一种北冬虫夏草液体培养基用添加剂.pdf

本发明一种冬虫夏草液体培养基用添加剂，涉及液体培养北冬虫夏草培养基成分的优化，通过添加氯化锌、橄榄油、生长激素和氯化铵使北冬虫夏草的菌丝体干重和次级代谢产物产量增加。其积极效果是：在普通北冬虫夏草液体培养的基础上，改变培养基成分，促进北冬虫夏草的生理代谢机能，加快生长速度和代谢产物虫草酸的合成，菌丝体干重可达16.8g/L左右，虫草酸含量可达1.375g/L以上，腺苷含量可达80mg/L以上。

1、  一种北冬虫夏草液体培养基用添加剂，其特征在于每升培养基中含有：
氯化锌 0.01-0.015g/L、氯化铵 10-20g/L。

2、  权利要求1所述的北冬虫夏草液体培养基用添加剂，其特征在于每升培养基中含有：
橄榄油 10-20ml/L、赤霉素 0.001-0.0015g/L。

3、  一种北冬虫夏草培养基，其特征在于组成是：
蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B10.1g/L，氯化锌0.01-0.015g/L，橄榄油10-20ml/L，赤霉素0.001-0.0015g/L，氯化铵10-20g/L，余量为水。

4、  权利要求1或2所述的北冬虫夏草液体培养基用添加剂的应用，其特征在于：将北冬虫夏草菌种按6％重量比接种到虫草培养基中，添加权利要求1所述的添加剂进行常规培养。

一种北冬虫夏草液体培养基用添加剂
技术领域
本发明提供一种北冬虫夏草液体培养基用添加剂，涉北冬虫夏草液体培养培养的配方优化，有效提高液体培养菌丝体产量及部分有效成分含量，生物菌培养技术领域。
背景技术
随着人们生活水平的提高及保健意识的增强，做为保健、药品主要原料之一的虫草需求量日益增加，加之虫草的采集，严重破坏了野生植被。虫草属国家明令禁止野外采集并加以保护的野生物种资源。为了满足市场的需求，人工培养北冬虫夏草已成为当前的发展趋势。而目前国家普遍采用cordyceps miltitaris菌株为北冬虫夏草生产菌，该菌株通过液体深层发酵获得菌丝体，其有效成分和该菌株的固体培养获得的子实体以及野生冬虫夏草相比，没有差异。现有的培养基菌株生产较慢，发酵周期长，不能满足生产的需求。
发明内容
本发明提供一种北冬虫夏草液体培养基用添加剂，可有效提高液体培养菌丝体产量及有效成分含量，缩短发酵周期。
本发明还提供了含有上述添加剂的北冬虫夏草培养基，用于培养北冬虫夏草。
本发明的北冬虫夏草液体培养基用添加剂，其特征在于每升培养基中含有：
氯化锌0.01-0.015g/L，橄榄油10-20ml/L；
上述培养基中还可添加以下添加剂：
赤霉素0.001-0.0015g/L，氯化铵10-20g/L。
本发明添加剂在使用时：将北冬虫夏草菌种按6％重量比接种到虫草培养基中，再加入上述添加剂进行常规培养。
一种含有本发明添加剂的北冬虫夏草培养基，其特征在于组成是：
蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B10.100g/L，氯化锌0.01-0.015g/L，橄榄油10-20ml/L，植物生长素(赤霉素)0.001-0.0015g/L，氯化铵10-20g/L，余量为水。
在现有广泛应用培养基基础上，添加本发明添加剂，从而达到缩短液体深层发酵周期，提过菌丝体、虫草酸产量。
本发明培养基的配制方法：
将蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B₁0.100g/L，氯化锌0.01-0.015g/L，橄榄油10-20ml/L，植物生长素(赤霉素)0.001-0.0015g/L，氯化铵10-20g/L装于250ml锥形瓶中，装液量为100ml，121℃ 20分钟灭菌备用。
应用本发明所制备的培养基分别对北冬虫夏草进行培育，并与常规培养基进行比较。
操作步骤如下：
在无菌环境中取制备好的北冬虫夏草菌株液6ml，加入已灭过菌的本发明制备的培养基(实施例1、实施例2)和普通培养基中(各平行5组)。26℃ 150转的恒温摇床中培养3天。
③将收获菌丝体冻干，称重，粉碎；测定虫草酸含量，结果如下表。从表中可以看出，与普通没有添加氯化锌、橄榄油、植物生长激素(赤霉素)相比，菌丝体干重提高19％以上，虫草酸含量提高30％以上，腺苷含量提高130％以上。见表1
表1

试验结果表明：本发明制备的培养基能有效提高北冬虫夏草液体培养菌丝体产量提高10％，添加植物生长激素(赤霉素)使其生长周期由5天缩短为3-4天，氯化铵可有效提高腺苷的合成，当液体培养蛹虫草3.5天收获时，腺苷含量可达80mg/L以上。
本发明的积极效果是：在普通培养基中添加氯化锌、橄榄油，可有效促进北冬虫夏草液体培养菌丝体的生长和虫草酸的合成；通过添加植物生长激素(赤霉素)可有效缩短北冬虫夏草的生长周期；添加氯化铵，可有效提高北冬虫夏草腺苷的合成；通过添加添加剂，与不添加改成分相比，液体深层发酵北冬虫夏草菌丝体产量可提高10％左右，虫草酸含量提高30％左右，腺苷含量提高130％以上。
具体实施方式
实施例1：
蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B10.100g/L，氯化锌0.01g/L，氯化铵10g/L，装于250ml锥形瓶中，装液量为100ml，121℃ 20分钟灭菌制成培养基。
实施例2：
蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B10.100g/L，氯化锌0.01g/L，橄榄油10ml/L，赤霉素0.001g/L，氯化铵10g/L，装于250ml锥形瓶中，装液量为100ml，121℃ 20分钟灭菌制成培养基。
实施例3：
蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B10.100g/L，氯化锌0.012g/L，橄榄油12ml/L，赤霉素0.0011g/L，氯化铵14g/L，装于250ml锥形瓶中，装液量为100ml，121℃ 20分钟灭菌制成培养基。
表3

实施例4：
蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B10.100g/L，氯化锌0.015g/L，橄榄油20ml/L，赤霉素0.0015g/L，氯化铵20g/L，装于250ml锥形瓶中，装液量为100ml，121℃ 20分钟灭菌制成培养基。
表4