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微波促进固相合成苦瓜MC-JJ0107多肽类似物及其应用
    【技术领域】

    本发明涉及MC-JJ0107多肽类似物及其微波促进固相合成方法。

    背景技术

    糖尿病是当今危害人类健康的重要疾病，目前全世界约有5％-7％的人受糖尿病困扰，被认为是继心脑血管疾病、恶性肿瘤之后，导致人类伤残、死亡的第三大杀手。

    糖尿病分为I型和II型，I型糖尿病是一种自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰岛素。II型糖尿病占众多糖尿病患者总数的95％左右。II型糖尿病的原因是胰岛细胞代谢发生障碍，胰岛素分泌不足，或者产生胰岛素抵抗，是以胰岛素抵抗为主伴胰岛素分泌相对不足，或者以胰岛素分泌相对不足为主伴胰岛素抵抗导致的代谢性疾病。胰岛素分泌不足，或者产生胰岛素抵抗都可造成血液中葡萄糖过量，当血糖含量超过肾阈时，葡萄糖就转移到尿中排出，从而产生葡萄糖尿。

    苦瓜(Momordica charantia)是一种人类有长期安全食用历史的蔬菜。近二十年来，人们在苦瓜的果实中发现了许多具有降血糖活性的成分，其中的多肽成分逐渐得到人们的认识并得到一些运用，但是由于苦瓜多肽的提取分离过于复杂，成本较高又难于得到纯的多肽，现在我们运用现代多肽合成技术能够解决这一问题。

    多肽可以通过基因工程的方法或者化学合成的方法得到。基因工程的方法在获取长肽(氨基酸残基长度大于50)或蛋白质上比化学方法有优势，但是多肽的化学合成方法尤其是在固相合成策略出现后，在制备氨基酸残基长度小于40的多肽或小肽上有基因工程方法难以比拟的灵活性、多样性和高效性等。1963年Merrifield创立并开发了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有两种策略：即Boc/Bzl正交保护固相合成策略和Fmoc/tBu正交保护固相合成策略，Merrifield创立的固相合成法即为Boc/Bzl正交保护固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保护固相合成策略中存在一些缺点，如副反应多、条件苛刻以及在延长肽链的过程中多肽链会从固相上丢失等。而随后出现的Fmoc/tBu正交保护固相合成策略则反应条件温和的多。当近年来微波技术运用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技术产生了一个飞跃。微波促进化学反应是由于其使极性分子在微波场中快速旋转，使得一些反应速率较常规加热方法快10到1000倍，而且产率大大提高。1986年Gedye等人首次报道了将微波应用于有机合成中，微波可以促进许多化学反应，如Diels-Alder反应，皂化反应等，可以显著地加快反应速率并提高收率。在1992年，Hui-ming Yu等首先报道了将微波应用于多肽固相合成领域中，他们完成了酰基载体蛋白片断十肽(acyl carrier protein，ACP 65～74)的合成。

    如何高效的合成长肽(大于20肽)在世界上仍然是一个挑战，因为多肽随着肽链的增加，其合成难度成倍增加。用传统的固相方法合成长肽，其收率往往很低杂质较多纯化困难，从而从实用的角度上说失去了合成的意义。其次合成周期长，在中间不出现困难肽序的情况下30肽一般需要近一个星期时间才能完成合成周期，如果出现困难肽序，往往就无法合成得到目标多肽。而使用微波促进固相合成多肽，可以克服困难肽序，合成传统固相方法无法得到的多肽，而且合成时间大大缩短，且显著提高多肽粗品纯度及收率，使得产品的纯化大大方便，只要经过一次制备型HPLC就能得到纯度较高的产品；此外还可以非常方便的用D型氨基酸及非天然氨基酸等对多肽进行定点修饰，去寻找活性更高、生物半衰期更长的多肽，这更是基因工程技术无法做到的。因此，我们在苦瓜降血糖(MC-JJ0107)多肽类似物的合成中采用此种方法快速高效的合成得到MC-JJ0107系列类似物。

    多肽可以通过基因工程的方法或者化学合成的方法得到。基因工程的方法在获取长肽(氨基酸残基长度大于50)或蛋白质上比化学方法有优势，但是多肽的化学合成方法尤其是在固相合成策略出现后，在制备氨基酸残基长度小于40的多肽或小肽上有基因工程方法难以比拟的灵活性、多样性和高效性等。1963年Merrifield创立并开发了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有两种策略：即Boc/Bzl正交保护固相合成策略和Fmoc/tBu正交保护固相合成策略，Merrifield创立的固相合成法即为Boc/Bzl正交保护固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保护固相合成策略中存在一些缺点，如副反应多、条件苛刻以及在延长肽链的过程中多肽链会从固相上丢失等。而随后出现的Fmoc/tBu正交保护固相合成策略则反应条件温和的多。当近年来微波技术运用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技术产生了一个飞跃。微波促进化学反应是由于其使极性分子在微波场中快速旋转，使得一些反应速率较常规加热方法快10到1000倍，而且产率大大提高。1986年Gedye等人首次报道了将微波应用于有机合成中，微波可以促进许多化学反应，如Diels-Alder反应，皂化反应等，可以显著地加快反应速率并提高收率。在1992年，Hui-ming Yu等首先报道了将微波应用于多肽固相合成领域中，他们完成了酰基载体蛋白片断十肽(acyl carrier protein，ACP 65～74)的合成。

    如何高效的合成长肽(大于30肽)在世界上仍然是一个挑战，因为多肽随着肽链的增加，其合成难度成倍增加。用传统的固相方法合成长肽，其收率往往很低杂质较多纯化困难，从而从实用的角度上说失去了合成的意义。其次合成周期长，在中间不出现困难肽序的情况下30肽一般需要近一个星期时间才能完成合成周期，如果出现困难肽序，往往就无法合成得到目标多肽。而使用微波促进固相合成多肽，可以克服困难肽序，合成传统固相方法无法得到的多肽，而且合成时间大大缩短，且显著提高多肽粗品纯度及收率，使得产品的纯化大大方便，只要经过一次制备型HPLC就能得到纯度较高的产品；此外还可以非常方便的用D型氨基酸及非天然氨基酸等对多肽进行定点修饰，去寻找活性更高、生物半衰期更长的多肽，这更是基因工程技术无法做到的。因此，我们在苦瓜降血糖(MC-JJ0107)多肽类似物的合成中采用此种方法快速高效的合成得到MC-JJ0107系列类似物。

    【发明内容】

    本发明有两个目的第一个母的是从具降血糖活性的药食同源植物苦瓜中得到多肽进行修饰得到降血糖活性更高的MC-JJ0107多肽类似物。

    本发明的第二个目的是提供了MC-JJ0107衍生物的固相制备方法，本发明采用微波促进Fmoc/tBu正交保护固相合成策略高效快速地合成得到系列MC-JJ0107类似物。

    其特征在于：采用微波促进Fmoc/tBu正交保护固相合成策略，于固相载体上先合成得到载有第一个Fmoc保护氨基酸的树脂，茚三酮法检测为阴性后脱去Fmoc保护基得到载有第一个氨基酸残基的树脂；再进入下一个偶联循环，按照相应的肽序用不同的保护氨基酸重复偶联和脱保护的步骤，依次延长所需的氨基酸序列，合成得到载有相应多肽的树脂，最后用裂解剂将多肽从树脂上切割下来得到多肽粗品。粗品经制备级高效液相色谱纯化，冻干得多肽纯品。

    载有第一个Fmoc保护氨基酸的树脂的制备方法，其特征是通过在微波照射条件下Fmoc保护氨基酸先经活化剂活化后再与固相载体偶合得到，反应中加入1-羟基-苯并三氮唑(HOBT)或其衍生物抑制消旋，并使用有机碱中和反应的酸性。载有第一个Fmoc保护氨基酸的树脂所使用的固相载体是Rink树脂、Wang树脂或2-氯三苯甲基氯树脂。活化剂是二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N，N″-羰基二咪唑(CDI)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)或使用的1-羟基-苯并三氮唑(HOBT)衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(HOSU)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAT)或3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(HOOBT)。有机碱为三乙胺(TEA)、N-甲基吗啉(NMM)或二异丙基乙胺(DIEA)；微波促进条件是：微波频率2450MHz，反应温度：20～100℃，反应时间为5～15min。

    Fmoc保护基的脱除是通过使用含有0.1mol.L^-1的1-羟基-苯并三氮唑(HOBT)的六氢吡啶溶液在微波促进下反应，选用二甲基甲酰胺(DM F)、二甲亚砜(DMSO)、或N-甲基吡咯烷酮(NMP)为反应溶剂。微波促进条件是：微波频率2450MHz，反应温度：20～100℃，反应时间为1～10min。

    本发明的优点在于：

    1.提出的一种MC-JJ0107类似物可以在保留降糖活性的基础上，提高MC-JJ0107的稳定性，延长作用时间。

    2.微波促进固相合成MC-JJ0107类似物大大的提高了偶合反应速率，常规固相合成方法充分偶合一个氨基酸到树脂上去，往往需要2小时到20小时不等，甚至更长。而微波促进则平均只需要10分钟左右；常规固相合成方法脱Fmoc保护基，往往需要30分钟到1小时不等，而微波促进则平均只需要5分钟左右，这极大的提高了多肽合成的效率，缩短了合成周期。

    3.微波促进固相合成MC-JJ0107类似物合成得到的粗品的纯度大于80％，较常规固相合成方法大大提高，这方便了后续的纯化工作，只需要经过一次制备液相纯化，冻干即可得到目标纯品。

    4.微波促进固相方法合成MC-JJ0107类似物，其成本低，由于偶合效率较高，所需要保护氨基酸平均只需要2倍过量，较常规固相合成方法需要4到5倍过量大为降低。

    5.微波促进固相合成MC-JJ0107类似物方法易于实现自动化、大规模化，这使其更适合工业化生产。

    因此用本发明提供的微波促进固相合成技术制备的MC-JJ0107类似物，收率高、合成周期短、粗品纯化容易，生产成本低、易于工业自动化生产。制备得到的MC-JJ0107类似物，比天然MC-JJ0107更加稳定，适合作为治疗糖尿病药物的活性成分。

    【具体实施方式】

    在本说明书全文中采用以下缩写：

    Et₃N：三乙胺；NMM：N-甲基吗啉；DIEA：N，N’-二异丙基乙胺；DMF：二甲基甲酰胺；DM SO：二甲亚砜；DCM：二氯甲烷；Fmoc：N-9芴甲氧羰基；DIC：N，N’-二异丙基碳二亚胺；CDI：N，N’-羰基二咪唑；DMAP：4-二甲氨基吡啶；HOSU：N-羟基琥珀酰亚胺；EDC.HCl：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯；HBTU：苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯；HCTU：6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯；HOAT：1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑；HOBT：1-羟基-苯并三氮唑；PyBOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷；HPLC：高效液相色谱；ESI-MS：电喷雾质谱；Gly：甘氨酸；Ser：丝氨酸；Ala：丙氨酸；Thr：苏氨酸；Val：缬氨酸；Ile：异亮氨酸；Leu：亮氨酸；Tyr：酪氨酸；Phe：苯丙氨酸；His：组氨酸；Pro：脯氨酸；Asp：天门冬氨酸；Met：蛋氨酸；Glu：谷氨酸；Trp：色氨酸；Lys：赖氨酸；Arg：精氨酸。Asn：天冬酰胺；Gln：谷氨酰胺。

    本发明是通过下列实施列来进行说明的，但这些实施例不做任何限制本发明的解释。

    实施例1

    Ala-Pro-Ala-Ala-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：2)的微波促进固相合成

    (1)树脂的溶胀

    称取Fmoc-rink amide-MBHA Resin 50mg(取代量0.4mmol/g)，经7mL DCM溶胀30min，抽滤去DCM，再用10mL NMP溶胀30min，最后分别用NMP，DCM，NMP 7mL冲洗干净。

    (2)微波促进Fmoc保护基的脱除

    将溶胀好的树脂放入反应器中，加入7mL含0.1M HOBT的25％哌啶/NMP(V/V)溶液，在微波反应器中反应1min，微波功率为15W，反应温度控制在50℃以内，使用空气压缩机压缩空气冷却，反应结束后滤去溶液；再加入7mL含0.1M HOBT的25％哌啶/NMP(V/V)溶液在微波反应器中再反应4min，微波功率为25W，反应温度控制在50℃，使用空气压缩机压缩空气冷却。反应结束后滤去溶液，用NMP洗涤干净。得到脱去初始连接的Fmoc保护基的树脂。

    (3)微波促进Fmoc-Ser-rink amide-MBHA Resin的合成

    将Fmoc-Ser-OH(0.04mmol)，HBTU(0.04mmol)，HOBT(0.04mmol)和DIPEA(0.08mmol)溶于10mL NMP中，再将此溶液加入上面的树脂中，在微波反应器中反应7min，微波功率为25W，反应温度控制在50℃.，使用空气压缩机压缩空气冷却。反应结束后滤除反应液，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次。

    (4)偶合效率的检测

    用茚三酮法或者溴酚兰法定性检测树脂的偶合效率，显色反应为阴性即可进入下一个偶合循环。

    茚三酮法：取少量树脂颗粒用乙醇洗涤，放入透明小瓶中加入5％茚三酮乙醇、KCN吡啶溶液(2ml 0.001MKCN稀释于98ml吡啶中)、80％苯酚乙醇溶液各2滴，于100℃加热5分钟，如果树脂显蓝色即为阳性。

    溴酚兰法：取少量树脂颗粒用二甲酰乙酰胺洗涤，放入透明小瓶中加入3滴1％的溴酚蓝二甲基乙酰胺溶液，常温下振摇3分钟，如果树脂显蓝色即为阳性。

    (5)肽链的延长

    按照Ala₁-MC-JJ0107-(1～9)-NH₂的序列，重复上述脱保护和偶合的步骤依次连接上相应的氨基酸，偶合微波促进反应时间5～20min不等。得到连有Ala₁-MC-JJ0107-(1～9)-NH₂的树脂。

    (6)树脂上多肽的裂解

    将上述得到的连有Ala₁-MC-JJ0107-(1～9)-NH₂的树脂放入反应瓶中，各加入裂解剂Reagent K(TFA/苯甲硫醚/水/苯酚/EDT，82.5∶5∶5∶5∶2.5，V/V)10mL，先在0℃下振摇30min，再在常温下反应3h。反应结束后抽滤，加少量TFA和DCM洗涤三次，合并滤液。将滤液加入大量的冰乙醚中析出白色絮状沉淀，冷冻离心得到目标多肽的粗品。最终得到Ala₁-MC-JJ0107-(1～9)-NH₂粗品63.2mg，收率为94.3％。

    (7)Ala₁-MC-JJ0107-(1～9)-NH₂粗品的纯化

    将上面得到的Ala1-MC-JJ0107-(1～9)-NH₂粗品，溶于少量的水中，用岛津制备型反相HPLC纯化粗品。纯化中采用C18反相制备柱(340mm×28mm，5μm)；流动相A：0.1％TFA/水(V/V)，流动相B：0.1％TFA/乙腈(V/V)；流动相梯度：流动相B 20％～65％，40min；流速为6mL/min；检测波长为214nm。收集的溶液冻干得纯品，最终得到纯品29.7mg。理论相对分子质量814.9ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺272.6，[M+4H]⁴⁺204.5，[M+5H]⁵⁺164.1；calu[M+3H]³⁺272.6，[M+4H]⁴⁺204.7，[M+5H]⁵⁺164.0

    根据实施例1所述的方法，根据相应的序列合成得到实施例2～49的多肽，通过电喷雾质谱(ESI-MS)确证各自的分子量。

    实施例2

    Ala-Pro-Ala-Cys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：3)；理论相对分子质量847.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺283.4，[M+4H]⁴⁺212.6，[M+5H]⁵⁺170.5；calu[M+3H]³⁺283.3，[M+4H]⁴⁺212.7，[M+5H]⁵⁺170.4

    实施例3

    Ala-Pro-Ala-Gly-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：4)；理论相对分子质量800.9

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺268.0，[M+4H]⁴⁺201.2，[M+5H]⁵⁺161.3；calu[M+3H]³⁺268.0，[M+4H]⁴⁺201.2，[M+5H]⁵⁺161.2

    实施例4

    Ala-Pro-Ala-His-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：5)；理论相对分子质量881.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺294.7，[M+4H]⁴⁺221.3，[M+5H]⁵⁺177.3；calu[M+3H]³⁺294.7，[M+4H]⁴⁺221.2，[M+5H]⁵⁺177.2

    实施例5

    Ala-Pro-Ala-Lys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：6)；理论相对分子质量872.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺291.7，[M+4H]⁴⁺219.2，[M+5H]⁵⁺175.6；calu[M+3H]³⁺291.7，[M+4H]⁴⁺219.0，[M+5H]⁵⁺175.4

    实施例6

    Ala-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：7)；理论相对分子质量907.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺303.4，[M+4H]⁴⁺227.7，[M+5H]⁵⁺182.4；calu[M+3H]³⁺303.3，[M+4H]⁴⁺227.8，[M+5H]⁵⁺182.4

    实施例7

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：8)；理论相对分子质量999.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺334.0，[M+4H]⁴⁺250.7，[M+5H]⁵⁺200.9；calu[M+3H]³⁺334.0，[M+4H]⁴⁺250.8，[M+5H]⁵⁺200.8

    实施例8

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-(D-Ala)-Ser(SEQ.ID NO：9)；理论相对分子质量985.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺329.5，[M+4H]⁴⁺247.4，[M+5H]⁵⁺198.0；calu[M+3H]³⁺329.4，[M+4H]⁴⁺247.3，[M+5H]⁵⁺198.0

    实施例9

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.ID NO：10)；理论相对分子质量985.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺329.4，[M+4H]⁴⁺247.5，[M+5H]⁵⁺198.0；calu[M+3H]³⁺329.4，[M+4H]⁴⁺247.3，[M+5H]⁵⁺198.0

    实施例10

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.ID NO：11)；理论相对分子质量1031.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺344.6，[M+4H]⁴⁺258.8，[M+5H]⁵⁺207.3；calu[M+3H]³⁺344.7，[M+4H]⁴⁺258.8，[M+5H]⁵⁺207.2

    实施例11

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.ID NO：12)；理论相对分子质量1059.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺354.1，[M+4H]⁴⁺265.8，[M+5H]⁵⁺212.7；calu[M+3H]³⁺354.1，[M+4H]⁴⁺265.8，[M+5H]⁵⁺212.8

    实施例12

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.ID NO：13)；理论相对分子质量1015.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺339.5，[M+4H]⁴⁺254.8，[M+5H]⁵⁺204.1；calu[M+3H]³⁺339.4，[M+4H]⁴⁺254.8，[M+5H]⁵⁺204.0

    实施例13

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.ID NO：14)；理论相对分子质量1059.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺353.2，[M+4H]⁴⁺265.1，[M+5H]⁵⁺212.3；calu[M+3H]³⁺353.1，[M+4H]⁴⁺265.1，[M+5H]⁵⁺212.2

    实施例14

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：15)；理论相对分子质量909.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺304.1，[M+4H]⁴⁺228.1，[M+5H]⁵⁺183.0；calu[M+3H]³⁺304.0，[M+4H]⁴⁺228.2，[M+5H]⁵⁺182.8

    实施例15

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.ID NO：16)；理论相对分子质量909.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺304.0，[M+4H]⁴⁺228.3，[M+5H]⁵⁺183.0；calu[M+3H]³⁺304.0，[M+4H]⁴⁺228.2，[M+5H]⁵⁺182.8

    实施例16

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.ID NO：17)；理论相对分子质量955.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺319.2，[M+4H]⁴⁺239.7，[M+5H]⁵⁺192.0；calu[M+3H]³⁺319.4，[M+4H]⁴⁺239.8，[M+5H]⁵⁺192.0

    实施例17

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.ID NO：18)；理论相对分子质量1008.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺337.1，[M+4H]⁴⁺253.2，[M+5H]⁵⁺202.7；calu[M+3H]³⁺337.0，[M+4H]⁴⁺253.0，[M+5H]⁵⁺202.6

    实施例18

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.ID NO：19)；理论相对分子质量983.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺328.7，[M+4H]⁴⁺246.9，[M+5H]⁵⁺197.8；calu[M+3H]³⁺328.7，[M+4H]⁴⁺246.8，[M+5H]⁵⁺197.6

    实施例19

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.ID NO：20)；理论相对分子质量939.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺314.1，[M+4H]⁴⁺235.9，[M+5H]⁵⁺188.6；calu[M+3H]³⁺314.0，[M+4H]⁴⁺235.8，[M+5H]⁵⁺188.8

    实施例20

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.ID NO：21)；理论相对分子质量985.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺329.5，[M+4H]⁴⁺247.4，[M+5H]⁵⁺198.1；calu[M+3H]³⁺329.4，[M+4H]⁴⁺247.3，[M+5H]⁵⁺198.0

    实施例21

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.ID NO：22)；理论相对分子质量1031.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺344.8，[M+4H]⁴⁺258.7，[M+5H]⁵⁺207.1；calu[M+3H]³⁺344.7，[M+4H]⁴⁺258.8，[M+5H]⁵⁺207.2

    实施例22

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.ID NO：23)；理论相对分子质量1059.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺354.0，[M+4H]⁴⁺265.7，[M+5H]⁵⁺212.8；calu[M+3H]³⁺354.1，[M+4H]⁴⁺265.8，[M+5H]⁵⁺212.8

    实施例23

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.ID NO：24)；理论相对分子质量1015.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺339.3，[M+4H]⁴⁺254.7，[M+5H]⁵⁺204.0；calu[M+3H]³⁺339.4，[M+4H]⁴⁺254.8，[M+5H]⁵⁺204.0

    实施例24

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.ID NO：25)；理论相对分子质量999.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺334.1，[M+4H]⁴⁺250.9，[M+5H]⁵⁺200.7；calu[M+3H]³⁺334.0[M+4H]⁴⁺250.8，[M+5H]⁵⁺200.8

    实施例25

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：26)；理论相对分子质量909.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺304.1，[M+4H]⁴⁺228.1，[M+5H]⁵⁺182.7；calu[M+3H]³⁺304.0[M+4H]⁴⁺228.2，[M+5H]⁵⁺182.8

    实施例26

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.ID NO：27)；理论相对分子质量909.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺304.2，[M+4H]⁴⁺228.2，[M+5H]⁵⁺182.6；calu[M+3H]³⁺304.0[M+4H]⁴⁺228.2，[M+5H]⁵⁺182.8

    实施例27

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.ID NO：28)；理论相对分子质量955.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺319.5，[M+4H]⁴⁺239.7，[M+5H]⁵⁺192.1；calu[M+3H]³⁺319.4[M+4H]⁴⁺239.8，[M+5H]⁵⁺192.0

    实施例28

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.ID NO：29)；理论相对分子质量1008.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺337.1，[M+4H]⁴⁺253.2，[M+5H]⁵⁺202.5，calu[M+3H]³⁺337.0[M+4H]⁴⁺253.0，[M+5H]⁵⁺202.6

    实施例29

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.ID NO：30)；理论相对分子质量939.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺314.2，[M+4H]⁴⁺235.7，[M+5H]⁵⁺188.9；calu[M+3H]³⁺314.0[M+4H]⁴⁺235.8，[M+5H]⁵⁺188.8

    实施例30

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.ID NO：31)；理论相对分子质量939.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺314.2，[M+4H]⁴⁺235.9，[M+5H]⁵⁺188.8；calu[M+3H]³⁺314.0[M+4H]⁴⁺235.8，[M+5H]⁵⁺188.8

    实施例31

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.ID NO：32)；理论相对分子质量971.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺324.6，[M+4H]⁴⁺243.9，[M+5H]⁵⁺195.3；calu[M+3H]³⁺324.7[M+4H]⁴⁺243.8，[M+5H]⁵⁺195.2

    实施例32

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.ID NO：33)；理论相对分子质量1017.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺340.1，[M+4H]⁴⁺255.3，[M+5H]⁵⁺204.5；calu[M+3H]³⁺340.1[M+4H]⁴⁺255.3，[M+5H]⁵⁺204.4

    实施例33

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.ID NO：34)；理论相对分子质量1045.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺349.5，[M+4H]⁴⁺262.3，[M+5H]⁵⁺210.1；calu[M+3H]³⁺349.4[M+4H]⁴⁺262.3，[M+5H]⁵⁺210.0

    实施例34

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.ID NO：35)；理论相对分子质量1001.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺334.7，[M+4H]⁴⁺251.3，[M+5H]⁵⁺201.1；calu[M+3H]³⁺334.7[M+4H]⁴⁺251.3，[M+5H]⁵⁺201.2

    实施例35

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.ID NO：36)；理论相对分子质量1042.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺348.5，[M+4H]⁴⁺261.3，[M+5H]⁵⁺209.3；calu[M+3H]³⁺348.4[M+4H]⁴⁺261.5，[M+5H]⁵⁺209.4

    实施例36

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：37)；理论相对分子质量909.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺304.1，[M+4H]⁴⁺228.3，[M+5H]⁵⁺182.7；calu[M+3H]³⁺304.0[M+4H]⁴⁺228.2，[M+5H]⁵⁺182.8

    实施例37

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser  (SEQ.ID NO：38)；理论相对分子质量895.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺299.1，[M+4H]⁴⁺224.8，[M+5H]⁵⁺180.0；calu[M+3H]³⁺299.3[M+4H]⁴⁺224.7，[M+5H]⁵⁺180.0

    实施例38

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.ID NO：39)；理论相对分子质量941.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺314.6，[M+4H]⁴⁺236.4，[M+5H]⁵⁺189.1；calu[M+3H]³⁺314.7[M+4H]⁴⁺236.3，[M+5H]⁵⁺189.2

    实施例39

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.ID NO：40)；理论相对分子质量941.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺332.5，[M+4H]⁴⁺249.4，[M+5H]⁵⁺199.8；calu[M+3H]³⁺332.4[M+4H]⁴⁺249.5，[M+5H]⁵⁺199.8

    实施例40

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.ID NO：41)；理论相对分子质量941.1

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺332.3，[M+4H]⁴⁺249.5，[M+5H]⁵⁺199.9；calu[M+3H]³⁺332.4[M+4H]⁴⁺249.5，[M+5H]⁵⁺199.8

    实施例41

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.ID NO：42)；理论相对分子质量925.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺309.3，[M+4H]⁴⁺232.3，[M+5H]⁵⁺186.1；calu[M+3H]³⁺309.3[M+4H]⁴⁺232.2，[M+5H]⁵⁺186.0

    实施例42

    Ala-Pro-Ala-(D-Ala)-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：43)；理论相对分子质量814.9

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺272.7，[M+4H]⁴⁺204.6，[M+5H]⁵⁺164.1；calu[M+3H]³⁺272.6[M+4H]⁴⁺204.7，[M+5H]⁵⁺164.0

    实施例43

    Ala-Pro-Ala-Arg-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：44)；理论相对分子质量900.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺301.1，[M+4H]⁴⁺226.2，[M+5H]⁵⁺181.1；calu[M+3H]³⁺301.0[M+4H]⁴⁺226.0，[M+5H]⁵⁺181.0

    实施例44

    Ala-Pro-(D-Ala)-Cys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：45)；理论相对分子质量1063.2

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺355.2，[M+4H]⁴⁺266.7，[M+5H]⁵⁺213.8；calu[M+3H]³⁺355.4[M+4H]⁴⁺266.8，[M+5H]⁵⁺213.6

    实施例45

    Ala-Pro-(D-Ala)-Gly-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：46)；理论相对分子质量800.9

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺268.1，[M+4H]⁴⁺201.3，[M+5H]⁵⁺161.2；calu[M+3H]³⁺268.0[M+4H]⁴⁺201.2，[M+5H]⁵⁺161.2

    实施例46

    Ala-Pro-(D-Ala)-His-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：47)；理论相对分子质量881.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺294.6，[M+4H]⁴⁺221.3，[M+5H]⁵⁺177.2；calu[M+3H]³⁺294.7[M+4H]⁴⁺221.2，[M+5H]⁵⁺177.2

    实施例47

    Ala-Pro-(D-Ala)-Lys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：48)；理论相对分子质量872.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺291.6，[M+4H]⁴⁺219.1，[M+5H]⁵⁺175.5；calu[M+3H]³⁺294.7[M+4H]⁴⁺219.0，[M+5H]⁵⁺175.4

    实施例48

    Ala-Pro-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.ID NO：49)；理论相对分子质量907.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺303.3，[M+4H]⁴⁺227.9，[M+5H]⁵⁺182.5；calu[M+3H]³⁺303.3[M+4H]⁴⁺227.8，[M+5H]⁵⁺182.4

    实施例49

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.ID NO：50)；理论相对分子质量879.0

    ESI-MSm/z：found[M+3H]³⁺294.1，[M+4H]⁴⁺220.6，[M+5H]⁵⁺176.8；calu[M+3H]³⁺294.0[M+4H]⁴⁺220.7，[M+5H]⁵⁺176.8

    实施例50

    MC-JJ0107及其类似物体内降糖活性实验

    取10周龄雄性昆明小鼠(体重18～22g)，随机分组，每组6只。尾静脉注射四氧嘧啶给药建模，给药剂量为60mg/kg，72小时后，小鼠禁食5～6小时测血糖挑选血糖值范围在13～23的小鼠随机分组，每组6只。成模后的小鼠1mg/kg连续给药10d腹腔注射MC-JJ0107多肽及其类似物。在0，30，60，90，120用血糖仪测定血糖值。

    如表1所示，MC-JJ0107多肽及其类似物的降血糖活性强于二甲双胍。

    表1MC-JJ0107及其类似物降血糖的效应

       0min  30min  60min  90min  120min  阴性空白  4.60±2.38  4.68±2.36  4.62±1.94  4.46±2.02  4.12±1.64  阳性空白  25.32±1.77  22.78±2.26  21.68±2.82  19.16±1.00  17.58±2.08  二甲双胍  23.15±11.48  20.45±5.97  18.03±6.24*  16.01±3.84*  14.23±5.77*

       0min  30min  60min  90min  120min  SEQ.ID NO：3  16.56±7.65**  14.64±3.33***  13.42±6.79***  11.26±3.77***  9.21±4.55**  SEQ.ID NO：5  17.15±3.22**  16.34±6.05**  15.34±5.60**  14.52±8.75**  12.48±4.20*  SEQ.ID NO：7  19.67±11.57*  17.77±7.73  15.27±6.00**  13.11±4.26***  12.81±7.51**  SEQ.ID NO：8  21.35±5.09*  19.42±4.27*  16.20±5.30**  13.80±6.83***  12.38±7.88**  SEQ.ID NO：9  20.88±5.93*  18.25±1.97*  17.68±4.54*  16.18±7.55*  12.71±4.54**  SEQ.ID NO：14  18.47±4.02**  16.65±4.05**  16.55±7.65*  14.9±3.72**  11.67±8.21**  SEQ.ID NO：19  17.36±7.16**  15.81±4.18**  14.93±3.38***  13.91±2.36**  10.98±6.11***  SEQ.ID NO：25  20.44±3.04*  18.78±1.34*  16.84±3.02*  14.54±3.24**  14.66±3.05*  SEQ.ID NO：31  22.28±1.60*  16.51±2.23**  13.65±4.32***  11.43±2.41***  8.23±2.45***  SEQ.ID NO：42  17.18±0.92**  16.10±1.64**  15.88±2.95*  14.67±4.36**  13.82±3.11*

    n＝6，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 vs saline

    【序列表】

    <110>中国药科大学

    <120>微波促进固相合成苦瓜MC-JJ0107多肽类似物及其应用

    <160>91

     

    <210>1

    <211>9

    <212>PRT

    <213>人工序列

     

    <220>

    <221>合成构建体

    <222>(1)..(1)

    <223>第1位的Xaa是Ala，D-Ala，Gly或Ser

     

    <220>

    <221>合成构建体

    <222>(3)..(3)

    <223>第3位的Xaa是Ala，D-Ala，Arg，Cys，Gly，His，Lys，Met，Tyr或Ser

     

    <220>

    <221>合成构建体

    <222>(4)..(4)

    <223>第4位的Xaa是Ala，D-Ala，Gly，Lys，Tyr或Ser

     

    <220>

    <221>合成构建体

    <222>(7)..(7)

    <223>第7位的Xaa是Lys或Ser

     

    <220>

    <221>合成构建体

    <222>(8)..(8)

    <223>第8位的Xaa是Ala，D-Ala，Gly，Cys，Arg，Lys，Met或Ser

    <400>1

    Xaa1-Pro-Xaa2-Xaa3-Ser-Ile-Xaa4-Xaa5-Ser

    1                   5

     

    <210>2

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>2

    Ala-Pro-Ala-Ala-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

    <210>3

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>3

    Ala-Pro-Ala-Cys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>4

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>4

    Ala-Pro-Ala-Gly-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>5

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>5

    Ala-Pro-Ala-His-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>6

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>6

    Ala-Pro-Ala-Lys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>7

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>7

    Ala-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>8

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>8

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>9

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>9

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-(D-Ala)-Ser

    1                5

     

    <210>10

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>10

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1                5

     

    <210>11

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>11

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                 5

     

    <210>12

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>12

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                5

     

    <210>13

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>13

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser

    1                 5

     

    <210>14

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>14

    Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

    1                5

     

    <210>15

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>15

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1               5

     

    <210>16

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>16

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1               5

     

    <210>17

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>17

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                 5

     

    <210>18

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>18

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser

    1               5

     

    <210>19

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>19

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                 5

     

    <210>20

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>20

    Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser

    1                5

     

    <210>21

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>21

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1                    5

     

    <210>22

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>22

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                    5

     

    <210>23

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>23

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                    5

     

    <210>24

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>24

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser

    1                    5

     

    <210>25

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>25

    (D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

    1                    5

    <210>26

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>26

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                    5

     

    <210>27

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>27

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1                    5

     

    <210>28

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>28

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                    5

     

    <210>29

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>29

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser

    1                    5

     

    <210>30

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>30

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                    5

     

    <210>31

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>31

    (D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser

    1                    5

     

    <210>32

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>32

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1                5

     

    <210>33

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>33

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                5

     

    <210>34

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>34

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                5

     

    <210>35

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>35

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser

    1                5

     

    <210>36

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>36

    Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

    1                5

     

    <210>37

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>37

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>38

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>38

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1                 5

     

    <210>39

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>39

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                 5

     

    <210>40

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>40

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser

    1               5

     

    <210>41

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>41

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                 5

     

    <210>42

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>42

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser

    1                 5

     

    <210>43

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>43

    Ala-Pro-Ala-(D-Ala)-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                   5

     

    <210>44

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>44

    Ala-Pro-Ala-Arg-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5                  10

     

    <210>45

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>45

    Ala-Pro-(D-Ala)-Cys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                    5

     

    <210>46

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>46

    Ala-Pro-(D-Ala)-Gly-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                   5

     

    <210>47

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>47

    Ala-Pro-(D-Ala)-His-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                    5

     

    <210>48

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>48

    Ala-Pro-(D-Ala)-Lys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                    5

    <210>49

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>49

    Ala-Pro-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                    5

     

    <210>50

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>50

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1                5

     

    <210>51

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>51

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                5

     

    <210>52

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>52

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                5

     

    <210>53

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>53

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser

    1                5

     

    <210>54

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>54

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

    1                5

     

    <210>55

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>55

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

    1                5

     

    <210>56

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>56

    Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

    1                5

     

    <210>57

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>57

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser

    1                5

     

    <210>58

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>58

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser

    1               5

     

    <210>59

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>59

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser

    1                5

     

    <210>60

    <211>10

    <212>PRT

    <213>人工序列

    <400>60

    Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-le-Lys-Ser-Ser

    1                5