一种提高苏云金杆菌毒力效价的助剂.pdf

摘要
申请专利号：	CN200910111748.8	申请日：	2009.05.13
公开号：	CN101887056A	公开日：	2010.11.17
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):G01N 33/00申请公布日:20101117\|\|\|文件的公告送达IPC(主分类):G01N 33/00收件人:黄勤清文件名称:视为撤回通知书\|\|\|公开
IPC分类号：	G01N33/00; A01N25/30	主分类号：	G01N33/00
申请人：	福建农业职业技术学院
发明人：	黄勤清
地址：	350007 福建省福州市仓山区上三路190号福建农业职业技术学院
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内容摘要

本发明涉及一种生物农药助剂，开发一种生物农药的新剂型，助剂是关键因素，良好助剂可改善制剂的理化性质提高使用效果，提高杀虫毒力。实验表明，当添加助剂浓度增加时，害虫死亡率随之增加，助剂浓度与供试虫死亡率呈线性正相关。本发明筛选的助剂BCM-101与Bt原粉配合使用增效最好，增效比达1.7214；助剂JFC次之，增效比为1.3443。本发明名称为一种提高苏云金杆菌毒力效价的助剂。

权利要求书

1.一种提高苏云金杆菌毒力效价助剂的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将Bt原粉和各种助剂分别配制成混粉过60目筛后分装入小袋并编码，所述助剂与混粉的重量比为助剂/混粉＝5％；(2)增效测定分别取不同助剂配制成的混粉300mg，用200ml自来水配制成药液，将供试小白菜叶片于药液中浸10sec，取出后立即用滤纸吸干叶片上的药液，用于饲养2龄棉铃虫幼虫，24h、48h检查死亡虫口数，计算死亡率；(3)对死亡率、LC₅₀及效价统计，筛选能显著提高杀虫毒力效价的助剂。2.根据权利要求1所述的一种提高苏云金杆菌毒力效价助剂的筛选方法，其特征在于当添加助剂浓度增加时，害虫死亡率随之增加，助剂浓度与供试虫死亡率呈线性正相关。3.根据权利要求1或2所述的一种提高苏云金杆菌毒力效价助剂的筛选方法，其特征在于在Bt原粉中添加助剂BCM-101的杀虫毒力效价最佳。

说明书

一种提高苏云金杆菌毒力效价的助剂

技术领域本发明涉及一种生物农药助剂，特别是提高苏云金杆菌毒力效价的助剂。

背景技术农药助剂(pesticide adjuvants)，又称农药辅助剂，是农药制剂加工或使用中用于改善制剂理化性质的辅助物质。助剂本身无生物活性，但是通过增加农药在生物体表面的滞留量、延长滞留时间和提高对生物体的穿透能力等，能增强防治效果。同时，助剂还有利于提高药效、降低成本、延长药剂货架寿命、保护天敌、减少环境污染等，因此是当前新农药开发与应用的研究热点。

国内外许多学者研究如何提高Bt的杀虫效果，其中包括对Bt进行细胞或者基因的改造、助剂的筛选、优化组合以及对剂型加工技术的改进等等。埃及学者Salarma及其同事就有关化学添加剂对Bt的协同作用进行了研究报道，所有的化学添加剂包括无机盐、氨基酸、有机酸蛋白质溶解剂等。在国内的研究中一般是通过在Bt制剂中直接加入一些添加物来提高毒力。孙明等在Bt制剂中加入有助于伴孢晶体溶解的介质以提高毒力；袁哲明等在Bt制剂中加入取食刺激物对Bt有明显的增效作用；徐建敏等研究过部分化学添加剂对Bt-ICPs杀斜纹夜蛾效果的影响；温志强等研究了7种学试剂对Bt杀小菜蛾效果的影响；王明道等报道了9种化学添加剂对Bt杀棉铃虫效果的影响；许文耀研究了11种添加物对Bt制剂杀鳞翅目害虫的增效作用；邱思鑫等从82种添加剂中筛选出12种有增效作用的物质进行不同浓度对Bt菌株杀虫效果的影响。

在Bt制剂生产中，产品的杀虫活性是衡量制剂质量的主要标准。而由于其活性和稳定性受多种环境因素影响，其作用方式又属于胃毒作用，导致了Bt制剂存在见效慢、防效不稳定、残效期短等问题。为了克服和改善Bt制剂的不足，近年来，对苏云金芽孢杆菌的增效途径探索渐成研究热点。增效途径主要包括四个方面：1)大量分离筛选更有效的Bt株系；2)对现有高毒菌株进行遗传改良，提高其杀虫活性，扩大杀虫谱；3)改进Bt剂型加工技术，改善制剂的性能，增强制剂杀虫效果和持效期，如制备粉剂、悬浮剂、油剂、乳剂、片剂、ES、淀粉胶囊剂等；4)大力开发各种增效剂和增效因子，提高现有菌株的杀虫活性。其中开发新剂型是重要手段之一。而开发一种新剂型，助剂是关键因素，良好助剂可改善制剂的理化性质提高使用效果，提高杀虫毒力。本发明将引自中国农业大学农药研究室的农药助剂，筛选出高毒力助剂，直接为生产服务。

发明内容本发明的目的是探索提高苏云金杆菌毒力效价助剂的筛选方法，筛选出能有效提高苏云金杆菌毒力效价的助剂，直接服务于生产。

本发明的目的是通过以下方法实现的。

本发明的一种提高苏云金杆菌毒力效价的助剂，其特征在于助剂的筛选方法如下：

1、将Bt原粉和各种助剂分别配制成混粉过60目筛后分装入小袋并编码，所述助剂与混粉的重量比为助剂/混粉＝5％。

2、增效测定分别取不同助剂配制成的混粉300mg，用200ml自来水配制成药液，将供试小白菜叶片于药液中浸10sec，取出后立即用滤纸吸干叶片上的药液，用于饲养2龄棉铃虫幼虫，24h、48h检查死亡虫口数，计算死亡率。

3、对死亡率、LC₅₀及效价统计，筛选能显著提高Bt杀虫毒力效价的助剂。

通过助剂对Bt杀虫制剂的增效实验，表明添加适量的助剂，能显著提高Bt杀虫制剂的毒力。

如表1(药剂浓度与试虫死亡率的关系)所示，当添加助剂浓度增加时，害虫死亡率随之增加，助剂浓度与供试虫死亡率呈线性正相关(备注：050433P为原粉代号)。

表1药剂浓度与试虫死亡率的关系

从表1的数据中，通过求毒力回归式y＝a+bx、LC₅₀、回归系数及增效比，可以得出BCM-101增效最好，增效比达1.7214，JFC次之，增效比达到1.3443；其他助剂均表现相加作用(见表2)。

表2Bt加入助剂后的毒力测定及增效效果测定

具体实施方式为了充分公开本发明的提高苏云金杆菌毒力效价助剂的筛选方法，以下结合实施例加以说明。

实施例一：一种提高苏云金杆菌毒力效价的助剂，筛选方法如下：

1.1供试药剂和材料

32000IU/mg Bt原粉、50000IU/mg Bt原粉、助剂AP、标准品B6效价15000IU/mg，均由浦城绿安生物农药公司提供；助剂JFC、BCM-101、6501、SD-1227A、B-10250由中国农业大学农药研究室提供。棉铃虫幼虫(2龄)：Heliotis armigera Hubner由浦城绿安生物农药公司提供。

1.2材料处理(按助剂/混粉＝5％配制)

取6个内膜袋分别写上6种助剂的代号：助剂AP、6501、SD-1227A、BCM-101、B-10250、JFC。将天平调零，称取19.0g Bt原粉装入内膜袋，用1ml的移液枪吸入相应助剂(与内膜袋代号一致)，将助剂均匀滴在原粉中，直到天平左右平衡(备注：原粉+助剂＝20.0g)。

观察助剂的表面性状及其与原粉的混配情况。将内膜袋袋口握紧，用手把混粉搓匀，不留下小颗粒。将搓匀的混粉倒入60目筛子中，观察混粉的性状以及能否全部通过60目筛子并装入原来的内膜袋；若筛上有粗头无法过筛，则另取内膜袋装好，以便后面的理化性质检验。将6种混粉配制好后，即可准备进行理化性的检测。(备注：混粉指Bt原粉与助剂的混合物)。

1.2增效试验方法

(1)取7只带玻璃珠的锥形瓶做上标记(1#、2#......7#)；往1#瓶加入自来水200ml和600mg标准品混匀备用；往2#～7#瓶分别加入200ml自来水和300mg的32000IU/mgBt原粉，再分别往2#～7#锥形瓶加入100μl的助剂，它们分别是(BCM-101、JFC、6501、B-10250、SD-1227A)；将所有锥形瓶放置摇床摇30min；将下摇床的锥形瓶药液以1.5倍稀释成5个浓度；每个浓度用60ml稀释液浸叶片。

(2)取差不多大小的小白菜叶片(经过自来水浸泡、冲洗，并自然晾干的叶片)分别浸入不同浓度药液中浸10sec，取出后立即用滤纸吸干叶片上多余的药液，并放在搪瓷盘中自然晾干，最后置于小烧杯中，每个烧杯放入2片叶子。

(3)挑取出2龄棉铃虫幼虫放置于小烧杯中，烧杯内放一小团浸过自来水棉花球，每个处理用10头供试虫，用双层纱布捆绑好，在室温中，相对湿度60～80％的条件下饲养。

(4)24h、48h检查死亡虫口数，计算死亡率。每个浓度重复4次。

(5)死亡率、LC₅₀及效价统计

以昆虫受试浓度的对数为自变量x，以死亡率机率值为因变量y，采用最小二乘法，在计算机上求出毒力回归式y＝a+bx、LC₅₀、回归系数和统计各处理的效价等。待测品效价IU/mg＝标准品LC₅₀/待测品LC₅₀×标准品效价。