杏香兔耳风总黄酮提取物及其提取方法和用途.pdf

本发明属于医药技术领域，提供了杏香兔耳风总黄酮提取物及其提取方法和用途。本发明采用杏香兔耳风为原料，以不同pH值的弱碱性溶液配制的乙醇为提取溶剂，采用回流提取，后经过石油醚萃取除杂，最后经大孔树脂分离和富集，得到总黄酮类成分纯度在50-95％之间。本发明工艺简单、操作方便安全、可重复性好，可用于工业化生产。本发明还提供了总黄酮类成分或总黄酮与药学上可接受的载体制成的制剂在制备治疗急慢性官颈炎药物中的应用。

1、  杏香兔耳风总黄酮提取物，其特征在于：该提取物中总黄酮的含量在50％-95％之间。

2、  根据权利要求1所述的兔耳风总黄酮提取物，其特征在于：该总黄酮提取物可以和药学上可接受的载体制成临床上可接受的制剂。

3、  一种如权利要求1所述的兔耳风总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：
①取干燥，粉碎的兔耳风药材，用6-15倍量浓度为5％-90％的乙醇溶液，30-100℃回流提取2-4次，过滤，滤液浓缩；
②取提取物浓缩液，用石油醚萃取2-4次去除叶绿素等杂质，保留水层上大孔树脂柱吸附；或直接取提取物浓缩液上柱；
③用0％-15％乙醇溶液洗脱大孔树脂柱至洗脱液无色，后用10％-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，蒸干至浸膏状，真空干燥，粉碎，得兔耳风提取物。

4、  如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤②所述的大孔树脂为中低极性的大孔树脂。

5、  如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的大孔树脂优选D-101树脂。

6、  如权利要求3所述的兔耳风总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：步骤①中所述的乙醇溶液为用pH值为7.5-10的氨水、氢氧化钙、碳酸钠等弱碱溶液配制。

7、  兔耳风总黄酮提取物和其制剂在制备治疗急慢性宫颈炎的药物中的应用。

杏香兔耳风总黄酮提取物及其提取方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及杏香兔耳风总黄酮提取物及其提取方法和用途。
背景技术
杏香兔耳风为一民间常用药，为菊科植物杏香兔耳风(Ainsliaeafragrans Champ.)的干燥全草。杏香兔耳风性味甘、微苦、性凉，归肺、肝经。具有清热补虚，凉血止血，利湿解毒等功效。主治虚劳骨蒸，肺疹咳血，妇女崩漏，湿热黄疸，水肿，痈疽肿毒，瘰疬结核，跌打损伤，毒蛇咬伤等。临床上用杏香兔耳风制剂及民间验方配伍治疗宫颈糜烂、子宫内膜炎、热疖、鹅口疮等疾病。杏香兔耳风作为少常用中药，在许多方面尚属空白，有待进一步开发利用，以期发挥其最大作用。
到目前为止，文献报道的化合物包括倍半萜内酯类，三菇类，有机酸类、黄酮类等，杏香兔耳风制剂包括杏香兔耳风片、复方杏香兔耳风颗粒等。目前市售兔耳风制剂的制备工艺方法陈旧，均是杏香兔耳风经过简单提取后的制剂，有效成分含量低，日服剂量大。为减小服用剂量、提高药效，本发明采用新方法对杏香兔耳风进行提取分离，得到更高纯度的提取物，提高了有效成分含量，减小服用剂量，提高疗效。
对于天然产物的提取分离，大孔树脂吸附法是一种非常有效的工业化生产方法，本方法从提取溶剂选取(选择不同浓度的乙醇溶剂并考察用弱碱性溶液调节pH值)、脂溶性杂质的去除到洗脱剂的选择进行优化，在每步最优条件下进行提取分离，总黄酮类成分转移率、纯化物中总黄酮含量均高于所见文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种杏香兔耳风总黄酮提取物及其提取方法和用途。
本发明目的是通过如下措施实现：
一种杏香兔耳风总黄酮的提取方法，包括以下工艺步骤：①取干燥，粉碎的兔耳风药材，用6-15倍量浓度为5％-90％的乙醇溶液30-100℃回流提取2-4次。过滤，滤液浓缩。②取提取物浓缩液，用石油醚萃取2-4次，保留水层上大孔树脂柱吸附；或直接取提取物浓缩液上柱。③用0％-15％乙醇溶液洗脱大孔树脂柱至洗脱液无色，后用10％-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，蒸干至浸膏状，真空干燥，粉碎，得兔耳风提取物。
步骤①所述的5％-95％的乙醇提取溶液可用pH值为7.5-10的氨水、氢氧化钙、碳酸钠等弱碱性溶液配制。
步骤②所述的大孔树脂可为中低极性的大孔树脂如D-101树脂等。
步骤③中所述的提取物中总黄酮的含量在50％-95％之间。
所述兔耳风提取物在治疗急慢性宫颈炎的药物中的应用：以总黄酮为活性成分，配以药用辅料，用公知的方法制备成药剂学上的任何一种剂型。
本发明工艺简单、操作方便安全、转移率约从37％提高至87％、提取率约提高135％，可重复性好，可用于工业化生产。
具体实施方式
实施例1：
取兔耳风药材1kg，粉碎，过20目筛，加以12000ml用pH值为9的氢氧化钙溶液配制的体积分数为5％的乙醇溶液，回流提取2小时，过滤并保存滤液，重复操作3次。合并三次滤液，滤液浓缩至约含黄酮2mg/ml，用石油醚萃取三次，保留水层。母液上处理好(以95％乙醇浸泡12h后装柱，再以95％乙醇洗脱2-4个体积，后以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味)的大孔树脂柱，流速1ml/min。用大量蒸馏水洗脱至洗脱液无色，用10％乙醇洗脱5个体积，收集10％乙醇的洗脱液，浓缩并蒸干，得兔耳风纯化物，总黄酮含量约为55％。
实施例2：
取兔耳风药材1kg，粉碎，过20目筛，加以12000ml用pH值为8的氢氧化钙溶液配制的体积分数为10％的乙醇溶液，回流提取2小时，过滤并保存滤液，重复操作3次。合并三次滤液，滤液浓缩至约含黄酮2mg/ml，用石油醚萃取三次，保留水层。母液上处理好(以95％乙醇浸泡12h后装柱，再以95％乙醇洗脱2-4个体积，后以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味)的大孔树脂柱，流速1ml/min。用大量蒸馏水洗脱至洗脱液无色，用30％乙醇洗脱5个体积，收集30％乙醇的洗脱液，浓缩并蒸干，得兔耳风纯化物，总黄酮含量约为67％。
实施例3：
取兔耳风药材1kg，粉碎，过20目筛，加以12000ml用pH值为8的氨水配制体积分数为30％的乙醇溶液，回流提取2小时，过滤并保存滤液重复操作3次。合并三次滤液，滤液浓缩至约含黄酮2mg/ml，用石油醚萃取三次，保留水层。母液上处理好(以95％乙醇浸泡12h后装柱，再以95％乙醇洗脱2-4个体积，后以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味)的大孔树脂柱，流速1ml/min。用大量蒸馏水洗脱至洗脱液无色，用30％乙醇洗脱5个体积，收集30％乙醇的洗脱液，浓缩并蒸干，得兔耳风纯化物，总黄酮含量约为69％。
实施例4：
取兔耳风药材1kg，粉碎，过20目筛，加以12000ml用pH值为9的氨水配制体积分数为50％的乙醇溶液，回流提取2小时，过滤并保存滤液，重复操作3次。合并三次滤液，滤液浓缩至约含黄酮2mg/ml，用石油醚萃取二次，保留水层。母液上处理好(以95％乙醇浸泡12h后装柱，再以95％乙醇洗脱2-4个体积，后以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味)的大孔树脂柱，流速1ml/min。用5％的乙醇溶液洗脱至洗脱液无色，用50％乙醇洗脱5个体积，收集50％乙醇的洗脱液，浓缩并蒸干，得兔耳风纯化物，总黄酮含量约为79％。
实施例5：
取兔耳风药材1kg，粉碎，过20目筛，加以12000ml用pH值为9的碳酸钠配制体积分数为70％的乙醇溶液，回流提取2小时，过滤并保存滤液，重复操作3次。合并三次滤液，滤液浓缩至约含黄酮2mg/ml，用石油醚萃取二次，保留水层。母液上处理好(以95％乙醇浸泡12h后装柱，再以95％乙醇洗脱2-4个体积，后以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味)的大孔树脂柱，流速1ml/min。用10％的乙醇溶液洗脱至洗脱液无色，用70％乙醇洗脱5个体积，收集70％乙醇的洗脱液，浓缩并蒸干，得兔耳风纯化物，总黄酮含量约为84％。
实施例6：
取兔耳风药材1kg，粉碎，过20目筛，加以12000ml用pH值为8的碳酸钠配制体积分数为95％的乙醇溶液，回流提取2小时，过滤并保存滤液，重复操作3次。合并三次滤液，滤液浓缩至约含黄酮2mg/ml，用石油醚萃取二次，保留水层。母液上处理好(以95％乙醇浸泡12h后装柱，再以95％乙醇洗脱2-4个体积，后以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味)的大孔树脂柱，流速1ml/min。用15％的乙醇溶液洗脱至洗脱液无色，用95％乙醇洗脱5个体积，收集95％乙醇的洗脱液，浓缩并蒸干，得兔耳风纯化物，总黄酮含量约为90％。
实施例7：兔耳风提取物抗炎活性的筛选
采用水提取法得到提取物F1(1g提取物相当于生药材6.7g)、碱性醇溶液提取法得到提取物F2(1g提取物相当于生药材4.2g)、大孔树脂分离纯化法得到纯化物F3(1g提取物相当于生药材18.2g)。采用角叉菜胶致大鼠足肿胀试验模型对其进行药理活性筛选。
取Wistar大鼠50只，随机分组，实验组大鼠分别给予水提取法得到提取物F1，碱性醇溶液提取法得到提取物F2、和大孔树脂分离纯化法得到纯化物F3，其中F1330mg·kg^-1、F2 540mg·kg^-1，F3 120mg·kg^-1；阳性药物对照和溶媒对照组大鼠分别给予阿斯匹林100mg·kg^-1和同体积蒸馏水，10ml·kg^-1容积灌胃给药，12小时(±2小时)1次，连续4次。
末次给药后立即以1％角叉菜胶0.1ml注射于大鼠右后足跖皮下致炎；测定大鼠致炎前和致炎后1、2、4、6、8小时的足跖容积，计算大鼠足跖肿胀率(％)和肿胀抑制率(％)。
实验数据以平均值±标准偏差表示，计量资料的组间显著性检验采用单因素方差分析，两两比较采用t检验，P<0.05为有显著性差异，P<0.01为有非常显著性差异。实验结果见表1。
实验结果，阳性对照药物阿斯匹林在所试剂量下表现了明显的抗炎活性，药后1-8小时与对照组比较差异有显著性和高度显著(P<0.01或0.05)，作用高峰时间在药后2-8小时。
试验，所试临床等效剂量的不同工艺提取兔耳风成分给药后均表现了不同程度的抗炎活性，其中F2和F3在药后2-8小时与对照组比较差异有显著性和高度显著(P<0.01或0.05)，F1在药后4-8小时与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。试验结果，兔耳风F3成分试验所用剂量较低，抗炎作用较强且稳定。