高纯度红景天甙的制备方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN02100489.7	申请日：	2002.02.06
公开号：	CN1365980A	公开日：	2002.08.28
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回\|\|\|公开\|\|\|实质审查的生效
IPC分类号：	C07H15/18; C07H1/08	主分类号：	C07H15/18; C07H1/08
申请人：	北京天纯维通生物技术有限公司;
发明人：	韩笑; 张天佑
地址：	100035北京市西城区西直门南大街16号(新技术所)
优先权：
专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明涉及的是一种采用高速逆流色谱法从天然植物红景天中分离制备高纯度的红景天甙的方法,其特点是:采用高速逆流色谱法从天然植物红景天浸提液中经过两次纯化得到98%纯度的红景天甙,本法适用于以各种含红景天甙的天然植物、天然植物的提取物为原料制备高纯度的红景天甙,适用于采用各种型号的逆流色谱仪分离制备红景天甙,用高速逆流色谱法制备红景天甙可连续,高效、快速的液液分配色谱分离,具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。

权利要求书

1.一种高纯度红景天甙的制备方法，其特征在于：它是采用高速逆流色谱法制
备的，其基本工艺路线是：
(1)用70％丙酮-水溶液浸提红景天，浸提液蒸去丙酮后，得到粗提取物；
(2)红景天甙的初步纯化：将粗提取物用高速逆流色谱分离法进行初步分
离，收集含红景天甙的组分，蒸干溶剂；
(3)红景天甙的精制：再将(2)所得组分用高速逆流色谱分离法制得高纯
度的红景天甙纯品。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度红景天甙的制备方法，其特征在于：
高速逆流色谱法对红景天甙进行初步纯化，可选用的溶剂体系由三个组分构
成，A组分可选用乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯类，
B组分可选用正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇，C组分为水，优选乙酸乙酯-
正丁醇-水体系，A、B、C的体积比为0.5-2∶2-10∶2-10。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度红景天甙的制备方法，其特征在于：
高速逆流色谱法对红景天甙进行初步纯化，溶剂体系由四个组分构成，A组分
可选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯类，B、C组分
可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇
或脂肪酮，D组分为水，优选乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水体系，A、B、C、D的
体积比为0.5-5∶10-100∶0.5-5∶10-100。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度红景天甙的制备方法，其特征在于：
高速逆流色谱法对红景天甙进行初步纯化，溶剂体系由两个组分构成，A组分
可选自正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇，B组分为水，优选正丁醇和水，其
体积比为1-100∶1-100。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度红景天甙的制备方法，其特征在于：
高速逆流色谱法对红景天甙精制溶剂体系由三个组分构成，A组分可选自氯仿、
二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪
醇或脂肪酮，C组分为水，优选氯仿-甲醇-水体系，A、B、C的体积比为2-15
∶2-25∶1-15。
6.根据权利要求1所述的一种高纯度红景天甙的制备方法，其特征在于：
高速逆流色谱法对红景天甙精制溶剂体系由四个组分构成，A组分可选自氯仿、
二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B、C组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、
丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮，D组分为水，优选氯仿-异
丙醇-甲醇-水体系，A、B、C、D的体积比为2-10∶0.5-5∶2-10∶1-10。
7.根据权利要求1所述的一种高纯度红景天甙的制备方法，其特征在于：
高速逆流色谱法对红景天甙精制溶剂体系由五个组分构成，A、C组分可选自氯
仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B、D组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异
丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮，E组分为水，优选
二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水体系，A、B、C、D、E的体积比为0.5-2∶0.5
-2∶1-10∶2-10∶1-10。

说明书

高纯度红景天甙的制备方法

技术领域：

本发明涉及一种从天然植物红景天中分离制备高纯度的红景天甙
(Salidroside)的方法。

背景技术：

景天科红景天属(Rhodiola L.)植物为多年生草本或亚灌木植物，全世界
的红景天属约90余种，我国约有近80种，大部分生于海拔3500至5000米的
石灰岩、花岗岩、山地水川或山谷岩石上。红景天以全草入药，有清肺止咳、
止血、止带的功效。古代亦用作滋补强壮药。近年来，人们发现红景天不但有
人参、刺五加的滋补强壮作用，而且在某些方面更优于这两种药物，如人参兴
奋作用强，刺五加可引起便秘，而红景天无上述副作用。按照国家卫生部颁布
的《食品安全性毒理学评价程序》，中国预防医学科学院、北京医科大学、首都
医学院进行了食品安全性毒理学试验，结果证明红景天无毒、无致突变和致畸
变作用。药理试验证明红景天有如下主要功效：(1)抗衰老作用：给14月龄的
衰老早期小鼠灌服红景天粉1-2g/kg，每日1次，连续6周，可明显降低血、肝
和睾丸中的过氧化脂质(LPO)和睾丸的脂褐素(LPF)含量，其作用强度优于
人参；(2)对免疫系统的影响：红景天可提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。红
景天多糖对正常小鼠外周血白细胞数及胸腺重量无明显影响，但能促进正常小
鼠脾脏淋细胞转化及提高NK细胞杀伤活性。(3)对心血管的影响：在体蛙心
实验证明皮下注射高山红景天甙200mg/ml，可使蛙心收缩幅度明显增大，比给
药前增加128.6％，说明红景天甙有明显的强心作用。(4)对血液系统的影响：
红景天粗提物对血虚症小鼠的造血祖细胞及外周血各血液成分有刺激增生、保
护和修复功能。(5)对内分泌系统的影响：红景天能增强家兔肾上腺功能，兴
奋小鼠发情期及兴奋小鼠及大鼠卵巢的内分泌功能。(6)抗辐射作用：红景天
对X射线照射损伤的小鼠，有降低其骨髓嗜多染红细胞微核产生率，抑制过氧
化脂质形成的作用。(7)抗肿瘤作用：红景天甙对白血病细胞(K562)生长有
一定的抑制作用。红景天可抑制体外培养人喉癌细胞的生长速度和分裂能力，
促进糖原合成，起到一定的阻抑喉癌细胞生长及增殖作用。(8)抗缺氧作用：
常氧或缺氧条件下，红景天浸膏口服，能明显提高小鼠心肌的耐缺氧能力；红
景天粗提物注射给药，可明显提高小鼠常压耐缺氧能力。(9)抗疲劳作用：临
床药理研究表明，红景天制剂均能改善志愿受试者的体力及智力、工作能力指
数，特别是在疲劳情况下可使工作错误率降低，能提高文字校对时的效率，降
低心率并使血压恢复正常。红景天甙(Salidroside)为红景天中的主要有效成分。
文献中报道红景天甙的制备主要采用多步柱色谱法。而制备高纯品时主要利用
结晶和制备型高压液相色谱完成，操作往往较繁琐，由于固态支持体或载体对
样品的吸附、变性，造成产品的纯度和回收率较低。高速逆流色谱(High-speed
Countercurrent Chromatography，HSCCC)是近年发展起来的一种连续的无需固
体支撑物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，具有分离量大、样品无损失、
回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点，已广泛应用于生物、医药、环保
等领域化学物质的制备分离和纯化。
发明目的：

本发明的目的是采用高速逆流色谱法制备纯度98％以上的红景天甙。

发明内容：

本发明的基本工艺路线是：

(1)用70％丙酮-水溶液浸提红景天，浸提液蒸去丙酮后，得到红景天粗提
取物。

(2)红景天甙的初步纯化：将红景天粗提取物用高速逆流色谱分离法进行
初步分离。收集含红景天甙的组分，蒸干溶剂。

(3)红景天甙的精制：再将(2)所得组分用高速逆流色谱分离法制得纯度
高于98％的红景天甙高纯品。

高速逆流色谱法对红景天甙进行初步纯化，可选用的溶剂体系主要有三
个。均以上相为固定相，下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成，A组
分可选用乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯类，B组分
可选用正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇，C组分为水，优选乙酸乙酯-正丁醇-
水体系，A、B、C的体积比为0.5-2∶2-10∶2-10。二号溶剂体系由四个组
分构成，A组分可选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪
酯类，B、C组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、
叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮，D组分为水，优选乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水体系，
A、B、C、D的体积比为0.5-5∶10-100∶0.5-5∶10-100。三号溶剂体系
由两个组分构成，A组分可选自正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇，B组分为
水，优选正丁醇和水，其体积比为1-100∶1-100。

高速逆流色谱法对红景天甙精制溶剂体系主要有三个。均以上相为固定相，
下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、
四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，
C组分为水，优选氯仿-甲醇-水体系，A、B、C的体积比为2-15∶2-25∶1-
15。二号溶剂体系由四个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳
等卤代烃，B、C组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁
醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮，D组分为水，优选氯仿-异丙醇-甲醇-水体系，
A、B、C、D的体积比为2-10∶0.5-5∶2-10∶1-10。三号溶剂体系由五
个组分构成，A、C组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B、D组
分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪
醇或脂肪酮，E组分为水，优选二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水体系，A、B、C、
D、E的体积比为0.5-2∶0.5-2∶1-10∶2-10∶1-10。

实验适合于在室温为15℃-30℃下进行。

用本法制备的红景天甙纯度可达到98％以上。本法适用于以各种含红景天
甙的天然植物、天然植物的提取物为原料制备高纯度的红景天甙。适用于采用
各种型号的逆流色谱仪分离制备红景天甙，用高速逆流色谱法制备红景天甙可
连续，高效、快速的液液分配色谱分离，具有分离量大、样品无损失、回收率
高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。

实施例1

采用乙酸乙酯-正丁醇-水和氯仿-甲醇-异丙醇-水两溶剂体系制备纯度高于
98％的红景天甙：使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样
阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057
便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，
以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样
阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。红景天甙的制备分两步进
行：(1)将体积比为1∶2∶3的乙酸乙酯-正丁醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后
静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用
1∶1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物100mg进行分离，收集含
红景天甙的组分，蒸干。(2)将体积比为5∶6∶0.5∶4的氯仿-甲醇-异丙醇-水
混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层
溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解(1)中所得样
品进行分离，收集红景天甙的组分峰，冷冻干燥。得到白色红景天甙固体，经
HPLC分析，其纯度达到98％以上。

实施例2

采用乙酸乙酯-异丁醇-丙酮-水和氯仿-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高于
98％的红景天甙：使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样
阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057
便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，
以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样
阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。红景天甙的制备分两步进
行：(1)将体积比为5∶40∶1∶60的乙酸乙酯-异丁醇-丙酮-水混溶于分液漏
斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)
为流动相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物200mg进行
分离，收集含红景天甙的组分，蒸干。(2)将体积比为7∶13∶8的氯仿-甲醇-
水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下
层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解(1)中所得
样品进行分离，收集红景天甙的组分峰，冷冻干燥。得到白色红景天甙固体，
经HPLC分析，其纯度达到98.23％。

实施例3

采用正丁醇-水和二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高于
98％的红景天甙：使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样
阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057
便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，
以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样
阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。红景天甙的制备分两步进
行：(1)将体积比为45∶53的正丁醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，
取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相
和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物150mg进行分离，收集含红景天甙的
组分，蒸干。(2)将体积比为1∶1∶4∶7∶5二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水混
溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶
液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解(1)中所得样品
进行分离，收集红景天甙的组分峰，冷冻干燥。得到白色红景天甙固体，经HPLC
分析，其纯度达到98.02％。
实施例4

采用乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水和氯仿-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高于98％
的红景天甙：使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，
聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057便携
式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2.0
ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，
然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。红景天甙的制备分两步进行：(1)
将体积比为1∶5∶0.5∶6乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后
静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用
1∶1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物100mg进行分离，收集含
红景天甙的组分，蒸干。(2)将体积比为13∶23∶13的氯仿-甲醇-水混溶于分
液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下
相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解(1)中所得样品进行分
离，收集红景天甙的组分峰，冷冻干燥。得到白色红景天甙固体，经HPLC分
析，其纯度达到98％以上。

实施例5

采用乙酸乙酯-正丁酯-水和氯仿-异丁醇-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高于
98％的红景天甙：使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样
阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057
便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，
以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样
阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。红景天甙的制备分两步进
行：(1)将体积比为1∶4∶5的乙酸乙酯-正丁酯-水混溶于分液漏斗中，摇匀后
静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用
1∶1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物150mg进行分离，收集含
红景天甙的组分，蒸干。(2)将体积比为7∶3∶6∶4的氯仿-异丁醇-甲醇-水混
溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶
液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解(1)中所得样品
进行分离，收集红景天甙的组分峰，冷冻干燥。得到白色红景天甙固体，经HPLC
分析，其纯度达到98.53％。