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本发明属于医药领域，具体涉及苯甲酰中乌头原碱的制备方法，所解决的技术问题是提供一种专属性强的用于分离、精制、收集苯甲酰中乌头原碱的制备方法。该方法是从乌头、附子、雪上一枝蒿或草乌中提取的总生物碱采用柱层析分离得到苯甲酰中乌头原碱；其中柱层析分离所用洗脱剂为石油醚-丙酮-二乙胺，其重量配比为50～53∶15～19∶3.5。具体采用先用硅胶柱层析分离，分离所得苯甲酰中乌头原碱粗品用丙酮溶解，再用氧化铝柱层析分离的方法。本发明方法分离方法专属性强，产品中苯甲酰中乌头原碱含量大于95％，可有效分离制备苯甲酰中乌头原碱。

权利要求书

苯甲酰中乌头原碱的制备方法
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及苯甲酰中乌头原碱的制备方法。
背景技术
雪上一枝蒿、草乌、川乌、附子等同属乌头属植物，其中的乌头碱类双酯型二萜生物碱及其水解产物是主要的毒性和活性成分，苯甲酰中乌头原碱Benzoylmesaconitine为双脂类二萜生物碱中乌头碱水解后的单脂型产物，毒性约为中乌头碱的1/200。具有镇痛、抗炎、局麻等作用。
中国专利申请CN1569864A，申请号为200410010819.2，附子及乌头属植物中脂类生物总碱的分离方法的发明专利申请公开了采用硅胶柱层析的方式分离脂类生物碱的方法，具体是以二氯甲烷-乙醚-乙醇分别以5～6∶3～4∶0～2比例梯度层析，得到三组脂类生物碱，分别是苯甲酰中乌头原碱链脂肪酸酯、苯甲酰乌头原碱长链脂肪酸酯、苯甲酰次乌头原碱长链脂肪酸酯，分离效率分别为35％，13％，3％以上；但是得到的并不是苯甲酰中乌头原碱。
据发明人了解现有方法提取、分离雪上一枝蒿、草乌、川乌、附子等乌头属植物所得到的提取物中苯甲酰中乌头原碱的含量极低，其他成分较多；并无专门提取苯甲酰中乌头原碱的提取分离方法，目前尚未见以柱层析方法专属分离、精制、收集苯甲酰中乌头原碱的相关报道。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种专属性强的用于分离、精制、收集苯甲酰中乌头原碱的制备方法。
具体地，本发明制备苯甲酰中乌头原碱的方法是从乌头、附子、雪上一枝蒿或草乌中提取的总生物碱采用柱层析分离得到苯甲酰中乌头原碱；其中柱层析分离所用洗脱剂为石油醚丙酮二乙胺，其重量配比为50～53∶15～19∶3.5。
采用本发明方法可从总生物碱中有效分离出苯甲酰中乌头原碱，分离后所得产品中所含杂质种类极少，仅有几种非苯甲酰中乌头原碱成分，该方法分离苯甲酰中乌头原碱的专属性强，所得苯甲酰中乌头原碱含量虽然小于90％，但是也为后来以此产品为基础继续分离、精制得到纯度更高的苯甲酰中乌头原碱。
为了进一步提高分离所得产品中苯甲酰中乌头原碱的含量，对柱层析分离方法进行改进优化，首先采用硅胶柱层析分离，所得苯甲酰中乌头原碱粗品用丙酮溶解，再用氧化铝柱层析分离。
具体地，对洗脱剂优化：硅胶柱层析分离所用洗脱剂为石油醚-丙酮二乙胺，其重量配比为50∶19∶3.5；氧化铝柱层析分离所用洗脱剂为石油醚-丙酮二乙胺，其重量配比为53∶15∶3.5。
优化硅胶柱层析分离，具体采用如下方法分离：
A、用洗脱剂湿润硅胶，排除气泡后，装柱，用洗脱剂洗脱12小时，硅胶柱备用；
B、将总生物碱吸附于硅胶上，干燥后粉碎，过100目筛后加入步骤A所得硅胶柱中；
C、用洗脱剂洗脱，洗脱速度为每5～5.5小时得43L洗脱液，经定性检测，将含有苯甲酰中乌头原碱的洗脱液合并，干燥后得苯甲酰中乌头原碱粗品。
优化氧化铝柱层析分离，具体采用如下方法：
A、将洗脱剂加入柱中，加入氧化铝，排除气泡，用洗脱剂洗脱12小时，氧化铝柱备用；
B、将苯甲酰中乌头原碱粗品用丙酮溶解后吸附于硅胶上，干燥后粉碎，过100目筛后加入步骤A所得氧化铝柱中；
C、用洗脱剂洗脱，洗脱速度为每3～3.5小时得50L洗脱液，经定性检测，将含有苯甲酰中乌头原碱的洗脱液合并，干燥后得苯甲酰中乌头原碱精制品。
对柱层析方法改进后，分离所得产品中苯甲酰中乌头原碱含量大于90％，产品纯度高，因而该分离方法专属性强，目的明确，效果显著。
针对从乌头属植物中提取总生物碱方法既可以采用如下提供的方法，也可以采用目前已公开报道的其他现有技术进行提取分离。本发明从乌头属植物中提取总生物碱的方法如下：
首先将乌头、附子、雪上一枝蒿或草乌粉碎，使用6-10倍量的80-95％乙醇提取1-4次，每次提取时间为煮沸后1-3小时，合并醇提液，回收乙醇，浓缩剩余药液，即得浸膏。
为了使浸膏的质量稳定可控，对制备工艺的优选如下参数：将乌头、附子、雪上一枝蒿或草乌粉碎，使用8倍量的90％乙醇提取3次，每次提取时间为煮沸后2小时，合并醇提液，回收乙醇，浓缩剩余药液，即得浸膏。
然后从浸膏中分离总生物碱，方法如下：
a、取乌头、附子、雪上一枝蒿或草乌浸膏，边搅拌边缓缓加入浓度为5％的盐酸，使pH值为1.5-2.0，搅拌，加入石油醚，搅拌，静置，分液，得到石油醚层和母液层；
b、取母液层，边搅拌边缓缓加入浓氨水，使pH值为9.5-10.0，用氯仿萃取，取氯仿层，加入饱和氯化钠水溶液，搅拌，静置，取氯仿层回收氯仿，干燥即得总生物碱。
为了提取完全，氯仿可萃取两次以上，每次萃取搅拌时间为60分钟；静置时间为12小时。具体为采用浓氨水调pH值后加入氯仿，用氯仿萃取，搅拌、静置分液，收集氯仿层。母液层再加入氯仿，搅拌、静置分液，收集氯仿层。以此类推，萃取后合并氯仿层。
为了充分反应和沉降完全，步骤a和步骤b中所述搅拌时间为60分钟；静置时间为12小时
本发明方法的有益效果：该分离方法专属性强，目的明确，效果显著；应用该方法分离、精制所得产品中苯甲酰中乌头原碱含量大于90％，产品纯度高。应用本发明柱层析方法还可以对含有苯甲酰中乌头原碱的物质进行分离、收集苯甲酰中乌头原碱。为分离、收集、精制苯甲酰中乌头原碱提供了一种新的方法。
具体实施方式
以下通过对本发明具体实施方式的描述说明但不限制本发明。
实施例1  乌头或附子浸膏的制备
将乌头或附子粉碎，使用8倍量的90％乙醇提取3次，每次提取时间为煮沸后2小时，合并醇提液，回收乙醇，浓缩剩余药液，即得。
实施例2  提取总生物碱
a、取实施例1制备所得的乌头或附子浸膏，边搅拌边缓缓加入浓度为5％的盐酸，使pH值为1.5-2.0，搅拌60分钟，加入石油醚，搅拌60分钟，静置12小时，分液，得到石油醚层和母液；
b、取母液层，边搅拌边缓缓加入浓氨水，使pH值为9.5-10.0，加入氯仿，用氯仿萃取，搅拌、静置分液，收集氯仿层。母液层再加入氯仿，搅拌、静置分液，收集氯仿层。合并氯仿层，加入饱和氯化钠水溶液，搅拌，静置，除去氯化钠水溶液，除去氯仿，即得总生物碱。
实施例3  从总生物碱中分离苯甲酰中乌头原碱
从实施例2所得总生物碱中分离苯甲酰中乌头原碱：采用硅胶柱层析分离，所用洗脱剂为石油醚-丙酮二乙胺，其重量配比为50∶19∶3.5。具体方法如下：
A、用洗脱剂湿润硅胶，排除气泡后，装柱，用洗脱剂洗脱12小时，硅胶柱备用；
B、将总生物碱吸附于硅胶上，干燥后粉碎，过100目筛后加入步骤A所得硅胶柱中；
C、用洗脱剂洗脱，洗脱速度为每5～5.5小时得43L洗脱液，经定性检测，将含有苯甲酰中乌头原碱的洗脱液合并，干燥后得苯甲酰中乌头原碱粗品。
所得粗品中，杂质种类极少，仅有几种非苯甲酰中乌头原碱成分。
实施例4  从总生物碱中分离苯甲酰中乌头原碱
从实施例2所得总生物碱中分离苯甲酰中乌头原碱：采用硅胶柱层析分离，所用洗脱剂为石油醚-丙酮二乙胺，其重量配比为53∶15∶3.5。具体方法如下：
A、用洗脱剂湿润硅胶，排除气泡后，装柱，用洗脱剂洗脱12小时，硅胶柱备用；
B、将总生物碱吸附于硅胶上，干燥后粉碎，过100目筛后加入步骤A所得硅胶柱中；
C、用洗脱剂洗脱，洗脱速度为每5～5.5小时得43L洗脱液，经定性检测，将含有苯甲酰中乌头原碱的洗脱液合并，干燥后得苯甲酰中乌头原碱粗品。
所得粗品中，杂质种类极少，仅有几种非苯甲酰中乌头原碱成分。
实施例5从总生物碱中分离苯甲酰中乌头原碱
从实施例2所得总生物碱中分离苯甲酰中乌头原碱：先用硅胶柱层析分离，分离所得苯甲酰中乌头原碱粗品用丙酮溶解，再用氧化铝柱层析分离；
其中，硅胶柱层析分离所用洗脱剂为石油醚-丙酮-二乙胺，其重量配比为50∶19∶3.5；
A、用洗脱剂湿润硅胶，排除气泡后，装柱，用洗脱剂洗脱12小时，硅胶柱备用；
B、将总生物碱吸附于硅胶上，干燥后粉碎，过100目筛后加入步骤A所得硅胶柱中；
C、用洗脱剂洗脱，洗脱速度为每5～5.5小时得43L洗脱液，经定性检测，将含有苯甲酰中乌头原碱的洗脱液合并，干燥后得苯甲酰中乌头原碱粗品。
氧化铝柱层析分离所用洗脱剂为石油醚-丙酮-二乙胺，其重量配比为53∶15∶3.5：
A、将洗脱剂加入柱中，加入氧化铝，排除气泡，用洗脱剂洗脱12小时，氧化铝柱备用；
B、将苯甲酰中乌头原碱粗品用丙酮溶解后吸附于硅胶上，干燥后粉碎，过100目筛后加入步骤A所得氧化铝柱中；
C、用洗脱剂洗脱，洗脱速度为每3～3.5小时得50L洗脱液，经定性检测，将含有苯甲酰中乌头原碱的洗脱液合并，干燥后得苯甲酰中乌头原碱精制品。
所得苯甲酰中乌头原碱精制品中：苯甲酰中乌头原碱的含量测得值为97.976％。