一种具有抗真菌活性的海洋放线菌及其应用.pdf

本发明涉及海洋微生物的应用及动植物真菌病害的防治，具体地说是一种具有抗真菌活性的海洋放线菌及其应用，该菌是灰色链霉菌属的菌株，于2007年4月13日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号CCTCC NO：M 207046，鉴别特征命名为Streptomyces griseus Hmp-S19。本发明菌株的发酵液具有抗白色念珠菌(Candida albicans)、稻瘟霉病菌(Pyricularia oryzae)和尖孢镰刀菌(Fuarium oxysporum)等致病真菌的作用，效果稳且持久，具有从中开发出新型、高效、无毒天然农用及医用药物的巨大潜力。

1.  一种具有抗真菌活性的海洋放线菌，该菌是灰色链霉菌属的菌株，于2007年4月13日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号CCTCC NO：M207046，鉴别特征命名为Streptomyces griseus Hmp-S19。

2.  一种权利要求1所述的海洋放线菌的应用，其特征在于：所述菌株Streptomyces griseus Hmp-S19的发酵液可用于抗白色念珠菌稻瘟霉病菌和/或尖孢镰刀菌的药物中，其具有抗致病真菌的活性。

3.  根据权利要求2所述海洋放线菌的应用，其特征在于：所述菌株Streptomyces griseus Hmp-S19的发酵条件为，于发酵培养基中按体积接种量7～10％接种菌株，28℃，培养48～72小时；
所述发酵培养基配方为：每升水中，玉米粉5～15g，豆饼粉5～15g，磷酸二氢钾0.5～1.5g，碳酸钙0.5～1.5g，pH7.0。

一种具有抗真菌活性的海洋放线菌及其应用
技术领域
本发明涉及海洋微生物的应用及动植物真菌病害的防治，具体地说是一种具有抗白色念珠菌(Candida albicans)、稻瘟霉病菌(Pyricularia oryzae)和尖孢镰刀菌(Fuarium oxysporum)等致病真菌的海洋微生物。
背景技术
稻瘟病又称稻热病、掐脖瘟，是世界各水稻产区的重要病害。稻瘟病在我国南北稻区均有发生，被列为水稻三大病害之首。此病流行年份一般减产10％～20％，严重的50％，甚至80％以上。稻瘟霉病菌是稻瘟病的致病菌，上世纪五六十年代使用化学药剂防治稻瘟病使得水稻和人类都受到了很大的伤害，从七十年代开始人们开始采用绿色的生物农药防治稻瘟病，取得了不错的成果。但是稻瘟霉病菌耐药性的出现使得科学家们不得不开始寻找新的生物农药。
尖孢镰刀菌在真菌分类上属于半知菌亚门尖镰孢属。它以产生的大量絮状菌丝危害寄主。植物致病尖孢镰刀菌在生长过程中可产生毒素，毒素在植物体内可以扩散或转移，并参与呼吸、光合等代谢作用，是导致植物枯萎的主要物质。尖孢镰刀菌引起的枯萎病是黄瓜的重要病害之一。
白色念珠菌是一种条件致病性酵母菌，可存在于正常人的口腔黏膜、胃肠道、肛门、阴道、皮肤等部位。当机体营养不良、维生素缺乏、长期接触免疫抑制剂及抗菌药物时，或对于年老体弱、AIDS、癌症及长期带假牙的患者，白色念珠菌感染机率增高。治疗白色念珠菌感染常用的是唑类抗真菌药，如氟康唑(FCZ)，这类药物可口服给药，副作用小、溶解度高、毒性低及组织分布广泛，对多数病原性白色念珠菌有广谱杀菌作用。但是随着唑类药物的广泛应用，真菌耐药性也越来越严重，临床治疗复发甚至失败的病例大量增多。另外，作为一种抗真菌研究中的模式菌株，对白色念珠菌的抗性作用可以作为评价对真菌抗性的有效指标。
因此，寻找新型有效的抗真菌物质，是农学和医学领域迫切需要解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗真菌活性的海洋放线菌及其应用，其发酵液具有较强抗致病真菌作用，其发酵液还对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有很好的抗菌活性。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种具有抗真菌活性的海洋放线菌，系从我国黄渤海大连海域采集的繁茂膜海绵样品中分离得到，现保存于国家知识产权局指定的保藏单位，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心；保藏单位地址：武汉珞珈山，武汉大学内，邮政编码430072；保藏日期为2007年4月13日；保藏编号CCTCC NO：M 207046。该菌命名为灰色链霉菌Streptomyces griseusHmp-S19。
本发明所述的海洋放线菌在大多数培养基上生长良好，于高氏合成一号琼脂生长时，气生菌丝灰白色，分枝较多；基内菌丝呈淡火岩棕色，不断裂、无横隔、不生孢、无孢囊，孢子丝发育良好，直或波曲，成丛状。该菌具有一定的需盐性和耐盐性：在没有NaCl的培养基上气丝生长微弱，可溶性色素颜色较深，在NaCl含量为1％—7％的培养基上生长均生长良好，在NaCl含量为9％的培养基上只生长基丝，气丝不生长，无可溶性色素。明胶液化、牛奶凝固、牛奶胨化、硝酸还原、淀粉水解、革兰氏染色均呈阳性；硫化氢产生、纤维素分解、酪氨酸酶产生均呈阴性。好氧生长；在PH为6.0-11.0环境中均可良好生长，PH<5.0则完全不能生长；能利用阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、棉子糖、甘露醇、麦芽糖、果糖、蔗糖、木糖；细胞壁含L-DAP，全细胞水解物不含特征糖，细胞壁属于I型。
本发明所述的海洋放线菌发酵液抗菌活性：以管碟发测定。本发明所述的海洋放线菌，其发酵液对白色念珠菌(Candida albicans)、稻瘟霉病菌(Pyricularia oryzae)和尖孢镰刀菌(Fuarium oxysporum)具有较强的抗性作用，对细菌枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌也有很好的抗性作用。
本发明所述的海洋放线菌发酵液中抗菌物质在中性偏酸及PH<10的偏碱性条件下都较为稳定，对热较为稳定，甚至在50℃处理20分钟后仍保留大部分抗菌活性。
本发明所述的海洋放线菌发酵液经昆明种小鼠急性经口毒性实验和大耳白兔皮肤刺激实验证实为对哺乳动物无毒无刺激。
本发明所述的海洋放线菌发酵液具有较强的抗真菌活性，并对致病细菌也具有很好的抗性效果，且药效持久、稳定、无毒，具备从中开发出新型、高效、无毒的天然农用及医用药物的巨大潜力。
附图说明
图1为本发明所述的海洋放线菌在高氏一号固体培养基上的电镜照片。
图2为本发明所述的海洋放线菌的发酵液抗真菌活性结果：A为抗白色念珠菌(Candida albicans)结果，B为抗稻瘟霉病菌(Pyricularia oryzae)结果，C为抗尖孢镰刀菌(Fuarium oxysporum)结果。
图3为本发明所述的海洋放线菌和部分相关菌株依据16SrRNA基因序列构建的系统发育树。
具体实施方式
实施例1
我国黄渤海大连海域采集的繁茂膜海绵样品，在实验室中按下列条件培养，即可活得本发明所述的海洋放线菌：
本发明所述的海洋放线菌是依据其形态学特征、细胞壁化学组分及16SrRNA基因序列的系统进化分析，该菌的16SrRNA基因全序列如下：
其具有序列表SEQ ID No：1中的碱基序列。
SEQ ID No：1：
1   GTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAACCGCTTTCGGGCGGGGATTA
51  GTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGAC
101 AAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATGACCGTCTGCCGCATGGT
151 GGATGGTGTAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCT
201 TGTTGGTGAGGTAGTGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAG
251 AGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGA
301 GGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACG
351 CCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGA
400 GAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCC
450 AGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGC
500 GTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCT
550 TAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAG
600 ATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGAGGAACACC
650 GTGGCGAAGGCGGATCTCTGGCCGATACTGCGCTGAGAGCAAAGCGTGGG
700 AGCGACAGATAGATACCCTGTAGTCACGCCGTAACGNGGCACTAGGGTGG
750 CACATTCCGTGNCGTGCNANTACCATTAATGCCCNCTGGGAGNCGGCGAG
800NTAACTAAGAATG
(1)SEQ ID No：1的信息(参见序列表)
(a)序列特征
  ^*长度：812碱基对
  ^*类型：核酸
  ^*链型：双链
  ^*拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：菌株Streptomyces griseus Hmp-S19；
参照文献：阎逊初，放线菌的分离与鉴定[M]，北京，科学出版社，1992；进行鉴定，结果如表1-3所示；
表1为本发明所述的海洋放线菌的培养特征。