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C7糖在预防和治疗真菌病中的用途
本发明涉及至少一种C7糖在预防和/或对抗皮肤、皮肤附件和/或粘膜上存在的酵母菌的增殖中的用途。
分类上位于真菌界的真菌是真核生物，其对碳来说为异氧，通过吸附为生并通过孢子生殖。显微镜可见的真菌被亚分类为霉菌、皮肤真菌和酵母菌(单细胞生物体)。一些显微镜可见的真菌可以在人类中引起皮肤、皮肤附件和内脏的寄生性疾病。
真菌病(mycoses)是由体内的寄生性的显微镜可见真菌的增殖引起的寄生虫病(parasitoses)。最常见的真菌病包括念珠菌病(candidiases)和糠秕孢子菌病(pityrosporoses)，它们是由皮肤上的酵母菌的增殖引起的。
念珠菌病是由假丝酵母属(Candida)引起的疾病。根据他们的发展，有两种念珠菌病的形式：由局部因素引起的急性真菌病(最常见的)和慢性真菌病(罕见)，慢性真菌病的治疗更为困难且有时候由免疫系统缺陷引起。
皮肤念珠菌病(影响皮肤)主要位于身体折痕处且由浸软(过度潮湿或皮肤干燥不足)所支持。皮肤念珠菌病导致出现擦烂(即在皮肤折痕底部开始的损伤，形成红疹(红颜色的)并以渗出而结束且引起瘙痒(发痒)。皮肤念珠菌病也可发生于指甲基部，引起表面的甲沟炎。
口腔念珠菌病引起鹅口疮，其特征是面颊内部有发白的和亮红色的区域。口腔念珠菌病主要出现于患有唾液缺乏(唾液缺乏症)的个体。口腔念珠菌病在免疫抑制的个体(那些免疫防御低的个体)以及患有HIV(AIDS)的个体和配带牙齿器具的个体中更甚。
生殖器念珠菌病是女性外阴阴道炎(带有阴道分泌物)和男性龟头炎的起源。男性中的生殖器念珠菌病是瘙痒症和尿道分泌物频繁的起源。其他的念珠菌病是婴儿中臀肌红斑，由于浸软的加重和pH值的上升而形成碱。
糠秕孢子菌病是非常常见的皮肤感染，由糠秕孢子菌属(Pityrosporum)的酵母引起。
有各种类型的糠秕孢子菌病，最显著的为：
-花斑癣，一种皮肤病，其特征为散漫红色(红斑)的出现并带有非常轻微的脱落(皮肤外层的轻微蜕落)，其由一种真菌(圆形糠秕孢子菌(Pityrosporum Orbiculare)，也称为糠秕孢子菌(Microsporumfurfur)或糠秕马拉色菌(Malassezia furfur))的发生所引起；
-头皮糠疹，其特征为出现头皮屑(各种大小的头皮)，有时伴有发痒；
-Brocq皮肤病，其特征为出现很小的红色碎片，其中心苍白，伴有皮肤轻微蜕落，有时发痒，位于胸部；
-脂溢性皮炎，其特征为出现小的微红的或有时为橘黄色的色斑(被液态(油脂状)鳞屑(皮肤的小片)所覆盖)，没有发痒。这些皮肤的损伤在头皮边缘的表面，眉毛周围和鼻翼发生得多；
-糠秕孢子菌毛囊炎，位于背部，其特征为小的丘疹伴有轻微发痒。
预防或治愈这些真菌病或他们的症状的治疗为已知的，但是本领域技术人员仍在持续寻找替代的治疗。
因此，以一个未预料和令人惊奇的方式，本发明人发现C7糖(特别是那些从鳄梨中提取的C7糖)可引起这些真菌的物理结块或聚集，因此防止他们穿透进入细胞且因此抑制其致病原性。
D-甘露庚酮糖，在1916年由La Forge首次鉴定出来的庚酮糖，结构为通式(I)

其在一些植物中被发现，特别是苜蓿(紫花苜蓿(Medicago sativaL.))、鳄梨、无花果(Ficus officinalisL.)、华丽景天(景天属长药景天(Sedum spectabile Bor.))和樱草花(报春花(Primula officinalis Jacq.))。但是，在鳄梨中发现的D-甘露庚酮糖含量最高。D-甘露庚酮糖已经用于治疗应用。例如，专利申请WO95/03809描述了D-甘露庚酮糖作为葡萄糖激酶在抑制癌细胞发展中的用途，专利申请US2003/0092669描述了一种含有D-甘露庚酮糖口服食物补充物，其降低胰岛素水平并因此可减少体重。
鳄梨糖醇，D-甘露庚酮糖的多羟基化合物形式，其结构为通式(II)

也在鳄梨中被发现，特别是果实或纹孔中。
根据Hitotaka Shibuya等人的论文(“Search for pharmacochemicalleads from tropical rainforest plants”，Pure Appl.Chem.，vol.71，no.6，pp.1109-1113，1999)，鳄梨糖醇与钾离子一起抑制Ehrlich腹水癌细胞中3H-亮氨酸的引入。
这些糖(鳄梨糖醇和D-甘露庚酮糖)用于刺激人β防御素(特别是HBD-2)的用途已经被描述(WO 2005/115421)。
本发明涉及至少一种C7糖在制备用于预防和/或治疗真菌病的组合物中的用途，所述真菌病选自念珠菌病和糠秕孢子菌病。
本发明人发现当把C7糖与假丝酵母和糠秕孢子菌属的特定酵母菌相接触时，这些糖能够使所述酵母菌聚集。一旦发生聚集，所述酵母菌的移动能力有限；由于他们更大，因此不能穿透角化细胞了。
假设：这种聚集是由这些酵母菌表面的甘露糖残基的存在而引起的。确实，虽然C7糖能够使这些酵母菌结块，他们不能诱导那些在表面缺乏这些残基的真菌或者细菌(例如，金黄色酿脓葡萄球菌(S.aureus)、绿脓杆菌(P.aeruginosa)、酿脓链球菌(S.pyogenes)，这些细菌在其表面没有甘露糖残基)结块。
本发明所靶向的酵母菌因此有利地在其表面具有甘露糖残基。
此外，本发明人发现C7糖能够抑制酵母菌的致病原性。
酵母菌的一种作用途径为调节宿主的促免疫行为以保证他们的存活。因此，酵母菌糠秕马拉色菌能够降低促炎性细胞因子(例如IL-1α、IL-6和TNF-α)的产生，所述促炎性细胞因子被认为是对抗酵母菌增殖，且增加角化细胞的TGF-β1(一种免疫抑制和抗炎性细胞因子)的产生。对这些白细胞介素的抑制使酵母菌能够在宿主中生存，没有这些白细胞介素则产生抗炎性应答。
但是注意到：当以C7糖预处理角化细胞时，这些角化细胞重新获得其与合适的促炎性应答的能力(相对于酵母菌来说)。因此C7糖能够抑制酵母菌的致病原性并恢复角化细胞的防御能力，从而再次对酵母菌不耐受。
在本发明的范围内，所靶向的念珠菌病特别是那些选自念珠菌性擦烂、口腔消化性念珠菌病、成人或婴儿生殖器念珠菌病、念珠菌性甲床炎和甲周炎、慢性黏膜与皮肤念珠菌病或念珠菌性毛囊炎。
念珠菌病是由念珠菌属的酵母菌引起的，最主要是人白色念珠菌(C.albicans)。在一些生理条件(怀孕)、病理条件(糖尿病)或因医生的治疗而引起的条件(以激素特别是肾上腺皮质类、抗生素或免疫抑制剂治疗)下，念珠菌可成为致病原性的并引起各种皮肤和粘膜的症状。
除了以上所列的一般因素以外，肥胖、浸软和卫生条件差也会支持念珠菌性擦烂。
口腔消化性念珠菌病可到达消化系统的各个部分。类型包括传染性口角炎、唇炎和口腔炎(鹅口疮)。这些念珠菌病通常标志为红斑。
生殖器念珠菌病在成年人或婴儿中由于尿布疹的延伸而被发现。其类型包括念珠菌性外阴阴道炎、尿道炎(在糖尿病中普遍)、龟头炎和阴茎头包皮炎以及婴儿的生殖器及臀部的念珠菌病，婴儿的生殖器及臀部的念珠菌病影响非常小的婴儿且通常被称为尿布疹(尿布疹具有各种成因)。
念珠菌性甲床炎和甲周炎由潮湿所支持。
慢性黏膜与皮肤念珠菌病是慢性的皮肤和粘膜感染，在免疫缺陷的病人中发生。
念珠菌性毛囊炎特别与海洛因成瘾相关，它是败血病的反映。
在本发明的优选的具体实施方式中，念珠菌病选自口腔消化性念珠菌病、生殖器念珠菌病、婴儿的生殖器及臀部的念珠菌病特别是尿布疹或念珠菌性毛囊炎。
在本发明的范围内，所靶向的糠秕孢子菌病特别是那些选自花斑癣、糠秕孢子菌毛囊炎、脂溢性皮炎、痤疮、红斑痤疮或过敏性皮炎。
作为定义来说，薄膜状态由头皮的非炎性脱落组成。脂溢性皮炎的特征为出现红斑和头皮以外的疾病的延伸。这里，马拉色菌起到中心作用并对导致表皮恶化的炎性应答起作用。
在本发明的优选的具体实施方式中，糠秕孢子菌病选自糠秕孢子菌毛囊炎、脂溢性皮炎、痤疮、红斑痤疮或过敏性皮炎。
在本发明中，所靶向的真菌病为念珠菌病(特别是那些由于假丝酵母属(特别是白色念珠菌)的增殖所引起的念珠菌病)和糠秕孢子菌病(特别是那些由马拉色菌(特别是糠秕马拉色菌)的增殖所引起的糠秕孢子菌病)。
马拉色菌属(Malassezia spp.)的酵母菌与各种系统性和皮肤疾病相关，或者是其起因，或者是与其相伴。与马拉色菌相关的疾病的例子特别包括花斑癣、脂溢性皮炎、表膜(pellicles)、毛囊炎、过敏性皮炎、牛皮癣、网状多发性乳头瘤病和脂溢性睑炎。也已经表明，马拉色菌与深层感染有关，例如乳腺炎、窦炎、化脓性关节炎、恶性外耳炎、真菌血症、脉管炎、腹膜炎和脑膜炎(Helen Ruth Ashbee，Recentdevelopments in the immunology and biology of Malassezia species，HEMS Immunol.Med.Microbiol.47(2006)14-23)。
因此，本发明人表明C7糖能够使酵母菌聚集(一旦发生聚集，则太大，以致不能穿透细胞)且能够使角化细胞恢复对这些酵母菌的耐受。在没有达到C7糖杀死或移植侵袭物(不是杀真菌剂或抑真菌剂)生长的浓度下，这些酵母菌失去了其侵袭的能力和其致病原性。
此外，C7糖具有一种物理的而非化学的作用模式。因此，他们是长期有效的，这与化学效应子相反，化学效应子可能引起致病原的抗性。
长期的功效是特别需要的，因为它使得可以对患有真菌病的病人进行治疗，所述患有真菌病的病人对目前可用的标准治疗不敏感，不敏感主要是由于对酵母菌所用的化学效应子的抗性。
本发明的C7糖因此可用于治疗和预防真菌病。在酵母菌的增殖为症状而非起因时，C7糖也可与其他药物联合来治疗疾病(主要是皮肤病)。因此，例如，在皮肤病的情况下，C7糖可用于限制马拉色菌的增殖。
根据本发明的优选的具体实施方式，C7糖用于对尿布疹的治疗环境中。他们可单独使用或与其他活性成分联合使用。
有意思的是，注意到C7糖对酵母菌聚集的物理作用不会打乱皮肤平衡，皮肤平衡在婴孩和婴儿中是特别脆弱和敏感的。因此，这些糖特别适合于治疗婴孩和婴儿或其他具有脆弱的皮肤平衡的病人，对这些病人来说治疗必须十分谨慎因为副作用可能会非常严重。
可以联合使用的活性成分是氧化锌、云母、氧化钛、维生素B5、多酚、抗酶(尿素酶、脂酶、蛋白酶)例如大豆异黄酮、油醋酸盐和油包水或硅树脂乳化剂包水(用于保护婴儿皮肤)。
可以联合使用的活性成分也是低聚原花青素(PCO)和花青素，例如在专利申请EP 953,353中所描述的那些。
根据本发明的优选的具体实施方式，C7糖用于治疗头皮屑或脂溢性皮炎，优选为脂溢性皮炎的环境中。他们可单独使用或与其他活性成分联合使用。
可以联合使用的活性成分是标准的抗真菌剂(酮康唑、吡啶硫酮锌、吡啶酮乙醇胺盐(roctone olamine)等)、抗脂酶、硒和锂盐、焦油(煤焦油、页岩油(ichtyol pale)等)、抗炎剂、去角质凝胶(exfoliant)或角蛋白调节剂(AHA，聚羟酸、酯化的或取代的自由BHA等)。
根据本发明的优选的具体实施方式，C7糖用于治疗遗传性过敏症。他们可单独使用或与其他活性成分联合使用。
遗传性过敏症描述了组成型或遗传性超敏反应的临床状态，在变应原存在下使个体倾向于过敏性反应，而在正常个体中所属变应原不会引起反应。
可以联合使用的活性成分是局部的肾上腺皮质类、局部或全身的免疫抑制剂、美容性润肤剂、抗炎剂、脂类生物合成促进剂(向日葵或鳄梨呋喃浓缩物)、PPAR激动剂、抗微生物肽的促进剂(亮氨酸、鳄梨肽等)。
根据本发明的另一个优选的具体实施方式，C7糖用于治疗或预防牛皮癣或其症状。
牛皮癣是一种自身免疫性疾病，其特征是真菌的增殖，特别是马拉色菌酵母菌(Helen Ruth Ashbee，Recent developments in theimmunology and biology of Malassezia species，HEMS Immunol.Med.Microbiol.47(2006)14-23)。本发明的C7糖限制这种酵母菌的增殖并因此限制损伤的严重性和程度。
可以联合使用的活性成分是可的松、表皮肾上腺皮质类、维生素D衍生物(特别是卡泊三醇(calcipotriol))、类维生素A、免疫抑制剂、甲氨蝶呤、环孢霉素、积雪草(Centella asiatica)提取物和软甲液(keratolytics)。
根据本发明的另一个优选的具体实施方式，C7糖用于治疗或预防炎性痤疮或黑头粉刺。可以联合使用的活性成分是局部或全身性类维生素A、局部或全身性抗生素、局部抗细菌剂、AHA、聚羟酸、BHA、抗炎剂、皮肤瘢痕剂(cicatrizer)和锌盐。
根据本发明的另一个优选的具体实施方式，C7糖用于治疗或预防红斑痤疮。可以联合使用的活性成分是甲硝哒唑、黄酮、PCO、多酚、异黄酮、抗胶原酶/弹性蛋白酶/白明胶酶和抗炎剂。
根据本发明的另一个优选的具体实施方式，C7糖用于治疗或预防身体折痕处和生殖器的皮炎。可以联合使用的活性成分是标准的抗细菌剂或抗真菌剂和干燥剂(曙红、高锰酸钾)。
根据本发明的另一个优选的具体实施方式，C7糖用于所有的皮肤损伤(创伤、烧伤、激光、磨损、剥落)中支持愈合或皮肤修复，用于取代局部防腐剂并与愈合分子(维生素B、氧化锌粘贴剂、积雪草酸(asiatic acid)、羟基积雪草酸(Madecassic acid)、熊果酸(ursolic acid)、鳄梨呋喃、羽扇豆(lupine)肽、促愈合细胞因子促进剂、TGF-β和IL-4联合使用。
在本发明上下文中，表达“C7糖”意思是这样的糖，其糖基序(motif)包含7个碳原子。C7糖优选地选自甘露庚酮糖、鳄梨糖醇或其混合物。
D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇的来源为可以是鳄梨或其它植物的水溶性的糖提取物。或者，D-甘露庚酮糖和鳄梨糖醇可由商业获得(合成来源的)。根据本发明的优选的具体实施方式，D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇的来源为可以是鳄梨糖的水溶性提取物。
鳄梨糖的水溶性提取物可以直接由鳄梨或鳄梨树的任何部分获得，例如鳄梨的果实、皮或纹孔或鳄梨树的叶子或根。也可能从鳄梨加工工业的副产品获得鳄梨的肽提取物，包括但非穷举：新鲜的鳄梨果肉、冷冻的果肉、去水的果肉、来自油提取过程(机械提取和/或通过溶剂使用事先去水果实)的鳄梨油块、来自湿油提取过程(离心)的去油固体物、来自酶法鳄梨油提取过程的去油固体物、粗捣碎的鳄梨(guacamole)和来自生产这些捣碎的鳄梨的工厂的固体废物。优选的，提取物从鳄梨树的新鲜的果实获得。果实选自哈斯(Hass)、富尔特(Fuerte)、埃汀格(Ettinger)、培根(Bacon)、纳巴尔(Naba1)、阿纳海姆(Anaheim)、卢拉(Lula)、里德(Reed)、兹他奴(Zutano)、皇后(Queen)、克瑞欧拉塞尔瓦(Criola Selva)、墨西哥苷达(MexicanaCanta)、德尚区(Region Dschang)、豪尔(Hall)、布斯(Booth)、彼得森(Peterson)或柯林森红(Collinson Red)品类，更优选为哈斯(Hass)、富尔特(Fuerte)、里德(Reed)品类。优选地，选择哈斯(Hass)、富尔特(Fuerte)、埃汀格(Ettinger)和培根(Bacon)品类，更优选地为哈斯(Hass)和富尔特(Fuerte)品类。
鳄梨树的果实主要由水、果肉、油和纹孔组成这些成分的比例，就像所有的天然和植物物质一样，高度可变。但是，在下列表1中列出的平均成分(以新鲜果实的百分率表示)是一般所接受的：
 

水70-85％蛋白质1.5-4.5％脂肪12-23％糖1.5-5％
 纤维1.1-1.6％
表1
实际上，鳄梨并不是特别富含多糖。但是，可溶性单糖的本性是非常特别的，以致于鳄梨糖醇和D-甘露庚酮糖包含7个碳原子。
鳄梨糖的水溶性提取物可通过以下方法的连续步骤获得：
-通过干燥鳄梨而获得鳄梨油块，优选为鳄梨的果实，然后提取脂肪(油)；然后
-对所述油块完全脱脂，然后在水中或在水醇介质中洗涤，然后依次倾析和离心以回收富含C7糖的可溶性分相(块的去除)；
-将前一步骤所获得的可溶性分相在离子树脂上进行去矿物化；
--在10,000道尔顿进行超滤；和
-如果需要，真空浓缩并调湿。
本方法的第一个步骤由干燥果实然后去油的步骤组成。因此，在将果实切成细片之后，可通过本领域技术人员所知的任何技术将其干燥，包括以热风干燥、冻干或渗透性干燥。通常，不论所用的技术为何，在这个干燥步骤中的温度优选为被维持在低于或等于80℃。在本方法的范围内，为了易于操作和成本的目的，优选为在通风设备干燥器中，在薄层中，在热风气流中，在70℃至75℃之间进行。操作持续时间可介于5至72小时之间。
然后在持续螺旋压力下以机械方式，或者使用溶剂(例如己烷)在索氏(soxhlet)提取器或De 持续提取器中以化学方式提取干燥果实的脂肪，特别的根据专利申请FR 2,843,027中所描述的方法，或者使用超临界CO₂的方法。在此方法的主要优点中，共产生的油构成了一种非常显然可以直接回收的产品。这就是为什么以机械方式提取脂肪为优选。经过干燥、去油的果实仍然被称为油块(oil cake)，然后进行下列步骤：
-完全脱脂，特别是在丙酮和/或乙醇中进行；
-倾析然后在水和/或水醇混合物中洗涤油块；
-离心，过滤，回收可溶性分相(块的去除)；
-浓缩；
-通过离子交换去矿物化；
-以10kDa界限进行超滤；
-真空浓缩，加入防腐剂并调湿。
通常，最终的水性提取物可包含重量为0.1％至20％的干燥物质，优选为1％至10％的干燥物质，更优选为3％至5％的干燥物质。干燥物质中C7糖中(即D-甘露庚酮糖和鳄梨糖醇中)的含量优选为介于重量的50％至100％，特别是介于重量的65％至90％，与干燥物质的总重量相比。在下表2中给出了根据上述方法获得的一种水性溶液(其含有5％干燥物质)的平均分析数据：

表2
水溶性提取物中的糖的相对成分(与提取物的干燥物质的总重量相比)，优选为达到以下标准(根据高效液相色谱(HPLC)所确定的相对成分，重量百分比)：
-D-甘露庚酮糖     0-100％，特别是5-80％
-鳄梨糖醇         0-100％，特别是5-80％
-蔗糖             小于10％
-葡萄糖           小于10％
-果糖             小于10％
与干燥物质的总重量相比，鳄梨糖的水溶性提取物优选为包含10％至80％重量的D-甘露庚酮糖，更优选为15％至70％重量的D-甘露庚酮糖。与干燥物质的总重量相比，鳄梨糖的水溶性提取物优选为包含20％至80％重量的鳄梨糖醇，更优选为25％至70％重量的鳄梨糖醇。
优选地，与干燥物质的总重量相比，水溶性提取物中的相对的糖成分满足以下标准(根据HPLC所确定的相对成分，重量百分比)：
-D-甘露庚酮糖     25-60％
-鳄梨糖醇         25-60％
-蔗糖             小于10％
-葡萄糖           小于10％
-果糖         小于10％
令人惊奇的是，本发明人注意到D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇与鳄梨糖提取物中存在的少数糖(果糖、葡萄糖、蔗糖)之间的协同效应。
可选地，为了获得完全水溶性的固体粉末(干燥提取物)的目的，所获得的提取物可被冻干。
可选地，所获得的提取物可被分相成为每个纯化的糖。这个分离和纯化可通过本领域技术人员已知的技术来进行，包括但非穷举：沉淀和过滤、重结晶或通过色谱分离(例如改进的模拟移动床(ISMB)方法)来进行。
在本发明的范围内，组合物可进一步包含(含有或不含有以上所列的化合物)有机酸、可被机体代谢或者不可被机体代谢的糖、赋形剂及例如多羟基化合物、麦芽糊精、硅石衍生物、氧化钛、乙二醇例如戊二醇或丁二醇，辛酰乙二醇或维持皮肤菌群(flora)的活性成分。
在本发明的范围内，组合物可进一步包含(含有或不含有以上所列的化合物)至少一个选自下列的化合物：乙二醇、水合活性成分、角蛋白合成激活剂、角蛋白调节剂、软甲液、重新构造皮肤屏障的试剂(皮肤脂肪合成激活剂、过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPAR)激动剂)、角化细胞分化激活剂(类维生素A、钙、维生素D3、维生素C)、角化细胞增殖激活剂(类维生素A和维生素B5)、抗生素、抗细菌剂、抗真菌剂(山梨酸钾、对羟基苯甲酸酯(paraben)、吡啶酮乙醇胺盐、吡啶硫酮锌、环吡酮胺(Cyclopyrox)、硒盐、脱落调节剂(煤焦油、页岩油等)、抗病毒剂、皮脂调节剂(seboregulator)例如5-α还原酶抑制剂(特别是由国家科学实验室市场化的产品活性成分免疫调节剂例如他克莫司(tacrolimus)和吡美莫司(pimecrolimus)、噁唑啉、防腐剂、抗刺激物(热水和燕麦衍生物)、抚慰试剂、阳光过滤器和保护屏、抗氧化剂、生长因子、愈合剂或富营养分子、抗炎剂或含有未皂化的植物油的化合物。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的角蛋白合成激活剂优选为类维生素A、羽扇豆肽(由Silab市场化)表皮层角质层或表皮层颗粒层的主要蛋白(角蛋白)。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的抗生素优选为梭链孢酸、青霉素、四环素、原始霉素、红霉素、氯林可霉素、莫匹罗星、二甲胺四环素和多西环素(Doxycycline)。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的抗病毒剂优选为阿昔洛韦(acyclovir)和伐昔洛韦(Valacyclovir)。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的抗刺激物优选为甘氨酸、羽扇豆糖和/或肽和(噁唑啉衍生物)。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的抚慰试剂优选为α红没药醇(Bisabolol)和甘草衍生物。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的角蛋白调节剂优选为α羟酸及其衍生物。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的软甲液特别是水杨酸及其衍生物。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的抗氧化剂优选为维生素类(C、E)和痕量元素(铜、锌、硒)。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的生长因子优选为贝卡普明(becaplermin)和TGF-β(转化生长因子β)。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的愈合剂优选为维生素A、泛酰醇、氧化锌、镁、硅、羟基积雪草酸或积雪草酸。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的药物优选为适合于局部或口服使用以预防和/或治疗遗传性过敏症的药物(肾上腺皮质类、润肤剂)、预防和/或治疗痤疮的药物(抗生素、苯甲酰过氧化物、类维生素A、壬二酸、维生素PP、锌、细胞周期素(cyclin))、预防和/或治疗湿疹的药物(免疫调节剂、润肤剂、鲑鱼油、紫草、益菌素、益生菌)或者预防和/或治疗牛皮癣的药物(肾上腺皮质类、卡泊三醇(calcipotriol)、骨化三醇(calcitriol)、他扎罗汀(tazarotene)、杜松油、阿曲汀(acitretine)、PUVA治疗)。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的抗炎剂优选为类固醇抗炎性药物(SAID)例如肾上腺皮质类或非类固醇抗炎性药物(NSAID)。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的重新构造皮肤屏障的试剂和帮助刺激主要表皮脂肪合成的试剂优选为向日葵浓缩物，更优选为亚油酸向日葵浓缩物，例如由发展实验室市场化的活性成分(参见国际申请WO 01/21150)、未皂化植物油例如(参见国际申请WO 01/21150)和PPAR激动剂(罗格列酮(rosiglitazone)和吡格列酮(pioglitazone))。与组合物或药物的总重量相比，重新构造性试剂优选为以0.001％至30％的重量比例存在。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用的抗真菌剂优选为益康唑和酮康唑。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的抗败血病防腐剂，其例子为三氯生(triclosan)、洗必太和季铵。在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的免疫调节剂优选为他克莫司、吡美莫司和噁唑啉。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的噁唑啉优选为选自2-十一烷基-4-羟基甲基-4-甲基-1，3-噁唑啉、2-十一烷基-4，4二甲基-1，3-噁唑啉、(E)-4，4-二甲基-2-十七烷-8-烯基-1，3-噁唑啉、4-羟基甲基-4-甲基-2-十七烷基-1，3-噁唑啉、(E)-4-羟基甲基-4-甲基-2-十七烷-8-烯基-1，3-噁唑啉或2-十一烷基-4-乙基-4-羟基甲基-1，3-噁唑啉。更优选地，所述噁唑啉为2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉，其被称为OX-100或
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的含有未皂化植物油的化合物优选为选自鳄梨呋喃脂、未皂化鳄梨和大豆、羽扇豆油浓缩物、向日葵油浓缩物或其混合物。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的鳄梨呋喃脂优选为2-烷基呋喃，特别是由发展实验室市场化的活性成分可由国际申请WO 01/21605中所描述的方法获得。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的未皂化鳄梨和大豆优选为鳄梨的呋喃未皂化物与大豆的未皂化物分别以大约1/3至2/3的比例的混合物。未皂化鳄梨和大豆更优选为由发展实验室市场化的产品
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的羽扇豆油浓缩物优选为通过羽扇豆油(优选为甜的白色羽扇豆，例如在国际申请WO 98/47479中所描述的)分子蒸馏获得的浓缩物。它们优选包含重量为大约60％未皂化物。
在本发明的范围内可与C7糖(优选为D-甘露庚酮糖和/或鳄梨糖醇)联合使用(优选为具有协同效应)的向日葵油浓缩物优选为亚油酸向日葵浓缩物，例如由发展实验室市场化的活性成分(参见国际申请WO 01/21150)。
根据本发明的优选具体实施方式，本发明的组合物还包含至少一种选自下列的试剂：抗真菌剂(标准的药学或美容学上的，例如以上所定义的)、抗细菌剂(例如以上所定义的)、抗生素(标准的或内源的，例如以上所定义的)、抗病毒剂(例如以上所定义的)、含有未皂化物的植物脂肪提取物例如向日葵浓缩物、鳄梨浓缩物和大豆浓缩物(例如以上所定义的)、氧化锌、维生素(例如以上所定义的)、植物肽和糖(例如以上所定义的)、抗炎剂(例如以上所定义的)、角化细胞分化和/或增殖激活剂(例如以上所定义的)。
与组合物的总重量相比，组合物(即待市场化的最终产物)优选包含重量为0.001％至20％，更优选地重量为0.001％至10％，更优选地重量为0.01％至10％，更优选地重量为0.01％至5％，更优选地重量为0.01％至2％的C7糖。C7糖优选为甘露庚酮糖、鳄梨糖醇及其混合物。
根据本发明的优选具体实施方式，与组合物的总重量相比，组合物优选包含重量为0.01％至20％，更优选地重量为0.01％至10％，更优选地重量为0.05％至5％，更优选地重量为0.05％至2％的如上所定义的鳄梨糖提取物。
组合物的最优的施药方式、剂量安排和盖仑派医学的(galenic)形式可根据通常的在建立药学、皮肤病学或兽医学治疗(以局部或全身途径)时所考虑的标准来确定。
治疗特别适合于免疫抑制性或敏感性个体(怀孕妇女、超重或肥胖个体，糖尿病人)以及对抗真菌剂有抗性的病人或那些通过限制通常所使用的唑类分子的含量和与其接触而寻求避免抗性的病人。
实施例1：鳄梨糖水溶性提取物的制备
使用带有圆形刀片的切片机，将50千克的新鲜鳄梨(Hass品类)切成2-5mm厚的薄片，包括纹孔。干燥设备为温控的热空气干燥烤箱。将切成片的鳄梨以4-5cm的厚度分布于堆叠架子上。在80℃下干燥48小时。一旦干燥之后，将果实进行冷冻加压。这个过程在小的Komet实验室加压器(laboratory press)上进行。从而获得4千克的去脂肪的干燥果实(油块)。
将去脂肪的果实进行冷冻粉碎，然后再25升乙醇存在下进行回流提取。然后通过在Büchner漏斗上进行过滤从而回收去掉脂肪的粉末，在50℃下用烤箱干燥5个小时。
然后用70/30的水醇混合物(10升)洗涤油块，然后通过离心分离。回收可溶性分相(液相)，根据以下步骤进行纯化和浓缩：
-使用离子树脂进行去矿物化：通过OH-树脂然后通过H+树脂将C7糖去矿物化；
-10,000Da超滤：以带有4个10kDa界限的膜的系统进行超滤；
-真空浓缩：使用真空蒸发器将纯化的提取物进行浓缩，直至获得大约6％的干燥物质；
-调湿(conditioning)：将提取物的浓度调整至5％的干燥物质，然后用0.2μm界限的膜将提取物进行灭菌过滤。
以下的表3给出了根据以上所描述的方法所制备的鳄梨C7糖提取物的成分(5％干燥物质)：
 外表浅黄色溶液分析标准干燥物质5％pH4.0
 在420mm处的吸光度(1/2稀释)0.008在550mm处的吸光度(1/2稀释)0.004成分(占干燥物质的百分率)蔗糖1.8葡萄糖3.0D-甘露庚酮糖38.6果糖4.4鳄梨糖醇38.0
表3
根据相同的方法，制备了另外一个提取物，在下表4中给出了其pH，吸光度和C7糖含量。C7糖含量对应于鳄梨糖醇和D-甘露庚酮糖的总和(通过HPLC分析得到)。

表4
实施例2：鳄梨糖提取物对酵母菌致病原性的效应
在酵母菌(包括糠秕马拉色菌(其为脂肪依赖性酵母菌，与正常的人皮肤菌群共生)和人白色念珠菌)侵袭能力上分析了实施例1中所描述的鳄梨糖提取物(AV119)的效应。也分析了这些酵母菌和AV119对于促炎性和免疫调节性角化细胞因子的表达的效应。
1.所用的微生物
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，ATCC 29737)、酿脓链球菌(Streptococcus.pyogenes，ATCC 10389)、绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa，ATCC 25619)、人白色念珠菌(Candida albicans，ATCC53324)和糠秕马拉色菌(Malassezia furfur，ATCC 12078)从美国典型微生物保藏中心(Rockville，Maryland，USA)获得。
细菌菌株用作阴性对照，酵母菌人白色念珠菌用作阳性对照。本研究的主要靶标为糠秕马拉色菌。
2.细胞培养和处理
在人类正常的角化细胞(从正常成人皮肤外科手术样品获得)上进行测试。
3.对AV119在微生物存活性和生长方面的效应的研究
为了研究AV119对于金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、酿脓链球菌、人白色念珠菌和糠秕马拉色菌存活性的效应，使用各种浓度的AV119(0.03％至0.5％干燥物质)来确定是否对细菌和酵母菌的生长有抑制。
通过经修改的Perez等人的琼脂凝胶分散方法(Perez C等人，Anantibiotic assay by the agar well diffusion method.Acta Biologiae etMedicine Experimentalis.1990；15：113-115)来确定抗微生物活性。
在35±2℃温育培养板24小时，但对于人白色念珠菌来说是在30℃温育，对于糠秕马拉色菌来说是在30℃温育4天。测量抑制圈的直径可确定抗微生物效应。
在AV119和微生物接触24小时之后通过计数在选择性琼脂介质上的群落形成单元(CFU)来测定活的微生物，以此来排除AV119的直接的抗微生物效应。
所获得的结果表明：所分析的微生物(金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、酿脓链球菌、人白色念珠菌和糠秕马拉色菌)对于AV119来说均为抗性的。确实，在所测试的所用浓度，没有观测到对于细菌和酵母菌存活性或生长的显著性效应。
这些结果排除了AV119的直接的杀菌效应。
4.对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和酿脓链球菌的侵袭的测定
以0.1％的AV119预处理角化细胞24小时，然后以细菌悬浮液(每个细胞100个细菌)在37℃下感染2个小时。
然后洗涤细胞，在37℃下温育两个小时，然后裂解。然后将细胞裂解液在PBS中进行稀释，沉积于选择性琼脂介质上以对获得细胞内细菌的数目进行定量。
AV119没有改变金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和酿脓链球菌的侵袭。
5.对糠秕马拉色菌和人白色念珠菌的侵袭的测定
以0.1％的AV119预处理角化细胞24小时，然后以糠秕马拉色菌(酵母菌/角化细胞：30/1)或人白色念珠菌(酵母菌/角化细胞：10/1)感染24、48或72个小时。
然后洗涤细胞并染色(May-Grunwald-Giemsa)，在显微镜下观察。
通过糠秕马拉色菌或人白色念珠菌穿透的角化细胞的数目进行计数来评估引入百分率。
结果表明：糖抑制了糠秕马拉色菌和人白色念珠菌的吸收(表5)。
确实，在用AV119处理的角化细胞中，没有观察到酵母菌的穿透(在未处理的角化细胞中观察到了酵母菌的穿透)。

表5：AV119对糠秕马拉色菌和人白色念珠菌的侵袭能力的效应
6.絮凝测试
在振动之后以及休息一段时间之后(为了让絮凝物沉降)通过在660nm处测定糠秕马拉色菌和人白色念珠菌悬浮液的光密度来对絮凝进行定量。
在0.1％的AV119或者葡萄糖(阴性对照)或甘露聚糖(阳性对照)存在的情况下进行测定。
鉴于Ca²⁺例子对絮凝是必要的，在各种浓度的CaCl₂存在的情况下进行絮凝测定。
将试管振动15分钟，然后静置15分钟，然后在660nm处测定光密度。
观察到聚集；酵母菌细胞形成大的聚集物。
 Log[Ca⁺⁺]-1012人白色念珠菌1.951.971.821.91人白色念珠菌+AV1191.931.20.70.6
表6：人白色念珠菌的絮凝结果(OD660)
 Log[Ca⁺⁺]-1012糠秕马拉色菌22.11.981.99糠秕马拉色菌+AV1191.981.10.50.5
表7：糠秕马拉色菌的絮凝结果(OD660)
因此注意到：在AV119不存在的情况下，酵母菌人白色念珠菌和糠秕马拉色菌不发生聚集。加入AV119引起这两种酵母菌的絮凝。
7.通过实时RT-PCR分析促炎性细胞因子的表达
为了确定AV119是否干扰糠秕马拉色菌作用机理，分析了已知被酵母菌控制的几个细胞因子的表达。
通过实时RT-PCR确定了人类角化细胞中IL-1α、IL-6、IL-8和TGF-β1的mRNA的表达。
以0.1％的AV119预处理细胞24个小时，然后以糠秕马拉色菌(酵母菌/角化细胞：30/1)处理24和48个小时。
已知糠秕马拉色菌主要是通过降低细胞因子IL-1α以及通过增加TGF-β1的产生来发挥作用。因此，酵母菌调节宿主的促炎性应答来允许其自身的生存。
结果(图1A至1D)表明AV119能够使角化细胞恢复其对酵母菌侵袭的应答(通过正确的促炎性应答)。
附图说明：
图1A：IL-1α水平的增加(与对照相比的百分率)，从左至右：
AV119，24小时和48小时；
糠秕马拉色菌，24小时和48小时；
AV119+糠秕马拉色菌，24小时和48小时。
图1B：IL-6水平的增加(与对照相比的百分率)，从左至右：
AV119，24小时和48小时；
糠秕马拉色菌，24小时和48小时；
AV119+糠秕马拉色菌，24小时和48小时。
图1C：IL-8水平的增加(与对照相比的百分率)，从左至右：
AV119，24小时和48小时；
糠秕马拉色菌，24小时和48小时；
AV119+糠秕马拉色菌，24小时和48小时。
图1D：TGF-β水平的增加(与对照相比的百分率)，从左至右：
AV119，24小时和48小时；
糠秕马拉色菌，24小时和48小时；
AV119+糠秕马拉色菌，24小时和48小时。
以AV119处理角化细胞(被糠秕马拉色菌感染)引起细胞因子IL-1α、IL-6和IL-8产生的增加(与未经处理的被糠秕马拉色菌感染的角化细胞相比)。在处理24小后，这个增加对于IL-1α来说达到43％(图1A)，而对IL-6和IL-8来说达到超过100％(图1B和1C)。相反，在48小时后因为对AV119处理的反应而观察到TGF-β1产生的显著性减少(图1D)。
这些结果表明：角化细胞的防御能力恢复了。
最后，在处理的角化细胞的上清液中研究了糠秕马拉色菌的代谢物的可能的盐析。以上清液(以AV119处理并被糠秕马拉色菌感染的细胞的上清液)来温育经AV119处理的或未经处理的角化细胞。上清液的存在或不存在没有改变角化细胞的应答，这表明在经AV119处理并被被糠秕马拉色菌感染的细胞中，不存在特定的能够诱导促炎性应答的代谢物。
注释：统计学分析
每个实验至少重复5次。
结果以平均数±标准偏差(SD)的形式表达。
对每个实验进行ANOVA检验。通常在0.01和0.03之间评估P值，这确定了所获得的结果的统计学上的相关性(p<0.05)。