一种血红蛋白多肽粉及其制备方法.pdf

本发明公开了一种血红蛋白多肽粉及其制备方法，其方法是将血红蛋白干粉溶于蒸馏水中，然后在85～90℃下保温5～10min；调节血红蛋白溶液pH值，按照比例向血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在35～40℃、pH 6.2～6.7条件下进行水解反应3～4.5h，离心、取上清液，再进行脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到本发明血红蛋白多肽粉。本发明脱色效果好，所得血红蛋白酶解产物无色，无腥味，可广泛用于食品、保健药品或化妆品等领域；并且本发明安全性高，无副作用；此外，本发明酶解脱色方法效率高，适于大规模工业化生产；本发明方法可避免血红蛋白多肽损失，成本低。

1、  一种血红蛋白多肽粉，按照如下方法制备：
(1)按照2～8％的重量百分比取血红蛋白干粉并溶于蒸馏水中，得血红蛋白溶液；然后在85～90℃下保温5～10min；调节血红蛋白溶液pH至6.2～6.7；
(2)按照中性蛋白酶与血红蛋白干粉的质量比为1:300～500的比例向步骤(1)的血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在35～40℃、pH 6.2～6.7条件下进行水解反应3～4.5h，再在85～90℃下保温5～10min，接着在4℃、4200g条件下冷冻离心10～15min，取上清液，得水解产物；
(3)对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，然后浓缩、冷冻干燥，得到血红蛋白多肽粉。

2、  按照权利要求1所述的血红蛋白多肽粉，其特征在于其步骤(1)中所述的血红蛋白干粉来自猪血或牛血。

3、  按照权利要求1或2所述的血红蛋白多肽粉，其特征在于其步骤(2)中所述的中性蛋白酶是木瓜蛋白酶。

4、  按照权利要求3所述的血红蛋白多肽粉，其特征在于其步骤(3)中所述的脱盐是通过离子交换树脂进行。

5、  含有权利要求1所述的血红蛋白多肽粉的食品、保健药品或化妆品。

6、  权利要求1所述血红蛋白多肽粉的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)、按照2～8％的重量百分比取血红蛋白干粉并溶于蒸馏水中，得血红蛋白溶液；在85～90℃下保温5～10min；调节血红蛋白溶液pH至6.2～6.7；
(2)、按照中性蛋白酶与血红蛋白干粉的质量比为1:300～500的比例向步骤(1)的血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在35～40℃、pH为6.2～6.7条件下进行水解反应3～4.5h，再在85～90℃下保温5～10min，接着在4℃、4200g条件下冷冻离心10～15min，取上清液，得水解产物；
(3)、对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，浓缩、冷冻干燥，得到血红蛋白多肽粉。

7、  按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于其步骤(2)中所述的中性蛋白酶是木瓜蛋白酶。

8、  按照权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于其步骤(3)中所述的脱盐是通过离子交换树脂进行。

一种血红蛋白多肽粉及其制备方法
技术领域
本发明属于功能性食品领域，具体地说涉及血红蛋白多肽粉及其制备方法。
背景技术
血液蛋白质具有极高的生物效价，其中血红蛋白占血液总蛋白质含量的60～70％。但是由于存在血红素，导致其在加工过程中会产生棕红色泽，限制了其在食品及药物领域的直接应用。目前主要用羧甲基纤维素(CMC)(Sato Y等，J Food Technol，1981，16:81-91)、羧甲基纤维素钠(NaCMC)(Autio K等，Bristol，UK.1984，pp 369-370)、海藻酸钠(Hayakawa D等，J Food Sci，1986，51:786-790)、过氧化氢(Wismer-Pedersen J.Helsinki，Finland.1987，pp119-123)、乙醇(Lindroos P，1977:Swedish patent 389596)和丙酮(Tybor PT等，J Food Sci，1975，40:155-159)等来去除血红蛋白中的血红素。但是这些脱色方法往往会造成血红蛋白的损失，并且存在溶剂残留问题。
利用酶解加工蛋白质可以提高蛋白质的功能特性，并能扩大蛋白质的应用范围(Panyam D等，Trends Food Sci Technol，1996，7：120-125.Vioque J等，JAOCA，2000，77:447-450.)。蛋白质部分水解后产生许多低分子量的肽段，这些肽段往往具有比原蛋白质有更高的功能活性及营养特性(Calderon Dela BarcaAM等，J Food Sci，2000，65:246-253.Molina Ortiz SE等，Food Res Int，2002，35:511-518.Pena-Ramos EA等，Meat Sci，2003，64:259-263. K等，Trends Food Sci Technol，2004，15:153-160.Lee KA等，Food Chem，2005，90:389-393.Clemente，A.Trends in Food Science and Technology，2000，11:254-262)。
Froi devaux等(Froidevaux R等，FEBS Lett 2001，491:159-163)利用胃蛋白酶水解辅以MgO吸附的方法对牛血血红蛋白酶解产物进行了脱色，但是此种方法会造成产物中活性肽的损失。经检索，没有发现单纯利用酶解方法对血红蛋白进行脱色的报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种血红蛋白多肽粉。该血红蛋白多肽粉安全，富含生物活性肽，可广泛应用于功能性食品、药物及化妆品领域。
本发明的另一目的在于提供上述血红蛋白多肽粉的制备方法。该方法脱色效率高、成本低。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
本发明一种血红蛋白多肽粉，按照如下方法制备：
(1)按照2～8％的重量百分比取血红蛋白干粉并溶于蒸馏水中，得血红蛋白溶液；然后在85～90℃下保温5～10min；调节血红蛋白溶液pH至6.2～6.7；
(2)按照中性蛋白酶与血红蛋白干粉的质量比为1:300～500的比例向步骤(1)的血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在35～40℃、pH6.2～6.7条件下进行水解反应3～4.5h，再在85～90℃下保温5～10min，接着在4℃、4200g条件下冷冻离心10～15min，取上清液，得水解产物；
(3)对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，然后浓缩、冷冻干燥，得到血红蛋白多肽粉。
上述血红蛋白多肽粉步骤(1)中所述的血红蛋白干粉，是用猪血或牛血(经离心喷雾干燥制得。
上述血红蛋白多肽粉步骤(1)中pH值用1N NaOH或1N HCl进行调节。
上述血红蛋白多肽粉步骤(2)中所述的中性蛋白酶是指能水解血红素的酶；如木瓜蛋白酶。所述的木瓜蛋白酶是一种具有蛋白酶和酯酶双重活性的含巯基(-SH)的肽链内切酶，具有较广泛的酶切特异性，主要作用位点为蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基端，这种特性对血红蛋白的高效脱色具有重要作用。木瓜蛋白酶可于市场上购买，如广西南宁杰沃利生物制品有限公司生产地木瓜蛋白酶。
上述血红蛋白多肽粉步骤(3)中所述的脱盐是通过离子交换树脂进行。
含有上述血红蛋白多肽粉的食品、保健药品或化妆品。
上述血红蛋白多肽粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)、按照2～8％的重量百分比取血红蛋白干粉并溶于蒸馏水中，得血红蛋白溶液；在85～90℃下保温5～10min；调节血红蛋白溶液pH至6.2～6.7；
(2)、按照中性蛋白酶与血红蛋白干粉的质量比为1:300～500的比例向步骤(1)的血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在35～40℃、pH为6.2～6.7条件下进行水解反应3～4.5h，再在85～90℃下保温5～10min，接着在4℃、4200g条件下冷冻离心10～15min，取上清液，得水解产物；
(3)、对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，浓缩、冷冻干燥，得到无色的血红蛋白多肽粉。
上述制备方法步骤(1)中所述的血红蛋白干粉，来自猪血或牛血。血红蛋白干粉可经对动物血液离心喷雾干燥制得。
上述制备方法步骤(2)中所述的中性蛋白酶是指能水解血红素的酶，如木瓜蛋白酶。
上述制备方法步骤(3)中所述的脱盐是通过离子交换树脂进行。
本发明产品可被应用于食品加工，如可作为起泡剂和乳化剂，也可作为食品添加剂，还可用于药物及化妆品领域。
本发明具有的优点和有益效果：(1)本发明脱色效果好，所得血红蛋白酶解产物无色，无腥味，可广泛用于食品、保健药品或化妆品等领域；(2)本发明是经食品级蛋白酶在温和条件下获得的，其安全性高，无副作用，无不良风味；(3)本发明含有许多生物活性肽，扩大了血红蛋白的应用范围；(4)本发明酶解脱色方法效率高，适于大规模工业化生产；(5)本发明方法可避免血红蛋白多肽损失，与现有方法相比可降低生产成本25％以上。
具体实施方式
实施例1  血红蛋白多肽粉的制备，包括如下步骤：
(1)取5g血红蛋白干粉(猪血经离心喷雾干燥制得)，溶于100ml蒸馏水中，得5％的血红蛋白溶液，在90℃下保温10min，然后用1N NaOH或1N HCL调节体系pH至6.5；
(2)向血红蛋白溶液中加入0.01g木瓜蛋白酶(购于广西南宁杰沃利生物制品有限公司)，然后在37℃、pH值为6.5条件下水解3.5h，再在90℃下恒温10min，后在4℃、4200g条件下冷冻离心10min，取上清液，得水解产物；
(3)通过离子交换树脂对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，得到的酶解液色泽接近无色，清澈、透明，无腥味，将其浓缩、冷冻干燥后得到无色的血红蛋白多肽粉4.3g。
血红蛋白多肽粉的蛋白质含量测定：双缩脲法。取上述血红蛋白多肽粉溶解于蒸馏水中，加入双缩脲试剂，充分混匀，室温放置30分钟后在540nm处检测吸光值。用双缩脲法测得其蛋白多肽含量为95％，说明本发明的血红蛋白多肽纯度较高。
水解产物灰份含量的测定：在坩埚中称取一定量的上述血红蛋白多肽干粉→在电炉中炭化至无烟→在500℃马福炉中灼烧到灰白色→冷却至200℃→移入干燥皿冷却到室温→称重灼烧1小时→冷却到恒重，测得其灰分为1.2％，说明本发明基本没有污染，安全性高。
实施例2  血红蛋白蛋白多肽粉的制备，包括如下步骤：
(1)取0.8g血红蛋白干粉(猪血经离心喷雾干燥制得)，溶于40ml蒸馏水中，在90℃下保温10min，然后用1N NaOH和1N HCL调节体系pH至6.6；
(2)向步骤(1)血红蛋白溶液中加入0.002g木瓜蛋白酶(广西南宁杰沃利生物制品有限公司)，然后在38℃、pH值为6.6条件下进行水解反应3h，再在90℃下恒温10min，后在4℃、4200g条件下冷冻离心12min，取上清液，得水解产物；
(3)将步骤(2)所得的水解产物通过离子交换树脂进行脱盐，再经浓缩、冷冻干燥，得到无色的血红蛋白多肽粉0.69g。
实施例3  血红蛋白蛋白多肽粉的制备，包括如下步骤：
(1)、取16g血红蛋白干粉(猪血经离心喷雾干燥制得)，溶于200ml蒸馏水中，在90℃下保温10min，然后用1N NaOH或1N HCL调节体系pH至6.4；
(2)、向步骤(1)的血红蛋白溶液中加入0.048g木瓜蛋白酶(广西南宁杰沃利生物制品有限公司)，然后在37℃、pH值为6.4条件下水解4h，冉在90℃下恒温10min，后在4℃、4200g下冷冻离心15min，取上清液，得水解产物；
(3)、通过离子交换树脂将步骤(2)所得水解产物进行脱盐，脱盐所得酶解液无色、清澈、透明，无腥味的，再将其浓缩、冷冻干燥，得到接近无色的血红蛋白多肽粉13.76g。