刺芒柄花素制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物用途.pdf

刺芒柄花素制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物用途，刺芒柄花素(Formononetin)是异黄酮类化合物，针状结晶(乙醇)，熔点258℃；结晶(乙醇)熔点262～264℃；无色针状结晶，熔点247～265℃。刺芒柄花素存在于豆科植物红车轴草(Trifolium pratense L.)的全草、紫苜蓿(Medicago sativa L.)的全草中，也可化学合成。有效成份用刺芒柄花素制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物以常规药用制剂的形式来使用；证明其具有舒张血管、降低血压的作用，用于治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病。

1、  有效成份用刺芒柄花素制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物用途。

刺芒柄花素制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物用途
技术领域
本发明属于医药学领域，涉及一种治疗高血压及血管缺血性疾病的药物，具体涉及一种刺芒柄花素(又名芒柄花素)用于制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物用途。
背景技术
高血压及缺血性心、脑血管疾病的发病机理
高血压及缺血性血管疾病正日益成为威胁人民健康的常见病。正常血压的维持对于机体各组织器官功能的正常运行具有重要意义。
高血压病的显著病理变化是外周血管阻力增加，小动脉管腔变小，血压升高。这些变化多与交感神经系统功能紊乱密切相关，另有部分病人与血浆肾素活性增高有关。发病初期，全身细小动脉平滑肌张力增高，引起血压升高。血压升高持续多年后可引起全身细小动脉硬化，管腔狭窄，管壁弹性降低，使高血压进一步加剧。
影响动脉血压调节的循环系统的基本因素是：外周血管阻力、心脏功能和血容量。这些因素主要通过植物神经和肾素-血管紧张素-醛固酮系统的调控来保持血压的相对稳定。
心绞痛是由于心肌暂时性缺血和缺氧所引起。暂时性缺血缺氧是由血和氧的供、需平衡失调所致。而心肌对氧的需求急剧增高及冠状动脉供血不足是导致心绞痛的重要病理生理机制。缺血性脑血管病是因局部脑血流量下降，氧合营养转运障碍，最终导致组织缺氧和细胞死亡。高血压病已经被公认是缺血性脑血管病首要的危险因素。长期高血压可促使脑动脉硬化，血压持久增高可引起血管壁机械性损伤，胶原纤维暴露伴随二磷酸腺苷(ADP)浓度升高，儿茶酚胺类物质释放，血小板大量聚集，血黏度增高，血小板聚集于微循环中并激活补体，释放超氧自由基等，可进一步损伤血管内皮，使前列环素(PGI)生成减少，而血小板释放血栓素A(TXA)增加，导致脑血管收缩，脑血栓形成。
高血压及缺血性心、脑血管疾病的治疗现状
高血压及缺血性心、脑血管疾病治疗策略主要就是控制血压在正常水平或扩张血管改善血供，从而控制症状和并发症。而血管张力是控制血压和局部血供的关键因素之一，扩张血管以降低血压和改善血供。治疗目标是使血压和血供保持在正常范围，防止高血压及心、脑血管缺血性疾病发生。
由于高血压病已经被公认是缺血性脑血管病首要的危险因素，因此对高血压的治疗已成为治疗缺血性脑血管病的首要任务。同时扩张脑血管改善缺血区域的脑血供也是治疗缺血性脑血管的关键因素。
刺芒柄花素的特性
刺芒柄花素(Formononetin)是异黄酮类化合物，针状结晶(乙醇)，熔点258℃；结晶(乙醇)熔点262～264℃；无色针状结晶，熔点247～265℃。刺芒柄花素存在于豆科植物红车轴草(Trifoliumpratense L.)的全草、紫苜蓿(Medicago sativa L.)的全草中，也可化学合成。研究证明刺芒柄花素激活人SR2B I蛋白基因转录，对血脂代谢有良性影响，能明显降低实验性高脂血症大鼠的TC，TG，LDL，升高HDL。治疗高脂血症和脂肪肝症的药物中的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种刺芒柄花素用于制备高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物用途。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：有效成份用刺芒柄花素制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物用途。
有效成份用刺芒柄花素制备治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病的药物以常规药用制剂的形式来使用；所述的常规药用制剂含作为活性成份的刺芒柄花素，该活性成份在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内和胃肠外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合，该药用制剂可以是固体形式如片剂、胶囊剂、冲剂等口服制剂，也可以制成注射剂，既可作为药物使用，也可作为保健品使用。
口服剂型，成人每日400mg，分2次服用，每月为一疗程。注射制剂，每日200mg，分2次注射。儿童酌情减量。
附图说明
图1是刺芒柄花素对60mmol/L K⁺预收缩不同血管的舒张作用；
图2是刺芒柄花素对苯肾上腺素预收缩不同血管的舒张作用；
图3是刺芒柄花素对U46619预收缩不同血管的舒张作用；
图4是刺芒柄花素降低自发性高血压大鼠收缩压的作用，其中a是收缩压，b是舒张压。与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01
为了更好地理解本发明的实质，下面将用刺芒柄花素的实验结果来证明其治疗高血压及缺血性心、脑血管疾病药物的有效性。
以下采用离体动物实验证明刺芒柄花素对各种血管的舒张作用。
实验1：刺芒柄花素对不同血管的舒张作用
SD大鼠处死后迅速取出肠系膜上动脉、肾动脉、脑动脉、冠状动脉和腹主动脉及ICR小鼠处死后迅速取出腹主动脉，浸入冷Krebs液中，显微镜下剥离血管周围组织。将处理好的血管切成1mm长的圆筒段，通过金属丝将其挂在DMT中，其中一个连接张力换能器，另一个连微调装置(调节负荷张力)，通过张力换能器与Powlab系统相连，记录血管收缩与舒张曲线。将安装好的动脉环置入含有Krebs液6mL的37℃恒温浴槽，持续通入含95％O₂和5％CO₂的混合气体，pH保持7.4。实验前，大鼠脑动脉及大鼠冠状动脉环静息负荷1.5mN，其余动脉环静息负荷为3mN，每20min换液1次，稳定1.5h，使血管恢复活性并适应离体环境。以K⁺-Krebs液(含60mmol/L K⁺)检验动脉环收缩性，两次收缩幅度相差小于10％者用于实验。再以K⁺-Krebs液收缩血管，稳定后分别采用浓度累加法加入受试药物每次加入6μL，使浴槽内在药物浓度依次为10^-6mol/L、3×10^-6mol/L、10^-5mol/L、3×10^-5mol/L、10^-4mol/L、3×10^-4mol/L，对照组给予相同体积的溶剂。观察对收缩血管的作用，将血管的舒张作用表示为K⁺收缩的百分率。图1结果显示了不同浓度的刺芒柄花素对60mmol/L K⁺预收缩不同血管的舒张作用。各种血管的pD₂分别为：大鼠肠系膜动脉4.88±0.05、大鼠腹主动脉4.78±0.08、大鼠肾动脉4.71±0.11、小鼠腹主动脉4.62±0.08、大鼠脑动脉4.53±0.06、大鼠冠状动脉4.45±0.06。
实验2：刺芒柄花素对苯肾上腺素预收缩不同血管的舒张作用
SD大鼠处死后迅速取出肠系膜上动脉、肾动脉、脑动脉、冠状动脉和腹主动脉及ICR小鼠处死后迅速取出腹主动脉，浸入冷Krebs液中，显微镜下剥离血管周围组织。将处理好的血管切成1mm长的圆筒段，通过金属丝将其挂在DMT中，其中一个连接张力换能器，另一个连微调装置(调节负荷张力)，通过张力换能器与Powlab系统相连，记录血管收缩与舒张曲线。将安装好的动脉环置入含有Krebs液6mL的37℃恒温浴槽，持续通入含95％O₂和5％CO₂的混合气体，pH保持7.4。实验前，大鼠脑动脉及大鼠冠状动脉环静息负荷1.5mN，其余动脉环静息负荷为3mN，每20min换液1次，稳定1.5h，使血管恢复活性并适应离体环境。以K⁺-Krebs液(含60mmol/L K⁺)检验动脉环收缩性，两次收缩幅度相差小于10％者用于实验。再以10^-5mol/L苯肾上腺素收缩血管，稳定后分别采用浓度累加法加入受试药物每次加入6μL，使浴槽内在药物浓度依次为10^-6mol/L、3×10^-6mol/L、10^-5mol/L、3×10^-5mol/L、10^-4mol/L、3×10^-4mol/L，对照组给予相同体积的溶剂。观察对收缩血管的作用，将血管的舒张作用表示为苯肾上腺素收缩的百分率。图2结果显示了不同浓度的刺芒柄花素对10^-5mol/L苯肾上腺素预收缩不同血管的舒张作用。各种血管的pD₂分别为：大鼠肠系膜动脉5.08±0.04、小鼠腹主动脉4.79±0.10、大鼠腹主动脉4.66±0.03、大鼠肾动脉4.55±0.08。
实验3：刺芒柄花素对U46619预收缩不同血管的舒张作用
SD大鼠处死后迅速取出肠系膜上动脉、肾动脉、脑动脉、冠状动脉和腹主动脉，方法同前。以10^-6mol/L U46619收缩血管，稳定后分别采用浓度累加法加入受试药物每次加入6μL，使浴槽内在药物浓度依次为10^-6mol/L、3×10^-6mol/L、10^-5mol/L、3×10^-5mol/L、10^-4mol/L、3×10^-4mol/L，对照组给予相同体积的溶剂。观察对收缩血管的作用，将血管的舒张作用表示为U46619收缩的百分率。图3结果显示了不同浓度的刺芒柄花素对10^-6mol/L U46619预收缩不同大鼠血管的舒张作用。各种血管的pD₂分别为：肠系膜动脉4.64±0.09、肾动脉4.62±0.05、脑动脉4.54±0.07、腹主动脉4.38±0.11、冠状动脉4.37±0.08。
实验4：舒张血管作用与内皮的关系
K⁺(60mmol/L)预收缩去内皮与完整内皮大鼠肠系膜动脉收缩稳定后，浓度累加法加入刺芒柄花素。结果显示，刺芒柄花素对完整动脉血管的舒张作用明显强于去内皮血管。去内皮血管的最大舒张率为56.8±1.9％，完整内皮血管的最大舒张率96.2±1.7％。提示刺芒柄花素舒张血管作用与内皮有关。
实验5：刺芒柄花素对KCl量效曲线的影响
去内皮肠系膜动脉以不同浓度的刺芒柄花素或DMSO预孵育15min，用KCl(10，20，40，80mmol/L)含有不同浓度的刺芒柄花素或DMSO替换，得到KCl量效曲线。结果显示，刺芒柄花素可以浓度依赖性非平行右移KCl量效曲线，提示，刺芒柄花素的舒张血管作用与电压门控性钙通道有关。
实验6：刺芒柄花素对CaCl₂量效曲线的影响
去内皮肠系膜动脉，不同浓度的刺芒柄花素或DMSO预孵育在高KCl(60mmol/L)含有EDTA(100μmol/L)的无钙Krebs液中20min，浓度累加法加入CaCl₂，得到CaCl₂量效曲线。结果显示，刺芒柄花素可以浓度依赖性非平行右移CaCl₂量效曲线，提示，刺芒柄花素的舒张血管作用与电压门控性钙通道有关。
实验7：刺芒柄花素对苯肾上腺素量效曲线的影响
去内皮肠系膜动脉，不同浓度的刺芒柄花素或DMSO预孵育20min，浓度累加法加入苯肾上腺素，得到苯肾上腺素量效曲线。结果显示，刺芒柄花素可以轻微得非平行右移苯肾上腺素量效曲线，提示刺芒柄花素的舒张血管作用与α受体有一定的关系。
实验8：刺芒柄花素对NE诱导的内钙释放以及外钙经ROCC内流的影响
去除内皮肠系膜动脉，在正常Krebs液给予30mN负荷平衡1.5h后，分别用K⁺(60mmol/L)和ACh(10^-5mol/L)检验血管活性和内皮功能合格后，换用无钙Krebs液，孵育15min，然后加10^-5mol/L NE，可见动脉环产生迅速而短暂的收缩。平稳后加入CaCl₂1mmol/L，可见动脉环再次收缩并达到峰值，作为药前对照，然后用Krebs液反复冲洗5次，平衡45min，加入无钙Krebs液的同时分别加入不同浓度刺芒柄花素作用15min，重复上述实验。实验结束前在做1次无钙NE收缩对照，收缩高度与用药前对照基本一致。计算刺芒柄花素对无钙Krebs液中NE、CaCl₂缩血管效应的抑制率。结果显示，刺芒柄花素能剂量依赖性明显抑制PE诱导的内钙释放，而经ROCC的外钙内流增加，但总收缩幅度降低。提示刺芒柄花素扩血管作用与抑制内钙释放有关，但对ROCC无抑制作用。
实验9：对高血压大鼠的降压作用
自发性高血压大鼠(SHR)实验前用无创血压测试仪尾动脉法每天测压训练1次，1周后进行实验。每次连测4～5个数据，取其平均值。随机分为5组：空白对照组、拉西地平0.06mg/kg组、刺芒柄花素5、10和20mg/kg组，测定药前收缩压、舒张压后给药，分别测定药后0.5h、1h、2h、3h、4h收缩压、舒张压。计算刺芒柄花素对无药后0.5h、1h、2h、3h、4h的抑制率。

参见图4，结果显示，刺芒柄花素可以剂量依赖性降低自发性高血压大鼠的收缩压和舒张压，与阳性药拉西地平相比刺芒柄花素的降压作用起效时间较长，作用较缓和。