紫茎泽兰多糖及制备方法和用途.pdf

本发明提供一种由紫茎泽兰植物中提取的紫茎泽兰多糖、其制备方法、含有紫茎泽兰多糖的药物制剂及其在制备促进免疫功能、抗氧化作用的保健品、食品、饲料添加剂或药物的用途。本发明提供的紫茎泽兰多糖、紫茎泽兰多糖药物组合物的制备方法简单、有效、适于工业化生产，产品质量稳定、易于控制。本发明利用紫茎泽兰提取活性多糖，拓宽了紫茎泽兰天然产物的开发利用途径，为紫茎泽兰的资源化提供一种有效利用的方法，有利于提高紫茎泽兰综合利用的经济价值。

1.  一种紫茎泽兰多糖提取物，由紫茎泽兰原料提取得到，其特征在于所述的多糖提取物中，总糖含量为60一95wt％，多糖分子量在3000一130000道尔顿之间，呈固态浅棕色，所述紫茎泽兰原料为紫茎泽兰全草粉碎物。

2.  根据权利要求1所述的紫茎泽兰多糖提取物，其特征在于，多糖平均分子量为3一8万。

3.  含有权利要求1或2所述紫茎泽兰多糖提取物的药物组合物，其特征在于所述的紫茎泽兰多糖提取物辅以药学上可接受的辅料，其中紫茎泽兰多糖提取物的含量为1一90wt％。

4.  权利要求1所述紫茎泽兰多糖提取物的制备方法，其特征在于：采用方法A进行制备：
(1)将紫茎泽兰原料水煮，将水煮液进行浓缩，得浓缩粗提取液，加入醇沉淀，收集紫茎泽兰多糖粗沉淀物，
其中所述水煮是将紫茎泽兰在蒸馏水中煎煮；加入5一20倍紫茎泽兰重量的蒸馏水；煎煮在沸腾下进行，煎煮提取1一4次至有效成分充分提取出来，每次1一5小时；
(2)将紫茎泽兰多糖粗沉淀物用水溶解，再用sevag法除去游离的蛋白质，该除去游离蛋白质的过程反复进行3-9次，浓缩，醇析沉淀，沉淀物用无水乙醇、丙酮、乙醚分别洗涤，得到去蛋白质后的紫茎泽兰多糖沉淀物；
(3)去蛋白质后的紫茎泽兰多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离，去除小分子杂质，得到多糖分子量在3000一130000道尔顿之间的紫茎泽兰多糖精制提取液，浓缩，加入醇沉淀，收集精制沉淀物；
(4)紫茎泽兰多糖精制沉淀物经干燥得到紫茎泽兰多糖精制提取物；所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇。

5.  权利要求1所述紫茎泽兰多糖提取物的制备方法，其特征在于：采用方法B进行制备：
(1)将紫茎泽兰原料加水浸泡0.5-2h后微波提取2次，提取液浓缩，得浓缩粗提取液，加入醇沉淀，收集紫茎泽兰多糖粗沉淀物；
(2)紫茎泽兰多糖粗沉淀物用水溶解，再用sevag法除去游离的蛋白质，该除去游离蛋白质的过程反复进行3-9次，浓缩，醇析沉淀，沉淀物用无水乙醇、丙酮、乙醚分别洗涤，得到去蛋白质后的紫茎泽兰多糖沉淀物；
(3)去蛋白质后的紫茎泽兰多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离，去除小分子杂质，得到多糖分子量在3000一130000道尔顿之间的紫茎泽兰多糖精制提取液，浓缩，加入醇沉淀，收集精制沉淀物；
(4)紫茎泽兰多糖精制沉淀物经干燥得到紫茎泽兰多糖精制提取物；所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇。

6.  权利要求1所述紫茎泽兰多糖提取物的制备方法，其特征在于：采用方法C进行制备：
(1)将紫茎泽兰原料加水浸泡0.5-2h后微波2次提取、提取液浓缩，得浓缩粗提取液，加入醇沉淀，收集紫茎泽兰多糖粗沉淀物，所述紫茎泽兰原料为紫茎泽兰全草粉碎物；
(2)紫茎泽兰多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离，去除小分子杂质，得到多糖分子量在3000一130000道尔顿之间的紫茎泽兰多糖精制提取液，浓缩，加入醇沉淀，收集精制沉淀物；
(3)紫茎泽兰多糖精制沉淀物经干燥得到紫茎泽兰多糖精制提取物；所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇。

7.  根据权利要求4或5所述紫茎泽兰多糖提取物的制备方法，其特征在于：
所述方法A(2)和B(2)中用sevag法除去蛋白质，其具体方法为：将由氯仿和正丁醇按体积比5:1构成的Sevag试剂与多糖溶液按1:5的体积比加入，加入试剂后震荡20一30分钟，使试剂与溶液充分混合，离心后去除交界处沉淀的蛋白，如此反复3-9次。

8.  根据权利要求4至6任一所述的紫茎泽兰多糖提取物的制备方法，其特征在于：
所述方法A和B及C中醇析沉淀使用的醇为75％一95％的醇，醇的用量为浓缩液的2一5倍体积量；
所述方法A和B及C中的浓缩为将提取液浓缩至原体积的1/2一1/5，浓缩采用加热浓缩、减压浓缩或薄膜蒸发浓缩；
所述方法A(3)和B(3)及C(2)中多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离，去除小分子杂质，所述的透析使用自来水或去离子水；
所述干燥为加热干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。

9.  权利要求1或2所述的紫茎泽兰多糖提取物或权利要求3所述的含有紫茎泽兰多糖提取物的药物组合物在制备促进免疫功能或抗氧化作用的保健品、食品或药物的用途。

10.  权利要求1或2所述的紫茎泽兰多糖提取物或权利要求3所述的含有紫茎泽兰多糖提取物的药物组合物在制备促进免疫功能、抗氧化的饲料添加剂或饲养动物的保健品或药物的用途。

紫茎泽兰多糖及制备方法和用途
一.技术领域
本发明涉及一种紫茎泽兰多糖、其制备方法、含有紫茎泽兰多糖的药物制剂及其用途，具体地说，本发明涉及由紫茎泽兰提取的紫茎泽兰多糖、其制备方法、含有紫茎泽兰多糖的药物制剂及其在制备促进免疫功能、抗氧化药物上的用途，属于药用天然产物领域。
二.背景技术
紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)为一种菊科泽兰属多年生草本植物，俗称飞机草、魔鬼草。原产于墨西哥，于上世纪四十年代经澳大利亚进入我国南部，现已广泛分布于云南、海南、广西、贵州、西藏、四川等省。同时，紫茎泽兰含有有毒物质，常使马、牛、羊等放牧家畜误食中毒甚至死亡。紫茎泽兰给所到之地的农业、牧业及林业等造成了难以挽回的巨大损失，对紫茎泽兰进行有效的开发利用，变害为利，应该具有重大的经济和社会意义。在利用紫茎泽兰生物活性成分的研究方面，主要集中于昆虫拒食活性、植物生长的双向调节作用、杀虫和杀菌活性等。目前开发利用紫茎泽兰已公开的方法中，尚未见利用制备多糖及其用途的报道。多糖是一类具有广泛生物活性的生物大分子物质，目前已有300多种多糖类化合物从天然产物中被分离。大量研究显示，多糖类物质具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、抗炎、抗疲劳和抗衰老等作用，植物多糖是其中极为重要的一个类别。植物活性多糖具有广泛的研究和开发利用价值。本发明利用紫茎泽兰提取活性多糖，拓宽了紫茎泽兰天然产物的开发利用途径，为紫茎泽兰的资源化提供一种有效利用的方法，有利于提高紫茎泽兰综合利用的经济价值。
三.发明内容：
本发明的目的在于提供一种紫茎泽兰多糖，是从紫茎泽兰中提取的主要活性多糖部位，以多糖直接入药，无毒副作用，服用量大大减少，药物的疗效明确，适用范围广。
本发明的另一目的在于提供一种紫茎泽兰多糖药物组合物，该药物组合物含有紫茎泽兰的提取物一一紫茎泽兰多糖，以及药学上可接受的其他辅料、各种药物剂型的安全、价廉、有效的药物组合物。
本发明的再一目的在于提供上述紫茎泽兰多糖、紫茎泽兰多糖药物组合物的制备方法，该方法简单、有效、适于工业化生产，产品质量稳定、易于控制。
本发明还有一目的在于提供紫茎泽兰多糖提取物、紫茎泽兰多糖药物在制备促进免疫功能、抗氧化保健品、食品或药物的用途。
此外，本发明还提供了紫茎泽兰多糖提取物或含有紫茎泽兰多糖提取物的药物组合物在制备促进免疫功能、抗氧化的饲料添加剂或饲养动物的保健品或药物的用途。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种紫茎泽兰多糖，是紫茎泽兰原料经提取得到的，其总糖含量为60—95wt％，分子量在3000—130000道尔顿之间，呈固态浅棕色。
优选总糖含量为70—85wt％。优选平均分子量为3—8万。
本发明的紫茎泽兰多糖呈固态浅棕色，易溶于热水，不溶于乙醇。
所述紫茎泽兰多糖药物组合物含有本发明紫茎泽兰多糖和药学上可接受的辅料。在紫茎泽兰多糖药物组合物中，紫茎泽兰多糖的含量为1—90wt％。
本发明紫茎泽兰多糖的制备方法，具体为：
方法A：
(1)将紫茎泽兰原料水煮、水煮液浓缩，得浓缩粗提取液，加入醇沉淀，收集紫茎泽兰多糖粗沉淀物；
(2)紫茎泽兰多糖粗沉淀物用水溶解，再用sevag法除去游离的蛋白质反复进行3-9次，浓缩，醇析沉淀，沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚分别洗涤，得到去蛋白后的紫茎泽兰多糖沉淀物；
(3)去蛋白后的紫茎泽兰多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离，去除小分子杂质，得到多糖分子量在3000—130000道尔顿之间的紫茎泽兰多糖精制提取液，浓缩，加入醇沉淀，收集精制沉淀物；
(4)紫茎泽兰多糖精制沉淀物经干燥得到紫茎泽兰多糖精制提取物；所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选乙醇；
或者方法B：
(1)将紫茎泽兰原料加水浸泡0.5-2h(小时)后微波2次提取、提取液浓缩，得浓缩粗提取液，加入醇沉淀，收集紫茎泽兰多糖粗沉淀物；
(2)紫茎泽兰多糖粗沉淀物用水溶解，再用sevag法除去游离的蛋白质，反复进行3-9次，浓缩，醇析沉淀，沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚分别洗涤，得到去蛋白后的紫茎泽兰多糖沉淀物；
(3)去蛋白后的紫茎泽兰多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离，去除小分子杂质，得到多糖分子量在3000—130000道尔顿之间的紫茎泽兰多糖精制提取液，浓缩，加入醇沉淀，收集精制沉淀物；
(4)紫茎泽兰多糖精制沉淀物经干燥得到紫茎泽兰多糖精制提取物；所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选乙醇。
或者方法C：
(1)将紫茎泽兰原料加水浸泡0.5-2h后微波2次提取、提取液浓缩，得浓缩粗提取液，加入醇沉淀，收集紫茎泽兰多糖粗沉淀物；
(2)紫茎泽兰多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离，去除小分子杂质，得到多糖分子量在3000—130000道尔顿之间的紫茎泽兰多糖精制提取液，浓缩，加入醇沉淀，收集精制沉淀物；
(3)紫茎泽兰多糖精制沉淀物经干燥得到紫茎泽兰多糖精制提取物；所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选乙醇。
所述制备方法中的紫茎泽兰原料为紫茎泽兰全草粉碎物；
所述方法A(1)紫茎泽兰的水煮是将紫茎泽兰在蒸馏水中煎煮；加入5—20倍紫茎泽兰重量的蒸馏水；煎煮在沸腾下进行，煎煮提取1—4次至有效成分充分提取出来，每次1—5小时；
所述方法B(1)与C(1)紫茎泽兰原料加水浸泡0.5-2h后微波2次提取是指将紫茎泽兰样品先在常温下浸泡0.5-2h，用微波1次提取后将残碴加相同体积水再浸泡0.5-2h，然后微波2次提取；所述微波提取处理条件为微波功率300-800W，料液重量比为1∶5-20，微波提取时间2-10min；
所述方法A和B中醇沉使用的醇为75％—95％的醇，醇的用量为浓缩液的2—5倍体积量，所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇；
所述方法A和B中的浓缩为将提取液浓缩至原体积的1/2—1/5，浓缩采用加热浓缩、减压浓缩或薄膜蒸发浓缩，优选在50-70℃下采用薄膜蒸发浓缩。
所述方法A(2)和B(2)中用sevag法除去蛋白质，其具体方法为：将由氯仿和正丁醇按体积比5:1构成的Sevag试剂与多糖溶液按1:5的体积比加入，加入试剂后震荡20—30分钟，使试剂与溶液充分混合，离心后去除交界处沉淀的蛋白，如此反复3-9次；
所述方法A(3)和B(3)及(2)中多糖沉淀物经透析或超滤的方法分离、去除小分子杂质，均指沉淀物用水充分溶解后进行，优选透析方法，所述的透析使用自来水或去离子水；
所述干燥为加热干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。
上述紫茎泽兰多糖、紫茎泽兰多糖水溶液，可以采用现有技术公知的方法制成含有紫茎泽兰多糖提取物或紫茎泽兰多糖的药物组合物，以及任何一种药剂学上可接受的剂型，如颗粒剂、口服液、胶囊、片剂、注射剂、粉剂等药物组合物等。
采用本发明方法得到的紫茎泽兰多糖呈固态浅棕色，易溶于热水，不溶于乙醇，平均分子量在3万—8万之间，总糖含量为60—95％。可以制成任何一种药剂学上所说的剂型。
本发明采用水煮醇沉及微波提取醇沉的方法提取分离紫茎泽兰中的有效成分紫茎泽兰多糖，提取过程中，采用Sevag试剂去除紫茎泽兰原药中的蛋白及其他杂质；通过多次醇沉淀、透析等方法可以进一步提纯和分离，得到含有一定分子量的紫茎泽兰多糖，经检测，总糖含量较高，避免了由于杂质较多引起的毒、副作用。
本发明方法得到的紫茎泽兰多糖原料易得，方法简单，生产成本低，产品多糖含量较高，质量稳定、易于控制。
采用本发明方法制备的紫茎泽兰多糖的毒性实验及药效实验结果如下：
1、毒性观察：
取昆明种小鼠64只，随机分组，采用服用和不服用紫茎泽兰多糖进行毒性对比实验研究，结果表明，紫茎泽兰多糖组在高达500mg/Kg的剂量下，无任何毒副作用，通过对心、肝、肾、肺解剖观察均无异常，并且体重均有增加。实验结果见表1。
表1.紫茎泽兰多糖(简称：紫多糖)毒性实验