5H，m)，2.42(3H，s)，2.80-2.95(3H，m)，3.27-3.29(2H，m)，3.44-3.51(1H，q，J＝6.6Hz)，3.63-3.65(2H，m)，3.75-3.78(3H，d，J＝9.6Hz)，4.40-4.54(1H，m)，6.96-6.98(1H，m)，7.18(1H，s)，7.28-7.31(1H，d，J＝7.8Hz)，7.35-7.38(2H，d，J＝7.8Hz)，7.82-7.84(2H，m)；EI-MS：m/z 715[M]⁺，462，419，394，364，335，283，238，181，141，112，98，82；HREI计算值C₃₇H₅₄ClN₅O₅S(M⁺)：715.3534，测量值：715.3520。
实施例29
化合物29：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲烷磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-巯基苯乙酸乙酯
向搅拌的4-氯磺酰基苯乙酸乙酯(2.62g，10mmol)和锌粉(3.27g，50mmol)的乙醇(5mL)溶液中滴加浓盐酸(2mL)。滴加完毕，混合物回流搅拌3小时。之后反应物倒在碎冰上，并用二氯甲烷(10mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水洗，硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至10/1(v/v))，得到无色的油(1.38g，收率70％)。
步骤2：4-甲巯基苯乙酸乙酯
向搅拌的4-巯基苯乙酸乙酯(1.05g，5.34mmol)和碳酸钾(1.48g，10.68mmol)的DMF(15mL)溶液中滴加碘甲烷(0.5mL，8.01mmol)。滴加完毕，混合物在室温继续搅拌15小时。之后反应物用乙酸乙酯(30mL)稀释，并用水洗，食盐水洗，硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝10/1(v/v))，得到无色的油(725mg，收率64％)。
步骤3：4-甲烷磺酰基苯乙酸乙酯
向冰冷却的4-甲巯基苯乙酸乙酯(725mg，3.45mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入m-CPBA(间-氯过氧苯甲酸)(1540mg，7.59mmol)。混合物在室温搅拌3小时之后用二氯甲烷(20mL)稀释，用10％的亚硫酸钠溶液洗，再用饱和的碳酸氢钠溶液洗，硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝4/1(v/v))，得到的残留物再重结晶(石油醚/乙酸乙酯)生成白色晶体(224mg，收率26％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.24-1.29(3H，t，J＝7.2Hz)，3.05(3H，s)，3.71(2H，s)，4.14-4.21(2H，q，J＝7.2Hz)，7.48-7.51(2H，d，J＝8.1Hz)，7.89-7.92(2H，d，J＝8.1Hz)。
步骤4：4-甲烷磺酰基苯乙酸
采用4-甲烷磺酰基苯乙酸乙酯代替4-(1-吡咯啉基)磺酰基苯乙酸乙酯，反应过程与实施例23步骤3相同，得到白色晶体(198mg，100％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 3.05(3H，s)，3.77(2H，s)，7.49-7.51(2H，d，J＝8.1Hz)，7.90-7.93(2H，d，J＝8.4Hz)。
步骤5：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲烷磺酰基苯基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺(化合物29)
采用4-甲烷磺酰基苯乙酸代替苯乙酸，反应过程与实施例2步骤7相同，得到淡黄色泡沫状物(54mg，收率36％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.25(3H，m)，1.44-1.50(1H，m)，1.56-1.88(10H，m)，2.01-2.09(1H，m)，2.04(3H，s)，2.31-2.40(4H，m)，2.42(3H，s)，2.79-2.99(3H，m)，3.04(3H，s)，3.27-3.35(2H，m)，3.44-3.52(1H，m)，3.65-3.68(2H，m)，3.71-3.82(3H，m)，4.47-4.53(1H，m)，6.94-6.98(1H，m)，7.18(1H，s)，7.29-7.31(1H，d，J＝5.4Hz)，7.44-7.47(2H，d，J＝8.1Hz)，7.87-7.90(2H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 658[M]⁺，489，462，419，364，337，335，196，170，141，112，98，82；HREI计算值C₃₄H₄₇ClN₄O₅S(M⁺)：658.2956，测量值：658.2960。
实施例30
化合物30：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-吗啉乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-氯乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
实施例2步骤6的产物(987mg，2.13mmol)溶于二氯甲烷(15mL)溶液，加入三乙胺(0.9mL，6.4mmol)，冷却至0℃，再逐滴加入氯乙酰氯(0.25mL，3.2mmol)。混合物缓慢升到室温后继续搅拌2小时。二氯甲烷(20mL)稀释，并分别用水和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1至15/1(v/v))，得到产物为淡黄色泡沫状物(1.01g，收率88％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.24(3H，m)，1.56-1.85(12H，m)，1.94-2.04(2H，m)，2.04(3H，s)，2.30-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.80-2.98(2H，m)，3.26-3.36(2H，m)，3.61-3.68(2H，m)，3.74-3.78(1H，d，J＝13.5Hz)，4.06(2H，s)，4.48-4.55(1H，m)，6.96-6.98(1H，d，J＝7.5Hz)，7.18-7.19(1H，d，J＝1.8Hz)，7.28-7.31(1H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 504，416，370，335，327，274，272，217，183，154，112，98，82，57。
步骤2：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-吗啉乙酰胺)-1-哌啶基)丙基)-4-哌啶甲酰胺(化合物30)
步骤1产物(110mg，0.2mmol)、吗啉(0.02mL，0.24mmol)和碳酸钾(55mg，0.4mmol)的乙腈(5mL)溶液加热回流下搅拌1.5小时。然后蒸干溶剂，用二氯甲烷(10mL)稀释，并用食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝20/1至10/1(v/v))，得到产物为微黄色的泡沫状物(67mg，收率55％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.09-1.24(2H，m)，1.59-1.74(12H，m)，2.03(3H，s)，2.06-2.16(1H，m)，2.29-2.39(4H，m)，2.41(3H，s)，2.47-2.55(4H，m)，2.80-2.99(3H，m)，3.15-3.16(2H，d，J＝3.6Hz)，3.22-3.38(2H，m)，3.60-3.81(8H，m)，4.46-4.54(1H，m)，6.94-7.00(1H，dt，J＝7.8Hz，1.8Hz)，7.18(1H，d，J＝2.1Hz)，7.27-7.30(1H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 589[M]⁺，489，416，378，335，112，100；HREI计算值C₃₁H₄₈ClN₅O₄(M⁺)：589.3395，测量值：589.3390。
实施例31
化合物31：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(N-甲基哌嗪)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在实施例30的步骤2中采用1-甲基哌嗪代替吗啉，反应过程与实施例30的步骤1、2相同，得到淡黄色泡沫状物(31mg，收率26％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.25(3H，m)，1.57-1.83(10H，m)，1.87-2.01(2H，m)，2.05(3H，s)，2.26-2.38(8H，m)，2.42(3H，s)，2.47-2.60(8H，m)，2.80-2.98(3H，m)，3.15-3.17(2H，m)，3.21-3.36(2H，m)，3.60-3.83(3H，m)，4.50-4.54(1H，m)，6.95-6.99(1H，d，J＝2.1Hz，5.7Hz)，7.19(1H，m)，7.28-7.31(1H，d，J＝8.1Hz)；ESI-MS：m/z 603.3[M+1]⁺。
实施例32
化合物32：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(4-甲酸甲酯哌啶-1-基)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在实施例30的步骤2中采用哌啶-4-甲酸甲酯代替吗啉，反应过程与实施例30的步骤1、2相同，得到淡黄色泡沫状物(15mg，收率11％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.09-1.25(5H，m)，1.59-1.97(15H，m)，2.05(3H，s)，2.17-2.39(7H，m)，2.42(3H，s)，2.84-2.91(4H，m)，3.19(2H，s)，3.27-3.44(3H，m)，3.68(3H，s)，3.69-3.78(3H，m)，4.50-4.55(1H，m)，7.04-7.17(1H，m)，7.22-7.23(1H，m)，7.33-7.35(1H，m)；EI-MS：m/z 645[M]⁺，489，463，416，335，156；HREI计算值C₃₄H₅₂ClN₅O₅(M⁺)：645.3657，测量值：645.3629。
实施例33
化合物33：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(N-叔丁氧羰基哌嗪)乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在实施例30的步骤2中采用哌嗪-1-碳酸叔丁酯代替吗啉，反应过程与实施例30的步骤1、2相同，得到淡黄色泡沫状物(100mg，收率20％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.25(3H，m)，1.45(9H，s)，1.57-1.95(12H，m)，2.04(3H，s)，2.28-2.50(9H，m)，2.42(3H，s)，2.80-2.98(3H，m)，3.16-3.18(2H，d，J＝3.9Hz)，3.23-3.36(2H，m)，3.41-3.49(4H，m)，3.63-3.68(2H，m)，3.74-3.79(1H，m)，4.49-4.53(1H，m)，6.98(1H，m)，7.18(1H，s)，7.28-7.31(1H，d，J＝8.4Hz)；EI-MS：m/z 688[M]⁺，489，463，416，335，199，143，99，57；HREI计算值C₃₆H₅₇ClN₆O₅(M⁺)：688.4079，测量值：688.4054。
实施例34
化合物34：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-哌嗪乙酰胺基)-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在搅拌下，化合物33(658mg，0.95mmol)溶解于四氢呋喃(5mL)，并在室温下向该溶液中滴加4N盐酸(5mL)，然后在室温下搅拌该混合物5小时。之后，蒸干溶液中的THF，水相在乙酸乙酯(5mL)萃取之后用2N氢氧化钠溶液调整溶液的pH值至10。该溶液再用二氯甲烷(5mL)萃取三次，合并有机相(仅二氯甲烷相)，硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1至5/1(v/v))得到产物为白色泡沫状物(185mg，收率33％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.06-1.24(4H，m)，1.55-1.98(10H，m)，2.03(3H，s)，2.24-2.54(7H，m)，2.41(3H，s)，2.79-2.93(8H，m)，3.13-3.15(2H，d，J＝5.4Hz)，3.19-3.35(2H，m)，3.42-3.50(2H，m)，3.65-3.78(4H，m)，4.47-4.52(1H，m)，6.94-6.97(1H，d，J＝7.8Hz)，7.18(1H，s)，7.27-7.30(1H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 588[M]⁺，489，463，416，335，141，99，71，57；HREI计算值C₃₁H₄₉ClN₆O₃(M⁺)：588.3555，测量值：588.3561。
实施例35
化合物35：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(N-甲烷磺酰基哌嗪)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
在化合物34(95mg，0.16mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三乙胺(0.044mL，0.32mmol)，混合物冷却到0℃后滴加甲烷磺酰氯(0.015mL，0.19mmol)，升到室温继续搅拌半小时。反应物用二氯甲烷(10mL)稀释，食盐水洗，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1至15/1(v/v))得到产物为白色泡沫状物(83mg，收率77％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.23(4H，m)，1.54-2.09(10H，m)，2.04(3H，s)，2.31-2.52(6H，m)，2.42(3H，s)，2.73(3H，s)，2.79-3.16(10H，m)，3.19-3.35(2H，m)，3.42-3.50(2H，m)，3.65-3.78(4H，m)，4.47-4.48(1H，m)，7.13-7.16(1H，m)，7.25(1H，m)，7.34-7.36(1H，d，J＝8.4Hz)；EI-MS：m/z 666[M]⁺，489，463，416，335，177；HREI计算值C₃₂H₅₁ClN₆O₅S(M⁺)：666.3330，测量值：666.3327。
实施例36
化合物36：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-吲哚)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
搅拌下，吲哚(22mg，0.18mmol)的DMF(1mL)溶液缓慢加入到钠氢(8mg，0.18mmol，含量60％)的DMF(1mL)溶液中，加料完毕继续在室温搅拌半小时。然后加入实施例30步骤1产物(100mg，0.18mmol)的DMF(3mL)溶液，并在室温连续搅拌反应8小时。反应物用乙酸乙酯(10mL)稀释，分别用水和食盐水洗涤，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝20/1(v/v))，得到产物为白色泡沫状物(30mg，收率26％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.27(2H，m)，1.53-1.83(10H，m)，1.94-2.00(2H，m)，2.04(3H，s)，2.17-2.24(1H，m)，2.31-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.74-2.95(3H，m)，3.24-3.41(3H，m)，3.58-3.67(2H，m)，3.73-3.78(1H，m)，4.49-4.53(1H，d，J＝12.9Hz)，4.90-4.91(2H，d，J＝5.1Hz)，6.54-6.55(1H，d，J＝2.7Hz)，6.92-6.97(1H，m)，7.07-7.11(2H，m)，7.15-7.23(3H，m)，7.27-7.31(1H，m)，7.60-7.63(1H，d，J＝7.8Hz)；EI-MS：m/z 619[M]⁺，489，416，335，298，202，130，112；HREI计算值C₃₅H4₆ClN₅O₃(M⁺)：619.3289，测量值：619.3280。
实施例37
化合物37：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-吡咯)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用吡咯代替吲哚，反应过程与实施例36相同，得到淡黄色泡沫状物(29mg，收率25％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.38(4H，m)，1.60-1.90(11H，m)，2.04(3H，s)，2.30-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.90-3.05(3H，m)，3.24-3.32(2H，m)，3.39-3.51(1H，m)，3.63-3.78(3H，m)，4.50-4.54(1H，m)，4.69-4.71(2H，d，J＝5.4Hz)，6.16-6.18(2H，d，J＝6.3Hz)，6.66(2H，s)，6.95-7.01(1H，m)，7.18(1H，s)，7.28-7.31(1H，d，J＝8.4Hz)；EI-MS：m/z 569[M]⁺，489，416，335，248，112，82；HREI计算值C₃₁H₄₄ClN₅O₃(M⁺)：569.3133，测量值：569.3122
实施例38
化合物38：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(3-硝基苯酚基)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
采用3-硝基苯酚代替吲哚，反应过程与实施例36相同，得到微黄色泡沫状物(12mg，收率10％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.10-1.30(1H，m)，1.60-2.01(14H，m)，2.04(3H，s)，2.34-2.42(4H，m)，2.42(3H，s)，2.80-2.93(1H，m)，2.96-3.01(2H，m)，3.29-3.35(2H，m)，3.44-3.51(1H，m)，3.61-3.68(2H，m)，3.72-3.80(1H，m)，4.48-4.54(1H，m)，4.77-4.79(2H，m)，6.95-6.98(1H，d，J＝8.1Hz)，7.18(1H，s)，7.29-7.31(2H，d，J＝7.8Hz)，7.42-7.47(1H，t，J＝8.1Hz)，7.69-7.72(1H，d，J＝7.2Hz)，7.84-7.87(1H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 641[M]⁺，624，489，416，335，320，277，154，112，82；HREI计算值C₃₃H4₄ClN₅O₆(M⁺)：641.2980，测量值：641.2975。
实施例39
化合物39：1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-(4-(N-乙基-2-(1-乙酰基哌啶-4-基)乙酰胺基-1-哌啶基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
反应过程与实施例2的相似，最后一个步骤用(1-乙酰基哌啶-4-基)乙酸(根据J.Med.Chem.2003，46，5512-5532合成)来代替苯乙酸，得到淡黄色泡沫状物(14mg，收率11％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.18-1.29(4H，m)，1.56-1.69(13H，m)，1.69-1.74(2H，m)，1.97-2.07(5H，m)，2.06(3H，s)，2.12(3H，s)，2.33-2.46(4H，m)，2.42(3H，s)，2.80-2.91(1H，m)，2.96-3.21(3H，m)，3.28-3.35(2H，m)，3.51-3.64(3H，m)，3.74-3.81(2H，m)，4.51-4.58(1H，m)，7.10-7.13(1H，d，J＝8.1Hz)，7.27(1H，s)，7.36-7.39(1H，d，J＝8.1Hz)；EI-MS：m/z 504，416，406，335，197，183，140，82。
实施例40
化合物40：1-(3-(1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺基)丙基)哌啶基-4-(乙基)甲氨酸苄酯
反应过程与实施例2的相似，最后一个步骤用苄氧甲酰氯代替苯乙酸和胺发生酰胺化反应，得到白色泡沫状物(27mg，收率40％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.16(3H，m)，1.45-1.79(11H，m)，2.04(3H，s)，2.17-2.51(5H，m)，2.41(3H，s)，2.79-2.87(2H，m)，3.07-3.11(1H，br-d，J＝10.5Hz)，3.48-3.77(6H，m)，4.48-4.53(1H，br-d，J＝14.1Hz)，5.17-5.26(2H，m)，6.68-6.70(1H，m)，6.93-6.99(2H，m)，7.33-7.39(5H，m)；EI-MS：m/z 596(M⁺)。
实施例41
化合物41：3-氯-4-甲基苯基(3-(4-(N-乙基-2-苯基乙酰氨基)哌啶-1-基)丙基)甲氨酸环己酯
反应过程与实施例2的相似，只是步骤4用环己氧甲酰氯代替1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯。最后得到白色泡沫状物(30mg，收率50％)。
¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ 1.08-1.16(3H，m)，1.45-1.79(11H，m)，2.17-2.51(5H，m)，2.41(3H，s)，2.79-2.87(2H，m)，3.17-3.26(2H，m)，3.48-3.77(6H，m)，3.87-3.91(1H，br-d，J＝10.5Hz)，4.48-4.53(1H，br-d，J＝14.1Hz)，6.93-6.99(1H，m)，7.14-7.33(7H，m)；EI-MS：m/z 553(M⁺)。
实施例42
化合物42：N-(1-(3-(N-(3-氯-4-甲基苯基)苯磺酰胺基)丙基)哌啶-4-基)-N-乙基-2-苯乙酰胺
反应过程与实施例2的相似，只是步骤4用苯磺酰氯代替1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯。最后得到淡黄色泡沫状物(55mg，收率60％)。
EI-MS：m/z 596(M⁺)。
实施例43
化合物43：N-(1-(3-(1-(3-氯-4-甲基苯基)-3-环己脲基)丙基)哌啶-4-基)-N-乙基-2-苯乙酰胺
反应过程与实施例2的相似，只是步骤4用环己基异氰酸酯代替1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯。最后得到淡黄色泡沫状物(35mg，收率50％)。
EI-MS：m/z 552(M⁺)。
生物学活性的测试例
CCR5属于G-蛋白偶联受体(GPCR)家族。针对GPCR的药物开发技术发展较为完善，其中受体配体结合法、GTPγS结合法和Ca²⁺流检测法等实验技术广泛应用于趋化因子受体相关的药物筛选。本发明中的化合物采用了抽滤式[³⁵S]GTPγS结合实验、SPA-WGA法[³⁵S]GTPγS结合实验和钙内流检测实验三种方法测试其CCR5抑制活性。
A.[³⁵S]GTPγS结合实验
CCR5与激动剂结合后，发生构象变化，从而使得CCR5与G蛋白发生相互作用，激活了G蛋白。G蛋白是由α亚基，βγ亚基共同组成的三聚体。由于α亚基与GTP结合的能力取决于CCR5与激动剂的作用，测定α亚基结合的GTP量就能反映激动剂对CCR5的激活能力。在GTPγS结合实验中，为了排除由于GTP酶水解GTP造成与G蛋白结合的GTP量不能准确反映CCR5的激活，同时也为了检测方便，采用³⁵S标记的GTP的结构类似物GTPγS替代GTP，GTPγS可与被活化的α亚基结合但不能被水解。这样，在CCR5未被激活时，α亚基结合GDP；CCR5激活后，α亚基结合GTPγS，GTPγS不可逆地结合在α亚基上。因此，测定α亚基结合[³⁵S]-GTPγS的数量就能反映出CCR5被激动剂激活的程度。当加入拮抗剂时，将使得激动剂激活CCR5的能力下降。
这类实验中游离的G蛋白结合的[³⁵S]-GTPγS可以使用薄膜抽滤的方法分离出来，称之为抽滤式GTPγS实验。
或者利用SPA(Scintillation Proximity Assay)技术来检测同G蛋白结合的[³⁵S]-GTPγS，就称为SPA-WGA法[³⁵S]GTPγS结合实验。SPA技术的原理是：放射性原子的衰变过程释放出的亚原子粒子，例如β射线(电子)在足够近的距离下可以激发微球发光而被测光仪器检测到。水相溶液中这类射线的能量大部分被溶剂吸收，传播距离十分有限。因此，如果通过麦胚凝集素(WGA)将发光微球连接到细胞膜上，则只有同G蛋白结合的[³⁵S]-GTPγS才具有足够短的距离激发微球发光，从而反映受体的激活。
CCR5对G蛋白的激活按以下实验进行测定。
表达CCR5的CHO(中国仓鼠卵巢细胞)永久细胞系(CHO-CCR5)用裂解缓冲液(5mM Tris-HCl，pH 7.5，5mM EDTA和5mM EGTA)裂解，以15,000×g离心10min。细胞膜用反应缓冲液(5mM Tris-HCl，pH 7.5，5mMMgCl₂，1mM EGTA，100mM NaCl)重悬后，用Bio-Rad的Bioford法定蛋白。然后，在反应缓冲液中进行GTPγS结合实验，其中，反应体系为100μL，含10μg膜蛋白，40μM GDP，0.5nM[³⁵S]-GTPγS(1200Ci/mmol)，加入待测的化合物后，振荡混匀后，将反应的试管于30℃孵育1小时。反应结束后，将试管置于冰上，用PBS稀释以中止反应，并马上用GF/C滤膜真空抽滤。结合的放射性活性加入闪烁液后用液体闪烁计数仪测定，这就是抽滤式GTPγS实验方法。SPA-WGA测定方法的前面步骤同GTPγS实验方法，只是在反应结束加入PBS终止反应后，在反应体系中加入SPA-WGA微球，再加入待测的化合物，体系混匀后于30℃孵育1小时，然后放冰上部分终止反应。室温离心，1000rpm，15min。随后使用液体闪烁计数仪测定。
结合的放射性活性用液体闪烁计数仪测定。基础结合(basal)在无激动剂的情况下测定，非特异性结合(non-specific)在有10μM非同位素的GTPγS存在的情况下测定。[³⁵S]-GTPγS结合百分比按100×[c.pm._sample-c.p.m._non-specific]/[c.p.m._basal-c.p.m._non-specific]来计算。IC₅₀是抑制10nM的RANTES(一种对单核-巨噬细胞有强烈趋化作用的细胞因子)引起的[³⁵S]-GTPγS结合50％时的化合物浓度，从化合物的浓度曲线上得到。
研究化合物的浓度-抑制曲线时，以激动剂RANTES作用下的最高CPM值或RFU值为100％，本底CPM值或RFU值为0％，再通过统计软件Sigmaplot拟合，并得到拮抗剂的IC₅₀值。当化合物浓度为1μM，其拮抗检测的CCR5能力未超过90％时，为了作图方便需要虚拟一个浓度，在本次研究中虚拟点为：当化合物为1mM时，其拮抗CCR5能力为100％。
B.钙内流检测实验
G蛋白被激活后可以通过几种不同的机制调节胞质内实验Ca²⁺浓度的变化，从而反映GPCR被激活的水平。Invitrogen公司的Fluo-4 calcium dye是一类常用的Ca²⁺检测的荧光染料，而信号的检测通常可以使用分子器件的FlexStation或者FLIPR来完成。本发明通过在CHO-CCR5稳定细胞系中过度表达G_q家族蛋白-G16的方式，实现了G_i/o蛋白偶联的CCR5受体对G_q信号通路的激活。
实验开始前4小时用无血清培养液培养细胞，用0.04％EDTA-PBS消化细胞，并用HBSS(Hank′s平衡盐溶液)缓冲液清洗一次。用含有2.5mMProbenecid(羟苯磺丙胺)的HBSS重悬浮细胞，将预先准备好的Fluo-4 AM(一种荧光染料)和Cremophor EL(聚氧乙烯蓖麻油)混合液加入到细胞悬液中，混合均匀后，37℃温箱中反应40min，然后800rpm离心3min，弃上清，5mL HBSS洗细胞2次。用11mL HBSS悬浮细胞铺96孔板(100μl/well)，96孔板1000rpm离心3min，室温避光孵10min，加入50μl的药物溶液，设置仪器FlexStation，加入激动剂溶液(25μl/well)，测定数据。
C.活性测试结果
[³⁵S]GTPγS结合实验和钙内流检测实验表明，本发明的一系列化合物是CCR5的拮抗剂，它们抑制10nM的RANTES激活CCR5而引起的GTPγS的结合，其抑制情况及IC₅₀列于下表1。
表1





^a“+++”表示在30nM浓度时该化合物对CCR5有超过50％的抑制；“++”表示在300nM浓度时该化合物对CCR5有超过50％的抑制；“-”表示在300nM浓度时该化合物没有显示CCR5拮抗活性。
表1中列出的活性数据充分显示，三种实验方法所得到的筛选结果相互验证、非常一致，本发明的化合物都是趋化因子受体CCR5的高活性拮抗剂，其中30个化合物对CCR5受体的抑制活性IC₅₀达到nM级别，5个化合物的IC₅₀达到10nM级别，8个化合物的IC₅₀至少达到100nM级别。因此，本发明化合物为强效CCR5拮抗剂，可作为CCR5介导的疾病的治疗药物，如HIV-1病毒入侵抑制剂、自身免疫性疾病、哮喘、风湿关节炎、慢性梗阻性肺病等。