一种水生植物的组织培养培养基及其组培快繁方法.pdf

一种水生植物的组织培养培养基及其组培快繁方法涉及一种植物生物技术中组培快繁方法，尤其是一种用于水生植物的组织培养培养基及其组培快繁方法。本发明的一种水生植物的组织培养培养基由无机营养物、有机附加物、生长调节物质、碳源、维生素组成，水生植物培养基配方的每一个物质都是水生植物生长必要的元素，其中6-BA促进芽的形成，可以提高水生植物的产量和质量，NAA能促进细胞分裂与扩大，6-BA和NAA同时激素刺激植物单株生长和侧芽生长。并且在本发明的组织培养的方法中，对水生植物的外材消毒程序能很大限度地抑制水

1、  一种水生植物的组织培养培养基，由无机营养物、有机附加物、生长调节物质、碳源和维生素组成，其特征在于：
(1)含无机营养硝酸钾9927.5～10972.5Mg/L、硝酸铵8621.25～9528.75Mg/L、硫酸镁1933.25～2136.75Mg/L、磷酸二氢钾888.25～981.75Mg/L、氯化钙2299～2541Mg/L、硫酸锰1165.175～1287.825Mg/L、硫酸锌449.35～496.65Mg/L、硼酸323.95～358.05Mg/L、碘化钾43.3675～47.9325Mg/L、硫酸铜1.311～1.449Mg/L、氯化钴1.311～1.449Mg/L、硫酸铁5570Mg/L和EDTA 7450Mg/L；
(2)含有机附加物琼脂4.275～4.725g/L、烟酸4.14～5.06Mg/100ML和甘氨酸16.56～20.24Mg/100ML；
(3)含生长调节物质6-BA 0.1Mg/L和NAA 0.1Mg/L；
(4)碳源是葡萄糖含量为28.5～31.5g/L；
(5)含维生素硫胺素3.312～4.048Mg/100ML、吡哆辛4.14～5.06Mg/100ML和肌醇828～1012Mg/100ML。

2、  如权利要求1所述的一种水生植物的组织培养培养基，其特征在于培养集中各物质含量为硝酸钾10450Mg\L、硝酸铵9075Mg\L、硫酸镁2035Mg\L、磷酸二氢钾935Mg\L、氯化钙2420Mg\L、硫酸锰1226.5Mg\L、硫酸锌473Mg\L、硼酸341Mg\L、碘化钾45.65Mg\L、硫酸铜1.38Mg\L、氯化钴1.38Mg\L、硫酸铁5570Mg\L、EDTA 7450Mg/L、琼脂4.5g/L、烟酸4.6Mg\100ML、甘氨酸18.4Mg\100ML、葡萄糖30G/L、硫胺素3.68Mg\100ML、吡哆辛4.6Mg\100ML、肌醇920Mg\100ML、6-BA 0.1Mg/L、NAA 0.1Mg/L。

3、  一种水生植物的组培快繁方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)外材消毒：
取外材用长流水冲洗至少40分钟，然后浸泡于用1000000单位链霉素加无菌水至0.8升的溶液中9小时；将浸泡过的外材植入含75％的乙醇溶液中进行细胞收敛2～10秒钟；将收敛后的外材用无菌水漂洗4次后植入0.05％～0.1％的砷汞溶液中消毒7分钟；
(2)获取未感染体：
将消毒后的外材植入培养瓶中，保持在温度为30℃，光照度为2500lx条件下的光照20天后，获得原外材15％的未感染外植体；
(3)组培快繁：
将未感染外植体在超净环境下取出，切去活化部分，植入权利要求1或2中所述的水生植物培养基中，保持在温度为30℃，光照度为2500lx条件下的光照10天进行繁殖。

4、  如权利要求3所述的一种水生植物的组培快繁方法，其特征在于所述的外材消毒步骤中的细胞收敛为6秒钟，砷汞溶液浓度为0.05％。

一种水生植物的组织培养培养基及其组培快繁方法
技术领域
本发明涉及一种植物生物技术中的组培快繁方法，尤其是一种用于水生植物的组织培养培养基及其组培快繁方法。
背景技术
组织培养是在无菌的环境下通过营养基和激素的作用促使植物的细胞分裂生长，以获得大量的同一属性的克隆体的技术。因其可以工厂化大量生产种苗以及使优良品种的选种得到切实的保障等优点，组织培养已经广泛用于苗木培养。
目前用于陆生花卉苗木的培养基配方，主要有MS培养基、N6培养基、EDTA螯合粒子铁、6-BA分裂激素以及NAA生长激素，这些培养基配方已经相当成熟，但是只能用于陆生花卉苗木的培养，相对水生植物就极不适应，水生植物培养过程中常常出现生长缓慢、外植体活化、感染率高、物种变异等情况，且水生植物本身植株体内原菌较多，传统的灭菌措施根本不能获得无菌的外植体，也就给水生植物的组织培养带来更多困难，因而研究出一种适合用于水生植物的组织培养培养基及其组培快繁方法变得尤为必要。
发明内容
本发明所要解决的就是水生植物组织培养难的问题，提供一种适合于水生植物的组织培养培养基及其组培快繁方法。
本发明的一种水生植物的组织培养培养基由无机营养物、有机附加物、生长调节物质、碳源、维生素组成，其特征在于
(1)含无机营养物硝酸钾9927.5～10972.5Mg/L、硝酸铵8621.25～9528.75Mg/L、硫酸镁1933.25～2136.75Mg/L、磷酸二氢钾888.25～981.75Mg/L、氯化钙2299～2541Mg/L、硫酸锰1165.175～1287.825Mg/L、硫酸锌449.35～496.65Mg/L、硼酸323.95～358.05Mg/L、碘化钾43.3675～47.9325Mg/L、硫酸铜1.311～1.449Mg/L、氯化钴1.311～1.449Mg/L、硫酸铁5570Mg/L和EDTA 7450Mg/L；
(2)含有机附加物包含琼脂4.275～4.725g/L、烟酸4.14～5.06Mg/100ML和甘氨酸16.56～20.24Mg/100ML；
(3)含生长调节物质6-BA 0.1Mg/L和NAA 0.1Mg/L；
(4)碳源是葡萄糖含量为28.5～31.5g/L；
(5)含维生素硫胺素3.312～4.048Mg/100ML、吡哆辛4.14～5.06Mg/100ML和肌醇828～1012Mg/100ML。
上述的各物质含量为硝酸钾10450Mg\L、硝酸铵9075Mg\L、硫酸镁2035Mg\L、磷酸二氢钾935Mg\L、氯化钙2420Mg\L、硫酸锰1226.5Mg\L、硫酸锌473Mg\L、硼酸341Mg\L、碘化钾45.65Mg\L、硫酸铜1.38Mg\L、氯化钴1.38Mg\L、硫酸铁5570Mg\L、EDTA 7450Mg/L、琼脂4.5g/L、烟酸4.6Mg\100ML、甘氨酸18.4Mg\100ML、葡萄糖30G/L、硫胺素3.68Mg\100ML、吡哆辛4.6Mg\100ML、肌醇920Mg\100ML、6-BA 0.1Mg/L、NAA 0.1Mg/L。
一种使用上述培养基的水生植物的组培快繁方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)外材消毒：
取外材用长流水冲洗至少40分钟，然后浸泡于用1000000单位链霉素加无菌水至0.8升的溶液中9小时；将浸泡过的外材植入含75％的乙醇溶液中进行细胞收敛2～10秒钟；将收敛后的外材用无菌水漂洗4次后植入0.05％～0.1％的砷汞溶液中消毒7分钟；
(2)获取未感染体：
将消毒后的外材植入培养瓶中，保持在温度为30℃，光照度为2500lx条件下的光照20天后，获得原外材15％的未感染外植体；
(3)组培快繁：
将未感染外植体在超净环境下取出，切去活化部分，植入上述水生植物培养基中，保持在温度为30℃，光照度为2500lx条件下的光照10天进行繁殖；
所述的外材消毒步骤中的细胞收敛为6秒钟，砷汞溶液为0.05％。
本发明的水生植物培养基配方的每一个物质都是水生植物生长必要的元素，其中6-BA促进芽的形成，可以提高水生植物的产量和质量，NAA能促进细胞分裂与扩大，6-BA和NAA同时激素刺激植物单株生长和侧芽生长。并且在本发明的组织培养的方法中，对水生植物的外材消毒程序能很大限度地抑制水生植物的内原菌的生长，有效的提高了水生植物幼苗的产量和质量。
具体实施方式
实施例1：选取小珍珠进行组织培养，先配置培养基以备用：
培养基由无机营养物、有机附加物、生长调节物质、碳源、维生素组成，其中各物质含量为：
(1)无机营养物包含硝酸钾10450Mg/L、硝酸铵9075Mg/L、硫酸镁2035Mg/L、磷酸二氢钾935Mg/L、氯化钙2420Mg/L、硫酸锰1226.5Mg/L、硫酸锌473Mg/L、硼酸341Mg/L、碘化钾45.65Mg/L、硫酸铜1.38Mg/L、氯化钴1.38Mg/L、硫酸铁5570Mg/L和EDTA7450Mg/L；
(2)有机附加物包含琼脂4.5g/L、烟酸4.6Mg/100ML、甘氨酸18.4Mg/100ML；
(3)生长调节物质是6-BA 0.1Mg/L和NAA 0.1Mg/L；
(4)碳源是葡萄糖30g/L；
(5)维生素是硫胺素3.68Mg/100ML、吡哆辛4.6Mg/100ML和肌醇920Mg/100ML。
然后使用上述培养基的小珍珠组培快繁方法，包括如下步骤：
(1)外材消毒：
取外材用长流水冲洗40分钟后浸泡于用1000000单位链霉素加无菌水至0.8升的溶液中9小时；将浸泡过的外材植入含75％的乙醇溶液中进行细胞收敛6秒钟；将收敛后的外材用无菌水漂洗4次后植入0.05％的砷汞溶液中消毒7分钟；
(2)获取未感染体：
将消毒后的外材植入培养瓶中，保持在温度为30℃，光照度为2500lx条件下的光照20天后，获得原外材15％的未感染外植体；
(3)组培快繁：
将未感染外植体在超净环境下取出，切去活化部分，植入上述水生植物培养基中，保持在温度为30℃，光照度为2500lx条件下的光照10天进行繁殖；
培养的周期为45天。