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1、10申请公布号CN101953786A43申请公布日20110126CN101953786ACN101953786A21申请号200910256501522申请日20091214A61K9/127200601A61K31/7064200601A61K47/28200601A61P35/0220060171申请人青岛大学地址266071山东省青岛市宁夏路308号72发明人王继波石振燕张丽54发明名称3,5环胞苷二月桂酸酯脂质体及其制备方法57摘要本发明公开了一种可用于治疗白血病、恶性淋巴瘤及某些实体瘤的新型环胞苷衍生物的脂质体制剂及其制备方法。本发明属于医药技术领域。发明人通过对环胞苷的分子结构。
2、进行改造，得到环胞苷的酯化衍生物3，5环胞苷二月桂酸酯，并采用反相蒸发法，由3，5环胞苷二月桂酸酯与作为辅料的天然卵磷脂、胆固醇、稳定剂二硬脂酰基磷脂酰胆碱制成脂质体。本发明制备的脂质体是一种独创的新型环胞苷衍生物缓释靶向制剂，不仅包封率高86824，而且具有粒度分布均匀、稳定性高的特点，提高了药物的疗效，克服了3，5环胞苷二月桂酸酯因水溶性差造成的给药难和吸收难的缺点。本发明的制备工艺简单，主要工艺参数易于控制，操作条件较温和，便于工业化生产。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图2页CN101953786A1/1页213，5环胞苷二月桂酸。
3、酯脂质体，其特征在于含有环胞苷二月桂酸酯、以及作为辅料的天然卵磷脂、胆固醇及稳定剂。2根据权利要求1所述的3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体，其特征在于膜材卵磷脂与胆固醇的摩尔比为11。3根据权利要求1所述的3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体，其特征在于膜材与药物的摩尔比为21。4根据权利要求1所述的3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体，其特征在于稳定剂为二硬脂酰基磷脂酰胆碱，与卵磷脂的摩尔比为051。53，5环胞苷二月桂酸酯脂质体的制备方法，包括如下步骤将蛋黄卵磷脂、胆固醇及二硬脂酰基磷脂酰胆碱按1105的摩尔比溶于适量氯仿中，将3，5环胞苷二月桂酸酯按膜材与药物摩尔比为21的量溶入上述氯仿混合液中，在45氮气。
4、气氛中减压旋转蒸发除去氯仿，在鸡心瓶内壁上形成脂膜；用无水乙醚溶解步骤制得的脂膜，再加入PH值为715的磷酸缓冲溶液，乙醚与缓冲溶液的体积比为31，超声分散20MIN，制得O/W型乳浊液；将步骤得到的O/W型乳浊液旋转蒸发成胶状，再加入所需量的PH值715的磷酸缓冲溶液，震荡5MIN，于2530旋转蒸发10MIN，制得乳白色的3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体；将步骤制得的脂质体通过SEPHADEXG75柱，以PH值715的磷酸缓冲溶液为洗脱液洗脱，除去未包封的3，5环胞苷二月桂酸酯；6根据权利要求5所述的3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体的制备方法，其特征在于采用反相蒸发法；运用SEPHADEXG75柱。
5、层析、以PH值715的磷酸缓冲溶液为洗脱液、洗脱除去未包封药物，得到本发明的产品。权利要求书CN101953786A1/3页33，5环胞苷二月桂酸酯脂质体及其制备方法技术领域0001本发明属于医药技术领域。确切地说它是一种3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体及其制备方法。背景技术0002环胞苷是临床上常用的抗白血病药物，但是，环胞苷易被肝脏中的胞嘧啶脱氨酶脱氨降解而失去抗癌活性。为了维持有效的血药浓度，必须对患者连续多次地给药，造成骨髓抑制和病人消瘦。为提高环胞苷的疗效，克服其在体内易脱氨降解的缺点，发明人对环胞苷的分子结构进行了改造，在其戊糖环上连接了两条月桂酸脂肪链，合成了3，5环胞苷二月桂酸酯，。
6、其分子结构见说明书附图1。0003实验证明，3，5环胞苷二月桂酸酯的抗癌活性高于其母体药物环胞苷。由于在环胞苷的戊糖环的3，5位上连接了两条月桂酸脂肪链，所以3，5环胞苷二月桂酸酯分子的水溶性差，造成了给药难和吸收难的问题。发明人利用脂质体作为药物载体，自主研制了3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体，并对其显微形态、包封率、粒度分布及药效学进行了研究。结果表明，脂质体颗粒呈球型，粒度分布均匀，包封率高，抗癌活性比游离的3，5环胞苷二月桂酸酯提高了168倍。发明内容0004本发明的目的是提供3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体及其制备方法，以改善3，5环胞苷二月桂酸酯给药难和吸收难的缺陷，同时提高药物的疗效。由。
7、于脂质体本身对人体无毒，无免疫原性，适合于生物体内降解，在血液中稳定。通过脂质体的包裹技术，可以保护被包裹的3，5环胞苷二月桂酸酯在血液中不被稀释和降解，提高药物的生物利用度，实施高效安全的程序精确释药模式。0005本发明是由3，5环胞苷二月桂酸酯与作为辅料的天然卵磷脂、胆固醇、稳定剂制备而成的脂质体。制备方法采用反相蒸发法。制备脂质体所采用的磷脂均是天然卵磷脂蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、猪脑卵磷脂。其组成包括3，5环胞苷二月桂酸酯、天然卵磷脂、胆固醇及稳定剂。其中卵磷脂与胆固醇的摩尔比为11，膜材与3，5环胞苷二月桂酸酯的摩尔比为21，稳定剂二硬脂酰基磷脂酰胆碱与磷脂的比例为051。0006本发。
8、明的优点是合成了3，5环胞苷二月桂酸酯，并发展了3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体释药系统，改善了3，5环胞苷二月桂酸酯因水溶性差导致的给药难和吸收难的缺陷，同时提高了药物的疗效。本发明制备的脂质体具有颗粒呈球型，粒度分布均匀，包封率高的特点。附图说明0007本发明说明书附图共4幅，图1为3，5环胞苷二月桂酸酯的分子结构。图2为3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体的透射电镜照片。图3为3，5环胞苷二月桂酸酯脂质说明书CN101953786A2/3页4体分别在室温及37条件下经72小时温育后的粒度分布图。图4为空白脂质体分别在室温及37条件下经72小时温育后的粒度分布图。具体实施方式0008本发明的具体制备方。
9、法，由以下实施实例举例说明。但本发明的的保护范围不局限于此。0009实施例0010一制备0011采用反相蒸发法制备3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体。天然卵磷脂经氧化铝柱层析分离得纯品，将卵磷脂胆固醇二硬脂酰基磷脂酰胆碱按1105的摩尔比置于鸡心瓶中，加入适量的氯仿使其溶解。准确称取所需量的3，5环胞苷二月桂酸酯，加入同一鸡心瓶中使其溶解，45氮气气氛中减压旋转蒸发除去氯仿，在鸡心瓶内壁上形成干膜，将乙醚及PH值为715的磷酸缓冲溶液按31的体积比加入先加入乙醚使脂膜溶解，然后再加入磷酸盐缓冲溶液，经超声波清洗仪20MIN的超声分散后，将得到的混合物在旋转蒸发仪上旋转蒸发成胶状除去乙醚，再加入所需量。
10、的磷酸缓冲溶液震荡5MIN，在2530的条件下继续在旋转蒸发仪上旋转蒸发10MIN彻底除去有机溶剂，即制得乳白色的3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体悬浮液。最后充氮气至乙醚味消失。未包封的3，5环胞苷二月桂酸酯通过SEPHADEXG75葡聚糖凝胶G75柱30CM15CM以磷酸缓冲溶液为洗脱液洗脱除去。0012二显微形态鉴定00133，5环胞苷二月桂酸酯脂质体样品用磷钨酸溶液P2O524WO344H2O1染色，用JEM1200EX透射电镜拍照。附图1显示，脂质体颗粒呈球型。0014三包封率的测定0015用RPHPLC测定3，5环胞苷二月桂酸酯标准系列的色谱图，通过峰面积与浓度线性回归得标准曲线。用SE。
11、PHADEXG75柱层析、以PH值715的磷酸缓冲溶液为洗脱液、洗脱除去未包封药物。包封药物的量通过标准曲线求得。含量测定的重现性为10026，SD076，CV088，N4。测得3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体的包封率为86824。0016四粒径测定0017用库尔特TAII型计数器测定3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体及空白脂质体在室温及经72小时37温育后的粒度分布，并用CARSTENSEN公式计算平均粒径及温育前后平均粒径的变化。00180019式中DN为数均粒径；NI为一定粒径粒子的百分比；DI为与NI对应的粒径。0020附图2显示，3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体粒度分布均匀。经72小时37温育后，。
12、平均粒径从021M增加到026M，仅增加了005M。附图3显示，空白脂质体的平均粒径增加了013M。说明3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体的聚结稳定性较好。0021五药效学实验说明书CN101953786A3/3页50022通过比较3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体与3，5环胞苷二月桂酸酯对小鼠腹水型肝癌的抑制率评估两者的抗癌活性。荷瘤小鼠由上海BIOSIS生物技术有限公司购买。首先将艾氏腹水用生理盐水稀释13V/V，瑞士雌性小鼠2225G按8106单位/鼠的量通过腹腔注射接种，接种后的小鼠随机分为4组，10只一组。0023接种1天后给药组和对照组通过腹腔注射给药，连续给药3次，每隔1天1次。记录每只小鼠。
13、在30天内的存活天数，计算每一组的平均存活天数。按下式计算抑制率0024IR100MSD1MSD2/MSD20025式中IR为抑制率，MSD1为给药组的平均存活天数，MSD2为对照组的平均存活天数。药效学实验结果列入表1。0026表13，5环胞苷二月桂酸酯与3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体的抗癌活性00270028CMC羧甲基纤维素钠0029表1数据显示，3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体与游离的3，5环胞苷二月桂酸酯的抗癌活性有显著性差异。经成组T检验，T65，P001。3，5环胞苷二月桂酸酯脂质体对小鼠腹水型肝癌的抑制率为8491，而游离3，5环胞苷二月桂酸酯对小鼠腹水型肝癌的抑制率为3159，前者的抑制率比后者高168倍。说明书CN101953786A1/2页6图1图2说明书附图CN101953786A2/2页7图3室温；37温育72小时。N图4室温；37温育72小时。N说明书附图。