抗寄生虫药物多哇麦汀(doramectin)的中间体及其制备方法 本申请是中国专利申请号为94193687.2、申请日为1994年9月19日、发明名称为《抗寄生虫药物多哇麦汀(doramectin)的中间体及其制备方法》的分案申请。背景技术
本发明涉及在制备下式(I)化合物[以下称作多哇麦汀(doramectin)]中的新中间体。制备所述中间体的改进方法。本发明还涉及所述中间体直接作为抗寄生虫药物的应用。本发明进一步涉及从下式(II)化合物制备多哇麦汀的改进方法。
多哇麦汀为广谱抗寄生虫药物和驱肠虫药，它属于称作艾外麦汀(avermectin)的二级代谢产物。如美国专利5,089,480(这里引作参考)所述，通过在有氧条件和含有无机盐及可同化的碳和氮源的营养介质中发酵产生微生物菌株链霉菌属avermitilis如ATCC31267，31271或31272的链霉菌属可制备多哇麦汀。另一种产生艾外麦汀的微生物菌株是Dutton等人公开在Journal of Antibiotics，44357-65(1991)中的链霉菌属avermitilis ATCC53568。根据布达佩斯条约，链霉菌属avermitilis ATCC31267，3127l，31272和53568现在保藏在美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection)，12301 Parklawn Drive，Rockville，Maryland 20852，U.S.A.。
在发酵过程中产生的上述式(I)化合物的各种副产物可被分离。在上述微生物菌株的发酵中分离的主要副产物具有上述式(II)的结构。从链霉菌属avermitilis ATCC53568肉汤发酵分离的式(II)化合物由Dutton等人在上述文献中公开。式(II)化合物是活性抗寄生虫和驱肠虫化合物，该化合物在美国专利5,089,480中公开和要求保护。但是多哇麦汀是优选地。利用本发明方法将副产物式(II)转化为更有价值的式(I)的多哇麦汀抗寄生虫剂。
该方法中整个转化过程是消除C-23的羟基，在分子中C-22到C-23位留下一个双键。对略有差别的艾外麦汀上的相同转化的低产率方法已有报道。例如，其中C-25的环己基被仲丁基代替，其转化用五步以总产率3.6％完成(Mrozik等人，Tetrahedron Letters，1982，23，2377-78)。根据现有技术中的低产率方法，发明一种其中起始原料更有效地转化为多哇麦汀的方法是所期望的。
因此，本发明的目的是将式(II)化合物以高总产率转化为多哇麦汀，本发明进一步的目的是提供对本发明有用的中间体。
发明概述
本发明提供新的式(III)中间体其中R1是(C2-C5)烷酰基或芳氧乙酰基和R2是氢或芳氧硫代羰基。
本发明进一步提供新的式(IV)中间体：其中R1是(C2-C5)烷酰基或芳氧乙酰基。
本发明特别优选的化合物是其中R1为(C2-C5)烷酰基，苯氧乙酰基或(C1-C4)烷基苯氧乙酰基和R2为氢或(C1-C4)烷基苯氧硫代羰基的式(III)化合物。在该组化合物中特别优选的化合物是其中R1为乙酰基或苯氧乙酰基和R2为氢或对甲苯氧硫代羰基的式(III)化合物。
本发明还特别优选的化合物是其中R1为(C2-C5)烷酰基，苯氧乙酰基或(C1-C4)烷基苯氧乙酰基的式(IV)化合物。在该组化合物中特别优选的化合物是其中R1为乙酰基或苯氧乙酰基的式(IV)化合物。
本发明进一步提供制备式(I)化合物的方法，包括以下连续步骤：
(a)式(II)化合物与式(R4CO)2O或R4COX(其中R4为芳氧基甲基及X为Cl或Br)的酰化试剂反应形成其中R1为芳氧乙酰基及R2为H的式(III)化合物；
(b)其中R1为芳氧乙酰基及R2为H的式(III)化合物与式R3OC(＝S)X(其中R3为芳基及X为Cl或Br)化合物反应形成其中R1为芳氧乙酰基及R2为芳氧硫代羰基的式(III)化合物；
(c)其中R1为(C1-C4)烷酰基及R2为芳氧硫代羰基的式(III)化合物在反应惰性溶剂和约150℃到200℃，在碳酸钙的存在下和连续通入反应惰性气体时反应约2小时-48小时形成其中R1为芳氧乙酰基的式(IV)化合物；和
(d)其中R1为芳氧乙酰基的式(IV)化合物与碱在醇溶剂中反应形成式(I)化合物。
在该方法中特别优选的方法是其中所述反应惰性气体为氮气的方法。在这个特别优选的方法中更优选的方法是其中的碱为NH3，KOH，KCN，Na2CO3，NaHCO3，或NaOAc的方法。在这个特别优选的方法中更进一步优选的方法是利用本发明特别优选的化合物的方法。
本发明进一步涉及式(I)化合物的制备方法，该方法包括以下连续步骤：
(a)式II化合物与式(R4CO)2O或R4COX(其中R4为(C1-C4)烷基及X为Cl或Br)的酰化试剂反应形成其中R1为(C1-C4)烷酰基及R2为H的式(III)化合物；
(b)其中R1为(C1-C4)烷酰基及R2为H的式(III)化合物与式R3OC(＝S)X(其中R3为芳基及X为Cl或Br)反应形成其中R1为(C1-C4)烷酰基及R2为芳氧硫代羰基的式(III)化合物；
(c)其中R1为(C1-C4)烷酰基及R2为芳氧硫代羰基的式(III)化合物在反应惰性溶剂和约150℃到200℃，在碳酸钙的存在下和连续通入反应惰性气体时反应约2小时-48小时形成其中R1为(C1-C4)烷酰基的式(IV)化合物；和
(d)其中R1(C1-C4)烷酰基的式(IV)化合物与氢化铝锂，氰基硼氢化钠或三乙基硼氢化锂在反应惰性溶剂中反应形成式(I)化合物。
在该方法中特别优选的方法是其中所述反应惰性气体为氮气的方法。在这个特别优选的方法中更进一步优选的方法是利用本发明特别优选的化合物的方法。
本发明进一步提供治疗患有寄生虫病的哺乳动物的方法，包括给所述哺乳动物施用抗寄生虫有效量的式(III)或(IV)化合物。发明详述
根据下面详述的本发明方法容易制备本发明化合物。
本发明式(I)化合物为公开在美国专利5,089,480(在此引作参考)中的多哇麦汀(doramectin)，它可用作抗寄生虫和驱肠虫剂。从本发明所述的式(IV)化合物通过式(IV)化合物与氢化铝锂，氰基硼氢化钠或三乙基硼氢化锂反应或通过根据被裂解酯的性质皂化所述酯制备多哇麦汀。
当R1为(C2-C5)烷酰基时，通过其中R1为(C2-C5)烷酰基的式(IV)化合物与氢化铝锂，氰基硼氢化钠或三乙基硼氢化锂在反应惰性溶剂中和在温度约-100℃到约0℃反应约15分钟至24小时，将(C2-C5)烷酰氧基转化为羟基。该反应适宜的反应惰性溶剂取决于对还原剂的选择并且选自(但不限于)如乙醚、二噁烷，四氢呋喃，2-甲氧基甲基醚和1，2-甲氧基乙烷等这些溶剂。该反应特别优选的还原剂是三乙基硼氢化锂，特别好的溶剂是四氢呋喃。在试剂与反应物混合过程中，温度通常保持在-78℃到-70℃并且其后在一个短时间例如15分钟到1小时保持该温度。混合完成之后，通常在15分钟到1小时时内，将温度慢慢升至室温。淬灭反应混合物并根据本领域普通技术人员已知的标准方法分离产物式(I)化合物。
当R1为芳氧乙酰基时，通过其中R1为芳氧乙酰基的式(IV)化合物与碱金属氢氧化物在醇溶剂中和在温度约-75℃到约0℃反应约15分钟至24小时，将芳氧乙酰氧基转化为羟基。特别优选的碱金属氢氧化物是氢氧化钾，特别优选的溶剂是甲醇。该反应一般在温度-35℃进行约1小时，然后根据本领域普通技术人员已知的标准方法分离产物式(I)化合物。或者用氨代替碱金属氢氧化物进行该反应。当使用氨时上述反应一般在约-35℃至约0℃进行约1小时至16小时。该反应优选在甲醇中在-15℃进行约5-6小时。根据本领域普通技术人员已知的有机化学标准方法分离产物式(I)化合物。
根据本发明方法容易制备本发明式(IV)化合物，即本发明式(III)化合物在高沸点溶剂如(但不限于)2-甲氧基乙基醚或2-乙氧基乙基醚中，在温度约150℃至约200℃反应约2小时至48小时。为了获得最大产率，将反应混合物中连续通入反应惰性气体如氮气或氩气。在156℃至158℃和2-甲氧基乙基醚中连续通入氮气进行反应12小时是特别优选的。当反应完成后根据本领域普通技术人员知已的标准方法分离产物式(IV)化合物。
根据本发明方法制备其中R2为芳氧硫代羰基的本发明式(III)化合物，即将R2为氢的本发明式(III)化合物与式R3OC(＝S)X的卤代硫羰甲酸酯(其中R3如上定义)在惰性溶剂中在质子清除剂如吡啶或4-二甲氨基吡啶存在下进行反应约30分钟到12小时。该反应适宜的反应惰性溶剂包括乙酸乙酯，1，2-二甲氧基乙烷，2-甲氧基甲醚，2-甲氧基乙醚，芳烃溶剂如甲苯，二甲苯和苯，以及氯代烃溶剂如氯仿和二氯甲烷。该反应优选的溶剂是乙酸乙酯或甲苯。该反应进行2-4小时是优选的。将反应混合物加热至40℃到约具体反应所选溶剂的回流温度。淬灭反应混合物并根据标准方法分离产物即其中R2为芳氧硫代羰基的式(III)化合物。
根据本发明方法容易制备其中R2为氢R1为(C2-C5)烷酰基或芳氧乙酰基的式(III)化合物。将式(II)化合物与酰化试剂在反应惰性溶剂中，在质子清除剂如(但不限于)吡啶，4-二甲氨基吡啶，哌啶，吡咯烷，三乙胺，吗啉或二异丙基乙胺的存在下，在温度度约-75℃至约0℃进行反应约5分钟至约8小时。该反应适宜的惰性剂包括芳烃如甲苯，苯或二甲苯或氯代烃如二氯甲烷，氯仿或1，2-二氯乙烷。适宜的酰化试剂为酰卤，通常为酰氯或酸酐。当酰氯被用作该反应中的酰化试剂时，特别优选的有机胺为吡啶。当酸酐被用作该反应中的酰化试剂时，特别优选的有机胺为三乙胺。无论用酰氯还是酸酐作酰化试剂，一般这些反应优选的溶剂均匀为氯代烃。其中二氯甲烷是特别优选的。当反应完成时，淬灭反应混合物并根据有机化学的标准方法分离产物即其中R2为(C2-C5)烷酰基或芳氧乙酰基的式(III)化合物。
如美国专利5,089,480(在此引作参考)所述，经过产生链霉菌属avermitilis菌株如ATCC 31267，31271或31272的艾外麦汀的发酵可分离式(II)化合物。获得式(II)化合物的其它方法包括从链霉菌属avermitilis ATCC53568的肉汤发酵分离，如Dutton等人在Journalof Antibiotics，44，357-65(1991)中所述。
本发明新的化合物(III)-(IV)用作从式(II)化合物合成式(I)化合物即多哇麦汀的中间体。
本发明新的化合物(III)-(IV)还用作抗寄生虫剂。所说化合物(III)-(IV)作为抗寄生虫剂的实用性通过Gration等人在VeterinaryParasitology，42，1992，273-279中所述啮齿动物模型体内所述化合物的活性来证明。
式(III)和(IV)化合物是高活性抗寄生虫剂，它们作为驱虫剂，杀外寄生虫剂，杀昆虫剂和杀螨虫剂具有特别的实用性。
式(III)和(IV)化合物对治疗和预防由内寄生虫引起的疾病特别是蠕虫病是有效的，蠕虫病经常由一组寄生虫即线虫引起，并且在猪，羊，马和牛以及感染家养动物和家禽中造成严重的经济损失。多哇麦汀对付感染各种动物的其它线虫也是有效的，所述线虫包括，例如狗的恶丝线虫，和各种寄生虫如钩口线虫属，板口线虫，蛔虫，类圆线虫属，毛线虫属，毛细线虫属，鞭虫属，蛲虫属和在血液或其它组织和器官中发现的寄生虫如丝虫属和外肠中的类圆丝虫属和毛线虫属。
式(III)和(IV)化合物对于治疗和预防外寄生虫感染特别是节肢动物外寄生虫和飞虫如蝉，螨，虱，蚤，蝇，叮咬虫类和可感染牛和马的行走双翅幼虫也是有价值的。
式(III)和(IV)化合物对家庭害虫如蟑螂，衣物中的蛾，地毯甲虫和飞虫也具有杀虫活性，以及对付储存在谷物和农业植物中的害虫如蜘蛛螨，蚜虫，毛虫和行走直目翅如蚱蜢也是有用的。
式(III)和(IV)化合物以适合具体用途的制剂对治疗的宿主动物品种和寄生虫或所述害虫进行给药。作为驱虫剂该化合物可以口服胶囊，丸剂，片剂，优选液体灌剂形式给药，或者通过注射，灌注或输注给药。根据标准兽医应用的方法制备上述制剂。因此，胶囊，丸剂或片剂可通过将活性成分与适宜的精细的稀释剂或另加分散剂和/或粘结剂如淀粉乳糖，滑石，硬脂酸镁等载体混合来制备。通过将活性成分分散在含有分散剂或湿润剂等液体溶液中可制备灌用制剂，注射剂可以灭菌溶剂形式制备，其中含有其它物质例如足量的盐或葡萄糖以使溶液与血液等渗。这些制剂将根据活性化合物的重量变化，而该重量又取决于被治疗宿主动物的种类，疾病的严重程度，感染的类型和宿主的体重。口服或注射给药一般剂量约为单剂量每公斤体重0.001-10mg或分剂量用1-5天是满意的，当然，也可以使用常量即指定较高或较低的剂量范围，这些均属于本发明范围。对于口服或注射给药更优选的剂量为单剂量每公斤体重约0.02-2mg或分剂量使用1-5天。
本发明化合物还可与运动饲料一起给药，为此可制备浓饲料添加剂或预混合料以便与运物饲料混合。
为了用作杀虫剂和治疗农业害虫，可根据标准农业方法将化合物以喷雾剂，粉剂，乳剂等形式使用。
此处和权利要求书中所用术语“反应惰性溶剂”意指不与起始原料，试剂，中间体或产物相互作用且不以任何方式影响所需产物的产率的任何溶剂。术语“反应惰性气体”意指不与起始原料，试剂，中间体或产物相互作用且不以任何方式影响所需产物的产率的任何气体。
此处和权利要求书中所用术语“芳基”意指苯基或任意被1-3个(C1-C4)烷基，(C1-C4)烷氧基或卤素取代的苯基。
此处和权利要求书中所用术语“芳氧基”意指芳氧基或任意被1-3个(C1-C4)烷基，(C1-C4)氧基或卤素取代的苯氧基。
通过下列实施例说明本发明。但是应该理解本发明范围不限于对这些具体实施例的描述。实施例1式(III)化合物(其中R1为苯氧乙酰基及R2为H)
将含20g式(II)化合物的400ml二氯甲烷和10ml无水吡啶溶液在氮气下冷却至-78℃并在10分钟内滴加15.1ml苯氧乙酰氯。将反应混合物保持在-70℃至-78℃ 1.5小时，然后用250ml饱和碳酸氢钠溶液淬灭。将混合物搅拌1.5小时，分离有机相，用250ml饱和碳酸氢钠溶液再萃取，并用无水硫酸镁干燥。真空除去溶剂得到25.7g97％纯标题化合物为米色固体(产率96％)。HPLC保留时间为7.9分钟(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV 245nm)。实施例2 式(III)化合物(其中R1为苯氧乙酰基及R2为对甲苯氧硫代羰基)
将含10g实施例1的标题化合物的100ml甲苯和30ml无水吡啶溶液在氮气下加热100℃并在5分钟内加入7.7ml O-对甲苯氯硫羰甲酸酯。将混合物保持在100±5℃2小时以完成反应，再冷却至50℃，并真空除去溶剂得到棕色剩余物。将其溶解在120ml甲苯中，用120ml水萃取溶液在用100ml饱和碳酸氢钠溶液萃取两次。将分离的有机相浓缩至约80ml，过滤，并用装有两个硅胶柱的Prep-500系统(Waters Associates)进行色谱分离。洗脱剂是75∶25己烷∶乙酸乙酯。合并含有产物的部分并真空除去溶剂，得到9.8g 95.7％纯产物为淡黄棕色固体(产率83.2％)。HPLC保留时间为15.2分钟(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV 245nm)。实施例3 5，4″-O-二苯氧乙酰基-多哇麦汀(其中R1为苯氧乙酰基的式(IV)化合物)
将4.5g碳酸钙加到8.5g实施例2的标题化合物的90ml甲氧基乙醚溶液中。然后在连续通入氮气和充分搅拌下将混合物加热至156-158℃。在156-158℃24小时后，分析混合物表明含有6.68g产物(产物90％)。过滤混合后，真空蒸发溶剂得到产物为黄色胶状物。HPLC保留时间为10.4分钟(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV 245nm)。实施例4 5，4″-O-二苯氧乙酰基-多哇麦汀(其中R1为苯氧乙酰基的式(IV)化合物)
将500mg碳酸钙加到含1g实施例2的标题化合物的20ml 2-乙氧基乙醚溶液中。然后在连续通入氮气和充分搅拌下将混合物加热至185℃。在185℃ 5小时后，将混合物冷却至室温并过滤。HPLC分析溶液(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV 245nm)表明含有796mg产物(产率91％)。实施例5 多哇麦汀(式(I)化合物)
将含500mg实施例3的标题化合物的1ml 2-甲氧基乙醚和3.5ml甲醇溶液冷却至-35℃并在1分钟内滴加2.1ml 2M甲醇的KOH溶液。在充分搅拌下将混合物保持在35℃1小时以完成反应，然后加入252mg冰醋酸的0.5ml甲醇溶液。中止冷却，开始结晶后在1小时内滴加2.2ml水。室温搅拌1小时后，过滤收集结晶，用0.5ml 7∶3甲醇∶水洗涤两次并在真空箱中干燥。从甲醇/水中重结晶得到272mg 93.8％纯产物(产率70.6％)。HPLC保留时间为6.5分钟(Ultrasphere ODS5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水860∶51∶89；1.5ml/min；UV 245nm)。实施例6 多哇麦汀(式(I)化合物)
将含75ml氨的甲醇饱和溶液加到6.6g实施例3的标题化合物的75ml的甲醇(冷却至-15℃)溶液中。将混合物保持在-15℃ 5.5小时以完成反应，然后通入氮气30分钟。真空除去挥发性物质，将所得淡黄色油溶解在45ml甲醇中，过滤使溶液澄清。开始结晶后向溶液中滴加5ml水。室温搅拌混合物2小时然后在2.5小时内加入6.3ml水。再搅拌1.5小时后，过滤收集固体并用2.5ml的甲醇∶水(7∶3)洗涤两次。室温真空箱干燥24小时后得到3.75g 87.7％纯产物(产率64％)。实施例7 式(III)化合物(其中R1为乙酰基及R2为H)
将28.6g三乙胺和1.06g 4-二甲氨基吡啶在氮气下加到20g式(II)化合物的200ml二氯甲烷溶液中。将溶液冷却至-5℃-0℃并在5分钟内滴加14.5g乙酐。将混合物保持在0℃20分钟以完成反应，然后在0℃用200ml饱和碳酸氢钠溶液淬灭。用饱和碳酸氢钠再萃取有机相两次，干燥(MgSO4)，真空除去溶剂得到22.2g 95％纯产物为白色固体(产率96.7％)。HPLC保留时间为6.6分钟(Ultrasphere ODS5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水905∶36∶62；1.0ml/min；UV 245nm)。实施例8 式(III)化合物(其中R1为乙酰基及R2为H)
将7.24g三乙胺和266mg4-二甲氨基吡啶在氮气下加到5g式(II)化合物的100ml甲苯的浆状物中。将混合物冷却至-15℃并在5分钟内滴加3.58g乙酐。将混合物在-10℃至-15℃搅拌30分钟以完成反应，然后用50ml饱和碳酸氢钠溶液淬灭并在室温搅拌1小时。用50ml饱和碳酸氢钠再萃取有机相两次，用Dean-Stark仪通过部分蒸馏溶剂来干燥。用HPLC(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水902∶36∶62；1.0ml/min；UV 245nm)分析溶液得到5.27g产物(产率96.5％)。实施例9 式(III)化合物(其中R1为乙酰基及R2为为对甲苯氧硫代羰基)
将60ml无水吡啶在氮气下加到含20g实施例7的标题化合物的200ml乙酸乙酯中，接着加入22.2g O-对甲苯氯硫羰甲酸酯形成黄色沉淀溶液。将混合物在充分搅拌下加热回流2小时以完成反应，然后冷却至室温。真空除去挥发性物质并将剩余物在150ml乙酸乙酯和150ml水间分配。用饱和碳酸氢钠水溶液萃取有机相两次再用水萃取一次。干燥(MgSO4)乙酸乙酯相并真空除去溶剂。将剩余物溶解在25ml乙酸乙酯和5ml二氯甲烷中，过滤使溶液澄清并且用装有两个硅胶柱的Prep-500系统(Waters Associates)进行色谱分离。洗脱剂为70∶25∶5己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷。合并含产物部分并在真空中蒸发溶剂，得到19g(产率82.6％)产物为淡黄色固体。HPLC保留时间为17.1分钟(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水902∶36∶62；1.0ml/min；UV 245nm)。实施例10 5，4″-O-二乙酰基-多哇麦汀(其中R1为乙酰基的式(IV)化合物)
将9.5g碳酸钙悬浮液在连续通入氮气下加热至156-158℃。向该混合物中加入18.7g实施例9的标题化合物；加热，搅拌并通入氮气25小时。冷却至50℃后，过滤混合物并真空除去溶剂。将剩余物溶解在55ml二氯甲烷中，加入25ml乙酸乙酯和70ml己烷，过滤溶液并用装有两个硅胶柱的Prep-500系统(Waters Associates)进行色谱分离。洗脱剂为70∶25∶5己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷。合并含有产物的部分并真空除去溶剂得到13.7g 87％纯产物为黄色固体(产率74.8％)。HPLC保留时间为11.1分钟(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水902∶36∶62；1.0ml/min；UV 245nm)。实施例11 5，4″-O-二乙酰基-多哇麦汀(其中R1为乙酰基的式(IV)化合物)
将250g碳酸钙加到含504mg实施例9的标题化合物的25ml 2-乙氧基乙醚溶液中。然后将混合物在充分搅拌和连续通入氮气下加热至183-185℃。在183-185℃ 1.5小时后，分析混合物表明含有产物364.4mg(产率84.7％)。
实施例12 多哇麦汀(式(I)化合物)
在45分钟内和冷至-72℃的氮气下在含7.3g实施例10的标题化合物的145ml无水四氢呋喃溶液中滴加59.5ml 1.0M三乙基硼氢化锂的四氢呋喃溶液。将反应混合物在-72℃至-70℃搅拌1小时，然后使其慢慢升至室温以完成反应。用75ml水和75ml二氯甲烷淬灭混合物并搅拌1小时。分离两相，水相用75ml二氯甲烷萃取，合并的有机相用75ml饱和碳酸氢钠洗涤两次。真空蒸发溶剂，将剩余物溶解在54ml甲醇中，并过滤使溶液澄清。结晶开始后在20分钟内向溶液中滴加6.9ml水。将混合物在室温搅拌15分钟，然后在30分钟内滴加6.2ml水。将混合物搅拌18小时，过滤收集固体，用2ml75∶25甲醇∶水洗涤两次并在真空箱中干燥，得到4.27g 89.5％纯产物(产物57.3％)。实施例13 通入氮气在热消去反应中的作用
将2.5g碳酸钙加到含5.3g实施例2的标题化合物的55ml 2-甲氧基乙醚溶液中。将混合物在充分搅拌和经过气体分散管连续通入氮气下加热至157℃。在154-157℃30小时后，将混合物冷却至室温，过滤并用HPLC分析(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV 245nm)。分析表明含有3.93g 5，4″-O-二苯氧乙酰基多哇麦汀(产率84.8％)。
该实验在相同条件下重复，包括使用相同的实施例标题化合物，但是没有氮气通入。在这种情况下产物的产率为47.5％，说明通入氮气的有益效果。