一种乌头类水解单酯型生物碱的制备方法.pdf

本发明提供一种乌头类水解单酯型生物碱的制备方法。以乌头属中药为原料，加20倍水浸泡，置于高压容器内，提取压力为0.05～0.17MPa，在提取温度为110～130℃，提取时间为10min～6h的范围内进行提取，将提取液浓缩，调pH＝9，用乙酸乙酯、乙醚或三氯甲烷萃取，得到的有机溶剂层浓缩，干燥，得到一种乌头类水解单酯型生物碱。通过电喷雾质谱检测，用有机溶剂萃取后得到的水解型生物碱较纯净，用滴定法测得含量可达50％以上并且无脂类生物碱干扰。此方法方便、高效、易于操作，可用于新药开发。

1.  一种乌头类水解单酯型生物碱的制备方法，其步骤和条件如下：以乌头属中药为原料，加入原料药的20倍水浸泡，置于高压容器内，在压力为0.05～0.17MP，温度为110～130℃，时间为10min～6h提取，将提取液浓缩，调pH＝9，用乙酸乙酯、乙醚或三氯甲烷萃取，得到的有机溶剂层浓缩，干燥，得到一种乌头类水解单酯型生物碱。

一种乌头类水解单酯型生物碱的制备方法
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，具体涉及一种乌头类水解单酯型生物碱的制备方法。
背景技术
毛茛科乌头属植物如：草乌、川乌、附子，是中医临床常用药。研究表明，这些中药发挥药效作用的主要化学成分是其中的生物碱类成分，按化学结构可将生物碱类成分分为双酯型、单酯型、胺醇型和脂型。其中的单酯型和胺醇型为双酯型生物碱的一级和二级分解产物^[1]。由于乌头属生药中的生物碱以双酯型为主，而双酯型生物碱对心脏和神经系统有强烈的毒性，由于其有效剂量与中毒剂量非常接近，稍有不慎，即造成中毒乃至致死事故^[2，3]，给临床用药带来了极大的不便，因此临床应用时主要采用上述中药的炮制品。对炮制品的化学成分及药理作用研究表明：炮制品中双酯型生物碱的含量远低于生品，而单酯型生物碱的含量有所增加，并且毒性大大降低^[4]。但如果双酯型生物碱的含量控制不当，在临床上仍然会有中毒情况发生。如果可以得到仅含有单酯型生物碱的提取物，并且将这种提取物应用于临床，即可以保证临床用药的安全性、有效性。由于单酯类生物碱又分为水解型和热解型两种，并且药理研究表明，二者的药效并不完全相同^[5]，有必要建立仅含有单一类型单酯生物碱的提取方法。
(参考文献：[1]马鸿雁，李楠，杨明.乌头碱水解实验和热力学研究.成都中医药大学学报[J]，2005，28(3)：57～59；
[2]郭俊玲.乌头碱中毒致恶性心律失常.药物不良反应杂志[J]，2003(6)；
[3]张宏.附子、川乌、草乌、草乌叶煎煮时间、剂量与药效的相关性研究[D]，2005：14；
[4]楚春莲，王萍.生品、制品草乌毒性成分变化分析.Journal of Qiqihar
College[J]，2004，25(5)：546；
[5]许庆轩.附子及乌头属植物中二萜类生物碱的电喷雾质谱研究[D]，2004：18。)
发明内容
本发明提供了一种乌头类水解单酯型生物碱的制备方法。其步骤和条件如下：
以乌头属中药为原料，加入原料药的20倍水浸泡，置于高压容器内，在压力为0.05～0.17MP，温度为110～130℃，时间为10min～6h提取，将提取液浓缩，调pH＝9，用乙酸乙酯、乙醚或三氯甲烷萃取，得到的有机溶剂层浓缩，干燥，得到一种乌头类水解单酯型生物碱。
有益效果：通过电喷雾质谱检测，用有机溶剂萃取后得到的水解型生物碱较纯净，用滴定法测得含量可达50％以上并且无脂类生物碱干扰。此方法方便、高效、易于操作，可用于新药开发。
附图说明
图1a是生草乌未经高压煎煮的电喷雾质谱图。
图1b是生草乌经高压提取后总生物碱的电喷雾质谱图。
图2a是制草乌未经高压煎煮的电喷雾质谱图。
图2b是制草乌经高压提取后总生物碱的电喷雾质谱图。
具体实施方式
实施例1
将生草乌35g，加水700ml，置于高压容器内，在110℃、0.05MP下煎煮3次，每次2h，合并3次提取液，浓缩，调pH＝9，用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取，得到的有机溶剂层浓缩干燥，即得较纯净的水解型单酯生物碱，用滴定法测得总碱含量为57.98％。图1a是生草乌未经高压煎煮的电喷雾质谱图。可以看出生草乌中含有的双酯型生物碱包括乌头碱(m/z646)、3-去氧乌头碱(m/z630)，单酯型生物碱为去乙酰乌头碱(m/z586)，脂型生物碱包括8-亚油酰-苯甲酰乌头原碱(m/z866)，8-棕榈酰-苯甲酰乌头原碱(m/z842)。图1b是生草乌经高压提取后总生物碱的电喷雾质谱图，未检测到双酯型及脂型生物碱，而主要含有水解型生物碱-苯甲酰乌头原碱(m/z604)和苯甲酰中乌头原碱(m/z590)。
实施例2
将制草乌35g，加水700ml，置于高压容器内，在115℃、0.07MP下煎煮3次，每次1.5h，合并3次提取液，浓缩，调pH＝9，用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取，得到的有机溶剂层浓缩干燥，即得较纯净的水解型单酯生物碱，用滴定法测得总碱含量为74.42％。图2a是制草乌未经高压煎煮的电喷雾质谱图，含有的双酯型生物碱包括乌头碱(m/z646)、3-去氧乌头碱(m/z630)；以及乌头碱的热解产物-去乙酰乌头碱(m/z586)；分子离子峰出现在m/z800～1000区域的为脂型生物碱，其中包括8-亚油酰-苯甲酰乌头原碱(m/z866)、8-棕榈酰-苯甲酰乌头原碱(m/z842)。图2b是制草乌经高压提取后总生物碱的电喷雾质谱图，主要为水解型单酯型生物碱-苯甲酰乌头原碱(m/z604)、苯甲酰中乌头原碱(m/z590)、苯甲酰次乌头原碱(m/z574)。
实施例3
将生川乌35g，加水700ml，置于高压容器内，在120℃、0.1MP下煎煮3次，每次1h，合并3次提取液，浓缩，调pH＝9，用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取，得到的有机溶剂层浓缩干燥，即得较纯净的水解型单酯生物碱，用滴定法测得总碱含量为76.11％。
实施例4
将生附子35g，加700ml，置于高压容器内，在125℃、0.14MP下煎煮3次，每次40min，合并3次提取液，浓缩，调pH＝9，用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取，得到的有机溶剂层浓缩干燥，即得较纯净的水解型单酯生物碱，用滴定法测得总碱含量为96.27％。
实施例5
将黑顺片30g，加水600ml，置于高压容器内，在120℃、0.1MP下煎煮3次，每次1h，合并3次提取液，浓缩，调pH＝9，用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取，得到的有机溶剂层浓缩干燥，即得较纯净的水解型单酯生物碱，用滴定法测得总碱含量为89.58％。