一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组合物及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种治疗乳腺病的中药组和物及其制备方法，尤其涉及一种治疗乳腺增生、乳腺癌的颗粒剂及其制备方法，属于中药技术领域。
背景技术
乳腺病是女性的常见病、多发病、久治难愈，发病率高达80％，乳腺增生症的发病率已达育龄女性的60％以上。近几年，乳腺病正处于高峰期，而且癌变率较高，据中国中医乳腺病防治研究中心流行病学统计的最新资料发现，女性乳腺癌发病率近年增加了39％，发病年龄提前了10岁，渐趋于年轻化，乳腺癌在妇女肿瘤的排行榜上由前几年的第五位跃居首位成为女性健康头号杀手。中医认为，乳腺增生病、乳腺癌(中医古称“乳岩”)，起自肝郁，终必肾虚，肿块坚硬难消，久治不愈，此乃“阴极阳衰”，寒痰凝聚。寒痰非温不能化，血瘀无阳安能散，且妇人“阳常不足”，用补肾温阳法，鼓舞阳气，以阳化阴，才能达到治愈之效。如果一见乳腺病就疏肝理气，一见内异症就活血化瘀，这就是仅知其一，不知其二，仅治其标，未治其本，有效也仅一时。申请号为CN200610114397.2的专利文献“治疗乳腺疾病的中药组合物及其制备方法”，公开了一种能补肾虚、温肾阳，活血化瘀，软坚散结治疗乳腺癌症及乳腺增生的药物组和物，但其制备工艺存存在不合理性，限制了药物处方疗效的发挥。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组和物及其制备方法，该组合物是以下列重量份的原料制成的：
紫草 50-150重量份 熟地 150-250重量份 附子(制) 30-60重量份
延胡索 40-80重量份 肉桂 40-80重量份 瓜蒌 150-250重量份
鳖甲 50-150重量份 全蝎 10-50重量份 鹿角胶 2-10重量份
该组和物的制备方法包括以下步骤：
1)取上述紫草重量份的一半、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，备用；
2)其余药味加水煎煮1-3次，第一次1-3小时，第二次1-2小时，合并煎液，浓缩至55℃下相对密度为1.10～1.40的浸膏；
3)将步骤1)中细粉与步骤2)中浸膏混合加入常规辅料，混匀，得药物混合物；
4)鹿角胶烊化后加入上述混合物中，依照本领域常规技术制成临床接受的制剂，如：胶囊剂、片剂、颗粒剂、软胶囊、丸剂。
该中药组合物颗粒剂的制备方法为：取原料药
紫草 87.5重量份 熟地 175重量份 附子(制) 45.8重量份
延胡索 58.3重量份 肉桂 58.3重量份 瓜蒌 175重量份
鳖甲 87.5重量份 全蝎 35重量份 鹿角胶 5重量份
其特征是该方法包括以下步骤：
1)取上述紫草重量份的一半、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉备用；
2)其余药味加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至55℃下相对密度为1.28～1.30的浸膏；
3)将步骤1)中细粉与步骤2)中浸膏混合，加入蔗糖粉300重量份、糊精300重量份，混匀，得药物混合物；
4)鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1000重量份，即得。
本发明原料药中，鳖甲用量较少，且有效成分难以煎出，故将其粉碎成细粉。因全蝎用量较少，比较贵重，同样将其粉碎成细粉。肉桂中含挥发油仅1％～2％，在所得制剂中难以鉴别，为了保留该有效成分，特别对制剂过程中使用的药用辅料进行了筛选。为了减少工艺中辅料的用量和制粒的需要将瓜篓、紫草粉碎或部分粉碎。
本发明水提原料药中，熟地黄用量较大且熟地黄经炮制后，所含成分发生较大变化，梓醇、多糖等成分较生地黄显著减少，而5-羟甲基糠醛、寡糖及低聚糖等成分含量明显增高。现代药理表明，熟地黄经炮制后的成分改变与其炮制后补血滋阴功效增强相吻合。因此现采用正交实验法，以其滋阴的主要成分之一5-羟甲基糠醛的含量为评价指标，对处方的提取工艺进行优化选择。与现有技术相比，本药物组合物对肿瘤的抑制作用较强，其抗转移效果较好，对化疗药物有减毒增效作用。
【具体实施方式】
下述实验例和实施例进一步说明但不下限于本发明
实验例1.本发明中药组和物提取工艺的优选实验
1.试验材料
Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1311A四元梯度泵、G1313A自动进样器、G1315A二极管阵列检测器(美国惠普公司)；Lambda 25 UV/VIS spectrometer(美国PerkinElmer公司)；AG285分析天平(德国梅特勒公司)；KS-600D超声清洗机(宁波科生仪器厂)；98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)。5-羟甲基糠醛对照品(批号：111626-200402)、购自中国药品生物制品检定所，乙腈色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 HPLC法测定5-羟甲基糠醛含量
2.1.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(250×4.6mm，5μm)；柱温：35℃；检测波长：280nm；流速：1.0mL·min-1；流动相：水-乙腈(85：15)；进样量：10μL。理论塔板数按5-羟甲基糠醛计算应不低于3000。
2.1.2对照品溶液制备
精密称取5-羟甲基糠醛对照品8.10mg置100mL容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2.1.3 线性关系的考察
精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10mL分别置100mL容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进样，以峰面积为纵坐标，5-羟甲基糠醛溶液的量为横坐标作图，得线性回归方程：y＝7.0725x-6.9933，r＝0.9999。表明5-羟甲基糠醛溶液在16.2～97.2ng间线性关系良好。
2.1.4 供试品溶液的制备及测定
精密量取本发明原料药提取液5mL，置25mL量瓶中，加甲醇15mL，超声15min，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液。在上述色谱条件下取10μL进样测定，计算。
2.2 正交试验设计
选择提取时间、提取次数、浓缩至相对密度三个因素，每个因素设3个水平，因素水平见表1，试验设计结果见表2，方差分析见表3。
称取紫草43.8g、熟地175g、附子(制)45.8g、延胡索58.3g、肉桂58.3g，按表2的设计进行回流提取，趁热滤过，合并二次提取液，浓缩并定容至500mL，按上述方法测定提取液中5-羟甲基糠醛含量，计算。
表1 优选因素水平表
表2.因素筛选正交试验数据表
表3 方差分析表
F1-0.1(2，2)＝9.00 F1-0.05(2，2)＝19.00 F1-0.01(2，2)＝99.00
以5-羟甲基糠醛含量为考察指标的正交试验直观分析及方差分析的结果表明，因素C对试验结果影响最大，以后依次为B、A。其中C2提取效果最好，宜选择C2；最佳提取浓缩工艺条件为A3B2C2。即加水提取2次，每次2小时，浓缩相对密度至1.29。
根据该结果和工艺执行中的实际情况，优选方法如下：取原料药加水煎煮2次，第一次加8倍量的水提取2小时，第二次加6倍量的水提取1.5小时，合并煎液，浓缩至55℃下相对密度为1.28～1.30。
实验例2.本发明胶囊剂、颗粒剂制备中辅料的筛选
本发明提取浸膏中含有较多粘液质和脂多糖等引湿性物质，所得该产品的固体制剂储存过程中易吸潮，使产品质量不稳定；另外，为了使产品装量准确，服用方便，特根据辅料与浸膏粉混匀后制成颗粒的吸湿性、成型性、溶化性、堆密度以及休止角来选择恰当辅料。
实验方法：取紫草43.8g、熟地175g、附子(制)45.8g、延胡索58.3g、肉桂58.3g处方量药材按优选出的最佳提取工艺提取、浓缩得浸膏，取紫草43.7g、瓜蒌175g、鳖甲87.5g、全蝎35g粉碎成细粉，按表4规定鹿角胶比例浸膏与辅料混匀，取鹿角胶5g烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1-6号颗粒剂，测定成型性、堆密度、休止角、溶化性以及吸湿性。并以成型性、堆密度、休止角、溶化性以及吸湿性为指标综合评价，优选最佳辅料。
综合指标＝(15/最大成型性值)×成型性值+(15/最大堆密度值)×堆密度值+(最 小休止角值×15)/休止角值+(20/最大溶化性值)×溶化性值+(最小吸 湿率值×35)/吸湿率值+对挥发油的保留效果(0-20分四个级别)。
表4 不同辅料与浸膏粉的配伍处方
1.1 成型性的测定
1.1.1 实验方法
将制备好的颗粒称重，先过一号筛，再过四号筛，收集能通过一号筛但不能通过四号筛的颗粒，称重。
成型率＝过筛后颗粒质量/过筛前颗粒质量*100％
成型性分值计算运用公式：(15/最大成型性值)×成型性值，结果见表5。
表5 成型性的测定
1.2 堆密度的测定
堆密度又称表观密度或松密度，系指单位体积颗粒的质量。堆密度所用的体积是指颗粒及其本身空隙以及颗粒与颗粒之间空隙在内的总体积。颗粒的堆密度大即堆体积小，可表示颗粒密集的程度以及决定体积分剂量的多少。
1.2.1 实验步骤
将过筛后的颗粒放入干燥的量筒中，轻轻振动，读出其近刻度处的ml数(V)；将过筛后的质量作为M(g)，两者的比值即为堆密度。堆密度＝M/V
堆密度分值计算运用公式：(15/最大堆密度值)×堆密度值，结果见表6。
表6 堆密度的测定
1.3 休止角的测定
流动性是颗粒剂的重要性质之一，流动性的好坏与颗粒的质量、分剂量的准确度有关，药剂学上常用流动率和休止角表示。休止角愈小，流动性愈好。通常粒径越小或粒度分布宽的颗粒，其休止角愈大；而粒径圆、大且均匀的颗粒易流动，休止角小。
3.3.1 实验步骤采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上1cm的高度处，小心地将颗粒沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到坐标纸上形成的颗粒圆锥体尖端接触到漏斗口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径(2R)，计算出休止角tga＝H/R.做5次，计算平均值。
休止角分值计算运用公式：(最小休止角值×15)/休止角值，结果见表7。
表7 休止角的测定
1.4 溶化率的测定
1.4.1 实验步骤在干燥恒重的5ml离心管(最小刻度0.1ml)中加入精密称定的颗粒，精密加入沸水5ml，搅拌振荡5min，3000r/min离心15min，弃去上清液，在80℃将残渣烘干至恒重，精密称定，计算溶化率。结果见表5。
溶化率＝溶化颗粒质量/颗粒质量*100％
溶化率分值计算运用公式：(20/最大溶化性值)×溶化性值，结果见表8。
表8 溶化率测定
1.5 吸湿性的测定
1.5.1 实验步骤取一定量的浸膏粉，置30℃烘箱中恒重48h。将底部放有NaCl饱和溶液的玻璃干燥器中定时放入NaCl直到形成NaCl过饱和溶液，此时干燥器内的相对湿度为75％。在已恒重的扁称量瓶底部放入厚约2mm的药粉，准确称重后置于上述干燥器内(扁称量瓶打开)。48h后称量，计算吸湿百分率。共做两组，计算平均值。
吸湿率分值计算运用公式：(最小吸湿率值×15)/吸湿率值，结果见表9。
表9 吸湿性的测定
1.6 对挥发油的保留效果
取以上各处方号颗粒2.0g，研细，加乙醇10ml，冷浸20分钟，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品(挥发油的主要成分)，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典2005版》(附录VI B)试验，吸取供试品溶液2～5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显色情况见表10。
表10 对肉桂挥发油的保留效果的检测
1.7 综合评分 对上述6项测试结果进行综合评价，结果见表11。
表11 综合评分
结论：将与糊精、糖粉与本发明浸膏(1：1：1)制成的颗粒容易制粒，稳定，不容易吸湿，易于溶化，且流动性好，制成颗粒后有助于分装和贮存的稳定性，且对肉桂挥发油的保留效果较好。故选用糊精与糖粉(1：1)作为辅料制粒最好。
实验例3.本发明片剂的制备
取上述紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮，合并煎液，浓缩成浸膏，混入上述细粉，再与细粉量0.5—5％的羧甲基淀粉钠混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，整粒，压片，包衣，即得。
本发明制成片剂的崩解性不好，故我们通过实验对加入的崩解剂进行了筛选，试验结果如下表12： 表12 不同崩解剂制成片剂的实验结果
崩解剂用量崩解时间(min)外观性状淀粉2％17易吸湿，药物稳定性差羧甲基淀粉钠2％9硬度好，外观可压性及流动性良好二氧化硅2％24可压性及流动性差低取代羟丙基纤维2％16硬度不符合要求
故本发明选择羧甲基淀粉钠为崩解剂。
实验例4.本发明软胶囊的制备
取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮，合并煎液，浓缩，减压干燥，粉碎，与细粉混匀，加入植物油适量，搅匀，制成软胶囊，所用软胶囊辅料为豆油：吐温-80：乙基纤维素＝5-12：0.2-8:3-10的混合物。为选择合适的辅料及其优选的配比，我们对其进行了筛选试验，结果如下表13
表13 不同软胶囊辅料的实验结果
辅料药物:辅料制成后性状豆油1：2内容物易分层、装量不准确豆油：吐温-80：乙基纤维素2：0.1：1.51：2流动性好，易制丸，且不易渗漏豆油：吐温-80：单硬脂酸铝2：0.1：1.51：2稳定性好，但流动性差，不易制丸
豆油：吐温-80：蜂蜡2：0.1：1.51：2流动性好，但易于渗漏
根据以上结果，我们以豆油、吐温-80、乙基纤维素作为该软胶囊的辅料。
实验例5.本发明丸剂的制备
取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮，合并煎液，浓缩，减压干燥，粉碎，与细粉混匀，加入药粉量0.1-6倍微晶纤维素混合，以2-10％PVP的乙醇溶液为粘合剂制成丸剂。
本发明制成丸剂时，我们对丸剂的辅料进行了筛选试验，试验结果见表14和表15：
表14 不同处方丸剂的外观质量
药物粉末赋形剂润湿剂粘合剂外观性状药物粉末2份淀粉1份90％乙醇3％PVP球形、光滑、圆整药物粉末2份微晶纤维素1份90％乙醇3％PVP球形、光滑、圆整药物粉末2份乙基纤维素1份90％乙醇3％PVP球形、不光滑、不圆整药物粉末2份等比例混合淀粉、乙基纤维素1份90％乙醇3％PVP球形、光滑、圆整药物粉末2份等比例混合淀粉微晶纤维素1份90％乙醇3％PVP球形、不光滑药物粉末2份等比例混合硬脂酸、乙基纤维素1份90％乙醇3％PVP块状
表15 溶散时间与吸湿百分率的测定结果
以上试验结果表明：药粉与微晶纤维素以2：1混合制备丸剂大小均匀、吸湿性小，稳定性好，可操作性和质量均符合规定，固本发明丸剂以微晶纤维素作为赋形剂。
实验例3.药效学实验
为了证明本发明的疗效，我们进行了以下药效学实验。
以下药效试验所用本发明药物组为依实施例6制备的颗粒剂；
阳性对照药：依申请号为CN200610114397.2的方法制得的颗粒剂：
鹿角胶42g、紫草210g、熟地黄210g、瓜蒌210g、鳖甲(醋制)105g、附子(制)56g、肉桂70g、延胡索(醋制)70g、全蝎42g
以上九味，鳖甲加水煎煮1小时后，加入熟地黄、瓜蒌、附子煎煮2小时，滤过，药渣再加水煎煮1.5小时，合并煎液，滤过，滤液备用，肉桂提取挥发油，蒸馏后的水液与上述滤液合并，浓缩至相对密度为1.20~1.35(80℃)的稠膏。紫草、全蝎和延胡索粉碎成细粉，备用。鹿角胶胶烊化后，加入上述稠膏内，混匀。取稠膏，和上述紫草等细粉，喷入挥发油，然后按照中药常规制备方法制成颗粒剂。
一、对乳腺增生的治疗和抑制作用的实验研究
1 材料和方法
1.1 实验动物 实验用雌性成年健康未孕大鼠70只，体重190～230g，在同一环境下，用固定配方饲料喂养。
1.2 实验药物 苯甲酸雌二醇注射液(上海通用药业股份有限公司生产，批号060102)。
1.3 实验方法 实验大鼠随机分4组。空白对照组共10只，不给任何药物；模型组共20只，肌内注射苯甲酸雌二醇0.13mg/次，隔日一次，共30d，总剂量为1.95mg/只；第3、4组为治疗组各20只，雌激素用法同上，并分别灌服本发明药物组、阳性对照药溶液，每只0.1g/次，每日一次，共30d，每只灌服2ml。
2 实验结果
2.1 大鼠乳房大小测定标准 大鼠正常乳房直径<0.3cm。I度增大：乳房直径0.3～0.49cm；II度增大：乳房直径0.5～0.69cm；III度增大：乳房直径0.7cm以上，结果见表16
表16 三组大白鼠乳房大小比较
注：与模型组比较，*P<0.05；与阳性对照药比较※P<0.05
从表16中看出，对照组乳房大小正常，模型组中II度增大者多达65％，而本发明药物组、阳性对照药组多数恢复正常，II度增大者仅占5％，经统计学处理两组差异有显著性(P<0.05)。
本发明药物组正常大小者占75％，阳性对照药组正常大小者占60％，经统计学处理两组差异有显著性(P<0.05)。
2.2 病理组织变化观察 以上4组动物在实验30d后处死，测量乳腺体积，解剖取一对乳腺，用10％甲醇固定，石蜡包埋，组织切片，H.E染色，光镜观察乳腺导管管腔、导管上皮、乳腺腺泡数、小叶内腺泡数。镜下可见对照组乳腺组织切片正常。模型组乳腺组织切片可见小叶内腺管数目明显增多，腺管上皮细胞增生呈多层，形成乳头状突入管腔，局部可见淋巴细胞浸润。本发明药物组、阳性对照药组组织切片可见乳腺腺泡数及小叶内腺泡数明显减少，乳腺组织基本正常，仅见腺管有扩张。通过动物实验证明本药物组合物对乳腺增生有明显的治疗作用。
二、对小鼠乳腺癌抑瘤、抗转移作用的实验研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品来源：环磷酰胺(CTX)针剂，为江苏恒瑞医药股份有限公司生产，200mg/支，生理盐水(NS)由上海长征富民药业有限公司生产。
1.1.2 实验动物：津白II号小鼠，6～8周龄，雌性，体重20g左右。
1.1.3 MA891瘤株：由中国医学科学院肿瘤研究所提供。
1.2 方法
1.2.1 小鼠移植性乳腺癌模型的建立：TA2MA2891原为一只348日龄雌性津白II型小鼠自发乳腺肿物，经同源雌性小鼠反复传代，获得高自发肺转移模型，病理证实为小鼠乳腺癌Dunn类B型。将对数生长期的小鼠乳腺癌细胞MA891以2×106/只接种于津白II号小鼠右侧腋窝皮下。
1.2.2 实验治疗：将接种后的津白II号小鼠随机分为5组，每组10只，即生理盐水(NS)组为对照组，CTX组、本发明药物组、阳性对照药、CTX+本发明药物组为治疗组。接种后第2天给药，连续治疗21天。①CTX组：CTX20mg/kg，隔日1次腹腔注射；②本发明药物组、阳性对照药：每只0.1g/次，每日1次灌胃；③CTX+本发明药物组：方法同CTX组和本药物组合物组；④NS组：灌胃，每次0.5ml，每日1次。
1.3 观察指标
1.3.1 观察抑瘤率：小鼠处死后，剥离肿瘤称重，观察肿瘤的抑制率。抑瘤率＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重。
1.3.2 肺转移抑制率：计数肺内转移结节，观察肺转移抑制率。转移抑制率＝(对照组平均肺转移结节-治疗组平均肺转移结节)/对照组平均肺转移结节。
1.3.3 脾脏重量及脾脏指数：取脾脏称重，脾脏指数＝脾重(g)/每10g小鼠重量。
1.4 统计方法采用SPSS 810统计软件，使用单因素方差分析(q检验)，以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 本药物组合物对肿瘤的抑制情况，见表17。
表17 本药物组合物对津白II号小鼠肿瘤抑制率(n＝40)
组别只数肿瘤重量(g)肿瘤抑制率(％)CTX组100.95±0.5172.14％*本发明药物组102.21±1.2035.19％*阳性对照药102.47±1.2427.57％*CTX+本发明药物组100.89±0.4673.90％*NS组103.41±1.200％
注：与生理盐水组比较，*P<0.05
从上表可以看出，CTX组、本发明药物组、阳性对照药、CTX+本发明药物组均有显著的抑瘤效果，其中CTX+本发明药物组效果最好，抑瘤率为73.90％；CTX组次之，抑瘤率72.14％，本发明药物组抑瘤率35.19％，阳性对照药组抑瘤率27.57％，本发明药物组优于阳性对照药。
2.2 本药物组合物对肺转移的抑制率，见表18。
表18 本药物组合物对津白II号小鼠肺转移抑制率(n＝40)
组别只数肺转移结节(个)肺转移抑制率(％)CTX组1011.65±3.5338.03％* ※本发明药物组1010.40±5.1544.68％*※阳性对照药组1014.35±4.8923.67*
CTX+本发明药物组108.10±2.5656.91％*※NS组1018.80±5.590％
注：与生理盐水组比较，*P<0.05，与阳性对照药组比较※P<0.05
从表2可以看出，除NS组外其余各组均有很好的抑瘤效果，CTX+本发明药物组抗肿瘤转移效果最好，肺转移抑制率56.91％；本发明药物组肺转移抑制率44.68％；阳性对照药组肺转移抑制率23.67％CTX组肺转移抑制率38.03％。本药物组合物组对肺转移抑制效果较阳性对照药组显著。
2.3 本药物组合物对脾脏重量的影响，见表19。
表19 本药物组合物对津白II号小鼠脾脏的影响(n＝40)
组别只数肿瘤重量(g)CTX组100.102±0.032*CTX+本发明药物组100.139±0.050*本发明药物组100.220±0.056*△阳性对照药组100.185±0.056*NS组100.170±0.045
注：与NS组比较，*P<0.05；与阳性对照药组比较，△P<0.05
表3结果表明本药物组合物组可以明显增加脾脏重量，CTX组、CTX+本发明药物组与NS组比较，P<0.05脾重明显减轻，P<0.05；本发明药物组、阳性对照药组与NS组比较，P<0.05脾重明显增加；本发明药物组与阳性对照药组比较，△P<0.05
本试验结果显示，本药物组合物对肿瘤有一定的抑制作用，其抗肺转移效果较好，其中CTX+本药物组合物组抑瘤及抗转移效果最好，说明本药物组合物对化疗药物有减毒增效作用。脾脏是重要的免疫器官，本药物组合物组脾脏重量明显增加，表明本药物组合物具有增强免疫功能的作用，且本发明药物优于阳性对照药，进一步证明了本发明工艺、处方用量的科学性。
实验例4.急性、长期毒性试验
1、急性毒性试验
选用昆明种小鼠随机分组，每组10只，每只每天灌胃根据实施例6制备的本发明药物60g/kg(按体表面积折算成相当于成人用量的30倍)，连续灌胃4周，无1只动物死亡，亦未见任何毒性反应。外周血象及肝肾功能检查，以及剖取心肝脾肺肾光学显微镜病理形态学检查，均未见异常。
2、长期毒性试验
根据实施例8制备的本发明药物2g/kg、10g/kg、100g/kg给大鼠连续灌胃给药3个月，动物的皮毛、肤色、摄食、活动、尿、便等均无异常动物的血常规、肝、肾功能等血液生化指标和动物的主要脏器指数均在正常范围，且正常动力无差异病理组织学检查表明，心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、气管、睾丸、卵巢等重要脏器无病理改变。停药两周后检查以上各项指标均无明显毒性反应，表明无蓄积毒性。
实验目的：本试验观察本发明药物灌哺乳动物给药大鼠的长期毒性，以了解口服给药的安全性。
动物：清洁级wistar种大鼠60只，体重为100-110g，由卫生部药品生物制品检定所提供。
药品(检品)：依实施例6所制药品，批号：05091201，由北京亚东生物制药有限公司提供，用时以0.5％甲基纤维素钠配制成所需浓度的均匀混悬液。
仪器：OLYMPUS BH-2型显微镜Encore II型全自动生化仪等。
方法与结果
清洁级wistar种大鼠60只，按体重随机分为三组，每组20只，雌雄各半，①对照组②本发明药物90g/kg组③本发明药物180g/kg组，两给药组的用量按公斤体重折合，分别相当于临床日用量的30倍和60倍。各组动物均于上午灌胃给药2ml/100g，连续给药2个月。
(1)一般观察：观察动物的行为活动、尿、便和食量。给药前和给药后每周称体重一次，直至实验结束。
结果表明，给药期间动物的摄食、活动及排泄情况正常，体重增长情况良好，结果见表
20及表21。
表20 本发明药物对雄性大鼠体重增长的影响(n＝10，X±SDg)
表21 本发明药物对雌性大鼠体重增长的影响(n＝10，X±SDg)
(2)血常检查：给药结束后各组大鼠禁食不禁水18小时，剪尾取血，以直接计数法测红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板，瑞氏染色法进行白细胞分类计数，结果见表22及表23。
表22 本发明药物对大鼠血象的影响(n＝20，X±SD)
表23 本发明药物对大鼠白细胞分类的影响(n＝20，X±SD)
结果表明，对照组及各给药组的红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(BPC)总数和白细胞分类均在正常值范围内，给药组和对照组比较无统计学差异，说明本发明药物对大鼠骨髓无抑制现象。
实验例5.临床试验
1.病例筛选
82例均为女性，年龄35～69岁，其中40～55岁68例，占8219％，平均年龄48.2岁，未婚3例，已婚未生育2例，有人流史71例，月经紊乱59例，合并子宫肌瘤39例，伴有更年期症候群38例。病例选择：①年龄多在40岁以上。②肿块大而硬，属重度乳腺增生病或可疑乳癌者。③久治不愈或反复发作者。④有肾阳不足表现：腰酸乏力，全身怕冷，四肢冰凉，夜尿频频，性冷无欲等。⑤手诊肾区晦暗。有以上任何一条即可入选，但多数病例兼有2条以上。
2、疗效评价
按照国际抗癌联盟(UICC)的实体瘤通用疗效评定标准进行疗效评估。病理学完全缓解(pCR)：手术标本中已无浸润癌细胞；临床完全缓解(cCR)：临床检查肿瘤完全消失；临床部分缓解(cPR)：肿瘤最大直径与其最大垂直径的乘积减少>50％以上；病情稳定(SD)：肿瘤最大直径与肿瘤最大垂直径的乘积减少<50％，或增加<25％；疾病进展(PD)：肿瘤最大直径与其最大垂直径的乘积增加>25％。
3.治疗方法
用法与剂量：开水冲服根据实施例6制备的本发明药物，1次1～2袋，1日2～3次。每月服药20d左右，经期停药，3个月经周期为1个疗程。服药反应：服药1周后多数人自觉精神好转，体力增加，不怕冷，手足转温。若全身有微微热感，口干欲饮的感觉为剂量合适，有这种服药反应者疗效好且起效快。但有人没有任何反应，只按常规服药即可，不必追求服药反应。
服药时间：最短1.5个月，最长10个月，平均服药4.2个月，大多数病例服药1～2个疗程。
4.治疗结果
按照国际抗癌联盟(UICC)的实体瘤通用疗效评定标准进行疗效评估。凡不连续服药，兼用其它药物或疗法者，病例记录不全者不在统计之例。
全组有效率为83.5％，其中完全缓解率为40.6％，部分缓解率为42.9％。
下述实施例均能实现以上发明效果
实施例1.
紫草 87.5g 熟地 175g 附子(制) 45.8g
延胡索 58.3g 肉桂 58.3g 瓜蒌 175g
鳖甲 87.5g 全蝎 35g 鹿角胶 5g
取上述紫草取紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮1-3次，第一次1-3小时，第二次1-2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10～1.40，加入上述细粉、常规辅料，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，依照本领域常规技术制成临床接受的制剂，如：胶囊剂、片剂、颗粒剂、软胶囊、丸剂。
实施例2.
紫草 87.5g 熟地 175g 附子(制) 45.8g
延胡索 58.3g 肉桂 58.3g 瓜蒌 175g
鳖甲 87.5g 全蝎 35g 鹿角胶 5g
蔗糖粉 300g 糊精 300g
取上述紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮1-3次，第一次1-3小时，第二次1-2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10～1.40，加入上述细粉、蔗糖粉、糊精，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。
实施例3.片剂
紫草 50g 熟地 250g 附子(制) 30g
延胡索 80g 肉桂 40g 瓜蒌 250g
鳖甲 50g 全蝎 50g 鹿角胶 2g
羧甲基纤维素纳20g
取上述紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，加入上述细粉，羧甲基纤维素纳20g，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，整粒，压片，包衣，制成1000片，即得。
实施例4.胶囊剂
紫草 60g 熟地 200g 附子(制) 35g
延胡索 70g 肉桂 45g 瓜蒌 200g
鳖甲 60g 全蝎 45g 鹿角胶 3g
蔗糖粉 50g 糊精 50g
取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，加入上述粉碎粉，蔗糖粉、糊精，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制粒、装胶囊，制成1000粒，即得。
实施例5.软胶囊
紫草 100g 熟地 130g 附子(制) 35g
延胡索 70g 肉桂 45g 瓜蒌 200g
鳖甲 60g 全蝎 45g 鹿角胶 3g
取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，减压干燥，粉碎，与细粉混匀，加入植物油适量，搅匀，制成软胶囊600粒，即得。
实施例6.颗粒剂
紫草 87.5g 熟地 175g 附子(制) 45.8g
延胡索 58.3g 肉桂 58.3g 瓜蒌 175g
鳖甲 87.5g 全蝎 35g 鹿角胶 5g
取上述紫草取紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，加入上述细粉，蔗糖粉300g、糊精300g，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。
功能主治：温阳补肾，活血化瘀，软坚散结。用于肾虚型乳腺增生。
用法用量：开水冲服，一次10g，一日3次。
规格：每袋装10g
实施例7.丸剂
紫草 87.5g 熟地 175g 附子(制) 45.8g
延胡索 58.3g 肉桂 58.3g 瓜蒌 175g
鳖甲 87.5g 全蝎 35g 鹿角胶 5g
取上述紫草取紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度1.10，60℃减压干燥，粉碎，与上述细粉混匀以3％PVP的乙醇溶液为粘合剂制成1000丸，即得。