使用溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶相关肽作为卵识别信息素的害虫灭杀.pdf

本发明提供一种模拟卵，所述模拟卵在其模拟害虫的卵的基质中包含溶菌酶、其盐或生物片段、或溶菌酶-相关肽，以及活性成分；以及一种使用所述模拟卵的害虫灭杀方法。

1.  一种模拟卵，所述模拟卵在其模拟害虫的卵的基质中包含溶菌酶、其盐或生物学片段或溶菌酶-相关肽作为卵识别信息素，和活性成分。

2.  根据权利要求1的模拟卵，其中所述活性成分是选自由杀虫剂成分、孵化抑制物质、繁殖抑制物质、和生长抑制成分组成的组中的一种或多种化合物。

3.  根据权利要求1或2的模拟卵，其中所述活性成分是缓慢作用的。

4.  根据权利要求1至3中任一项的模拟卵，其中所述害虫为白蚁。

5.  一种用于灭杀害虫的方法，所述方法包括：对所述害虫提供根据权利要求1至4中任一项的模拟卵，和利用卵运送行为使所述害虫将所述模拟卵运送到它们的巢中。

6.  溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽作为害虫的卵识别信息素的用途。

使用溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽作为卵识别信息素的害虫灭杀
技术领域
[0001]本发明涉及一种用于灭杀和防治害虫，特别是白蚁的新的模拟卵，一种利用所述模拟卵进行害虫灭杀和防治的方法，等。
背景技术
[0002]关于害虫灭杀，迄今已经开发了多种方法。特别地，白蚁对木制房屋造成巨大破坏，并因此在世界范围已经研究并开发了害虫的灭杀剂和灭杀方法。用于灭杀白蚁的方法包括：将溶液药剂如有机磷药剂、氨基甲酸酯药剂或拟除虫菊酯药剂注射到侵入位置中以杀灭昆虫的方法，或通过溴代甲烷等进行烟熏以杀灭昆虫的方法(参见，例如，非专利文献1)。
[0003]作为喷射药剂方法的备选方法，存在诱饵法，其中将缓慢作用的杀虫活性成分混合在诱饵中，并且将诱饵喂给白蚁，并从而灭杀白蚁(参见，例如，非专利文献2)。
[0004]常规灭杀技术基本上是从被破坏的木材外投掷大量药剂以杀灭害虫。然而，这些技术导致健康损害如病态建筑综合症(sick buildingsyndrome)，或导致环境污染。而且，存在这样的问题，即如果剩余一些白蚁群体，则该破坏将扩散到另一个地方。最严重的问题是，灭杀所需的劳动力成本过多。使用溴代甲烷的熏蒸技术已被频繁采用，然而，溴代甲烷是引起臭氧层破坏的物质，并且近年来，试图控制溴代甲烷的使用的趋势已经增加。
[0005]作为用于灭杀以与白蚁相同的方式组织群居生活的蚁类的有效方法，存在这样的方法，即将蚁类喜好的食物混合到毒药中，并且将混合的食物作为诱饵提供，以允许蚁类将所述食物带到它们的巢中，并且杀灭蚁类的整个种群。然而，由于白蚁食用在其中建巢的木材本身，因此允许白蚁将药剂从巢的外部运送到巢的内部的诱饵方法并不总是有效。特别是，难以通过诱饵方法根除黄胸散白蚁(Reticulitermes speratus)的巢(参见，非专利文献2)。
[0006]作为用于比诱饵方法更有效地使害虫摄取活性成分的方法，已经开发了“通过运送模拟卵灭杀害虫的方法”(专利文献1)，其中利用了作为害虫的基本群居行为的卵运送本能。在此方法中的害虫是白蚁。然而，在此方法中，已经可能通过使用从白蚁的卵提取的粗提取成分使白蚁运送模拟卵，然而，还没有确定卵识别信息素。除非卵识别信息素得以确定并且可以大量地并且廉价地制备，否则实施这种方法存在巨大的成本问题。
[0007]特别地，如果害虫是白蚁，则由于下述原因难以灭杀，并且尚未发现决定性的解决方案。
由于白蚁将它们的居所构筑在封闭的空间中，即在木材中，因此难以从外部渗透药剂。
由于白蚁组织群居生活，如果群体中的一部分残留，则白蚁移动并且使破坏扩散。
由于白蚁通过食用它们在其中构筑它们的居所的木材本身，因此毒药诱饵的引入无效。
专利文献1：JP 2000-342149 A
非专利文献1：“Termites and strategies of extermination(白蚁及灭杀策略)”，The Japan Termite Control Association(日本白蚁控制协会)，2000，第219页
非专利文献2：“Activity evaluation of Japanese underground termitesusing a monitoring station and the extermination by bait methods(使用监控站的日本地下白蚁的活动评价以及通过诱饵方法的灭杀)”，Newdevelopments of monitoring technique of insect ecology in a living zone(生活区中昆虫生态监控技术的新发展)，2006，第48页
发明内容
本发明要解决的问题
[0008]考虑以上情形，本发明人进行了深入细致的研究，以确定害虫，特别是白蚁的卵识别信息素，从而使利用模拟卵运送灭杀害虫的方法更有效并且更廉价地提供。本发明人已经发现，白蚁的卵识别信息素是溶菌酶，即一种抗菌蛋白，并且白蚁识别包含溶菌酶的卵，并且将所述卵运送并保护在巢的生长室中。由此，本发明人完成了本发明。
解决问题的手段
[0009]即，本发明涉及以下：
(1)一种模拟卵，所述模拟卵在其模拟害虫的卵的基质中包含溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽作为卵识别信息素，以及活性成分；
(2)根据(1)的模拟卵，其中所述活性成分是选自由杀虫剂成分、孵化抑制物质、繁殖抑制物质和生长抑制成分组成的组中的一种或多种化合物；
(3)根据(1)或(2)的模拟卵，其中所述活性成分是缓慢作用的；
(4)根据(1)至(3)中的任一项的模拟卵，其中所述基质由持续释放材料制成；
(5)根据(4)的模拟卵，其中所述基质被所述害虫的唾液降解；
(6)根据(4)或(5)的模拟卵，其中所述基质具有胶囊形状，并且所述活性成分包含在其中；
(7)根据(1)至(6)中任一项的模拟卵，其中所述基质包含甘油和/或纤维素酶；
(8)根据(1)至(7)中任一项的模拟卵，其中所述基质包含从所述害虫的卵提取的成分；
(9)根据(1)至(8)中任一项的模拟卵，其中所述害虫为白蚁；
(10)一种用于灭杀害虫的方法，所述方法包括：对害虫提供根据权利要求1至9中任一项的模拟卵，和利用卵运送行为使所述害虫将所述模拟卵运送到它们的巢中；
(11)溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽作为害虫的卵识别信息素的用途。
发明效果
[0010]根据本发明，可以大规模并且廉价地制备模拟卵，所述模拟卵在其模拟害虫的卵的基质中包含溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽作为卵识别信息素，以及活性成分。并且可以有效地、简单地并且廉价地进行害虫，特别是白蚁的灭杀或防治。

附图简述
[0011]图1显示关于白蚁的溶菌酶的卵识别活性的研究结果。缩写词指示如下；TEE：白蚁卵提取物；pK：由蛋白酶降解的白蚁卵提取物，TEL：从白蚁卵提取物分离的溶菌酶，HEL：卵清溶菌酶，CEL：纤维素酶，HEL+CEL：卵清溶菌酶和纤维素酶的混合溶液。n.s.：与对照没有显著区别。＊＊：存在1％的显著水平的显著区别。＊＊＊：存在0.1％的显著水平的显著区别(双侧T检验(two-sided T test))。
图2显示这样的照片，其显示在将涂敷有白蚁卵提取物的模拟卵提供给白蚁的情况下，模拟卵进入到卵块(egg mass)中的运送情况(左)。对模拟卵附加了白圈，以清楚显示已经被传送的模拟卵(右)。
实施本发明的最佳方式
[0012]具有运送卵的特征的昆虫如白蚁具有这样的特征，即通过以下方式照顾卵：将卵运送并堆叠在它们的巢中，并且舔舐卵的表面等，或在个体之间进行交哺。通过利用这种特征，可以灭杀或防治害虫。例如，白蚁将具有类似于天然卵的尺寸和形状，并且在其表面上包含卵识别信息素的模拟卵识别为天然卵，并且将该模拟卵运送到巢中的它们的卵块中。从而，白蚁进行护理行为，例如舔舐模拟卵的表面，并且在个体之间进行交哺。因此，通过使模拟卵包含活性物质，例如，活性成分诸如杀虫剂成分、孵化抑制物质、繁殖抑制物质、或生长抑制成分，和使白蚁将该模拟卵运送到卵块中，可以有效破坏群体的繁殖中心。
[0013]本发明人已经反复地深入细致地进行研究，以确定白蚁的卵识别信息素。已经对通过离子交换色谱法和疏水色谱法提纯和分离的白蚁的卵识别信息素进行了精确质量分析，并且已经揭示，卵识别信息素是分子量为约14.5kDa的蛋白。此外，由于活性成分显示出高溶菌活性，因此提示白蚁的卵识别信息素是溶菌酶，即一种抗菌蛋白。基于该发现，已经针对源自鸡卵清的溶菌酶样品确定了白蚁的卵识别活性，并且已经识别了高活性。因此，已经揭示，白蚁的卵识别信息素是溶菌酶。
[0014]因此，在第一方面中，本发明提供模拟卵，所述模拟卵在其模拟害虫的卵的基质中包含溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽作为卵识别信息素，以及活性成分。
[0015]可以通过本发明的模拟卵和方法灭杀的害虫可以是任何害虫，条件是它们具有卵运送本能并且识别溶菌酶作为卵识别信息素。对其优选应用本发明的模拟卵和方法的害虫是白蚁。通过本发明灭杀的白蚁可以是任何种类的白蚁，并且不仅在日本，而且在世界范围内的白蚁可以是目标。通过本发明灭杀的典型白蚁包括白蚁诸如散白蚁属(Reticulitermes)和家白蚁属(Coptotermes)，但是不局限于此。在本说明书中，害虫的灭杀包括防治害虫。在本说明书中，害虫是对人、农业动物、农产品、财产等造成有害效果的昆虫。
[0016]本发明的卵识别信息素是溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽。溶菌酶可以源自任何物种的生物体，例如，可以源自哺乳动物、禽物种诸如鸡、鱼、爬行动物、两栖动物、昆虫诸如蚕，等。可以大规模并廉价地获得并且可用于本发明的优选溶菌酶包括源自鸡卵清的溶菌酶。而且，源自白蚁卵提取物的溶菌酶可以用于本发明。用于本发明的溶菌酶可以是提纯或未提纯的。此外，用于本发明的溶菌酶可以通过遗传重组方法制备。蛋白、多肽、或肽通过遗传重组方法的制备对于本领域的技术人员是熟知的。通常，使期望蛋白的基因与载体相连接并且引入到适当的宿主细胞如大肠杆菌(Escherichia coli)或酵母中，并且通过增殖该细胞，可以获得期望的蛋白。载体或宿主细胞的类型、载体引入条件、宿主细胞的培养条件、分离和提纯期望蛋白的方法等，可以由本领域技术人员从已知材料和已知方法中适当地选择。
[0017]本发明中使用的溶菌酶可以是盐的形式。溶菌酶盐可以是具有可以形成盐的各种物质的盐，例如具有有机酸的盐、具有无机酸的盐、具有有机碱的盐或具有无机碱的盐。而且，例如，构成溶菌酶的天冬酰胺或谷氨酰胺的β-或γ-羧基与金属如钠或钾可以形成盐。而且，例如，构成溶菌酶的碱性氨基酸的侧链可以形成盐。在本发明中，溶菌酶的生物学片段或溶菌酶-相关肽可以具有盐的形式。
[0018]此外，在本发明中，溶菌酶的生物学片段可以用作卵识别信息素。溶菌酶的生物学片段是多肽或肽，其具有溶菌酶的部分氨基酸序列，并且具有与溶菌酶类似的卵识别活性。该片段是短链的，且因此适于通过遗传重组方法大规模制备。
[0019]此外，在本发明中，溶菌酶-相关钛可以用作卵识别信息素。溶菌酶-相关肽是蛋白、多肽或肽，其具有与溶菌酶类似的卵识别活性，并且与溶菌酶和溶菌酶的生物学片段不同。溶菌酶-相关肽可以源自天然来源，或可以是合成的化合物。通过技术如定点诱变法(site-directed mutagenesismethod)，溶菌酶-相关肽可以具有与天然溶菌酶不同的氨基酸序列。例如，在本发明中可以制备和使用具有白蚁更喜好的氨基酸序列的溶菌酶、其生物学片段、或溶菌酶-相关肽。而且，例如，在本发明中可以制备和使用具有这样的氨基酸序列的溶菌酶、其生物学片段、或溶菌酶-相关肽，所述氨基酸序列对特定种类的白蚁具有高特异性。
[0020]必要的是，本发明的模拟卵具有与待灭杀的害虫的卵的形状、尺寸和特征类似的形状、尺寸和特征。本发明中使用的模拟卵的形式和尺寸可以通过模拟害虫的实际卵的形式和尺寸而制备。在白蚁的情形中，模拟卯的形式可以是长卵形或球形。在模拟卵具有长卵形的情形中，优选地，其短直径近似等于或稍微大于待灭杀的白蚁的卵的短直径。例如，当长卵形白蚁卵的短直径为约0.25至约0.45毫米时，白蚁的长卵形模拟卵的短直径可以为约0.25至约0.6毫米，优选约0.4至约0.55毫米，并且进一步优选约0.45毫米。而且，在白蚁的球形模拟卵的情形中，优选地，其直径近似等于或稍微大于待灭杀的白蚁的卵的短直径。例如，当球形白蚁卵的短直径为约0.25至约0.45毫米时，白蚁的球形模拟卵的直径可以为约0.25至约0.6毫米，优选约0.4至约0.6毫米，并且进一步优选约0.45至约0.55毫米。从容易形成的观点考虑，球形模拟卵是优选的。
[0021]必要的是，本发明的模拟卵不仅物理性质如上述形状和尺寸以及重量或硬度，而且化学性质，特别是卵识别信息素，都与害虫的天然卵的那些相同或类似。即，必要的是，当模拟卵的基质包含溶菌酶、其生物学片段、或溶菌酶-相关肽时，这些物质存在于基质的表面上。
[0022]本发明的模拟卵的基质可以是可以制备具有与害虫的天然卵的形状和特征类似的形状和特征的模拟卵的任意材料。优选用于制备本发明的模拟卵的基质包括：热塑性树脂如聚乙烯，聚丙烯，聚苯乙烯，聚酯，聚氯乙烯和聚碳酸酯，热固性树脂如尿素树脂，环氧树脂，酚树脂和聚氨基甲酸酯，多孔材料如硅胶和沸石、陶瓷、玻璃等。
[0023]基质包含溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽，以及活性成分，并且由此制备本发明的模拟卵。许多用于制备包含在基质中的这些物质的方法对于本领域技术人员是已知的。可以将这些物质在制备基质中混合在其中，或可以将这些物质在制备基质以后包含在基质中。例如，可以将这些物质在制备基质中混合或揉和(knead)在其中，或可以用这些物质覆盖、浸渍、涂敷或喷射(splay)所制备的基质。而且，由于用于将蛋白、多肽、或肽固定到固体支持物的方法是已知的，因此可以将这些方法应用于此。固定方法包括吸附法、共价键法、离子键法、包囊法等。
[0024]对本发明的模拟卵的基质施用的溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽的量可以容易地由本领域的技术人员确定，这取决于多种因素，诸如害虫的物种(来源有机体)、物理化学性质等、类型，活性物质的种类和量、以及期望效果的种类和程度(参见，例如，本申请的实施例)。
[0025]优选地，使得基质包含溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽的模式的具体实施方案包括表面涂敷模式、基质添加模式、和胶囊溶解模式等。在表面涂敷模式的一个实施例中，将活性成分涂敷到基质的表面上，并且将溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽涂敷于其上。在基质添加模式的一个实施例中，在其中混合有活性成分的基质的表面上，涂敷溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽。在胶囊溶解模式的一个实施例中，将膜形基质成形为胶囊形基质，并且将活性成分密封在其中，并且在基质的表面上涂敷溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽。
[0026]可以用于本发明的模拟卵和灭杀方法的活性物质可以是可以实现害虫的灭杀或防治的任意物质。例如，活性物质可以扰乱害虫的行为，并且因而导致群体的破坏。适于灭杀或防治害虫的活性物质包括杀虫剂成分、孵化抑制物质、繁殖抑制物质、或生长抑制成分。考虑到多种因素，诸如活性物质的种类或害虫的种类和期望活性的种类或程度(要对害虫给予的破坏)，可以选择可以用于本发明的模拟卵和方法的活性物质的种类和量。通常，选择活性物质的种类和量，以使得可以对目标害虫充分施加期望的作用。然而，还进行选择，以使得害虫的模拟卵的运送率不会下降，并且使得通过使用本发明的模拟卵和方法，对人和周围农业动物或有益昆虫不会产生不利影响。
[0027]可以将一种或两种以上的活性成分用于本发明的模拟卵和灭杀方法。可以使用杀虫剂成分，诸如拟除虫菊酯化合物、有机磷化合物、氨基甲酸酯化合物、N-芳基二唑化合物、腙化合物、氨磺酰化合物或天然杀虫剂成分。另外，可以将昆虫生长调节剂如壳多糖合成抑制剂、保幼激素-样活性化合物和蜕皮激素-样活性化合物用作活性成分。不用说，可以用于本发明的活性成分不限于以上化合物。
[0028]在本发明的模拟卵中，优选地，活性成分是缓慢作用的。如上所述，害虫如白蚁识别这样的模拟卵并且将模拟卵运送到巢中的它们的卵块中，所述模拟卵具有与天然卵类似的尺寸和形状，并且在其表面中包含卵识别信息素。害虫通过护理行为例如舔舐模拟卵的表面摄取活性成分。当群体的一些个体摄取活性成分时，活性成分通过经由口道食物和肛道食物的高频交哺而遍及整个群体。因此，用于本发明的优选活性成分不在运送模拟卵时，或在害虫摄取以后即刻发挥作用。或优选的活性成分，以不影响行为如模拟卵运送或交哺的程度发挥作用，且在将模拟卵运送到巢中并且在许多个体之前进行交哺以后发挥作用。通过使用这种缓慢作用的活性成分，可以有效灭杀目标群体中的许多个体，并且活性成分的用量小。因此，对其它生态系统的影响小。可以用于本发明的模拟卵的缓慢作用的活性成分不仅包括缓慢作用的杀虫剂成分如伏蚁腙(hydramethylnon)，还包括缓慢作用的孵化抑制成分、缓慢作用的繁殖抑制成分、以及缓慢作用的生长抑制成分，但不仅限于此。
[0029]在本发明的模拟卵中，还优选的是，基质由持续释放材料制成。其基质由持续释放材料制成的模拟卵是优选的，且由此，模拟卵被运送到巢中，然后活性物质逐渐释放并被害虫摄取。这种模拟卵包括由可被害虫的唾液降解的材料制成的卵。优选地，活性成份包含在基质内部(通过混入、混合、填充等)。模拟卵被运送到巢中，然后基质被害虫的唾液降解。由此释放内部活性成分。特别地，在以上基质的添加模式或胶囊溶解模式等中，优选使用可以被害虫的唾液降解的基质。可以被害虫的唾液降解的基质的材料可以取决于害虫的唾液中的消化酶的种类而选择。例如，当在害虫的唾液中包含纤维素酶时，可以使用由纤维素材料制成的基质。
[0030]本发明的模拟卵的特别优选类型是上述胶囊溶解类型。具体地，将包含溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽的膜形基质成形为类似于实际卵的形状(即，成为胶囊形式)，并且将活性成分包含在胶囊内。由此，可以制备本发明的模拟卵。形成这种胶囊的方法对于本领域技术人员是已知的。所述膜的材料的实例包括氧化物膜和纤维素膜等。优选地，膜形基质具有持续释放性质，并且优选使用例如可以被害虫的唾液降解的纤维素膜。由这种胶囊密封模式制备的模拟卵还适于在野外(field)灭杀大的群体。
[0031]包含由这种持续释放材料制成的基质的模拟卵，在活性物质缓慢作用的情况下也有效，并且在活性物质不缓慢作用的情况下特别有效。
[0032]还优选的是，基质中包含甘油和/或纤维素酶，以维持在本发明的模拟卵中作为卵识别信息素的溶菌酶、其盐或生物学片段、或溶菌酶-相关肽的活性，并且将其保持在基质的表面上。不必须使用高度提纯的甘油或纤维素酶。基质中甘油或纤维素酶的含量可以取决于多种因素，诸如待使用的溶菌酶的种类、特征、量等，害虫的种类，活性物质的种类或量，以及期望效果的种类的程度而确定。
[0033]而且，还优选的是，本发明的模拟卵的基质包含从目标害虫的卵提取的组分。因此，可以获得较高的卵运送效果。可以将来自卵的粗提取物包含在基质中，或可以将提纯的提取物包含在基质中。基质中的粗提取物或其提纯产物的含量可以取决于多种因素，诸如待使用的溶菌酶的种类、特征、量等，害虫的种类，以及期望效果的种类和程度而确定。从卵提取和提纯有效成分的方法在本领域中是已知的并且可以使用。
[0034]在另一个方面中，本发明提供一种用于灭杀害虫的方法，所述方法包括对害虫提供上述模拟卵。通过本发明的方法灭杀或防治的害虫可以是任何害虫，条件是它们具有卵运送本能并且识别溶菌酶作为卵识别信息素。对其优选应用本发明的灭杀方法的害虫是白蚁。例如，在灭杀白蚁的情况下，可以将本发明的模拟卵放置在蚁路或巢材料的一部分上。可以通过钻在蚁路上钻孔，并且将本发明的模拟卵注射到它们中。可以将本发明的模拟卵包封在保护膜如玻璃纸中，从而在野外保持耐久性。在此情况下，可以对保护膜添加摄取促进物质如木材提取溶液或腐烂的木材提取溶液。为了本发明的害虫灭杀方法使用监控站也是有效的。
[0035]将通过下列实施例具体并详细地进一步描述本发明，但是实施例仅用于示例，并且它们不意在限制本发明。
实施例1
[0036]实施例1：制备模拟卵和验证溶菌酶的卵识别活性
通过使用黄胸散白蚁职虫(职虫白蚁)，研究白蚁卵提取物、从白蚁卵提取物提纯的溶菌酶、被蛋白酶降解的白蚁卵提取物、卵清溶菌酶、纤维素酶、卵清溶菌酶和纤维素酶的混合物以及作为对照的30％的甘油水溶液的卵识别活性。
[0037]各个测试样品制备如下。
将800μL的超纯水加入到在Eppendorf管中的400mg的黄胸散白蚁卵中，并搅匀，并且进行超声处理5分钟，并且在15,000rpm进行离心30分钟。将上清液冻干，并且将5.0mg冻干的粉末溶解在100μL的30％的甘油水溶液中(白蚁卵提取物)。将以如上所述同样方式制备的白蚁卵提取物通过BioRex 70(BioRad实验室，CA，USA)阳离子交换树脂提纯，并且进而，通过Q-1柱色谱法(BioRad实验室，CA，USA)和甲基HIC柱色谱法(BioRad实验室，CA，USA)分离溶菌酶组分，并且将1.0mg的其冻干的粉末溶解在20μL的30％的甘油水溶液中(从白蚁卵提取物分离的溶菌酶)。将蛋白酶(蛋白酶K，Nacalai Tesque有限公司，京都)添加到以如上所述相同方式制备的白蚁卵提取物中，并且在37℃处理24小时(被蛋白酶降解的白蚁卵提取物)。将2.0mg的卵清溶菌酶(西格玛(SIGMA)，St.Louis，MO，美国)溶解在10μL的30％的甘油水溶液中(卵清溶菌酶)。将2.0mg的纤维素酶(西格玛(SIGMA)，St.Louis，MO，美国)溶解在10μL的30％的甘油水溶液中(纤维素酶)。将10mg的卵清溶菌酶和10mg的纤维素酶溶解在50μL的30％的甘油水溶液中(卵清溶菌酶和纤维素酶的混合溶液)。
[0038]将2.0μL各种测试样品添加到相等量的100个各自具有0.5mm的直径的玻璃珠，并且充分混合，并由此将测试样品涂敷在玻璃珠的表面上。将仅涂敷有30％的甘油水溶液的玻璃珠用作对照。
将10个白蚁卵和20个通过以上方法得到的模拟卵随机放置在直径为30mm的培养皿上，并且将10只黄胸散白蚁的职虫白蚁(职虫)放置于其中，并且容许培养皿在25℃恒温室中静置24小时，然后研究模拟卵进入到卵块中的运送率(对于每一份测试样品，以相同的方法进行实验)。对于每一个试验重复9次实验。将运送率转化成反正弦根，并且通过双侧T检验与对照进行统计学比较。在除被蛋白酶降解的白蚁卵提取物和对照以外的情况下，职虫白蚁将分散在培养皿上的卵聚拢以形成卵块，并且显示了保育行为。涂敷有测试样品中每一种的模拟卵进入到卵块中的运送率显示在图1中。在将涂敷有白蚁卵提取物的模拟卵提供给白蚁的情况下，显示模拟卵进入到卵块中的运送情况的照片如图2所示。
实施例2
[0039]实施例2：在野外研究中将模拟卵引入到群体中
将630μL的30％的甘油水溶液加入到63mg在实施例1中得到的冻干的白蚁卵提取物中，并且将溶液加入相等量的31,500个各自具有0.5mm的直径的玻璃珠中，并且进行涂敷。在赤松木材中，通过钻对具有黄胸散白蚁的成熟群体的枯萎并且被筑巢的赤松树材料钻孔。将所有的模拟卵分为5份并且注射到5个孔中。在48小时以后，将筑巢的材料完全粉碎，并且将全所有卵块取出，并且研究运送到卵块中的模拟卵的比率。
[0040]在注射到筑巢的材料中的31,500个模拟卵中，6,098个模拟卵存在于卵块中。野外48小时后的模拟卵的引入率为19.35％。模拟卵被运送到此群体中存在的全部60个卵块中并且模拟卵的运送率为100％，这极高。
实施例3
[0041]实施例3：将携带灭杀剂的模拟卵引入到在培养皿中繁殖的群体中
将相等量的200个各自具有0.5mm的直径的玻璃珠混合到含有10μg/μL缓慢作用的杀虫活性物质伏蚁腙和50μg/μL白蚁卵提取物的40μL的30％的甘油水溶液中，并且进行涂敷(每个珠被涂敷2μg伏蚁腙和10μg白蚁卵提取物)。将所得到的模拟卵用作灭杀剂。将200个上述模拟卵提供给在90mm培养皿中繁殖的黄胸散白蚁的职虫(职虫白蚁)，并且容许职虫进行卵运送和卵保护，并且每12小时研究存活率和运送率。
[0042]以上伏蚁腙量不影响运送活性，并且在仅有白蚁卵提取物的情况下显示与其相等的高运送活性(运送率为80％)。职虫白蚁以与它们的卵相同的方式照料携带灭杀剂的模拟卵，并将伏蚁腙摄取到白蚁体内(伏蚁腙是黄色的，并且由于白蚁的照料，黄色变浅)。在12小时以后的存活率为100％，然而，在3天以后，存活率为0％(即，100只职虫全部死亡)。从这些结果，得出的结论是，伏蚁腙充分分散在群体中，并且它的功效通过照料和交哺而发挥。
工业适用性
[0043]本发明提供害虫，特别是白蚁的有效灭杀。本发明可适用于杀虫剂生产领域、害虫灭杀工业领域、建筑工业领域、园艺工业领域等。