氯化血红素及其制备方法和补血药物组合物 技术领域 本发明属于生化提取技术领域， 特别涉及一种氯化血红素及其制备方法和补血药 物组合物。
背景技术 铁缺乏症和缺铁性贫血是最常见的营养素缺乏症， 至今仍是世界各国普遍而重要 的健康问题， 尤其是发展中国家， 其高危人群为妇女、 婴幼儿和儿童 ； 目前， 全世界约 11.2 亿人患缺铁性贫血， 有 21.5 亿人铁缺乏。
复旦大学各附属医院统计的上海市铁缺乏和缺铁性贫血状况如下 ：
缺铁性贫血 育龄妇女 妊娠三个月以上妇女 10 岁～ 17 岁青少年 6 个月～ 2 岁婴幼儿
铁缺乏 43.32％ 66.27％ 13.17％ 75％～ 82.5％11.39％ 19.28％ 9.84％ 33.8％～ 45.7％以往改善缺铁性贫血所用的补血产品都是补充离子铁， 包括无机铁如硫酸亚铁和 有机铁如乳酸亚铁等。 铁在胃肠道以亚铁离子形式被吸收， 然而离子铁吸收差， 并且在体内 易被氧化而产生大量自由基， 伤害机体组织器官， 有一定的毒副作用。 发明内容 因此， 本发明要解决的技术问题就是针对现有的补血产品都是补充离子铁， 存在 离子铁吸收差， 有毒副作用的缺陷， 提供一种新的补血产品， 其吸收率高， 不引起蓄积中毒， 安全性好。
本发明人首先采用生物和酶工程方法， 选择最佳浓度、 配方比例及消化时间， 从动 物新鲜的血红细胞中提取氯化血红素 (Hemin)。然后将其作为 ( 主要 ) 功效成分制成补血 的药物制剂。 通过反复试验表明， 该药物制剂可达到更为经济合理的生产目标， 工艺稳定性 也高。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是 ： 一种氯化血红素的制备方法， 包 括以下步骤 ：
(1) 将抗凝新鲜猪血和含 0.5 ～ 2％ (wt)NaCl 的冰醋酸混合， 在 100 ～ 130℃消化 1 ～ 8 小时 ；
(2) 将步骤 (1) 消化后所得流体物和醋酸溶液混合均匀， 调节 pH 值至 3.5 ～ 4.5， 加入蛋白酶进行酶解 ；
(3) 将步骤 (2) 酶解后的反应液过滤， 分离出固体即得氯化血红素。
本发明步骤 (1) 中， 所述的含 0.5 ～ 2％ (wt)NaCl 的冰醋酸较佳的是含 1％ (wt) NaCl 的冰醋酸。所述的抗凝新鲜猪血是指新鲜猪血经抗凝处理所得的产品， 一般按现有技 术往新鲜猪血加入抗凝剂即可。 抗凝新鲜猪血和含 0.1 ～ 5％ (wt)NaCl 的冰醋酸的体积比 是 1 ∶ 3 ～ 1 ∶ 7， 较佳的是 1 ∶ 5。消化条件较佳的是 115℃， 4 小时。
步骤 (2) 中， 消化后所得流体物和醋酸溶液的体积比是 1 ∶ 4 ～ 1 ∶ 8， 较佳的是 1 ∶ 6。醋酸溶液的浓度是 10 ～ 30(wt)％。所述的蛋白酶可以是常规的蛋白质水解酶， 较 佳的是 537 蛋白酶。537 蛋白酶是市售商品， 有较强的水解能力， 能将大分子的蛋白质水解 成氨基酸等产物。酶解条件采用各蛋白酶的最佳反应条件。较佳的， 蛋白酶的添加量是占 反应溶液的 0.1 ～ 1(wt) ％， 较佳的是 0.5(wt) ％， 酶解 50 ～ 70 ℃， 36 ～ 72 小时， 较佳的 60℃， 48 小时。酶解较佳的在搅拌状态下进行， 较佳的转速 60 转 / 分。
步骤 (3) 中， 分离出固体按常规进行烘干， 一般是颗粒物。烘干的条件同常规， 较 佳的是于 121℃烘烤 2 小时以上， 即可得恒重的产品， 即得氯化血红素。
因此， 本发明还提供上述方法制备的氯化血红素。该氯化血红素与人体血红蛋白 (Hb) 中的血红素同源。纯度可高达 90％以上， 可以大大增强血红素的功效性和利用率。 本发明还提供一种补血药物组合物， 包括活性成分和载体， 其中， 所述的活性成分 至少包括如上所述的氯化血红素。当然也可以还包括其他的补血活性成分。所述的氯化血 红素的用量是贫血的治疗或预防使用量。所述的载体是常规的药学上使用的载体， 如填充 剂、 稀释剂、 润滑剂、 矫味剂等。
较佳的所述的补血药物组合物是片剂， 其包括以下质量百分比的各组分 ： 3 ～ 8％ 氯化血红素， 2 ～ 5％葡萄糖酸锌， 2 ～ 5％维生素 C， 30 ～ 70％乳糖， 0.5 ～ 3.8％微晶纤维 素， 20 ～ 50％蔗糖， 0.1 ～ 1％硬脂酸镁和 0.1 ～ 0.5％包衣粉。
较佳的， 所述的补血药物组合物的组成如下 ： 4.5％氯化血红素， 3.75％葡萄糖酸 锌， 3.75％维生素 C， 50％乳糖， 2％微晶纤维素， 35.3％蔗糖， 0.5％硬脂酸镁和 0.2％包衣 粉， 百分比是质量百分比。
本发明所用的原料或试剂除特别说明之外， 均市售可得。
相比于现有技术， 本发明的有益效果如下 ： 本发明采用生物提取技术制备氯化血 红素， 该生物提取技术可大规模、 无污染的得到高纯度的氯化血红素。 氯化血红素是治疗铁 缺乏症和缺铁性贫血最有效的原料。将为新一代高效补血产品的开发带进一个高安全、 高 吸收的 “高纯度生物铁时代” 新的时代。
附图说明
以下结合附图说明本发明的特征和有益效果。
图 1 是工艺流程图。 具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明， 但本发明并不受其限制。下列实施例中未注 明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件， 或按照制造厂商所建议的条件。 本发明中所述 的百分比若无特别说明， 是指质量百分比。实施例 1 氯化血红素的制备
1. 消化 ： 将抗凝新鲜猪血与含 1(wt)％ NaCl 的冰醋酸按体积比 1 ∶ 5 混合于反应 釜中， 115℃消化 4 小时。
2. 酶解 ： 将消化后所得流体物及 20(wt) ％醋酸溶液按体积比 1 ∶ 6 投入反应 釜中， 开启搅拌， 转速要求 60 转 / 分， 搅拌 30min 后， 将反应液 pH 值调节至 3.5。再按 0.5(wt)％比例加入 537 蛋白酶 ( 购自江门市亚东生物化工有限公司 )( 相当于 500IU/ml 反应液 )， 在 60℃下搅拌 48 小时。然后出料。
3. 过滤、 分离 ： 将酶解后的反应液先用压滤机过滤， 然后用分离机进行分离， 转速 要求 7600 转 / 分。分离后取固体颗粒物。
4. 干燥 ： 将固体颗粒物于 121℃烘烤 2 小时以上至恒重， 即得氯化血红素。氯化血 红素纯度是 92％。
实施例 2 氯化血红素的制备
1. 消化 ： 将抗凝新鲜猪血与含 0.5(wt)％ NaCl 的冰醋酸按体积比 1 ∶ 7 混合于反 应釜中， 100℃消化 8 小时。
2. 酶解 ： 将消化后所得流体物及 30(wt) ％醋酸溶液按体积比 1 ∶ 8 投入反应 釜中， 开启搅拌， 转速要求 60 转 / 分， 搅拌 30min 后， 将反应液 pH 值调节至 4.5。再按 0.1(wt)％比例加入 537 蛋白酶， 在 50℃下搅拌 72 小时。然后出料。
3. 过滤、 分离 ： 将酶解后的反应液先用压滤机过滤， 然后用分离机进行分离， 转速 要求 7600 转 / 分。分离后取固体颗粒物。
4. 干燥 ： 将固体颗粒物于 121℃烘烤 2 小时以上至恒重， 即得氯化血红素。氯化血 红素纯度是 94％。
实施例 3 氯化血红素的制备
1. 消化 ： 将抗凝新鲜猪血与含 2(wt)％ NaCl 的冰醋酸按体积比 1 ∶ 3 混合于反应 釜中， 130℃消化 1 小时。
2. 酶解 ： 将消化后所得流体物及 10(wt)％醋酸溶液按体积比 1 ∶ 4 投入反应釜 中， 开启搅拌， 转速要求 60 转 / 分， 搅拌 30min 后， 将反应液 pH 值调节至 4.0。 再按 1(wt)％ 比例加入 537 蛋白酶， 在 70℃下搅拌 36 小时。然后出料。
3. 过滤、 分离 ： 将酶解后的反应液先用压滤机过滤， 然后用分离机进行分离， 转速 要求 7600 转 / 分。分离后取固体颗粒物。
4. 干燥 ： 将固体颗粒物于 121℃烘烤 2 小时以上至恒重， 即得氯化血红素。氯化血 红素纯度是 90％。
实施例 4 氯化血红素药物制剂的制备
原料配方 ：
原料名称 氯化血红素 葡萄糖酸锌质量百分比 4.5％ 3.75％5102051392 A CN 102051398说维生素 C 乳糖 微晶纤维素 蔗糖 硬脂酸镁 包衣粉明书3.75％ 50％ 2％ 35.3％ 0.5％ 0.2％4/6 页生产工艺 ：
1. 粉碎过筛 ： 按配方， 将包含实施例 1 所得的氯化血红素等颗粒晶体形原料粉碎， 并过 100 目筛。
2. 制粒 ： 将上述所有原料进行混匀后， 加 7％的纯化水， 制软材， 用高效湿发制粒 机制粒成 20 目颗粒 ； 湿粒制成后， 放入干燥箱， 干燥温度 60-70℃， 二小时后即得干颗粒 ； 然 后用 20 目筛对干颗粒整粒。
3. 压片 ： 往上述干颗粒中加入硬脂酸镁， 充分搅匀， 用旋转式压片机压片。
4. 包衣 ： 将压制好的素片用高效薄膜包衣机包衣， 包衣过程应控制片床温度为 2 55±5℃， 雾化压力为 3.5 ～ 4.5kgf/cm ， 转速为 5 ～ 6 转 / 分钟， 喷液量为 150 ～ 200g/min。
5. 内包装 ： 将片子通过片剂包装机装入塑料瓶内， 或通过铝塑包装机包装。
6. 外包装 ： 按包装规格要求进行盒装， 最后出成品。
上述工艺流程图见图 1。
实施例 5 氯化血红素药物制剂的制备
原料配方 ：
原料名称 氯化血红素 葡萄糖酸锌 维生素 C 乳糖 微晶纤维素 蔗糖 硬脂酸镁质量百分比 6.00％ 5.00％ 2.00％ 45.00％ 0.50％ 40.00％ 1.00％6102051392 A CN 102051398说包衣粉明书0.50％5/6 页
生产工艺同实施例 1。 实施例 6 氯化血红素药物制剂的制备 原料配方 ：原料名称 氯化血红素 质量百分比 8.00％
葡萄糖酸锌 维生素 C 乳糖 微晶纤维素 蔗糖 硬脂酸镁 包衣粉
3.00％ 5.00％ 30.00％ 3.80％ 50.00％ 0.10％ 0.10％生产工艺同实施例 1。 实施例 7 氯化血红素药物制剂的制备 原料配方 ：原料名称 氯化血红素 葡萄糖酸锌 维生素 C 乳糖 微晶纤维素 蔗糖 硬脂酸镁 质量百分比 3.00％ 2.00％ 3.00％ 70.00％ 1.00％ 20.00％ 0.70％7102051392 A CN 102051398说包衣粉明书0.30％6/6 页生产工艺同实施例 1。
下面通过试验例来进一步说明本发明的有益效果。
试验例 1
1. 产品功效
经上海医科大学食品毒理与保健食品功能检测中心检测， 结果认为实施例 4 所制 片剂具有改善营养性贫血的作用。
2. 产品安全性
经上海市预防医学研究院按 GB15193 有关规定对实施例 4 所制片剂进行安全毒理 学评价试验， 结果认为实施例所制属无毒级物质。
3. 吸收率试验
按照中国药典有关铁吸收率的试验标准， 将实施例 4 ～ 7 制备的氯化血红素片剂 和市场上常规的一、 二代补血产品进行比较， 测定吸收率及对胃肠道的刺激反应。 结果见表 1 所示。
表 1. 三代补血成分升级表