桑叶多糖在预防和治疗糖尿病中的应用 所属技术领域 ：
本发明涉及一种从桑叶中提取桑叶多糖在预防和治疗糖尿病中的应用， 属于天然 药物应用的技术领域。 背景技术 迄今， 全球糖尿病患者已达 1.3 亿， 且人数还在剧增。糖尿病已经成为继心血管、 肿瘤之后的第三号杀手， 是世界三大公共卫生难题之一。 据卫生部公布数据， 2009 年仅城市 糖尿病患者已超过 4100 万， 且平均每年新增患者约 150 万。糖尿病是由遗传和环境因素相 互作用而引起的常见病， 临床以高血糖为主要标志， 常见症状有多饮、 多尿、 多食以及消瘦 等。糖尿病可引起身体多系统的损害， 引起胰岛素绝对或相对分泌不足以及靶组织细胞对 胰岛素敏感性降低， 引起蛋白质、 脂肪、 水和电解质等一系列代谢紊乱综合征， 其中一高血 糖为主要标志。目前还没有特效的药物能给予有效的根治。从现有的活性物质筛选出发， 研究已知疗效的中药药效成分， 对推动中药国际化具有很大帮助。
以往， 对糖尿病的治疗主要有四种方法 ： 饮食治疗、 药物治疗、 运动治疗。在国外， 一些著名医学家主张糖尿病患者应做适当的体力活动， 并把体力活动、 饮食控制、 注射胰岛 素列为治疗糖尿病的三大法宝。近年来， 利用中医药治疗糖尿病已成为研究的热点课题。
桑叶多糖是一种酸性杂多糖， 主要由糖醛酸及各种中性糖组成。 桑叶异名铁扇子， 为桑科落叶性多年禾本科植物桑树的叶。现代药理和临床研究表明， 桑叶活性成分之一的 多糖具有降血糖、 降血压、 免疫调节、 抗菌和抗病毒等多种生理活性。目前国内外尤其是日 本对桑叶中的有效成分研究较多， 发现多糖具有降血糖的作用， 并对多糖结构进行了分析。 因此受到生物医学界的重视。
多糖是一类被活跃研究的生物反应调节剂， 桑叶中含有的活性多糖有增强免疫功 能和抗感染的作用， 还有治疗高胆固醇的作用， 且可强化血管和预防动脉硬化、 血栓症、 心 机梗塞等。桑叶多糖无毒性， 有着明显的保健效果， 尤其具有免疫活性功能而更加受到重 视， 桑叶多糖保健食品将成为新型保健食品的重要一员。因此开发我们的桑叶资源就有十 分重要的作用。
我国桑树种类、 品种以及桑椹产量均位居世界首位， 除青藏高原外， 全国各地均有 栽培。 目前大部分地区将桑作为饲用栽培， 每年除了饲养桑蚕外， 桑树的很多部位都没得到 利用。尽管许多研究已经报道桑有多种药理作用， 抗过敏作用的研究也鲜有报道。迄今为 止的文献均着重于桑叶中提取的 1- 脱氧野尻霉素在治疗糖尿病中研究， 它在治疗糖尿病 中的作用机理已经十分清楚。我们在研究过程中发现含量低的 1- 脱氧野尻霉素比含量高 的 1- 脱氧野尻霉素对治疗糖尿病的效果更好， 同时查阅文献发现对桑叶多糖在预防和治 疗糖尿病方面并没有研究。而且桑叶多糖在桑叶中含量较高， 取材方便， 分布广泛， 价格便 宜。 因而， 如果桑叶多糖在预防和治疗糖尿病方面具有一定的作用， 将对桑进行深加工意义 非凡。
发明内容 本发明所提到的桑叶多糖是从干燥过后的桑叶经用蒸馏水热提取、 过滤、 减压浓 缩、 三氯乙酸除蛋白， 然后用柱吸附、 将洗脱液浓缩， 减压浓缩， 制得桑叶多糖纯品。其多糖 含量在 95％以上。
技术效果 ：
1、 本发明方法中所用的原料、 设备均为常见的普通原料、 设备， 避免了工业化生产 过程中对于昂贵原材料、 仪器的依赖， 大大地降低了生产成本。
2、 桑树种植容易， 扦插、 籽播均可， 产量高、 价格低， 来源方便， 后续资源有保障。 与 传统提取技术相比较， 该技术可以大大缩短提取时间、 降低能耗、 减少杂质成分的溶出。
3、 本发明方法操作简单， 不需要精密仪器或自动化设备， 可在桑叶资源丰富的乡 镇企业进行生产， 这极大的降低了桑叶多糖的生产成本， 简化了生产过程。
4、 本发明所述的桑叶多糖具有多方面的调理作用， 副作用小， 与化学合成药物相 比， 无明显的依赖性。
具体实施方式 下面， 本发明将用实施例进行进一步的说明， 但是它并不限于这些实施例的任一 个或类似实例。
实施例 1 ： 桑叶多糖的制备方法
粉碎干燥桑叶 10kg， 加入 180L 蒸馏水， 70 ℃加热回流提取 90min， 三层纱布过滤 两次， 再用陶瓷膜过滤， 减压浓缩至 10L， 然后浓缩液用 10％三氯乙酸除蛋白， 上 SEPHADEX G-10 柱分离收集含有桑叶多糖组分， 浓缩至 1L 再上硅胶柱分离收集桑叶多糖成分浓缩至 干， 获得桑叶多糖。经蒽酮 - 浓硫酸法测定， 其中桑叶多糖含量在 95.5％。
实施例 2 ： 桑叶多糖的小鼠喂养实验
1、 糖尿病鼠模型
(1) 成年昆明小鼠 (20-25g)， (25±1℃ ) 通风条件下养殖， 光照 12h， 黑暗 12h， 自 由采食、 标准喂养。
(2) 糖尿病鼠诱导 ： 按照 45mg/kg 的要求， 通过腹腔注射链脲霉素 ( 溶于 0.1M 柠 檬酸缓冲液 PH4.5)。 连续 7 天， 空腹鼠尾采血， 选择空腹血糖 200mg/dl 的鼠作为实验对象。 2、 实验设计 ：
2、 将实验鼠分成 6 组， 每组 6 只 ： 实验前进行空腹血糖测定
第1组： 正常无糖尿病鼠， 饮用蒸馏水 ；
第2组： 糖尿病鼠， 蒸馏水 ；
第 3-5 组 ： 糖尿病鼠分别给桑叶提取物 0.25， 0.5， 1.0g/kg/day ；
第6组： 糖尿病鼠注射 4U/kg/day 胰岛素， 持续 6 周。
所有实验鼠在实验前和第 6 周后进行空腹血糖测定， 使用血糖测定仪测定血糖。 禁食期间， 停止给老鼠一切食物除了水外。在最初阶段 ( 诱导糖尿病之前 ) 和 6 周治疗期 之后， 鼠尾静脉取血测定丙二醛、 脂质过氧化物和糖化血红蛋白。
3、 使用硫代巴比妥酸反应产物法检测 MDA ： 血浆与硫代巴比妥酸反应生成有色的 硫代巴比妥酸反应产物 ( 根据 Draper 描述 )， 532nm 波长下测定， 血浆 MDA 含量使用四乙氧
基丙烷标准曲线。
4、 脂质过氧化物测定采用亚铁离子二甲酚橙化验 ： 血浆脂质过氧化物氧化 Fe2+to Fe3+ 键合二甲酚橙 ( 根据 Nourooz-Zadeh 描述 )。反应物在 560nm 波长下分光光度计测定。 脂质过氧化物含量使用过氧化氢标准曲线测定。 通过化验糖化血红蛋白的方法测定体内桑 叶提取物对糖化水平的作用。血液总抗凝剂， 用来测定血红素和糖化血红蛋白浓度。比色 法测定总的血红素， 使用免疫透射比浊速率法 (COBAS INTEGRA 700 试剂盒 ) 测定糖化血红 蛋白。糖化血红蛋白量用血红素的％含量表示。
5、 动物实验结果
(1) 桑叶提取液对实验性糖尿病小鼠血糖的影响
与糖尿病模型组比较， 桑叶提取液组全血血糖明显下降 (P ＜ 0.05)， 实验鼠多饮、 多食、 多尿症状明显改善。但血糖与对照组比较仍较高， 没有下降到正常水平， 而且在一定 范围内随着桑叶提取物浓度的增加起降血糖的作用越明显 ； 但其功效没有胰岛素的明显。 糖尿病模型组实验鼠假饲前后血糖无明显差异 (P ＞ 0.05)。结果见表 1 ：
表 1 桑叶提取液组对实验性糖尿病实验鼠血糖的影响
Table 1 The effects of extract of mulberry leaves on blood sugar level in diabetic rats( 珔 x±s， mmol/L)
(2) 桑叶提取液对实验性糖尿病小鼠血浆 SOD 活性的影响
造模后的糖尿病组实验鼠 SOD 活性较对照组实验鼠的 SOD 活性明显降低， 给予桑 叶提取液后全血 SOD 活性明显升高 (P ＜ 0.05)。 其桑叶提取物的给量不同也有这不同的效 果。结果见表 2 ：
表 2 桑叶提取液组对实验性糖尿病实验鼠血浆 SOD 活性的影响
Table2 The effects of extract of mulberry leaves on SOD in plasma of diabetic rats( 珔 x±s， U/mL)
从表 2 可以看出糖尿病鼠模型 SOD 水平低于正常实验鼠 SOD 水平， 给予桑叶提取 液后， 实验鼠的血浆 SOD 活性水平明显升高 (P ＜ 0.05)。其活性升高的大小在一定范围内 随着桑叶提取物的给量成正向相关性， 桑叶提取物组 3 的 SOD 活性达到了正常水平。而胰 岛素注射组则使得其 SOD 活性恢复到正常水平。
(3) 桑叶提取液对实验性糖尿病小鼠全血 LPO 含量的影响
造模后的糖尿病组实验鼠 LPO 含量较对照组实验鼠的 LPO 含量明显升高， 给予桑 叶提取液后全血 LPO 含量明显下降 (P ＜ 0.05)。 其桑叶提取物的给量不同也有这不同的效 果。结果见表 3 ：
表 3 桑叶提取液组对实验性糖尿病实验鼠全血 LPO 含量的影响
Table 3 The effects of extract of mulberry leaves on LPO in diabetic rats( 珔 x±s， mmol/L)
由表 3 可知， 桑叶提取物对糖尿病小鼠血糖中 LPO 的降低具有一定的功效， 且随着 浓度的升高， 其效果也越明显， 桑叶提取物组 3 的 LPO 含量也接近于正常水平。糖尿病变组 则无变化， 胰岛素注射组小鼠的 LPO 含量则接近了正常水平。
6