炭团菌抑菌活性成分防治松枯梢病制剂的制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种防治松枯梢病生物制剂的制备方法。背景技术 松枯梢病是一种发病普遍、 危害性大的世界性的传染性病害， 世界上 20 多个国家 先后报导了松枯梢病发生及其危害。近年来， 在辽宁、 内蒙古、 吉林的部分苗圃的一年生松 幼苗上发现枯梢病， 该病在幼苗上蔓延迅速， 造成顶芽枯死、 根茎腐烂、 枯叶， 已成为当前松 育苗生产中急需解决的问题。黑龙江、 吉林、 辽宁各省普遍发生樟子松枯梢病， 引起樟子松 人工林成片枯死， 严重时可导致大面积松林死亡。目前， 樟子松枯梢病已日益为人们所重 视， 已列为我国重要的森林病害进行研究。目前枯梢病的防治极大程度上还是依赖于化学 防治， 这虽然给林业生产带来了很高的效益， 但是， 环境污染、 生态系统自然平衡的破坏等 诸多弊端也随之而来。因此， 寻找高效的生物防治菌株刻不容缓。
在 Answorth 1973 真菌分类系统中， 炭团菌 (Hypoxylon perforatum(Schwein.) Fr.) 隶 属 子 囊 菌 亚 门 (Ascomycotina)、核 菌 纲 (Pyrenomycetes)、球 壳 菌 目 (Sphaeriales)、 炭角菌科 (Xylariaceae)、 炭团菌属 (Hypoxylon)。目前， 有关炭团菌属的 研究主要集中在两方面， 一是由炭团菌引起的病害， 二是对该属内几种海洋真菌代谢产物 的研究。经检索未发现与本发明相关文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种炭团菌抑菌活性成分防治松枯梢病制剂的制备方法。
为了达到上述目的， 本发明采用的技术方案是 ： 炭团菌菌丝体发酵液的制备 - 炭 团菌菌丝体发酵液中抑菌活性成分的提取 - 炭团菌抑菌活性成分制剂制备。
本发明的优点是 ：
本发明采用的原料为可再生的菌物资源， 来源丰富、 价廉， 对松枯梢病菌具有显著 的抑制效果， 本发明具有高效、 微毒、 无公害等特点， 对防治松枯梢病具有广泛的应用前景。 具体实施方式
下面对本发明的实施例作进一步详细描述。
实施例 1、
炭团菌菌丝体发酵液的制备 ： 采用改良马铃薯葡萄糖 (PD) 液体培养基， 培养基的 配方为 ： 马铃薯 150g、 葡萄糖 17g、 KH2PO42.5g、 MgSO41g、 水 1000ml， pH5， 对炭团菌菌丝体进 行摇床发酵培养 10 天， 接种量 0.5％， 装液量 40％， 发酵培养条件为 ： 温度 25℃， 摇床转数 140r/min，
炭团菌菌丝体发酵液中抑菌活性成分提取 ： 将培养 10 天的炭团菌菌丝体发酵液 用无菌纱布过滤后， 与乙酸乙酯按重量体积比 1 ∶ 3 混合， 常温下静止放置 5 天， 萃取后弃 下层滤液， 将上层有机溶剂以 30℃真空旋转蒸发除去溶剂得到抑菌活性成分，炭团菌抑菌活性成分制剂的制备 ： 将抑菌活性成分用 10％吐温 80 溶液溶解， 恢复 为原发酵液过滤液体积的 1/10。
实施例 2、
炭团菌菌丝体发酵液的制备 ： 采用改良马铃薯葡萄糖 (PD) 液体培养基， 培养基的 配方为 ： 马铃薯 200g、 葡萄糖 19g、 KH2PO43.0g、 MgSO41.5g、 水 1000ml， pH5.5， 对炭团菌菌丝 体进行摇床发酵培养 12 天， 接种量 1.0％， 装液量 45％， 发酵培养条件为 ： 温度 28℃， 摇床 转数 150r/min，
炭团菌菌丝体发酵液中抑菌活性成分提取 ： 将培养 12 天的炭团菌菌丝体发酵液 用无菌纱布过滤后， 与乙酸乙酯按重量体积比 1 ∶ 3 混合， 常温下静止放置 8 天， 萃取后弃 下层滤液， 将上层有机溶剂以 30℃真空旋转蒸发除去溶剂得到抑菌活性成分，
炭团菌抑菌活性成分制剂的制备 ： 将抑菌活性成分用 10％吐温 80 溶液溶解， 恢复 为原发酵液过滤液体积的 1/10。
实施例 3、
炭团菌菌丝体发酵液的制备 ： 采用改良马铃薯葡萄糖 (PD) 液体培养基， 培养基的 配方为 ： 马铃薯 250g、 葡萄糖 22g、 KH2PO43.5g、 MgSO42g、 水 1000ml， pH6， 对炭团菌菌丝体进 行摇床发酵培养 15 天， 接种量 1.5％， 装液量 50％， 发酵培养条件为 ： 温度 30℃， 摇床转数 160r/min， 炭团菌菌丝体发酵液中抑菌活性成分提取 ： 将培养 15 天的炭团菌菌丝体发酵液 用无菌纱布过滤后， 与乙酸乙酯按重量体积比 1 ∶ 3 混合， 常温下静止放置 10 天， 萃取后弃 下层滤液， 将上层有机溶剂以 30℃真空旋转蒸发除去溶剂得到抑菌活性成分，
炭团菌抑菌活性成分制剂的制备 ： 将抑菌活性成分用 10％吐温 80 溶液溶解， 恢复 为原发酵液过滤液体积的 1/10。
炭团菌抑菌活性成分制剂对松枯梢病菌 (Sphaeropsis sapinea) 菌丝生长抑制率 为 73.20％， 对孢子萌发抑制率为 91.63％， 对小鼠的半致死剂量 LD50 ＞ 13200mg/kg， 为微 毒， 对自然环境下的紫外线、 温度具有很高的稳定性， 并且具有一定的抗氧化还原能力和良 好的耐热性， 长期贮存不影响抑菌活性。
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