抗细菌活性的15元内酰胺类酮内酯 【技术领域】
国际专利分类：A61K31/70,C07H17/08技术难题
本发明涉及红霉素A大环内酯抗菌素类的新型化合物。特别地，本发明涉及6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高-和6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A(homoerythromycin)类的新型15元环酮氮杂内酯类(ketoazalides)、涉及其制备的中间产物及方法、涉及其与无机或有机酸的药物上可接受的加成盐、涉及药物组合物的制备方法以及药物组合物用于治疗细菌感染的用途。现有技术
红霉素是一种大环内酯抗菌素，其结构特征在于带有C-9酮和两种糖，L-克拉定糖和D-德糖胺的14元内酯环，其中所述的糖在C-3和C-5位上以糖苷方式结合到所述分子的糖苷配基部分(McGuire：《抗菌素化疗法》(Antibiot.Chemother.)1952,2:281)。40多年来一直认为红霉素A是治疗由象军团菌属、支原体属、衣原体属和螺杆菌属这样菌株的革兰氏阳性菌引起的呼吸道和生殖器感染的安全而有效的抗菌剂。在使用口服制剂后所观察到的生物利用度的改变、许多患者中的胃部产生不耐受性和在酸性介质中的活性缺失是使用红霉素A疗法中的主要缺陷。糖苷配基环地螺环化成功地被C-9酮或C-6和/或C-12位上的羟基的化学转化所抑制。因此，例如通过使红霉素A中的C-9酮与盐酸羟基胺发生肟化反应、使所得的9(E)-肟发生贝克曼重排并还原由此形成的6,9-亚氨醚(6-脱氧代-9-脱氧代-9a-氮杂-9a-高红霉素A6,9-环亚氨醚)，获得9-脱氧代-9a-氮杂-9a-高红霉素A，它是第一种半合成的带有15元氮杂内酯环的大环内酯(Kobrehel G.等，美国专利4,328,334,5/1982)。通过使按照埃谢韦勒-克莱克反应将新引入的桥环9a-氨基还原性甲基化来合成9-脱氧代-9a-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A(阿齐红霉素)，它是一种新型氮杂内酯(azalide)抗菌素类的原型(Kobrehel G.等，BE 892 357,7/1982)。除具有包括抗革兰氏阴性菌在内的广抗菌谱外，阿齐红霉素的特征还在于具有较长的生物半衰期、输送到施用部位的特异性机制和较短的治疗期。阿齐红霉素能够透入并蓄积在人体吞噬细胞内，从而导致对军团菌属、衣原体属和螺杆菌属菌株的胞内致病微生物起改进作用。
此外，公知红霉素A的C-6/C-12螺环化还受到糖苷配基环中的C-6羟基的O-甲基化的抑制(Watanabe Y.等，美国专利4,331,803,5/1982)。通过使红霉素A与苄氧基羰基氯反应、随后使所得的2’-O,3’-N-双(苄氧基羰基)-衍生物甲基化、消除保护基和3’-N-甲基化而形成6-O-甲基-红霉素A(甲红霉素-克拉霉素)(Morimoto S.等《抗菌素杂志》(J.Antibioties)1984,37,187)。如果与红霉素A比较，那么甲红霉素-克拉霉素在酸性介质中明显更为稳定并在体外表现出对革兰氏阳性菌菌株的活性增加(Kirst H.A.等《抗菌剂和化疗法》(Antimicrobial Agents and Chemother.)1989,1419)。
对14元大环内酯类的新近研究已经产生了新型大环内酯抗菌素即酮内酯类(ketolides)，其特征在于3-酮基取代了中性糖L-克拉定糖，众所周知后者甚至在弱酸性介质中也具有不稳定性(Agouridas C.等，EP 596802 A1,5/1994；Le Martret O.,FR 2697524 A1,5/94).酮内酯类在体外表现出抗由抗性生物体诱发的MLS(大环内酯、林肯酰胺和链阳菌素B)的显著增强的活性(Jamjian C.《抗菌剂化疗》(Antimicrob.Agents Chemother.)1997,41,485)。
根据公知和确定的现有技术，迄今为止还没有描述过来自6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高-和6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A类的15元环酮氮杂内酯类及其与无机或有机酸的药物上可接受的加成盐、其制备方法及其中间产物以及药物组合物的制备方法及其用途。
本发明的目的以下列步骤为代表：使6-O-甲基红霉素A的9(E)-和9(Z)-肟发生贝克曼重排、在由此获得的8a-和9a-内酰胺类中水解克拉定糖、保护德糖胺中2’-位上的羟基、氧化3-羟基并除去保护基，由此获得迄今为止还没有描述过的来自6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高-和6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A类的新型15元环酮氮杂内酯类。技术方案
按照如下步骤获得来自具有通式(Ⅰ)的6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高-和6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A类的新型15元环酮氮杂内酯类(ketoazalides)及其与无机和有机酸类的药物上可接受的加成盐：其中A代表NH基且B同时代表C=O基；或A代表C=O基且B同时代表NH基；R1代表OH基、通式(Ⅱ)的L-克拉定糖基或与R2一起代表酮；R2代表氢或与R1一起代表酮；R3代表氢或C1-C4的链烷酰基；步骤1：本发明的第一步包括将通式(Ⅲ)的6-O-甲基红霉素A(甲红霉素-克拉霉素)的C-9酮肟化成相应的肟。酮转化成肟是众所周知的反应，该反应通常用盐酸羟基胺在有合适的无机或有机碱类存在的情况下在合适的质子溶剂或非质子传递溶剂中进行。相对于甲红霉素-克拉霉素而言，以1-15等摩尔过量、优选以10-等摩尔过量使用盐酸羟基胺。将碱金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐和乙酸盐作为合适的碱类使用，而将C1-C3的醇类作为溶剂使用。优选的碱是碳酸钠或乙酸钠且优选的溶剂是甲醇。一般来说，该反应在0-80℃的温度下、优选在65℃下进行2小时至几天，但基本上在8-20小时内完成。按照常规方式进行处理，例如通过在真空中蒸发溶剂；添加水与有机溶剂的混合物；随后在碱介质中、优选在pH8.0-10.0下萃取。将二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚和甲苯用作产物的萃取溶剂，氯仿是优选的萃取溶剂。通过分离有机层并蒸发溶剂来分离产物，从而产生约1∶1比例的通式(Ⅳ)的6-O-甲基红霉素A9(E)-和9(Z)-肟的混合物。如果必要，通过使用二氯甲烷-甲醇-氢氧化铵90∶9∶1.5系统的硅胶柱层析来进行异构体的分离，从而产生色谱均相的具有Rf值为0.446的通式(Ⅳa)的6-O-甲基红霉素A9(E)-肟；和色谱均相的具有Rf值为0.355的通式(Ⅳb)的6-O-甲基红霉素A9(Z)-肟。步骤2：
通过贝克曼重排反应(参见“综合有机化学”，I.O.Sutherland(编辑)，Pergamon Press,New York,1979,第2卷，398-400和967-968)而将通式(Ⅳa)的6-O-甲基红霉素A9(E)-肟转化成通式(Ⅰ)的6-O-甲基-红霉素A，其中A代表NH基；B同时代表C=O基；R1代表通式(Ⅱ)的L-克拉定糖基；R2和R3相同并代表氢。一般来说，酮肟的贝克曼重排产生甲酰胺或就环系而言产生内酰胺类。这种重排的机理包括肟羟基预转化成更好的离去基团，它在第二个反应步骤相对于离去基团反位的碳原子的同时迁移下被裂解。在水性介质中形成腈鎓离子作为中间产物，它与水反应生成一种合适的酰胺。
贝克曼重排反应在酸性、中性和碱性条件下进行。催化重排的常用酸性试剂包括浓硫酸、多磷酸、tionyl chloride、五氯化磷、二氧化硫和甲酸。由于大环内酯分子在酸性介质中的敏感性且特别是由于中性糖L-克拉定糖易发生裂解，所以这些试剂不适于将通式(Ⅳa)的肟重排成通式(Ⅰ)的6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A，其中A、B、R1、R2和R3具有上述含义。优选的情况是，通过最初用烷基磺酰卤类、芳基磺酰卤类或芳基磺酰酐类使肟羟基O-磺化来进行肟(Ⅳa)的贝克曼重排。分离中间产物肟磺酸酯或通常在原位进行重排成所需产物。一般来说，磺化和重排在有有机或无机碱类存在的情况下进行。
催化肟(Ⅳa)重排的优选磺化试剂包括甲磺酰氯、苯磺酰氯、4-乙酰氨基磺酰氯、对甲苯磺酰氯、苯磺酸和对甲苯磺酸的酐类。该反应在有无机碱类诸如碳酸氢钠或碳酸钾存在的情况下或在有有机碱类诸如吡啶、4-二甲氨基吡啶、三乙胺和N,N-二异丙基-胺存在的情况下进行。合适的溶剂包括含水混合物诸如丙酮-水混合物和二噁烷-水混合物以及有机溶剂诸如二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、四氢呋喃、甲苯、乙腈和吡啶。一般来说，通过使用1-3等摩尔过量的磺化试剂并使用相同或更大等摩尔量的碱在-20到50℃的温度下进行该反应。通常将吡啶用作溶剂并同时用作碱。优选的情况是，肟(Ⅳa)的贝克曼重排在丙酮-水混合物中使用双倍等摩尔过量的对甲苯磺酰氯和碳酸氢钠来进行。如果必要，通过使用二氯甲烷-甲醇-氢氧化铵90∶9∶1.5溶剂系统的硅胶柱层析来纯化产物，从而产生色谱均相的6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A。
按照与9(E)-肟(Ⅳa)类似的方式来进行式(Ⅳb)的6-O-甲基红霉素A9(Z)-肟转化成通式(Ⅰ)的6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A的贝克曼重排，其中A代表C=O基，B同时代表NH基；R1代表通式(Ⅱ)的L-克拉定糖基；且R2和R3相同并代表氢。
步骤3：
如果合适，使步骤2中通式(Ⅰ)的6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A或6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A与强酸类、优选0.25-1.5N的盐酸在室温下的10-30小时内发生作用，其中A、B、R1、R2和R3具有上述含义，从而产生通式(Ⅰ)的6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A或6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A的3-O-脱克拉定糖基-3-氧-衍生物，其中A代表NH基且B同时代表C=O基；或A代表C=O基且B同时代表NH基；R1代表OH基；且R2和R3相同并代表氢。
步骤4：
如果合适，使步骤3中通式(Ⅰ)的3-O-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A或6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A与德糖胺中2’-位上的羟基发生选择性酰化反应，其中A、B、R1、R2和R3具有上述含义。在0-30℃的温度下，通过使用带有多达4个碳原子的羧酸的酐类、优选使用乙酸酐在有无机或有机碱类存在的情况下在惰性有机溶剂中进行酰化反应，产生通式(Ⅰ)的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A2’-O-乙酸酯或3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A2’-O-乙酸酯，其中A代表NH基且B同时代表C=O基；或A代表C=O基且B同时代表NH基；R1代表OH基；R2是氢且R3是乙酰基。将碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、吡啶、三丁胺用作合适的碱类，优选使用碳酸氢钠。将二氯甲烷、二氯乙烷、丙酮、吡啶、乙酸乙酯、四氢呋喃用作合适的惰性溶剂，优选使用二氯甲烷。
步骤5：
如果合适，在10℃-室温的温度下，按照改进的Moffat-Pfitzner方法，在有二甲亚砜和三氟乙酸吡啶鎓作为催化剂存在的情况下使步骤4中通式(Ⅰ)的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A-2’O-乙酸酯或3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A-2’O-乙酸酯与N,N-二甲氨基丙基-乙基-碳化二亚胺在惰性有机溶剂、优选在二氯甲烷中进行糖苷配基环C-3位上羟基的氧化反应，其中A、B、R1、R2和R3具有上述含义，产生通式(Ⅰ)的3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A2’-O-乙酸酯或3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A2’-O-乙酸酯，其中A代表NH基且B同时代表C=O基；或A代表C=O基且B同时代表NH基；R1和R2一起代表酮且R3代表乙酰基。
步骤6：
接下来使步骤5中通式(Ⅰ)的3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A2’-O-乙酸酯或3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A2’-O-乙酸酯在低级醇类、优选在甲醇中在室温至溶剂的回流温度下进行溶剂分解反应，其中A、B、R1、R2和R3具有上述含义，产生通式(Ⅰ)的3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素或3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A，其中A代表NH基且B同时代表C=O基；或A代表C=O基且B同时代表NH基；R1和R2一起代表酮且R3代表氢。
通过使来自通式(Ⅰ)的6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A和6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A类的新型化合物与至少等摩尔量的合适无机或有机酸诸如盐酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、硬脂酸、琥珀酸、乙基琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和月桂基磺酸类在对反应来说是惰性的溶剂中进行反应来获得也属于本发明目的的药物上可接受的加成盐，其中A、B、R1、R2和R3具有上述含义。如果加成盐在对反应来说是惰性的溶剂中是不溶的，那么通过过滤来分离所述的加成盐，在其它情况中通过用非溶剂沉淀或通过蒸发溶剂、多数情况下通过冻干法来分离加成盐。
通过根据NCCLS方案(临床实验室标准国家委员会，文件M7-A2，第10卷，第8期，1990和文件M11-A2，第10卷，15,1991)的微量稀释法测定通式(Ⅰ)的新型化合物(其中A、B、R1、R2和R3具有上述含义)及其药物上可接受的与无机或有机酸类的加成盐对一系列标准测试微生物和临床分离物的体外抗菌作用。按照NCCLS方案(文件M7-A2，表3,M100-S4)、借助于对照菌株金黄色葡萄球菌ATTC29213(美国典型培养物保藏中心)来进行实验室方法的对照。
将来自实施例3的6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A与阿齐红霉素、红霉素和甲红霉素-克拉霉素比较的对一系列标准测试微生物的体外抗菌作用列在表1中。
表1：6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A(实施例3)的体外抗菌作用与阿齐红霉素(Az)、红霉素(Er)和甲红霉素-克拉霉素(Cl)的比较
测试微生物 Az Er Cl 实施例3单核细胞增生利斯特 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125氏菌ATCC 7644金黄色葡萄球菌ATCC 0.5 0.25 0.5 0.5
25923表皮葡萄球菌ATCC 1.0 0.25 0.25 0.5
12228粪肠球菌ATCC 35550 0.5 1.0 0.25 1.0肺炎链球菌ATCC 6305 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125化脓链球菌ATCC ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125
19615产气荚膜梭状芽孢杆 0.125 0.5 0.125 0.25
菌ATCC 13124粘膜炎莫拉氏菌ATCC ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125
25238胎儿弯曲杆菌ATCC ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125
19438空肠弯曲杆菌ATCC ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125 ＜0.125
33291弗劳地氏柠檬酸杆菌 4.0 64.0 64.0 16.0
ATCC 8090大肠杆菌ATCC 25922 2.0 32.0 32.0 8.0奇异变形菌ATCC 64.0 ＞128.0 ＞128.0 32.0
12453奇异变形菌ATCC 64.0 ＞128.0 ＞128.0 32.0
43071猪霍乱沙门氏菌ATCC 2.0 64.0 32.0 8.0
13076弗氏志贺氏菌ATCC 1.0 32.0 32.0 4.0
12022小肠结肠炎耶尔森氏 1.0 16.0 16.0 4.0
菌ATCC 9610流感嗜血杆菌ATCC 0.5 2.0 4.0 1.0
49247流感嗜血杆菌ATCC 1.0 4.0 8.0 1.0
49766铜绿假单胞菌ATCC 64.0 ＞128.0 ＞128.0 32.0
25619
通过下列实施例来举例说明本方法，它们不以任何方式来限定本发明的范围。实施例16-O-甲基红霉素A9(E)-和9(Z)-肟的制备方法A
将甲醇(100ml)中的6-O-甲基红霉素A(2.0g,0.003摩尔)加热到回流温度，加入盐酸羟基胺(2.0g,0.03摩尔)和碳酸钠(0.2g,0.002摩尔)并在回流条件下加热该体系，同时搅拌3小时。然后再加入相同量的盐酸羟基胺和碳酸钠并在回流条件下将该体系进一步加热6小时。在减压条件下蒸发甲醇并加入水(200ml)和氯仿(100ml)，将pH调元至9.8，分离该层并再用氯仿将水层萃取两次。将合并的有机提取物用碳酸钾干燥、过滤并在减压下蒸发，得到2.0g的标题产物的混合物。通过使用二氯甲烷-甲醇-浓氢氧化铵90∶9∶1.5系统的硅胶柱层析来获得0.63g色谱均相的具有Rf值为0.446的6-O-甲基红霉素A9(E)-肟和0.61g色谱均相的具有Rf值为0.355的6-O-甲基红霉素A9(Z)-肟。9(E)-肟：Rf 0.418，乙酸乙酯-(正己烷)-二乙胺，100∶100∶20IR (KBr)cm-1:3449, 2974,2939,2832,2788,1735,1638,1459,1379,1348,1169,1112,1054,1012,957,835,755.1H NMR(300MHz,DCDl3)δ:5.11(H-13),4.95(H-1″),4.45(H-1＇),4.03(H-5″),3.77(H-8),3.76((H-3),3.75(H-11),3.66(H-5),3.48(H-5＇),3.33(3″-OCH3),3.24(H-2＇),3.10(6-OCH3),3.03(H-4″),2.89(H-2),2.57(H-10),2.45(H-3＇),2.37(H-2″a),2.31/3＇-N(CH3)2/,1.93(H-4),1.93(H-14a),1.68(H-4＇a),1.58(H-2″b),1.53(H-7a),1.48(6-CH3),1.46(H-14b),1.31(5″-CH3),1.25(3″-CH3),1.23(5＇-CH3),1.20(2-CH3),1.13(10-CH3),1.13(12-CH3),1.08(4-CH3),1.00(8-CH3),0.86(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:175.5(C-1),169.2(C-9),102.5(C-1＇),95.7(C-1″),80.2(C-5),78.4(C-6),78.0(C-3),77.8(C-4″),76.5(C-13),73.8(C-12),72.4(C-3″),71.1(C-2＇),70.0(C-11),68.2(C-5＇),65.2(C-5″),64.9(C-3＇),50.8(6-OCH3),49.1(3″-OCH3),44.7(C-2),40.1/3＇-N(CH3)2/,38.7(C-4),37.0(C-7),34.6(C-2″),32.3(C-10),29.4(C-4＇),24.9(C-8),21.1(5＇-CH3),21.0(3″-CH3),20.8(C-14),19.6(6-CH3),18.3(5″-CH3),18.2(8-CH3),15.7(12-CH3),15.6(2-CH3),14.6(10-CH3),10.2(15-CH3),8.8(4-CH3).9(Z)-肟：Rf 0.300，乙酸乙酯-(正己烷)-二乙胺，100∶100∶20IR (KBr)cm-1:3433,2973,2939,2832,1733,1638,1459,1379,1348,1286,1169,1114,1054,1011,958,892,755.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:5.07(H-13),4.93(H-1″),4.43(H-1＇),4.03(H-5″),3.98(H-11),3.77(H-3),3.62(H-5),3.48(H-5＇),3.33(3″-OCH3),3.21(H-2＇),3.09(6-OCH3),3.06(H-4″),2.88(H-2),2.74(H-8),2.65(H-10),2.45(H-3＇),2.36(H-2″a),2.30/3＇-N(CH3)2/,1.96(H-4),1.94(H-14a),1.76(H-14b),1.67(H-4＇a),1.59(H-2″b),1.58(H-7a),1.47(H-7b),1.38(6-CH3),1.32(10-CH3),1.31(5″-CH3),1.25(3″-CH3),1.24(5＇-CH3),1.19(2-CH3),1.14(12-CH3),1.07(4-CH3),1.06(8-CH3),0.84(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:176.0(C-1),167.4(C-9),102.7(C-1＇),96.0(C-1″),80.4(C-5),78.7(C-6),78.5(C-3),77.8(C-4″),76.9(C-13),74.7(C-12),72.6(C-3″),70.9(C-2＇),70.3(C-11),68.4(C-5＇),65.5(C-5″),65.3(C-3＇),50.0(6-OCH3),49.3(3″-OCH3),45.0(C-2),41.0/3＇-N(CH3)2/,38.9(C-4),37.0(C-7),35.6(C-8),34.7(C-2″),34.1(C-10),28.9(C-4＇),21.3(3″-CH3),21.2(5＇-CH3),21.1(C-14),19.7(6-CH3),19.6(8-CH3),18.5(5″-CH3),16.4(12-CH3),15.7(2-CH3),10.7(10-CH3),10.4(15-CH3),9.8(15-CH3).方法B
将甲醇(800ml)中的6-O-甲基红霉素A(10.8g,0.014摩尔)加热到回流温度，然后将盐酸羟基胺(27.0g,0.388摩尔)和无水乙酸钠(15.2g,0.183摩尔)在10小时之内分4部分加入到反应溶液中并在回流条件下加热该体系，同时进一步搅拌8小时。在减压条件下蒸发甲醇、加入水(1500ml)和二氯甲烷(200ml)并通过在pH5.0和9.8时的梯度萃取来萃取该反应体系。将pH为9.8的合并的有机提取物用碳酸钾干燥、过滤并在减压下蒸发，得到9.5g的标题产物的混合物。通过使用二氯甲烷-甲醇-浓氢氧化铵90∶9∶1.5系统的硅胶柱层析来获得色谱均相的6-O-甲基红霉素A9(E)-肟和6-O-甲基红霉素A9(Z)-肟，其理化常数与方法A中那些物质的理化常数相同。实施例26-O-甲基红霉素A9(E)-肟的贝克曼重排
将来自实施例1的6-O-甲基红霉素A9(E)-肟(4.0g,0.005摩尔)溶于丙酮(130ml)并将该溶液冷却至0-5℃。随后，在搅拌下在1小时内向其中逐滴加入对甲苯磺酰氯(2.6g,0.01摩尔)的丙酮(40ml)溶液和碳酸氢钠(0.830g,0.01摩尔)的水(130ml)溶液。在室温下将该反应混合物搅拌8小时，在减压下蒸发丙酮并向该水溶液中加入氯仿(40ml)，由此通过在pH5.0和9.0时的梯度萃取来萃取该反应体系。蒸发pH9.0时的合并的有机萃取物，从而得到2.8g的6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A。Rf 0.218,乙酸乙酯-(正己烷)-二乙胺，100∶100∶20IR (KBr)cm-1:3449,2974,2939,2834,1734,1706,1659,1534,1459,1379,1274,1169,1111,1053,1011,958.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:6.12(9a-CONH),4.85(H-1″),4.68(H-13),4.45(H-1＇),4.21(H-3),4.16(H-10),4.07(H-5″),3.75(H-5),3.49(H-5＇),3.34(3″-OCH3),3.32(6-OCH3),3.22(H-11),3.20(H-2＇),3.04(H-4″),2.83(H-2),2.43(H-3＇),2.38(H-2″a),2.30/3＇-N(CH3)2/,2.22(H-8),2.07(H-7a),1.87(H-4),1.87(H-14a),1.67(H-4＇a),1.57(H-2″b),1.57(H-14b),1.36(6-CH3),1.33(H-7b),1.32(5″-CH3),1.25(3″-CH3),1.24(H-4＇b),1.23(5＇-CH3),1.23(2-CH3),1.18(12-CH3),1.16(10-CH3),1.09(8-CH3),1.02(4-CH3),0.89(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:179.5(C-1),177.3(C-9),102.5(C-1＇),94.9(C-1″),79.1(C-6),78.5(C-5),77.7(C-4″),77.7(C-13),75.9(C-3),73.9(C-12),72.5(C-3″),72.6(C-11),70.7(C-2＇),68.2(C-5＇),65.3(C-5″),65.1(C-3＇),51.0(6-OCH3),49.1(3″-OCH3),45.1(C-10),44.5(C-2),41.3(C-4),40.0/3＇-N(CH3)2/,39.6(C-7),35.4(C-8),34.4(C-2″),28.8(C-4＇),21.1(5＇-CH3),21.0(3″-CH3),20.3(C-14),20.2(6-CH3),19.1(8-CH3),18.1(5″-CH3),15.9(12-CH3),14.6(2-CH3),13.4(10-CH3),10.7(15-CH3),8.7(4-CH3).实施例36-O-甲基红霉素A9(Z)-肟的贝克曼重排
将来自实施例1的6-O-甲基红霉素A9(Z)-肟(1.4g,0.002摩尔)溶于丙酮(50ml)并将该溶液冷却至0-5℃。随后在搅拌下在1小时内向其中逐滴加入对甲苯磺酰氯(1.84g,0.014摩尔)的丙酮(56ml)溶液和碳酸氢钠(1.16g,0.014摩尔)的水(180ml)溶液。在室温下将该反应混合物搅拌2小时，在减压下蒸发丙酮并向该水溶液中加入氯仿(70ml)，由此通过在pH5.0和9.0时的梯度萃取来萃取该反应体系。蒸发pH9.0时的合并的有机萃取物，从而得到0.80g的产物，如果合适，通过使用二氯甲烷-甲醇-浓氢氧化铵90∶9∶1.5系统的硅胶柱层析来纯化该产物，得到6-0-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A，它具有下列理化常数：Rf 0.152，乙酸乙酯-(正己烷)-二乙胺，100∶100∶20IR (KBr)cm-1:3442,2974,2938,2833,1736,1648,1535,1459,1379,1284,1169,1110,1055,1013,960,902.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5:5.78(8a-CONH),5.02(H-1″),4.96(H-13),4.41(H-1＇),4.19(H-8),4.02(H-5″),3.96(H-3),3.69(H-5),3.51(H-11),3.47(H-5＇),3.32(3″-OCH3),3.18(H-2＇),3.16(6-OCH3),3.02(H-4″),2.68(H-2),2.44(H-3＇),2.35(H-2″a),2.29/3＇-N(CH3)2/,2.22(H-10),1.92(H-4),1.91(H-14a),1.68(H-7a),1.64(H-4＇a),1.56(H-2″b),1.53(H-7b),1.47(H-14b),1.39(6-CH3),1.29(5″-CH3),1.24(3″-CH3),1.23(5＇-CH3),1.20(2-CH3),1.18(10-CH3),1.13(12-CH3),1.13(8-CH3),1.07(4-CH3),0.88(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:177.0(C-1),174.3(C-9),102.9(C-1＇),95.1(C-1″),80.1(C-5),78.6(C-6),77.9(C-4″),77.2(C-3),76.7(C-13),74.0(C-12),72.6(C-3″),70.4(C-2＇),70.1(C-11),68.7(C-5＇),65.4(C-3＇),65.2(C-5″),51.5(6-OCH3),49.1(3″-OCH3),45.4(C-2),42.6(C-7),42.1(C-4),41.8(C-10),40.6(C-8),40.0/3＇-N(CH3)2/,34.5(C-2″),28.3(C-4＇),23.5(6-CH3),21.3(C-14),21.2(12-CH3),21.1(5＇-CH3),21.1(3″-CH3),17.9(5″-CH3),15.8(8-CH3),14.8(2-CH3),10.8(15-CH3),9.2(10-CH3),9.1(4-CH3).实施例43-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A
将来自实施例2的物质(1.5g,0.002摩尔)溶于0.25N盐酸(40ml)并在室温下将该溶于放置稳定24小时。向该反应混合物中加入二氯甲烷(30ml)(pH1.8)并用浓氨水将该混合物的pH调元至9.0，分离该层并再用二氯甲烷(301)将水层萃取两次。将合并的有机萃取物用10％的碳酸氢钠水溶液和水洗涤且然后蒸发，得到1.3g的粗产物，如果合适，通过使用二氯甲烷-甲醇-浓氢氧化铵90∶9∶1.5系统的硅胶柱层析来纯化该产物。从0.9g的粗产物中分离出0.65g的色谱均相的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A，它具有下列理化常数：Rf 0.152，乙酸乙酯-(正己烷)-二乙胺，100∶100∶20IR (KBr)cm-1:3438,2973,2939,2879,2788,1702,1658,1535,1458,1373,1329,1270,1173,1112,1050,985,958,937.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.16(9a-CONH),4.63(H-13),3.81(H-5),4.45(H-1＇),4.13(H-10),3.78(H-3),3.55(H-5＇),3.30(6-OCH3),3.25(H-2＇),3.16(H-11),2.66(H-2),2.51(H-3＇),2.39(H-8),2.26/3＇-N(CH3)2/,2.05(H-4),1.92(H-14a),1.84(H-7a),1.68(H-4＇a),1.57(H-14b),1.43(H-7b),1.38(6-CH3),1.33(2-CH3),1.26(5＇-CH3),1.26(H-4＇b),1.20(10-CH3),1.12(12-CH3),1.11(8-CH3),1.01(4-CH3),0.91(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDC13)δ:179.3(C-1),176.9(C-9),106.4(C-1＇),88.1(C-5),79.1(C-6),78.7(C-13),78.0(C-3),73.8(C-12),73.9(C-11),70.2(C-2＇),69.7(C-5＇),65.4(C-3′),49.9(6-OCH3),45.6(C-10),43.9(C-2),40.8(C-7),39.9/3＇-N(CH3)2,35.6(C-4),32.8(C-8),27.8(C-4＇),20.9(5＇-CH3),20.5(C-14),18.3(6-CH3),17.4(8-CH3),15.8(12-CH3),15.9(2-CH3),14.8(10-CH3),10.7(15-CH3),7.5(4-CH3).实施例53-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A
按照实施例4中所述的方法，从实施例3的物质(1.5g,0.002摩尔)获得1.2g的粗产物，如果合适，通过使用二氯甲烷-甲醇-浓氢氧化铵90∶9∶1.5系统的硅胶柱层析来纯化该产物，得到色谱均相的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A，它具有下列理化常数：Rf 0.195，氯仿-甲醇-氢氧化铵，6∶1∶0.1IR (KBr)cm-1:3438,2974,2939,2788,1733,1648,1535,1458,1378,1263,1165,1113,1075,1050,985,958,937.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:5.58(9a-CONH),5.09(H-13),4.38(H-1＇),3.76(H-5),3.92(H-8),3.80(H-3),2.64(H-2),3.54(H-5＇),3.47(H-11),3.25(H-2＇),2.11(H-4),3.12(6-OCH3),2.48(H-3＇),2.38(H-10),2.25/3＇-N(CH3)2/,1.94(H-14a),2.11(H-7a),1.66(H-4＇a),1.51(H-7b),1.50(H-14b),1.31(2-CH3),1.39(6-CH3),1.12(4-CH3),1.26(5＇-CH3),1.26(H-4＇b),1.20(10-CH3),1.25(8-CH3),1.13(12-CH3),0.88(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:176.0(C-1),174.4(C-9),106.1(C-1′),89.6(C-5),77.3(C-6),75.8(C-13),78.3(C-3),74.3(C-12),70.3(C-11),69.9(C-2＇),69.4(C-5＇),64.9(C-3＇),49.7(6-OCH3),42.1(C-10),43.8(C-2),41.7(C-7),39.9/3＇-N(CH3)2/,35.2(C-4),42.4(C-8),27.4(C-4＇),22.3(5＇-CH3),20.9(C-14),20.4(6-CH3),20.5(8-CH3),15.7(12-CH3),15.2(2-CH3),9.5(10-CH3),10.1(15-CH3),7.50(4-CH3).实施例63-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A2’-O-乙酸酯
向来自实施例4的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A(0.750g,0.0012摩尔)的二氯甲烷(25ml)溶液中加入碳酸氢钠(0.440g,0.0052摩尔)和乙酸酐(0.128ml,0.0013摩尔)并在室温下搅拌3小时。向该反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液(30ml)，分离该层并用二氯甲烷(2×20ml)再次提取含水部分。将合并的有机提取物依次用饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤并蒸发，得到0.750g的粗标题产物，它具有下列理化常数：Rf 0.403,氯仿-甲醇-浓氢氧化铵，6∶1∶0.1IR (K.Br)cm-1:3455,2974,2940,2880,2787,1748,1702,1658,1540,1459,1376,1239,1173,1112,1061,986,958,937,904.实施例7 3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A2’-O-乙酸酯
向来自实施例5的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A(1.5g,0.0024摩尔)的二氯甲烷(40ml)溶液中加入碳酸氢钠(0.88g,0.01摩尔)和乙酸酐(0.250ml,0.0025摩尔)且然后按照实施例6中所述的方法获得1.4g的标题产物，它具有下列理化常数：Rf 0.423,氯仿-甲醇-浓氢氧化铵，6∶1∶0.1IR (KBr)cm-1:3394,2972,2939,2784,1736,1649,1542,1459,1376,1262,1165,1085,1059,986,958,904.实施例83-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A
向来自实施例6的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-9a-氮杂-9a-高红霉素A2’-O-乙酸酯(0.760g,0.0012摩尔)的二氯甲烷(15ml)溶液中加入二甲亚砜(1.27ml)和N,N-二甲氨基丙基-乙基-碳化二亚胺(1.335g,0.007摩尔)。将该反应混合物冷却至15℃且然后在不断搅拌和维持该温度的条件下在30分钟内逐滴逐步加入三氟乙酸吡啶鎓(1.37g,0.007摩尔)溶于二氯甲烷(5ml)所得到的溶液。将该反应混合物的温度逐步升高到室温，持续进一步搅拌3小时并通过加入饱和NaCl溶液(20ml)和二氯甲烷(20ml)来中止反应。在用2N NaOH将该反应混合物碱化至pH9.5后，将其用CH2Cl2萃取，将有机萃取物依次用饱和NaCl、NaHCO3溶液和水洗涤且然后用K2CO3干燥。在过滤并在减压下蒸发二氯甲烷后，获得0.800g的油状残余物。在室温下和24小时内使该油状残余物进行甲醇分解(30ml甲醇)。在减压下蒸发甲醇并通过使用二氯甲烷-甲醇-浓氢氧化铵90∶9∶0.5溶剂系统的低压硅胶柱层析来纯化获得残余物(0.625g)。通过蒸发具有Rf值为0.235的合并的萃取物来获得色谱均相的标题产物，它具有下列理化常数：Rf 0.235，二氯甲烷-甲醇-浓氢氧化铵，90∶9∶0.5IR (KBr)cm-1:3438,2975,2939,2878,2787,1744,1655,1530,1458,1380,1340,1304,1169,1111,1075,1051,986,959,940.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:6,63(9a-CONH),4.64(H-13),4.49(H-5),4.41(H-1＇),4.20(H-10),3.90(H-2),3.64(H-5＇),3.34(H-11),3.20(H-2＇),3.07(6-OCH3),3.02(H-4),2.51(H-3＇),2.30(H-8),2.27/3＇-N(CH3)2/,1.94(H-14a),1.94(H-7a),1.69(H-4＇a),1.63(H-14b),1.42(H-7b),1.40(2-CH3),1.30(5＇-CH3),1.29(4-CH3),1.26(6-CH3),1.25(H-4＇b),1.22(12-CH3),1,19(10-CH3),1.10(8-CH3),0.91(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ206.8(C-3),177.3(C-1),173.8(C-9),102.6(C-1＇),79.3(C-13),78.4(C-6),74.4(C-5),73.9(C-12),73.1(C-11),70.0(C-2＇),69.1(C-5＇),65.5(C-3＇),50.1(6-OCH3),49.0(C-2),46.2(C-4),45.3(C-10),40.3(C-7),40.0/3＇-N(CH3)2/,34.6(C-8),28.3(C-4＇),21.0(6-CH3),20.7(C-14),19.6(5＇-CH3),18.6(8-CH3),15.9(12-CH3),14.1(2-CH3),13.9(10-CH3),13.9(4-CH3),10.7(15-CH3).实施例93-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A
向来自实施例7的3-脱克拉定糖基-3-氧-6-O-甲基-8a-氮杂-8a-高红霉素A2’-O-乙酸酯(1.4g,0.0022摩尔)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入二甲亚砜(2.5ml)和N,N-二甲氨基丙基-乙基-碳化二亚胺(2.7g,0.014摩尔)。将该反应混合物冷却至15℃且然后在不断搅拌和维持该温度的条件下在30分钟内逐滴逐步加入三氟乙酸吡啶鎓(2.7g,0.014摩尔)溶于二氯甲烷(10ml)所得到的溶液。按照实施例8中所述的方法获得1.1g的标题产物，它具有下列理化常数：IR (KBr)cm-1:3435,2975,2939,2879,2788,1746,1648,1542,1458,1379,1339,1302,1166,1111,1076,1052,989,960,918.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:5.89(9a-CONH),5.08(H-13),4.42(H-1＇),4.27(H-5),4.03(H-8),3.78(H-2),3.60(H-5＇),3.58(H-11),3.18(H-2＇),3.05(H-4),2.91(6-OCH3),2.49(H-3＇),2.39(H-10),2.27/3＇-N(CH3)2/,1.96(H-14a),1.68(H-7a),1.68(H-4＇a),1.50(H-14b),1.41(2-CH3),1.32(6-CH3),1.30(4-CH3),1.25(5＇-CH3),1.23(H-4＇b),1.20(10-CH3),1.19(8-CH3),1.17(12-CH3),0.88(15-CH3).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:206.2(C-3),170.0(C-9),174.6(C-1),103.1(C-1＇),78.2(C-6),77.9(C-5),77.5(C-13),74.1(C-12),70.6(C-11),70.0(C-2＇),69.1(C-5＇),65.5(C-3＇),50.5(6-OCH3),50.4(C-2),47.6(C-4),42.2(C-10),42.1(C-7),41.6(C-8),39.9/3＇-N(CH3)2/,28.0(C-4＇),22.8(8-CH3),21.2(C-14),20.8(5＇-CH3),20.1(6-CH3),16.1(12-CH3),15.4(2-CH3),14.4(4-CH3),10.5(15-CH3),10.1(10-CH3).