芸薹属游离小孢子再生植株的培养基配方.pdf

芸薹属游离小孢子再生植株的培养基配方涉及园艺作物芸薹属的小孢子再生植株的培养基配方的改进，属于生物工程领域。本发明就是提供一种诱导成胚率高、分化率高的芸薹属游离小孢子再生植株的培养基配方。本发明的培养基包括胚状体诱导培养基、分化培养基和生根培养基，所述的胚状体诱导培养基、分化培养基和生根培养基均包括大量元素、微量元素和有机元素。本发明为育种提供了大量的新基因型纯系，极大地丰富了芸薹属的育种资源。

1、  芸薹属游离小孢子再生植株的的培养基配方，其特征在于：培养基包括胚状体诱导培养基、分化培养基和生根培养基，所述的胚状体诱导培养基包括大量元素、微量元素和有机元素，所述的大量元素包括KNO₃80-200mg，Ca(NO)₂·4H₂O 400-600mg，KH₂PO₄ 80-200mg，FeSO₄·7H₂O 22-30mg，EDTA·Na₂ 28-42mg；所述的微量元素包括KI 0.5-1.0mg，CoCl₂·6H₂O0.01-0.05mg，H₃BO₃5-8mg，Na2MoO₄·2H₂O 0.1-0.5mg，MnSO₄·4H2O 18-25mg，CuSO₄·5H₂O 0.01-0.05mg，ZnSO₄·7H₂O 6-10mg；所述的有机元素包括肌醇60-150mg，烟酸2-10mg，吡哆醇0.2-0.7mg，硫胺素0.2-0.7mg，甘氨酸1.5-2.5mg，叶酸0.2-0.7mg，生物素0.01-0.1mg，谷氨酰胺600-1000mg，丝氨酸60-150mg，谷光甘肽20-40mg，6-苄基腺嘌呤0.5-1.5mg，蔗糖50-200g，活性炭0.1-0.5g，用水定容至1L，pH6.0-6.5。
所述的分化培养基包括大量元素、微量元素和有机元素，所述的大量元素包括NH₄NO₃1500-2000mg，KNO₃1800-2000mg，CaCl₂·2H₂O300-500mg，MgSO₂·7H₂O200-500mg，KH₂PO₄ 100-250mg，FeSO₄·7H₂O 25-30mg，EDTA·Na₂25-45mg，所述的微量元素包括KI0.5-1.0mg，CoCl₂·6H₂O 0.01-0.05mg，H₃BO₃ 5-8mg，Na2MoO₄·2H₂O 0.1-0.5mg，MnSO₄·4H₂O 18-25mg，CuSO₄·5H₂O 0.01-0.05mg，ZnSO₄·7H₂O6-10mg，所述有机元素包括肌醇60-150mg，烟酸0.2-0.8mg，吡哆醇0.2-0.7mg，硫胺素0.1-0.15mg，甘氨酸1.5-2.5mg，蔗糖20-50g，琼脂8-12g，用水定容至1L，pH6.0-6.5。
生根培养基包括大量元素、微量元素和有机元素，其中大量元素是分化培养基大量元素的浓度的一半，微量元素与分化培养基微量元素的浓度一致，所述的有机元素包括：肌醇60-150mg，烟酸0.2-0.8mg，吡哆醇0.2-0.7mg，硫胺素0.1-0.15mg，甘氨酸1.5-2.5mg，蔗糖10-20g，琼脂8-10g，用水定容至1L，pH5.8-5.9。

2、  根据权利要求1所述的芸薹属游离小孢子再生植株的培养基配方，其特征在于所述的分化培养基中添加激动素0.01-5ppm、6苄基嘌呤0.01-5ppm、萘乙酸0.01-5ppm。

芸薹属游离小孢子再生植株的培养基配方
技术领域
本发明涉及园艺作物芸薹属的小孢子再生植株的培养基配方的改进，属于生物工程领域。
背景技术
传统的小孢子培养均是采用MS和F培养基，MS与F培养基无机盐浓度较高，成本较高；且激素的浓度不合理，种类不齐全，因此诱导分化率较低。
发明内容
本发明就是针对上述问题，提供一种诱导成胚率高、分化率高的芸薹属游离小孢子再生植株的培养基配方。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案，本发明的培养基包括胚状体诱导培养基、分化培养基和生根培养基，所述的胚状体诱导培养基包括大量元素、微量元素和有机元素，所述的大量元素包括KNO₃ 80-200mg，Ca(NO)₂·4H₂O400-600mg，KH₂PO₄ 80-200mg，FeSO₄·7H₂O 22-30mg，EDTA·Na₂ 28-42mg；所述的微量元素包括KI 0.5-1.0mg，CoCl₂·6H₂O 0.01-0.05mg，H₃BO₃ 5-8mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.1-0.5mg，MnSO₄·4H₂O 18-25mg，CuSO₄·5H₂O 0.01-0.05mg，ZnSO₄·7H₂O 6-10mg；所述的有机元素包括肌醇60-150mg，烟酸2-10mg，吡哆醇0.2-0.7mg，硫胺素0.2-0.7mg，甘氨酸1.5-2.5mg，叶酸0.2-0.7mg，生物素0.01-0.1mg，谷氨酰胺600-1000mg，丝氨酸60-150mg，谷光甘肽20-40mg，6-苄基腺嘌呤0.5-1.5mg，蔗糖50-200g，活性炭0.1-0.5g，用水定容至1L，pH6.0-6.5；
所述的分化培养基包括大量元素、微量元素和有机元素，所述的大量元素包括NH₄NO₃1500-2000mg，KNO₃1800-2000mg，CaCl₂·2H₂O 300-500mg，MgSO₂·7H₂O200-500mg，KH₂PO₄ 100-250mg，FeSO₄·7H₂O 25-30mg，EDTA·Na₂25-45mg，所述的微量元素包括KI0.5-1.0mg，CoCl₂·6H₂O 0.01-0.05mg，H₃BO₃  5-8mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.1-0.5mg，MnSO₄·4H₂O 18-25mg，CuSO₄·5H₂O 0.01-0.05mg，ZnSO₄·7H₂O6-10mg，所述有机元素包括肌醇60-150mg，烟酸0.2-0.8mg，吡哆醇0.2-0.7mg，硫胺素0.1-0.15mg，甘氨酸1.5-2.5mg，蔗糖20-50g，琼脂8-12g，用水定容至1L，pH6.0-6.5；
生根培养基包括大量元素、微量元素和有机元素，其中大量元素是分化培养基大量元素的浓度的一半，微量元素与分化培养基微量元素的浓度一致，所述的有机元素包括：肌醇60-150mg，烟酸0.2-0.8mg，吡哆醇0.2-0.7mg，硫胺素0.1-0.15mg，甘氨酸1.5-2.5mg，蔗糖10-20g，琼脂8-10g，用水定容至1L，pH5.8-5.9；
作为另一种优选方案：所述的分化培养基中添加激动素0.01-5ppm、6苄基嘌呤0.01-5ppm、萘乙酸0.01-5ppm。
本发明的有益效果
1.基因型适应性广，出胚率较高；且由于一个胚代表着一种遗传基因型，所以本发明为育种提供了大量的新基因型纯系，极大地丰富了芸薹属的育种资源；
2.可将常规育种中纯合材料的获取时间由8—10年降低为2年，且遗传背景完全纳合；可加快育种步伐，大大的缩短育种时间，应用前景广阔。
具体实施方式
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所有培养基均用蒸馏水配制。
实施例1
具体配方见表1：
表1  芸薹属游离小孢子的培养基配方及灭菌方式

实施例2
具体配方见表2：
表2  芸薹属游离小孢子培养的培养基配方及灭菌方式