背景技术
皮肤作为从外界环境中保护身体的屏障扮演着非常重要角色。这种屏障功能是防御多种外界刺激(例如化学物质、污染物、干燥环境、紫外线等)和保护水分从身体中通过皮肤向外界的过量流失的保护功能。这种保护功能只有在由角质化细胞组成的角质层正常形成时才能保持。
皮肤的角质层(角质层)是表皮的最外层，它是由角质化细胞形成的，并且由分化的角质化细胞以及包围所述角质化细胞的脂质层组成(Marcelo C.L.等人，J.Invest.Dermatol.，80，第37-44页，1983)。
角质化细胞是位于表皮的最下层的持续增殖的基细胞向上移动到皮肤的表层，同时在形态和功能上经过逐步变化而形成的特有的细胞。在特定的一段时间后，老的角质化细胞从皮肤上脱落，并被新的角质化细胞取代，并且这种一系列的重复变化被称为“表皮细胞的分化”或“角质化”。
在角质化过程中，角质化细胞形成角质层，同时产生天然保湿因子(NMFs)和细胞内脂质(神经酰胺、胆固醇、脂肪酸等)，使得所述角质层具有稳固性和弹性，因而可以起到皮肤屏障的功能。
这种角质层会因为习惯因素(如过度的洗脸或沐浴)、环境因素(如干性污染物)和内源性疾病(如过敏性皮肤或衰老皮肤)而容易丧失它的功能。事实上，由于现今进一步增加的多种因素，遭受上述因素所致的干性皮肤以及多种症状的人群不断增大。
因此，为了从外部供给水分或阻止从体内丢失水分以便把皮肤的水含量维持在合适的水平上，进行了大量的研究。事实上，已经开发了多种具有水保留能力的保湿液。作为皮肤保湿液，通常使用能够增加保留在角质层中的水的脂质成分(如神经酰胺)和物质(如必要的脂肪酸和脂质复合物)(Rawlings A.V.等人，J.Invest.Dermatol.，5，第731-741页，1994)。
但是，对皮肤的危险因素不断增加，角质层产生和脱落的速度由于饮食习惯的改变而变缓，角质层中保湿因子和脂质的量由于角质化细胞功能的退化而减少，并且由于这些原因，皮肤、角质层不再起到正常皮肤屏障功能的人群逐渐扩大。这种皮肤屏障功能的衰退会引发多种皮肤疾病，包括干性皮肤、过敏性皮炎、接触性皮炎和银屑癣。通过具有水保留功能的现有的传统保湿液只能减轻这些疾病，但是用这些传统的保湿液难以根治这些疾病。
如本发明所用，术语“石榴皮”指石榴(Punica granatum L.)的果实、茎干、枝和根的皮层。所述植物石榴在成熟时具有黄色或黄红色。同样地，所述植物是肉质植物，而且外皮经常不规则地裂开以露出种子。在中医中，该植物用作止泻、抑制肠内出血、治疗口腔粘膜炎和扁桃腺炎、控制虫害、预防流产和防止怀孕的药物。
杏的种子是指通过从属于蔷薇科的杏树果实中去除果肉和种皮而得到的干燥种子。在中医中，杏的种子已知在治疗咳嗽和哮喘上是有效的。具体地，已经报导了杏的种子含有大量的不饱和脂肪酸，从而具有松弛和软化皮肤的优异效果，还具有优异的皮肤增白效果。
薏苡是指属于禾本科的薏苡(Job’s tears)的种子。在中医中，薏苡用于治疗腹泻、水肿、头痛和肌肉抽筋。薏苡的有效成分包括薏苡素(coixol)和谷甾醇。
三白草是属于胡椒目(order Piperales)三白草科的多年生双子叶植物，三白草的根和茎是白色的，并在泥土中向一边延伸。三白草的叶相互交叉，叶端尖，叶底呈心形。叶表面呈绿色，叶背面呈亮白色，但位于茎上部的2-3个叶片具有白色的表面。在中医中，将整个植物干燥，并用于治疗体肿、不正常排尿(abnormal urination)，也用于治疗脚气病、黄疸和肝炎。
紫苏指的是属于唇形科(family labiatae)的一年生植物的紫苏的叶子。该植物的茎呈方形，直立，高度为20-80厘米。该植物的叶片具有与日本绣线菊(Perilla japonica)的叶片相似的宽卵形，但是具有紫色和浓郁的香气，并且包括锯齿状的边缘。在中医中，整个植物(包括根)已知在治疗贫血、抑制排汗(inhibiting perspiration)、退烧(alleviating fever)、治疗支气管炎、咳嗽和哮喘、祛痰(loosening phlegm)、治疗肠胃炎、促消化、治疗眩晕、减轻身体疼痛、减轻鼻塞以及减少鼻涕上是有效的，并用作鱼中毒的药剂。
具体实施方式
本发明提供了一种皮肤外用组合物，该组合物含有草药提取物复合物作为活性成分，该草药提取物复合物含有石榴皮、杏的种子、薏苡、三白草和紫苏的中草药提取物。
在下文中，本方面将被详细描述。
本发明提供了一种皮肤外用组合物，该组合物含有通过将石榴皮、杏的种子、薏苡、三白草和紫苏以干重比为1∶2∶2∶6-8∶6-8互相混合、并提取该混合物而制备的草药提取物复合物。在本发明中，对以不同的混合比例的上述药材制备的提取物的效果进行了检测，结果，它们在以上述指定的混合比例范围内表现出最优的效果。
本发明中所用的提取溶剂可以为选自由纯化水、甲醇、乙醇、甘油、乙酸乙酯、丁二醇、丙二醇、二氯甲烷和己烷组成的组中的任意一种或者两种或三种的混合溶剂。
本发明中的所述提取物优选为通过在室温下冷浸、加热和过滤而得到的液相提取物，或者通过从液相提取物中蒸发掉所述溶剂或者使所述液相提取物喷雾干燥或冷冻干燥而得到的提取物。
根据本发明的所述皮肤外用组合物，以所述组合物的总重量为基准，含有0.0001-20重量％的所述草药提取物复合物。如果所述草药提取物复合物的含量低于0.0001重量％，则该草药提取物复合物不能够表现出增加皮肤水分、增强皮肤的屏障功能和诱导皮肤角质化细胞分化的效果；而如果所述含量超过20重量％，则所述含量的增加不会导致该组合物的效果的明显增加，并且会引起产品的触感和配方稳定性的问题。
含有所述草药提取物复合物的皮肤外用组合物可用于增加皮肤水分、增强皮肤的屏障功能和诱导皮肤角质化细胞的分化。因此，所述组合物能够有利地用作预防或改善由于不完全的表皮分化而引起的干性皮肤、过敏性皮炎、接触性皮炎和银屑癣的皮肤外用组合物。
根据本发明的所述皮肤外用组合物可以配制成化妆品组合物(如润肤液(skin lotion)、收敛洗液(astringent lotion)、乳液(milk lotion)、营养霜(nourishing cream)、按摩霜(massage cream)、精华素(essence)、眼霜(eyecream)、眼部精华素(eye essence)、清洁霜(cleansing cream)、清洁泡沫(cleansing foam)、清洁水(cleansing water)、美容涂敷剂(pack)、粉剂(powder)、润体液(body lotion)、体霜(body cream)、身体调和油(body oil)、护体精华素(body essence)、底霜(makeup base)、粉底(foundation)、染发剂(hair-dyeing agent)、洗发水(shampoo)、漂洗剂(rinse)和沐浴露(bodycleaner))或药物组合物(如油膏(ointment)、凝胶、乳剂、药膏(patch)和喷雾剂(spray))，并且对所述组合物的配方没有特殊的限制。本发明的所述组合物可以含有其配方所需要的各种基础和添加剂，这些成分的种类和含量可以被本领域技术人员容易地选择。
根据本发明的所述皮肤外用组合物的配方将进一步详细地描述。
除了所述草药提取物复合物之外，所述化妆品组合物可以含有能给本发明的主要效果提供协同作用的其它成分，只要这些成分不消弱本发明的主要效果即可。
根据本发明的所述草药提取物复合物优选以直接用于皮肤的化妆品配方的形式制备，但也可以以常规的皮肤外用配方的形式制备。
根据化妆品组合物的配方和目的，本领域技术人员可以对所述添加的成分进行适当地选择和组合。
为了提高增加皮肤水分、增强皮肤的屏障功能和诱导皮肤角质化细胞的分化的效果，所述化妆品组合物可以含有皮肤吸收促进剂。
另外，本发明的所述化妆品组合物可以额外含有通常加入到化妆品组合物中的选自由水溶性维生素、油溶性维生素、缩氨酸聚合物(polymericpeptides)、鞘脂类(sphingolipids)和海草提取物组成的组中的一种或多种。
此外，根据本发明的所述化妆品组合物除了含有所述必要成分以外，还可以按照需要含有通常加入到化妆品组合物中的添加剂，所述添加剂的例子包括：油性成分(oily components)、保湿液、润肤剂(emollients)、表面活性剂、有机和无机色素、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、酒精、着色剂、香料、血液循环促进剂、冷却剂、防汗剂(anti-perspiration agent)、纯化水等。
含有本发明的所述草药提取物复合物的药物组合物可以进一步含有通常用于药物组合物的制备中的适当的载体、赋形剂和稀释剂。
根据本发明的含有所述草药提取物复合物的药物组合物可以按照任意常规的方法配制，而没有特别的限定。所述配方的例子包括皮肤外用配方，如油膏、凝胶、乳剂、药膏或喷雾剂。
尽管根据本发明的所述配方的剂量按照患者的年龄、性别、体重和条件以及给药的方式而变化，但是所述配方优选以1.0-2.0毫升/每天1-5次的量使用一个月或更长时间。
同时，本发明的所述草药提取物复合物具有微弱的或没有毒性和副作用，因此可以长期安全地用于预防的目的。
以下，本发明将结合实施例和测试例作进一步详细的描述，但本发明的范围不只限于这些实施例。
实施例1：草药提取物复合物的制备1
将经过干燥的石榴皮、杏的种子、薏苡、三白草和紫苏以1∶2∶2∶7∶6的重量比互相混合，制备2千克的草药混合物。将该草药混合物加入到5升的80％乙醇水溶液中，在回流下提取3次，然后在15℃下浸泡1天。然后，使溶液通过滤布过滤和离心过滤，以分离成滤渣和滤出液。将分离得到的滤出液在减压下浓缩，并将浓缩物悬浮在水中，用1升的乙醚萃取5次以去除色素。水层用500毫升的1-丁醇萃取3次。将得到的全部的1-丁醇层在减压下浓缩以获得1-丁醇提取物。将该提取物溶解于少量的甲醇中，然后向其中加入大量的乙酸乙酯。将产生的沉淀干燥，从而得到200克的草药提取物复合物。
实施例2：草药提取物复合物的制备2
将经过干燥的石榴皮、杏的种子、薏苡、三白草和紫苏以1∶2∶2∶7∶7的重量比互相混合，制备2千克的草药混合物。草药提取物用与实施例1中相同的方法提取，从而得到150克的草药提取物复合物。
实施例3：草药提取物复合物的制备3
将经过干燥的石榴皮、杏的种子、薏苡、三白草和紫苏以1∶2∶2∶7∶8的重量比互相混合，制备2千克的草药混合物。草药提取物用与实施例1中相同的方法提取，从而得到170克的草药提取物复合物。
对比例1：石榴皮提取物的制备
准备2千克的干燥的石榴皮，将其加入到2升的80％乙醇水溶液中，在回流下提取3次，然后在15℃下浸泡1天。然后，使溶液通过滤布过滤和离心过滤，以分离成滤渣和滤出液。将分离得到的滤出液在减压下浓缩，并将浓缩物悬浮在水中，用1升的乙醚萃取5次以去除色素。水层用500毫升的1-丁醇萃取3次。使得到的1-丁醇层在减压下浓缩以获得1-丁醇提取物。将该提取物溶解于少量的甲醇中，然后向其中加入大量的乙酸乙酯。将产生的沉淀干燥，从而得到180克的石榴皮提取物。
对比例2：杏的种子提取物的制备
将2千克的干燥的杏的种子用与对比例1相同的方法提取，从而制得195克的杏的种子提取物。
对比例3：薏苡提取物的制备
将2千克的干燥的薏苡用与对比例1相同的方法提取，从而制得210克的薏苡提取物。
对比例4：三白草提取物的制备
将2千克的干燥的三白草用与对比例1相同的方法提取，从而制得150克的三白草提取物。
对比例5：紫苏提取物的制备
将2千克的干燥的紫苏用与对比例1相同的方法提取，从而制得130克的紫苏提取物。
测试例1：促进角质化细胞的分化的效果
为了检测实施例1至3和对比例1至5中获得的提取物的角质化细胞的分化促进效果，角质化细胞分化中产生的编码角质化包膜(comifiedenvelops)的量用以下方法中的吸光率来测定。
首先，将从新生婴儿的表皮中分离并原代培养得到的人的角质化细胞置于培养瓶中并与培养瓶的底部接触。然后，所述细胞用1ppm的如下表1中所示的每种测试物质分别处理，然后培养5天至约70-80％的汇合。在这当中，将用低钙(0.03mM)处理的组和用高钙(1.2mM)处理的组分别作为阴性对照组和阳性对照组。然后，收获培养的细胞，并用PBS(磷酸缓冲盐溶液(phophate buffered saline))洗涤，然后在其中加入1毫升含有20mM DTT(二硫苏糖醇)和2％SDS(十二烷基磺酸钠)的1mM Tris-HCl(pH为7.4)。然后，将细胞溶液进行声波处理、煮沸和离心，并将沉淀悬浮于1毫升的PBS中，测定340纳米处的吸光率。同时，取部分声波处理后的溶液，并测定用作评价细胞分化的程度的标准的蛋白质含量。测量结果如下表1所示。
表1
测试物质
角质化细胞的分化(％)
低钙(0.03mM)溶液(阴性对照组)
100
高钙(1.2mM)溶液(阳性对照组)
210
实施例1
178
实施例2
176
实施例3.
173
对比例1
111
对比例2
103
对比例3
95
对比例4
115
对比例5
127
如表1所示，可以确定，当角质化细胞用各自含有五种药材的草药提取物复合物的实施例1至3处理时，角质化细胞的分化程度明显高于当角质化细胞用各自含有每一味药材的提取物的对比例1到5处理时。
测试实施例2：在无毛小鼠的皮肤中的恢复皮肤屏障功能和增加皮肤水分的效果的测量
为了测量草药提取物复合物在恢复因皮肤伤害而受损的皮肤屏障功能上和在增加皮肤水分上的效果，进行了以下检测：
首先，每天2次将丙酮定期施用于8-10周龄的无毛小鼠的背部(查理斯河(Charles River)，日本)5天，以诱导测试动物背部的皮肤中的皮肤屏障功能的丧失。然后，用蒸发计测量背部皮肤的经表皮水丢失(TEWL)。基于该测量结果，只选择显示具有大于40克/平方米/小时的经表皮水丢失的皮肤的测试动物，并将每个含有7∶3的丙二醇和甲醇的混合物的赋形药(vehicle)(赋形药处理组)和含有1重量％的每个在实施例1至3和对比例1至5中制得的提取物的样品，以200微升每5平方厘米皮肤面积的剂量，每天2次，连续施用于所述选择的动物3天，同时以特定的时间间隔测量皮肤的TEWL。测量结果如图1所示。
从图1的结果可以看出，用实施例1至3的提取物处理的组的受损屏障比用所述媒介和对比例1-5的提取物处理的组的受损屏障恢复得快。
并且，皮肤的水含量用Corneometer(Courage Khazaka，德国)测量，测量结果如图2所示。同时，也测量对照组的皮肤的水含量。
从图2的结果可以看出，用实施例1至3的提取物处理的组中皮肤的水含量高于用对比例1至5的提取物处理的组。因此，可以确定，用草药提取物复合物的处理恢复了受损的皮肤屏障并且还增加了皮肤的水含量。
通过上述的结果，可以确定，本发明的所述草药提取物复合物具有非常优越的促进角质化细胞分化、恢复受损的皮肤屏障和增加皮肤水分的效果。
下文将描述根据本发明的所述组合物的配方实例，但是这些配方实例仅用于说明目的，并不限制本发明的范围。
配方实例1：肥皂的制备
按照下面表2所示的组合物，配方实例1的肥皂用常规的方法制得。(单位：重量％)
表2
成分
含量
实施例1的草药提取物复合物
1.00
油和脂肪
适量
氢氧化钠
适量
氯化钠
适量
香料
少量
纯化水
余量
配方实例2：洗剂(lotion)的制备
按照下面表3所示的组合物，配方实例2的洗剂用常规的方法制得。(单位：重量％)
表3
成分
含量
实施例1的草药提取物复合物
3.00
L-抗坏血酸-2-磷酸镁
1.00
水溶性胶原(1％水溶液)
1.00
柠檬酸钠
0.10
柠檬酸
0.05
甘草提取物
0.20
1，3-丁二醇
3.00
纯化水
余量
配方实例3：乳剂的制备
按照下面表4所示的组合物，配方实例3的乳剂用常规的方法制得。(单位：重量％)
表4
成分
含量
实施例1的草药提取物复合物
1.00
聚乙二醇单硬脂酸酯
2.00
自乳化甘油单硬脂酸酯
5.00
十六醇
4.00
角鲨烯
6.00
2-乙基己基丙三醇(2-ethylhexane glycerol)
6.00
鞘糖酯(sphingoglycolipid)
1.00
1，3-丁二醇
7.00
纯化水
余量
配方实例4：美容涂敷剂的制备
按照下面表5所示的组合物，配方实例4的美容涂敷剂用常规的方法制得。(单位：重量％)
表5
成分
含量
实施例1的草药提取物复合物
5.00
聚乙烯醇
13.00
L-抗坏血酸-2-磷酸镁
1.00
月桂酰羟脯氨酸(lauroylhydroxyproline)
1.00
水溶性胶原(1％水溶液)
2.00
1，3-丁二醇
3.00
乙醇
5.00
纯化水
余量
配方实例5：精华素的制备
按照下面表6所示的组合物，配方实例5的精华素用常规的方法制得。(单位：重量％)
表6
成分
含量
实施例1的草药提取物复合物
2.00
羟基亚乙基纤维素(hydroxyethylene cellulose)(2％水溶液)
12.00
黄原胶(2％水溶液)
2.00
1，3-丁二醇
6.00
浓缩甘油
4.00
玻璃酸钠(1％水溶液)
5.00
纯化水
余量