一种用于五积散超微粉体制剂含量测定的方法.pdf

本发明涉及一种中成药超微粉体制剂的含量测定方法。其特征在于选择了11种含量控制指标，采用高效液相色谱法采用同一种含量测定方法同时进行五积散中11种化学成分的指标的含量测定，该方法包括色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制剂含量限度。本方法优点在于相对简单、准确、重现性好，适于全面评价五积散复方制剂的质量。

1.  一种用于五积散超微粉体制剂质量监测的方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行含量测定；所述含量控制指标为麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚11种成分；所述色谱条件：填充剂为十八烷基键合硅胶；流动相A为0.35％(v/v)磷酸水溶液；B为乙腈；梯度洗脱：0～15min，7-18％B；15～38min，18-30％B；38～42min，30-41％B；42～45min，41-55％B；46～65min，55-62％B；65～75min，62-75％B；75～80min，75-90％B；80～85min，90-93％B；85～95min，93-93％B。柱温30℃；流速为1ml/min；各控制指标的检测波长见表1。
表1五积散超微粉体制剂中11种指标成分的检测波长


2.  如权利要求1所述的五积散超微粉体制剂含量测定方法，其特征在于所述供试品溶液的制备方法为：以甲醇为溶剂，4℃冷浸12小时。

3.  如权利要求1所述的五积散超微粉体制剂含量测定方法，其特征在于含量限度为：每袋重量9g的药物中含麻黄以盐酸麻黄碱计，不得少于5.0mg；含白芍以芍药苷计，不得少于3.8mg；含甘草以甘草苷与甘草酸计，分别不得少于8.6mg与21.9mg；含当归以阿魏酸计，不得少于2.72mg；含枳壳和陈皮以柚皮苷与橙皮苷计，分别不得少于24.2mg与40.7mg；含桂枝以桂皮醛计，不得少于1.6mg；含白芷以欧前胡素计，不得少于0.3mg；含厚朴以厚朴酚和和厚朴酚计，分别不得少于8.1mg与7.0mg。

一种用于五积散超微粉体制剂含量测定的方法
技术领域
本发明涉及一种超微粉体制剂的中成药含量测定方法，特别是涉及五积散超微粉体制剂中指标成分的含量测定。
背景技术
药品质量标准是药品检验和技术监督法定性依据，从一定意义上讲，药品质量的好坏与其质量标准的质量存在密切的相关性，含量测定作为中药质量标准中的关键内容之一，可在很大程度上控制药品质量。中药复方往往含多类、多种成分，仅建立某单一成分的含量测定在很大程度上带有较大的片面性。因此，有必要在中药复方质量标准中建立多指标含量测定，实现对多数成份指标的控制，多方面控制产品质量，提高现代中药制剂的质量控制水平。
五积散源于宋朝《太平惠民和济局方.伤寒门》，现收载于卫生部药品标准《中药成方制剂》第21册，标准编号WS3-B-2475-97，处方为麻黄40g、白芷30g、桂枝50g、干姜30g、茯苓30g、当归30g、白芍30g、桔梗60g、苍术80g、厚朴40g、陈皮50g、枳壳50g、法半夏30g、甘草30g、川芎20g，功能发表温中、燥湿化痰、理气活血，为消除寒、食、气、血、痰五积之剂。多用于外感寒湿，内伤生冷而致的头痛身疼、项背拘急、发热无汗、恶心呕吐、脘腹胀满以及风寒湿痹，妇人气血不和，痛经等证。现代研究表明，麻黄中的麻黄碱，白芍中的芍药苷，当归中的阿魏酸，甘草中的甘草苷与甘草酸，枳壳与陈皮中的柚皮苷、橙皮苷，桂枝中的桂皮醛，白芷中的欧前胡素，厚朴中的厚朴酚与和厚朴酚，分别具有松弛支气管平滑肌、收缩血管与子宫^[1，2]、抗病毒^[3-9]、抗菌^[10-15]、抗炎^[16-18]、抗氧化^[19-23]、镇静^[24]、抗血栓形成^[25]、抗肿瘤^[26，27]等药理作用。上述成分协同作用才能发挥五积散的发表温中、燥湿化痰、理气活血之功效。
五积散作为应用历史上千年的经典名方，其质量标准仅有鉴别项，未使用含量对成品质量进行控制，质量标准单一。很显然，鉴于中药组合物成分的复杂性，现有技术中没有提供一种对该方剂中多种成分同时进行检测的方法。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种同时检测五积散超微粉体制剂多种指标成分的含量测定方法，以便更好的、全面的控制该产品的质量，保障用药安全、有效、可靠，具有实际意义。
本发明的另一目的是确定五积散超微粉体制剂的含量限度。
本发明提供的技术方案是采用高效液相色谱法进行含量测定；所述含量控制指标为麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚11种成分；所述色谱条件为：色谱条件：填充剂为十八烷基键合硅胶；流动相A为0.35％(v/v)磷酸水溶液；B为乙腈；梯度洗脱：0～15min，7-18％B；15～38min，18-30％B；38～42min，30-41％B；42～45min，41-55％B；46～65min，55-62％B；65～75min，62-75％B；75～80min，75-90％B；80～85min，90-93％B；85～95min，93-93％B。柱温30℃；流速为1ml/min；各控制指标的检测波长见表1。
表1五积散超微粉体制剂中11种指标成分的检测波长

所述对照品溶液的制备方法：取麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，以甲醇溶解，配制成一定比例的溶液。
所述供试品溶液的制备方法为：以甲醇为溶剂，冷浸12h，用0.45μm微孔滤膜滤过，制备而得。
五积散超微粉体制剂是按照五积散处方制成的超微粉体颗粒，为了更好的控制本品质量，保障安全用药，本发明以制剂中麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚11种成分作为控制指标进行含量测定，并对含量测定方法学进行线性关系、稳定性、重复性、加样回收等方法学考察，结果表明该方法可行，重现性好，通过多批样品的含量测定，拟定了本品适当的含量测定限度，结果证明所指定的超微粉体制剂的质量标准专属性强、可控性好，可以更好的、全面的控制本品的内在质量，保证了制剂工艺稳定剂质量可控。
所述含量限度为本品每袋含麻黄以盐酸麻黄碱计，不得少于5.0mg；含白芍以芍药苷计，不得少于3.8mg；含甘草以甘草苷与甘草酸计，分别不得少于8.6mg与21.9mg；含当归以阿魏酸计，不得少于2.72mg；含枳壳和陈皮以柚皮苷与橙皮苷计，分别不得少于24.2mg与40.7mg；含桂枝以桂皮醛计，不得少于1.6mg；含白芷以欧前胡素计，不得少于0.3mg；含厚朴以厚朴酚和和厚朴酚计，分别不得少于8.1mg与7.0mg。
附图说明
图1是对照品与供试品溶液的高效液相色谱图；
其中(A)为对照品溶液，(B)为五积散微米粉体制剂溶液.
(1)盐酸麻黄碱；(2)芍药苷；(3)甘草苷；(4)阿魏酸；(5)柚皮苷；(6)橙皮苷；(7)桂皮醛；(8)甘草酸；(9)欧前胡素；(10)厚朴酚；(11)和厚朴酚.
具体实施方式
通过以下具体实施方式实现对本发明的进一步具体说明，但不应被理解为对本发明的任何限制。
实施例1五积散超微粉体制剂中11种指标的含量测定
1、色谱条件：
色谱柱：十八烷基健合硅胶柱((5.0μm，250mm×4.6mm)
流动相A为0.35％(v/v)磷酸水溶液；B为乙腈；梯度洗脱：0～15min，7-18％B；15～38min，18-30％B；38～42min，30-41％B；42～45min，41-55％B；46～65min，55-62％B；65～75min，62-75％B；75～80min，75-90％B；80～85min，90-93％B；85～95min，93-93％B。柱温30℃；流速为1ml/min；各控制指标的检测波长见表1。流速：1.0mlmin^-1。
检测波长：采用可变波长的方法，即分别在各指标成分的保留时间位置采用相应指标成分的最大吸收波长。见表1。
表1同时检测五积散超微粉体制剂11种指标成分高效液相色谱法的检测波长

柱温：30℃。
理论板数：按含量最高的柚皮苷峰计算，应不低于2000.
2、对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷干燥的盐酸麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚适量，用甲醇定容至100ml，得到每1ml含盐酸麻黄碱25μg、芍药苷180μg、甘草苷148μg、阿魏酸38μg、柚皮苷85μg、橙皮苷13.5μg、桂皮醛6.9μg、欧前胡素2.37μg、甘草酸99.6μg、厚朴酚32μg、和厚朴酚29.5μg的混合对照品储备液，冰箱中4℃下避光保存。
3、供试品溶液的制备：取五积散微米粉体制剂0.35g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称定重量，于冰箱(4℃)中冷浸12h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，再用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
4、测定法：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定。
5、计算法：按照外标法计算，即得。
分别测定3批五积散微米粉体制剂样品，每mg五积散微米粉体制剂含盐酸麻黄碱700ng、芍药苷539ng、甘草苷1193ng、阿魏酸374ng、柚皮苷3377ng、橙皮苷5652ng、桂皮醛220ng、欧前胡素36ng、甘草酸3045ng、厚朴酚1125ng、和厚朴酚970ng。
实施例2线性关系考察
将11种对照品的混合溶液并稀释至6个浓度水平，精密吸取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以盐酸麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚的峰面积为纵坐标(Y)、对照品溶液进样浓度(μl/ml)为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程见表2。所有回归方程均表明在检测范围内线性关系良好(r²＞0.9993)。
表211种成分的回归数据与最低检测限(n＝6).

实施例3精密度考察
取五积散超微粉体制剂溶液在上述色谱条件下，进行日内精密度与日间精密度试验。日内精密度试验采用三个浓度的样品溶液一日内重复检测5次，日间精密度则连续三日分别检测一次。结果见表3，11种主要成分的R.S.D.均小于5％。表明，该方法具有良好的精密度。
表3精密度试验


实施例4稳定性考察
取供试品溶液在4℃下避光放置，分别于0，24，48h测定。11种主要有效成分的峰面积与保留时间的R.S.D.分别小于4.9％、2.0％。结果表明，样品溶液在4℃下48h内稳定。
实施例5回收率试验
采用加样回收法，精密称取已知含量的五积散适量，共3份，按样品中相应成分含量的50％、100％、150％，分别准确加入上述对照品，制成溶液，在分别测定11种指标成分的含量，并计算回收率，结果见表4，平均加样回收率范围均在96.56-103.85％，R.S.D.小于4.87％。表明，该方法准确性好。
表4回收率试验


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